参芪扶正注射液对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:研究参芪扶正注射液在体外对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及其机制。方法:体外培养PC-3细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;PI染色法测PC-3细胞凋亡率;ELISA法测Caspase-3、Caspase-9、Fas含量;Bradford法测SOD、MDA含量。结果:参芪扶正注射液对PC-3细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度依赖性;参芪扶正注射液能诱导PC-3细胞凋亡,促进Caspase-3、Caspase-9、Fas蛋白表达,增加细胞内SOD的活性,降低MDA的含量。结论:参芪扶正注射液可抑制PC-3细胞的增殖,其作用机制与启动线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路及增加机体的抗氧化功能有关。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制。方法以流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测CyclinD1、P21以及凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax表达的变化;TRAP-PCR-ELISA方法检测MG-63细胞端粒酶活性的变化;Z-IETD-fmk阻断试验检测Caspase-8阻断前后,冬凌草甲素对MG-63细胞凋亡影响的变化。结果冬凌草甲素增加G0/G1期MG-63细胞百分率,降低S期MG-63细胞百分率;浓度依赖性抑制MG-63细胞的CyclinD1、Survivin和Bcl-2蛋白表达,上调P21和Bax蛋白表达;浓度依赖性抑制MG-63细胞端粒酶的活性;Z-IETD-fmk阻断Caspase-8活性后,能部分逆转和减弱冬凌草甲素对MG-63细胞的凋亡诱导作用。结论冬凌草甲素通过影响细胞周期调节蛋白、阻断细胞周期G1/S期"稽查点";抑制Survivin、Bcl-2,上调Bax;抑制端粒酶活性以及活化Caspase-8等途径抑制MG-63细胞增殖及诱导MG-63细胞凋亡。     

夜香树多糖诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡作用的探讨

目的:探讨夜香树多糖对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡诱导作用并研究其可能的作用机制。方法:从夜香树叶中提取夜香树多糖,分别用终质量浓度为2.5,5,10 mg·L^-1的夜香树多糖处理处于对数生长期的MG-63细胞,另设MG-63细胞为空白组;不同质量浓度夜香树多糖作用72 h后,采用MTT法检测MG-63细胞增殖抑制作用;不同质量浓度夜香树多糖作用46 h后,采用透射电镜观察经处理过的细胞超微结构的改变,采用流式细胞术检测夜香树多糖对MG-63细胞凋亡率的影响,Western blot法分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3),Caspase-8,Caspase-9和B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果:夜香树多糖显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63增生,在5~10 mg·L^-1质量浓度显著抑制细胞增殖,并呈浓度和时间的依赖性;电镜下可发现夜香树多糖能诱导细胞凋亡,胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,细胞表面绒毛减少;流式细胞仪检测表明,5 mg·L^-1夜香树多糖可使MG-63细胞阻滞在G₀/G₁;夜香树多糖能剂量依赖诱导MG-63凋亡,浓度依赖性的降低MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达和升高Caspase-8的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:夜香树多糖能抑制MG-63细胞增殖,诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡,与作用剂量和作用时间呈正相关,这一过程可能与夜香树多糖下调Bcl-2和激活Caspase-8有关。     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡及其凋亡通路的影响

目的:研究槲皮素体外对人肝癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测细胞上清液中Caspase-3、Caspase-9及Survivin的含量。结果:槲皮素(10-320μmol.L-1)体外可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并具有浓度和时间依耐性;在40-160μmol.L-1浓度下,槲皮素可诱导SMMC-7721细胞凋亡;将细胞阻滞在G2-M期;使Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量显著增加,而Survivin蛋白表达显著减少。结论:槲皮素抑制人肝癌SMMC-7721细胞的作用机制与诱导细胞凋亡和将细胞周期阻滞在G2-M期有关,其凋亡通路涉及Caspase途径。     

白黎芦醇对人口腔鳞癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨白藜芦醇对人口腔鳞癌KB细胞的增殖及凋亡影响。方法:应用MTT比色法检测Res对KB细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;Hoechst33258荧光染料染色,显示凋亡细胞形态;Western blot方法检测survivin、Caspase-3、Smac蛋白的表达。结果:Res能以剂量和时间依赖的方式抑制KB细胞生长,以剂量依赖的方式使KB细胞周期阻滞在S期、诱导细胞凋亡;Hoechst33258染色,可见细胞呈明显的凋亡特征;Western blot方法测得Res下调KB细胞的Survivin蛋白表达水平、增加KB细胞胞浆的Smac蛋白含量(P<0.01)、同时活化Caspase-3蛋白。结论:Res可抑制KB增殖,使细胞周期呈S阻滞并可诱导细胞发生凋亡,Survivin、Caspase-3和Smac基因参与了Res诱导KB细胞凋亡的作用。     

槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:观察槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度的槲皮素作用于体外培养的MG-63细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测槲皮素对MG-63细胞增殖的抑制能力,流式细胞术(FCM)检测槲皮素对MG-63细胞凋亡的影响。结果:槲皮素可显著抑制MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性;槲皮素可明显诱导MG-63细胞凋亡。结论:槲皮素能够抑制MG-63细胞增殖,诱导MG-63细胞凋亡。     

莪术醇诱导人骨肉瘤MG63细胞自噬的实验研究

目的观察莪术醇对人骨肉瘤MG-63细胞自噬性凋亡的作用。方法体外人骨肉瘤MG-63细胞单独或和莪术醇共同培养,MTT法检测莪术醇对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制作用;FITC-annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡;PI和hochest33258活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;EGFP-LC3b细胞转染,荧光显微镜观察细胞自噬;微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)蛋白和自噬相关蛋白Beclin-1表达水平用Western blotting方法分析。结果 MTT检测显示莪术醇可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并具有浓度-时间依赖性;流式细胞术检测显示莪术醇可显著诱导MG-63细胞凋亡;活细胞荧光染色显示MG-63细胞核凝聚并碎裂成小体;细胞质内凝集荧光增强;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值,Beclin-1蛋白表达明显增强;自噬抑制剂3-MA可明显逆转上述现象。结论莪术醇能明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,其机制主要是通过诱导自噬性凋亡。     

醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究

目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用;Hoeehst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;AnnexinV/PI染色流式细胞术检测LO2细胞凋亡;PI染色流式细胞术分析其对细胞周期的影响;检测细胞培养液上清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,细胞裂解上清超氧化歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与阴性对照组比较,京大戟生品各浓度组均可抑制LO2细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞S期阻滞(P＜0.05);能显著升高细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著降低细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、增加MDA含量.醋制后,与京大戟生品组比较,可显著降低细胞凋亡率、降低细胞周期阻滞,显著降低细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著升高细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、显著降低MDA含量.结论:醋制可降低京大戟对LO2细胞的毒性,其机制可能是减轻氧化损伤,从而降低细胞周期阻滞,减少细胞凋亡.     

通络救脑注射液对Aβ1-42诱导原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡的影响

目的：探讨通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡因子Caspase-3蛋白表达的影响。方法：模型组以Aβ1-42加入内皮细胞培养基中制备阿尔茨海默病（AD）内皮细胞损伤模型,通络救脑注射液（简称TLJN）组在造模前先行加入通络救脑注射液干预。采用生化法检测各组内皮细胞中MDA含量、SOD活性,运用Western Blot法检测各组Caspase-3蛋白表达。结果：TLJN组能明显降低AD内皮细胞损伤模型中MDA含量、提高SOD活性;抑制Caspase-3蛋白表达。结论：在本实验观察范围内,通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞的凋亡有抑制作用,其作用机制可能是通过提高SOD抗氧化酶活性、降低MDA含量,进而下调Caspase-3蛋白表达以抑制细胞凋亡。     

番茄红素对体外人骨肉瘤细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究番茄红素(LP)对体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖及荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的影响,并初探其机制。[方法]取对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞;设空白对照组,LP(5、10、20μg/mL)组和顺铂(40μg/mL)组;给药48 h后,观察细胞形态,检测细胞周期、细胞增值抑制率,观察细胞凋亡状况并测定细胞凋亡率。采用背部皮下注射接种人骨肉瘤细胞的方法建立荷骨肉瘤裸小鼠模型,设模型对照组,LP[5、10、20mg/(kg·d)]和顺铂[2 mg/(kg·d)],各20只;称量瘤体质量并计算抑瘤率,观察肿瘤组织形态结构变化和细胞凋亡状况,检测肿瘤组织凋亡相关蛋白(bcl-2、Bax、caspase-3)表达。[结果]体外实验:空白对照组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长、增殖迅速,LP干预组和顺铂组细胞呈现变圆、脱壁、细胞间接触松散状态;与空白对照组比较,LP组和顺铂组细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞增殖抑制率显著升高,凋亡细胞数量明显增多、凋亡率显著升高,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。体内实验:与模型组比较,LP 10、20 mg/(kg·d)组瘤质量显著减轻、抑瘤率显著升高;LP组肿瘤组织呈片状坏死、瘤细胞皱缩等病理性改变,细胞凋亡指数(AI)显著升高,肿瘤组织bcl-2表达下调、Bax上调而Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3表达显著上调,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。[结论]LP具有抑制体外人骨肉瘤MG-63细胞增殖和荷骨肉瘤裸小鼠肿瘤生长的药理学作用,其机制可能与LP阻滞细胞周期、调节凋亡相关调控蛋白表达有关。     

蜂毒素对人成骨肉瘤细胞体外增殖抑制作用的机制探讨

目的:探讨蜂毒素对人成骨肉瘤U2OS细胞体外增殖抑制作用的机制。方法:通过MTT法检测蜂毒素对骨肉瘤U2OS细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察细胞生长状态,免疫细胞化学法检测PCNA表达变化,流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果:蜂毒素能明显抑制U2OS细胞增殖,下调PCNA表达,造成S期细胞堆积。经蜂毒素处理后的U2OS细胞,在透射电镜下见染色质边集,有凋亡小体出现。结论:蜂毒素能够抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖,其作用机制可能与其下调PCNA表达,将细胞周期阻滞于S期以及诱导细胞凋亡的作用有关。     

青蒿琥酯与大蒜素在体外对骨肉瘤细胞株的协同抗癌作用

目的:探讨青蒿琥酯和大蒜素联合作用对人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S的体外抑制效果。方法:分别采用25、50、100μmol/L的大蒜素,10、20、40μmol/L的青蒿琥酯分别作用于体外培养的人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S于24h。在显微镜下观察肿瘤细胞的凋亡情况,并采取MTT法检测实际的肿瘤抑制效果。以两者联合应用作为对照作用于人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S,比较单独用药和联合用药的差异。结果:青蒿琥酯与大蒜素联合应用,对人骨肉瘤细胞株MG-63、U20S增殖有较好的抑制作用,并诱导其凋亡,较单独使用其中一种药物而言,联合用药效果更佳,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:青蒿琥酯与大蒜素在体外对骨肉瘤细胞株的抗癌作用具有协同效应,且两者的作用机理不同,值得深入研究。     

仙茅总黄酮诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的机制研究

目的 观察仙茅总黄酮诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡并探讨其可能的机制。方法 采用加热回流提取和大孔吸附树脂纯化方法制备仙茅总黄酮。通过CCK-8法检测MG-63细胞的增殖抑制率，计算半数抑制浓度（IC50）;Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞核形态；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blotting法和RT-PCR法检测JNK、p38 MAPK、Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白和mRNA表达水平。结果 纯化后仙茅总黄酮纯度为40.72%；与空白对照组相比，仙茅总黄酮对MG-63细胞的增殖抑制作用明显，且呈时间和剂量依赖性；药物组凋亡率显著升高；Western blotting及RT-PCR结果显示，随药物浓度升高，JNK、p38 MAPK和Bcl-2的蛋白和mRNA表达水平均显著降低，Caspase-3、Bax的蛋白和mRNA表达水平均显著升高（P <0.05,P <0.01或P <0.001）。结论 仙茅总黄酮能显著抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖、促进其凋亡，其作用机制可能与下调MAPK信号通路JNK、p38 MAPK及抗凋亡因子Bcl...     

大黄素抑制人结肠癌RKO、Caco-2细胞体外增殖作用的研究

目的:探讨大黄素对人结肠癌细胞株RKO、Caco-2的体外增殖的抑制作用。方法:MTT比色法检测细胞活力;倒置显微镜显像观察细胞数量变化;FCM检测细胞凋亡率及周期分布;Caspase-3分光光度法检测Caspase-3酶蛋白活性。结果:随着作用时间的延长以及大黄素浓度的升高,大黄素对人结肠癌RKO、Caco-2细胞的体外增殖抑制作用增高;大黄素阻滞两种细胞于S期,使G2/M期细胞比率明显下降,激活Caspase-3酶蛋白;提高细胞凋亡率。结论:大黄素抑制人结肠癌细胞株RKO、Caco-2体外增殖,其作用呈浓度、时间依赖性;大黄素能够阻滞RKO、Caco-2细胞株细胞周期并激活Caspase-3诱导细胞凋亡。     

过表达性别决定区Y框蛋白7基因对骨肉瘤细胞生长及免疫逃逸相关因子表达的影响

目的:探讨过表达性别决定区Y框蛋白7(SOX7)基因对骨肉瘤MG-63细胞活力、周期、凋亡、Wnt/β-catenin信号及免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达的影响。方法:将人骨肉瘤MG-63细胞分为空白组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-SOX7组,pcDNA3.1转染参照Lipofectamine 2000试剂盒说明书。通过CCK-8法检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞24～72 h的细胞活力;流式细胞仪检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞48 h的细胞周期和凋亡率。Western Blot检测SOX7、β-catenin、cyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达。结果:pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞后,细胞中SOX7蛋白表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,G_0/G_1期细胞百分比明显升高,G_2/M期和S期百分比明显降低,β-catenin、CyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:过表达SOX7基因可抑制骨肉瘤MG-63细胞活力,阻碍细胞周期进程,诱导细胞凋亡,抑制免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

徐长卿丹皮酚联合顺铂对骨肉瘤细胞迁移和凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨徐长卿丹皮酚(Paeonol)联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法:培养骨肉瘤MG-63细胞,分别加入不同浓度的徐长卿丹皮酚(0.3,0.6,1.2 mmol/L)和顺铂(4μmol/L)单独及联合作用,采用CKK-8法检测MG-63细胞增殖抑制率,并计算两药相互作用指数(CDI),评价两药相互作用性质,细胞划痕实验和Transwell实验检测MG-63细胞的迁移和侵袭能力,TUNEL法检测MG-63细胞凋亡情况,Western Blot法检测骨肉瘤MG-63细胞中Akt和mTOR蛋白表达及磷酸化水平。结果:徐长卿丹皮酚和顺铂联合给药可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖,两药存在协同作用,CDI1,其抑制作用与徐长卿丹皮酚浓度及作用时间相关,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);徐长卿丹皮酚不同浓度联合顺铂给药可显著抑制骨肉瘤细胞迁移,并具有一定的浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);徐长卿丹皮酚联合顺铂可以显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭能力,并具有一定的浓度依赖性;随着徐长卿丹皮酚浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞有明显增多的趋势,以徐长卿丹皮酚中、高浓度与顺铂联用最明显;徐长卿丹皮酚联合顺铂可显著抑制Akt、mTOR蛋白磷酸化水平,具有一定的浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.01)。结论:徐长卿丹皮酚增强顺铂抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡,可能通过抑制Akt、mTOR蛋白磷酸化,发挥协同抑瘤作用。     

TRAIL联合阿霉素和IFN-γ对人骨肉瘤细胞TRAIL相关受体的影响

目的：探讨TRAIL联合阿霉素和IFN-γ对人骨肉瘤细胞凋亡的作用及可能机制。方法：采用MTT法检测不同浓度及不同时间下TRAIL的抗癌活性。用流式细胞仪检测TRAIL、阿霉素和IFN-γ单独及联合应用后人骨肉瘤MG-63的凋亡率。RT-PCR法检测DR5及Yin Yang1（YY1）mRNA在加药前后的表达。结果：TRAIL、阿霉素、IFN-γ三者联合作用于MG-63细胞后,能显著增强对MG-63的杀伤、抑制增殖及诱导凋亡作用,明显高于单独应用TRAIL组或阿霉素组（P〈0.05）。结论：TRAIL、阿霉素、IFN-γ三者联用能显著提高骨肉瘤细胞MG-63生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与DR5mRNA表达上调及Yin Yang1（YY1）mRNA表达被抑制有关。     

参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡。MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关。     

番茄红素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的观察番茄红素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法取处于对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞,设空白组,番茄红素低、中、高剂量组(5,10,20μg/mL)和顺铂(40μg/mL)组。各组给予相应干预48 h后,观察细胞生长情况,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期、细胞凋亡情况并计算凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2值,免疫蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3表达情况。结果光学显微镜下观察可见空白组人骨肉瘤MG-63细胞呈贴壁生长,增殖迅速,而番茄红素各组和顺铂组细胞增殖受到抑制,细胞数明显减少,呈现回缩、脱落现象。番茄红素各组和顺铂组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量均明显高于空白组(P均0.05),且番茄红素高剂量组均明显高于顺铂组(P均0.05)。番茄红素中、高剂量组G_0/G_1期细胞所占比例、Bax mRNA表达量、Bax/Bcl-2值均明显高于空白组(P均0.05),Bcl-2 mRNA表达量均明显低于空白组(P均0.05),且除Bax mRNA表达量外,番茄红素高剂量组各指标改善情况均明显优于顺铂组(P均0.05)。结论番茄红素具有抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡的作用,机制可能与阻滞细胞周期和影响凋亡调控基因、蛋白表达有关。