当归补血汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经元的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后当归补血汤对大脑皮质神经元的保护作用。方法雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞再灌注组、生理盐水对照组、当归补血汤治疗组。治疗组术前连续6d灌胃,每日2次(早、晚各1次),术后4h再灌胃2次,每次2.5ml,次日取材。观察各组大鼠神经行为学缺陷;脑梗死体积和梗死率变化;血脑屏障通透性变化;大脑皮质神经元的形态和数量;大脑皮质神经元p53和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况以及大脑皮质凋亡神经元的形态和数量。结果与缺血再灌注组、生理盐水对照组比较,当归补血汤治疗组2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色显示大脑皮质梗死区体积减少(P0.05);荧光显微镜观察脑组织中伊文斯蓝的含量减少(P0.05),Nissl染色显示大脑皮质神经元数量增加(P0.05);免疫组织化学方法显示大脑皮质神经元Caspase-3、p53的阳性细胞数减少(P0.05);TUNEL染色法显示大脑皮质神经元凋亡细胞减少(P0.05)。结论当归补血汤治疗组能减少大脑皮质神经元的死亡,这与其减少大脑皮质神经元Caspase-3、p53的表达,并通过减少细胞凋亡起保护作用有关。     

UCF-101对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的观察UCF-101对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及Caspase-9蛋白表达的影响,探讨UCF-101对缺血性脑损伤的神经保护作用。方法随机将大鼠分为假手术组、缺血再灌注组及UCF-101处理组。采用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)2h再灌注模型,于再灌注后24h取脑,采用TTC法测梗死体积,TUNEL法检测神经元凋亡,免疫组化法观察脑组织神经元Caspase-9蛋白的表达。结果假手术组未见梗死现象,与假手术组比较,缺血再灌注组脑组织凋亡细胞数和Caspase-9的表达均明显升高(P0.05)。与缺血再灌注组相比,UCF-101处理组梗死体积明显缩小(P0.05),UCF-101处理组脑组织凋亡细胞数和Caspase-9的表达均明显减少(P0.05)。结论 UCF-101可能通过下调脑组织神经元Caspase-9蛋白的表达,抑制神经元的凋亡而发挥神经保护作用。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织P53蛋白表达的调节作用

目的　研究降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织P53蛋白表达的影 响,探讨降钙素基因相关肽对脑组织缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法　用线栓法制备大鼠大脑中动 脉阻塞(MCAO)模型,应用免疫组化和显微图像分析方法检测大鼠脑缺血再灌注后脑组织P53蛋白的表达。 结果　假手术组海马和顶叶内未见P53阳性细胞,脑缺血再灌注组阳性细胞明显增多,注射CGRP后P53阳 性细胞平均灰度值明显高于缺血再灌注组(P<0.01)。结论　CGRP下调缺血神经元P53蛋白的表达,可能 对缺血神经元的恢复有促进作用。     

骨形态发生蛋白-7对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响

目的 观察骨形态发生蛋白-7（BMP-7）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响及其机制。方法 将40只SD雄性大鼠随机分为实验组、对照组和假手术组,采用改良线栓法制作大脑中动脉栓塞缺血再灌注（MCAO/R）模型,实验组在缺血2h再灌注后尾静脉注射BMP-7（0.1mg/kg）250μl,对照组和假手术组尾静脉注射等量生理盐水,运用Bederson评分法进行神经功能缺失评分。再灌注24h后将大鼠处死,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法观察梗死灶范围,并计算梗死灶体积占半球体积的百分比;HE染色观察脑组织病理变化,原位缺口末端标记法（TUNEL）计数神经元凋亡数量,免疫组织化学染色观察缺血脑组织内Caspase-3表达。结果 BMP-7组大鼠Bederson评分（1.7±0.5）比对照组（2.7±0.5）明显降低（t =4.66,P ＜0.01）,脑梗死体积百分比（7.6±1.4）比对照组（22.3±4.5）明显降低（t =6.98,P ＜0.01）。与对照组相比,HE染色显示BMP-7组大鼠缺血侧大脑皮质脑组织损伤明显减轻。BMP-7组缺血侧大脑皮质、纹状体及海马TUNEL阳性细胞数（分别为3.6±0.6、7.4 ±1.1、5.0±0.7）明显低于对照组同一区域（分别为13.4±1.1、17.8±1.5、15.4±1.1,P ＜0.01）。BMP-7组缺血侧大脑皮质、纹状体及海马Caspase-3阳性细胞数（分别为7.6±0.9、5.8±0.8、10.6±1.1）明显低于对照组同一区域（分别为15.4±0.6、14.0±1.2、17.2±0.8,P ＜0.01）。结论 BMP-7可通过下调Caspase-3表达而抑制大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡,起到神经保护作用。     

高血脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的:检测高血脂对脑缺血再灌注损伤后缺血侧大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:喂食高脂饲料建立高血脂动物模型,随后线栓法建立脑缺血再灌注模型。Zea-Longa神经行为学评分法记录大鼠神经行为改变,TTC染色检测脑梗死灶体积,免疫组织化学及免疫印迹检测大脑皮质p38MAPK表达水平。结果:高血脂脑缺血再灌注后神经行为损伤加重,且梗死灶体积较单纯脑缺血再灌注明显扩大。与假手术组比较,单纯脑缺血再灌注组和高血脂脑缺血再灌注组大脑皮质p38MAPK表达明显增加,再灌注2 h时其表达量即开始增高,再灌注24 h时达高峰,而后又降低。相同再灌注时间点,与单纯脑缺血再灌注组比较,高血脂脑缺血再灌注组p38MAPK表达增高。结论:高血脂脑缺血再灌注损伤中,高血脂可上调大脑皮质p38MAPK表达,促进细胞凋亡的发生及加重炎症反应,进而加重缺血再灌注损伤。     

通心络对脑缺血再灌注大鼠TLR4 和NF-κB 表达的影响

目的:探究通心络对脑缺血再灌注大鼠Toll样受体4(TLR4)和核转录因子(NF-κB)表达的影响。方法:采用线栓法构建脑缺血再灌注(I/R)大鼠模型,将50只SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组(Sham)、模型组(I/R)、通心络低剂量组(0.5 g/kg)、通心络高剂量组(2 g/kg)和尼莫地平组(2 mg/kg),每组10只;观察各组大鼠神经功能症状、脑梗死体积和病理组织学变化;采用TUNEL法检测脑组织中细胞凋亡情况,ELISA法检测血清中IL-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,Western blot法检测脑组织中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、TLR4及NF-κB p65的表达。结果:与Sham组相比,I/R组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织细胞凋亡数、血清IL-6、IL-1β及TNF-α水平、脑组织中Caspase-3、TLR4及NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);给予通心络处理后,大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织细胞凋亡数、血清IL-6、IL-1β及TNF-α水平、脑组织中Caspase-3、TLR4及NF-κB p65的表达显著下降,并呈剂量依赖性(P0.05)。结论:通心络对脑缺血再灌注大鼠能产生保护作用,减少脑组织细胞的凋亡,可能与下调TLR4、NF-κB的表达有关。     

CGRP对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的上调作用

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和磷酸化CREB（p-CREB）表达的影响。方法:用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型，应用免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组大鼠顶叶皮质CREB表达少于假手术组，CGRP组大鼠顶叶皮质CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。假手术组右侧顶叶皮质p-CREB表达很少，缺血再灌注组顶叶皮质p-CREB表达多于假手术组，CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠右侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达，CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。     

活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响

目的探讨活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中所诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响。方法制作脑缺血再灌注模型，80只大鼠随机平均分为4组，假手术组、模型组、阿司匹林组、活血通脉汤组，每组20只。应用免疫组织化学方法分别检测每组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达的情况。结果模型组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显高于假手术组（P〈0．01）；活血通脉汤组大鼠各时间点脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01），且与阿司匹林组无显著差异性（P〉0．05）。结论活血通脉汤能降低大鼠脑组织Fas、Caspase-3表达水平，减轻缺血脑组织神经元坏死的程度，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，机制与降低Fas、Caspase-3表达水平有关。     

RGMb参与脑缺血再灌注损伤中大鼠海马神经元的凋亡

目的探讨RGMb(repulsive guidance molecule b)在大鼠脑缺血再灌注损伤中对细胞凋亡的影响。方法健康8周Wistar大鼠60只,随机分为:假手术组、缺血再灌注组、RGMb阻断组,每组依据缺血后再灌注6h、12h、24h、48h、72h不同时间点再分五个小组。采用免疫组织化学方法 ,Western blot方法检测Caspase-3在各组海马CAI区不同再灌注时间点的表达变化,应用TUNEL法检测海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注组Caspase-3蛋白表达量和凋亡细胞数明显高于假手术组(P0.01),而RGMb阻断组Caspase-3蛋白表达量和凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(0.01)。结论阻断RGMb可减少脑缺血再灌注损伤中神经元的凋亡。     

黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注模型大鼠海马组织神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达*

背景：有研究表明黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡。 目的：观察黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。 方法：采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注大鼠模型,建模后给予质量浓度2,4,6,8和10 mL/kg的黄芪注射液腹腔注射,并设立假手术组。分别采用原位末端标记法染色和蛋白免疫印迹方法检测各组大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达。 结果与结论：模型组大鼠海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显增多(P < 0.05);与模型组相比,黄芪注射液4,6,8,10 mL/kg组海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显减少(P < 0.05);与黄芪注射液4 mL/kg组比,黄芪注射液6,8,10 mL/kg 组神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达减少(P < 0.05),且呈剂量依赖性。结果证实,黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达。关键词：黄芪注射液;脑缺血再灌注;不同剂量;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;细胞凋亡;中医药;组织构建 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.031     

主动脉弓手术停循环与脑灌注期间脑区域氧饱和度监测

目的:明确深低温停循环(DHCA)与脑灌注相结合进行主动脉弓手术期间脑区域氧饱和度监测(rSO2)的价值.方法:28位病人的rSO2被监控,数据被统计分析.结果:DHCA的平均停循环时间是(59±17.1)min,外科手术的结果比较满意,住院期间死亡2例,死亡率(5.6%).虽然全部病人兼有脑灌注支持,rSO2在DHCA期间仍然逐渐下降,平均降到(47±9.7)%,在复温末期又恢复到它的最初水平.有2位病人rSO2降低最明显,在长达83和88min的DHCA之后rSO2分别从57%和56%下降到27%和29%,这2位病人最终发展永久的神经系统损害.我们同时考察了End-rSO2和△-rSO2两个参数,在DHCA期间,脑灌注的灌注流速和这两个参数都存在线性相关.结论:(1)尽管DHCA和一定方式脑灌注的结合能提供大脑更有效的保护,这种保护措施仍然有一个安全的时限;(2)NIRS能实时监控脑rSO2,可用于监测大脑保护是否充分,有利于DHCA下脑灌注参数的凋整.     

Decision strategies for cerebral dysfunction IV: Determination of cerebral dysfunction

The present study examined the contribution of tests that compose the Impairment Index with regard to their ability to predict brain impairment. The investigation further examines the ability of various other tests, chosen because of their observed usefulness in detecting brain impairment. Subjects composing the brain damaged group (n = 298) were found to be impaired on both CT and EEG examinations. The pseudo-neurological control group (n = 193) consisted of patients referred for testing yet all non-neuropsychological tests were normal. Discriminant analyses were conducted to determine the weightings of each test as well as to determine the overall prediction accuracies of three groupings of tests. These analyses demonstrate that tests, not comprising the Impairment Index, are of predictive value in determining dysfunction: Thurstone Word Fluency and a 60 minute delayed recall from the WMS. Overall prediction accuracies of the various test groupings ranged from 73.52% to 78.02%. No statistically significant reduction of accuracy resulted with cross validation. All tests of statistically predictive value and all prediction results with their corresponding discriminant formulas are reported as well as a discussion of the application of these findings.     

Physiopathology of cerebral ischemia

In spite of significant advances made in the technology to image the intracranial contents and to measure the metabolic activity of discrete brain sites, the factor(s) responsible for the death of ischemic neurons remains unresolved. Several potential culprits have been tried: (1) "energy failure", or depletion of high-energy phosphates, occurs very quickly after ischemia, but energy metabolites recover even in tissues where functional return does not occur; (2) "tissue lactacidosis" enhances ischemic cell necrosis, but this factor is not the indispensable cause of neuronal necrosis because acidosis is minimal or nonexistent under conditions of hypoglycemia and seizures; (3) "impairment of the microcirculation" may be a contributing factor, but such microcirculatory impairment cannot be the initiating event as it is known that irreversible neuronal injury precedes the development of microcirculatory abnormalities; (4) the effects of "excitatory neurotransmitters", especially glutamate, may explain the "delayed neuronal death" or the protracted necrosis of neurons in the CA1 sector of the hippocampus; (5) ionic pump alterations: studies of experimental myocardial ischemia tend to support a contributory role of Ca2+ in the aggravation of cell necrosis; however, lack of an experimental model in which steady-state conditions can be maintained has left unresolved the potential participation of calcium ions in ischemic cell necrosis; (6) the same statement, concerning the lack of an experimental model, can be made about the role of free-radical species; oxygen free radicals and superoxides are abundant in the reperfusion stage of ischemic injury, but it is unclear how significant their contribution might be as initiators of ischemic necrosis; and (7) the "ischemic penumbra" is a zone or portion of brain tissue that is sufficiently hypoperfused as to be functionless, but where the cells are likely to recover once normal perfusion is reestablished. Further understanding of the "penumbra" may prove crucial in future studies of brain ischemia.     

Pathology of cerebral infarction

Classification of cerebral infarctions is presented in connection with their etiology and pathogenesis. The zones of cerebral infarction, the ultrastructural and synthesizing characteristics of clear, dark, and pyknomorphic neurons are described in detail. The results of pathological examinations of cerebral infarctions are compared with experimental data obtained in hypoxia conditions of the nervous system by means of electron microscopy and ultrastructural autoradiography.     

构建大脑中动脉阻塞脑缺血模型大鼠的类型分析

背景：线栓法造成短暂性大脑中动脉阻塞是研究大鼠局灶性脑缺血普遍使用的模型制作方法。但制作大鼠脑缺血模型的类型存在一定差异,可能导致实验结果的偏差。 目的：分析大脑中动脉阻塞线栓法制作大鼠脑缺血模型的类型及其影响因素。 方法：雄性SD大鼠166只,参照Longa线栓法造模,术后24 h行MRI扫描,根据扫描结果将大鼠分成皮质梗死组、皮质下梗死组及无梗死组,分析造模时线栓插入的深度。 结果与结论：皮质梗死组、皮质下梗死组和无梗死组大鼠的线栓插入深度分别为(19.9±0.9),(19.0±1.1)和(17.7±1.3) mm,皮质梗死组大鼠的线栓插入最深,而无梗死组的线栓插入最浅(P < 0.01)。提示插入深度不同导致的大鼠脑梗死的类型也不同,线栓插入越深,皮质梗死的概率可能越大。     

Effects of leu-enkephalin analog on cerebral circulation in cerebral ischemia of different severity

Leu-enkephalin analog reduces cerebral circulation in mild and has no effect in moderate ischemia, while in severe cerebral ischemia it causes periodic compensatory enhancement of cerebral circulation in experimental animals, instead of its monotonous reduction, thus ensuring 100% survival during a 6-h period, whereas in the control group 60% animals die within 3 h. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 126, No. 11, pp. 516–519, November, 1998