乌索酸通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路改善高糖诱导的系膜细胞损伤

目的:探讨乌索酸(ursolic acid,UA)对高糖所致人肾小球系膜细胞(RMC)损伤的保护作用,明确是否通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路的活化,抑制细胞增殖及活性氧簇等活动。方法:将体外培养人系膜细胞分为正常葡萄糖组(NG)、高糖组(HG)、甘露醇高渗对照组(MA)及HG+不同剂量(0.5、1.0、2.0μmol/L)乌索酸干预组(UA),采用MTT法及DCFH-DA流式细胞仪分别检测系膜细胞增殖及活性氧簇产生;Westen-blot检测系膜细胞PI3K/AKT/m TOR信号通路活性及TGF-β1、FN表达;RT-PCR法检测TGF-β1、FN mRNA表达。结果:高糖刺激人肾小球系膜细胞48 h后,系膜细胞异常增殖,UA呈剂量依赖性抑制高糖诱导的系膜细胞增殖。UA抑制系膜细胞ROS的产生及氧化应激反应,减轻系膜细胞损伤。UA抑制高糖诱导的系膜细胞AKT、m TOR磷酸化水平及系膜细胞TGF-β1、FN蛋白及mRNA的表达(P0.05 vs.HG)。结论:乌索酸通过抑制高糖介导的PI3K/AKT/m TOR信号通路活化,抑制系膜细胞增殖及ROS的产生,减轻系膜细胞损伤。     

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78、Caspase-12表达的影响

目的:观察通络益肾方含药血清对高糖培养下大鼠系膜细胞(MC)增殖及GRP78、Caspase-12 mRNA表达的影响,从内质网应激角度探讨该方的肾保护机制。方法:肾小球MC随机分为6组:正常组、模型组、通络益肾方大、中、小剂量组及西药组,分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MC增殖情况,RT-PCR检测各组MC、GRP78、Caspase-12 mRNA的表达水平。结果:(1)模型组MC在各时间点均明显增殖(P0.05或P0.01);与模型组比较,中药大、中、小剂量组在24 h、48 h、72 h均能抑制MC增殖(均P0.01),其中以大剂量组效果最佳(P0.01);西药组MC增殖在12 h、24 h低于中药大剂量组(均P0.05),而在48 h、72 h两组之间差异无统计学意义(P0.05)。(2)与正常组比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降(P0.05,P0.01)。四个给药组之间GRP78 mRNA比较,48 h时呈西药组中药小剂量组中剂量组大剂量组,72 h时呈西药组中药小剂量组大剂量组(均P0.05,P0.01)。同时各给药组GRP78 mRNA表达呈现出从24 h、48 h到72 h持续缓慢增加的趋势,表明药物可延缓GRP78增幅、延缓ERS而持续发挥其保护细胞的作用。(3)Caspase-12 mRNA结果显示:与正常组比较,模型组48 h、72 h时Caspase-12mRNA明显增加(P0.01),而各给药组Caspase-12 mRNA均较模型组明显下降(P0.05或P0.01),48 h时三个中药组Caspase-12 mRNA表达明显低于西药组(P0.05);72 h时三个中药组呈小剂量组中剂量组大剂量组(P0.01或P0.05),提示casspase-12 mRNA表达与给药剂量呈负相关。结论:高糖条件下大鼠肾小球MC内质网应激明显,通络益肾方可明显抑制MC的增殖,推测其作用机制与延缓GRP78增幅、下调Caspase-12 mRNA的表达有关。     

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ⅣC）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。方法：培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）测定TGF-β1mRNA的表达。结果：百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显（P〈0.01）;高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多（P〈0.01）,百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖（P〈0.01）、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达（P〈0.05）。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

高糖对大鼠肾系膜细胞泛素及泛素化蛋白表达的影响

目的 探讨高糖对大鼠肾系膜细胞泛素及泛素化蛋白表达的影响。 方法 将大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,高糖作为刺激因子,分别设正常对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组（10、20、30 mmol/L葡萄糖）、甘露醇组。刺激12、24、48 h后,分别用实时定量PCR法和Western印迹法检测各组系膜细胞泛素mRNA和泛素化蛋白的表达。 结果 泛素化蛋白多以大分子蛋白为主。与正常对照组比较,30 mmol/L葡萄糖刺激24 h和48 h后泛素化蛋白的表达分别增加36％和52％（均P ＜ 0.01）;20 mmol/L和30 mmol/L葡萄糖作用48 h泛素化蛋白的表达分别增加31％和52％（均P ＜ 0.01）;高糖作用24、48 h,泛素mRNA的表达显著增加（均P ＜ 0.05）。 结论 高糖呈时间浓度依赖性地促进大鼠肾系膜细胞泛素mRNA及泛素化蛋白的表达,增加泛素蛋白酶体途径活性。     

己酮可可碱对高糖诱导肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达信号通路的影响

目的 探讨高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化及其作用通路,并且研究己酮可可碱（PTX）对CTGF表达的影响。 方法 体外培养大鼠系膜细胞,观察不同浓度的高糖在不同时间对系膜细胞转化生长因子β（TGF-β）、CTGF、 p-Smad2/3、Smad7及纤连蛋白（FN）表达的影响;并在高糖培养液中加入TGF-β中和抗体及不同浓度的PTX观察其对上述各指标表达的影响。 结果 高糖可以诱导系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA及蛋白表达增加（均P < 0.05）,且呈时间、剂量依赖性,同时伴有p-Smad2/3蛋白表达的增加及Smad7蛋白表达的减少。阻断TGF-β可使高糖诱导的CTGF mRNA及蛋白表达分别下降86.4%及91.8%（均P < 0.05）。PTX可以抑制高糖诱导的系膜细胞CTGF mRNA及蛋白表达,随着PTX浓度的增加其抑制作用更为显著（P < 0.05）,但对于TGF-β的表达没有影响。结论 高糖可通过TGF-β-Smads通路使CTGF mRNA表达增加进而影响其蛋白表达。PTX可以有效的抑制CTGF的表达而对于TGF-β的表达没有直接的抑制作用。     

高糖对系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达及细胞外基质合成的影响

目的：探讨高糖环境下系膜细胞中胞外调节蛋白激酶（ERK）转导途径活性和转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的变化。方法：分离培养大鼠肾脏系膜细胞,调整培养液浓度为以下3组,即正常糖组、高糖组、甘露醇组。分别予干预12h、24h、48h后用免疫细胞化学法和Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达进行定位、定性及半定量分析,用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达,放免法测定各组细胞上清中Ⅳ型胶原的含量。结果：高糖组系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达较正常糖组明显增高并由胞浆向胞核内转移,随培养时间延长其表达呈上升趋势（P〈0.01）,高糖组TGF-β1 mRNA的表达及细胞上清液Ⅳ型胶原的含量均高于正常糖组（P〈0.01）,甘露醇组上述指标较正常糖组略有升高,但两组间无统计学意义（P〉0.05）。结论：高糖环境下系膜细胞中ERK信号转导通路被激活,TGF-β1 mRNA表达上调,可能是糖尿病肾病系膜细胞受损,肾小球硬化的机制之一。     

P38 MAPK抑制剂在高糖诱导系膜细胞CTGF表达和基质蛋白分泌中的作用

目的:探讨P38 MAPK抑制剂SB203580在高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达和细胞外基质蛋白分泌的作用。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组:正常对照组(NG组,5. 5 mmol/L葡萄糖);渗透压对照组(NG+M组,5. 5 mmol/L葡萄糖+24. 5 mmol/L甘露醇);高糖组(HG组,30 mmol/L葡萄糖);高糖+SB203580组(HG+SB203580组,30 mmol/L葡萄糖+10μmol/L SB203580),分别给予不同刺激。48 h收集细胞,分别提取系膜细胞蛋白、RNA及细胞上清液。采用Western blot检测MKP-1、p38 MAPK及磷酸化p38MaPK的表达; RT-PCR检测p38 MAPK、MKP-1、CTGF和FN mRNA的表达; ELISA法测定细胞上清CTGF和纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)含量,放免法测定细胞上清液Ⅳ型胶原的含量。结果:与NG组相比,HG组系膜细胞MKP-1表达下调,p38 MAPK蛋白表达无明显差别,但磷酸化的p38 MAPK表达明显升高,MKP-1 mRNA表达下降,p38 MAPK、CTGF和FN mRNA的表达增加,细胞上清液中CTGF、FN和Ⅳ型胶原含量增加;与HG组相比,HG+SB203580组MKP-1表达升高,p38 MAPK蛋白表达无明显差别,但磷酸化的p38MAPK表达明显下降,p38 MAPK、CTGF和FN mRNA的表达下降,系膜细胞上清液中CTGF、FN和Ⅳ型胶原含量下降。结论:p38 MAPK抑制剂SB203580通过增强MKP-1的表达,增强p38 MAPK去磷酸化,使p38 MAPK活性下降,从而阻断CTGF的合成和细胞外基质蛋白表达,在糖尿病肾病细胞外基质重构中发挥保护作用。     

晚期糖基化终产物诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的观察晚期糖基化终产物（AGE）修饰的牛血清白蛋白（BSA）对体外培养的人近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响，并探讨可能的作用途径。方法将HK-2细胞在体外与不同浓度的AGE-BSA和BSA共同培养。间接免疫荧光法检测糖基化终产物受体（RAGE）。免疫印迹法观察HK-2细胞表达的CTGF蛋白质，ELISA和免疫印迹法检测TGF-β1的合成和分泌。结果在HK-2细胞的胞膜和胞质存在RAGE的表达。AGE-BSA以时间和剂量依赖方式上调HK-2细胞CTGF的表达，8、24、48及72h组分别为0h组的117％、138％、257％及339％：20、50及100mg／L组分别为0mg／L组的186％、240％及287％。在一定的剂量和时间范围内，AGE—BSA能够诱导TGF-β1蛋白质的表达和分泌。抗RAGE和抗TGF-β1的单克隆抗体能够部分抑制AGE-BSA诱导的CTGF蛋白质表达。结论人肾小管上皮细胞表面存在RAGE的表达。AGE—BSA可能部分地通过RAGE介导TGF-β1表达上调。诱导HK-2细胞CTGF表达。     

复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞ERK信号途径的影响

目的：观察复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞中胞外调节蛋白激酶通路相关蛋白表达的影响。方法：大鼠肾小球系膜细胞按1×105/孔接种24孔板,实验分为6组：正常葡萄糖组、高糖对照组、中药糖耐康高、中、低浓度干预组、西药吡格列酮组。每组设平行孔4孔,培养24h后检测指标。用RT-PCR法测定各组细胞cPLA mRNA表达,用蛋白质印迹杂交方法（Western Blot）检测p-ERK、PCK-α、c-fos蛋白的表达。结果：治疗组cPLA mRNA、p-ERK、PCK-α、c-fos蛋白表达的水平比模型组均有不同程度的降低（P〈0.01,P〈0.05）。结论：糖耐康对糖尿病肾病肾脏的保护作用,可能是糖耐康抑制了PKC的活化,阻止了DAG-PKC转导途径向通过ras依赖的ERK的传导,并阻止了转录因子c-fos的活化,使不通过ras途径激活ERK的PKC无法激活相关转录因子。     

通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素β1、白细胞介素10表达的影响

目的：探讨中药复方“通脉口服液”对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖及其产生白细胞介素融（IL-β1）和白细胞介素10（IL-10）的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定通脉口服液含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PEn）法测定系膜细胞IL—β1 mRNA和IL-10mRNA表达及其蛋白水平。结果：通脉口服液含药血清在5％～20％浓度范围明显抑制脂多糖（LPS）刺激的系膜细胞增殖；在观察的2个时间点（6h、24h）上，LPS均可刺激系膜细胞IL-β1 mRNA的表达及提高IL-β1 分泌水平，在6h时间点上LPS可刺激系膜细胞IL-10mRNA的表达及提高IL-10分泌水平；而通脉口服液在10％浓度上能够明显抑制LPS诱导的系膜细胞IL-β1 分泌及其mRNA的表达，在6h时间点上促进LPS诱导的系膜细胞IL-10分泌及其mRNA的表达。结论：中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-β1 的产生，促进LPS诱导的系膜细胞IL-10的产生；肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之-。     

EGCG对高糖环境下小鼠足细胞增殖和P21^Cip1、P27^Kip1表达的影响

目的：研究作为绿茶主要活性成分的EGCG对高糖环境下足细胞增殖和周期素激酶抑制剂P21^Cip1和P27^Kip1表达的影响,从而探讨其作用机制。方法：以高糖（25mmol/L）培养的小鼠足细胞为研究对象,维生素E为对照,以不同浓度EGCG（0.2,10,100μmol/L）培养24h、48h、72h,首先以相差显微镜观察足细胞形态改变;其次,以BrduELISA法检测细胞增殖;流式细胞仪分析足细胞G1/G0、S期、G2/M期百分比;RT-PCR检测细胞周期依赖型蛋白激酶抑制剂P21^Cip1mRNA和P27^Kip1mRNA表达。结果：（1）相差显微镜下观察,高糖刺激后24h,部分足细胞脱落,呈不规则形态。（2）BrduELISA法以正常糖为对照,高糖刺激24h后,足细胞增殖无统计学差异,48h和72h后足细胞增殖减少,有统计学差异（P〈0.05）;以高糖组为对照,高糖刺激24h,维生素E组和维生素E＋EGCG协同作用组促进足细胞增殖有统计学差异（P〈0.05）,EGCG（0.2,10,100μmol/L）作用组无统计学意义;48h实验结果和24h相同;72hEGCG（100μmol/L）维生素E组和维生素E＋EGCG协同作用组促进足细胞增殖作用有统计学差异（P〈0.01）。（3）不同浓度EGCG对高糖刺激后足细胞周期G1/G0期、S期、G2/M期百分比无统计学差异（P〉0.05）。（4）RT-PCR高糖刺激后24h,足细胞P21^Cip1mRNA表达有上升,但无统计学意义（P〉0.05）;随EGCG浓度增加,以维生素E为对照,P21^Cip1mRNA表达无统计学差异（P〉0.05）。正常糖组为对照,高糖刺激后24h足细胞P27^Kip1mRNA表达上调,有统计学差异（P〈0.01）,随EGCG浓度增加,P27^Kip1mRNA表达无统计学差异（P〉0.05）。结论：EGCG（100μmol/L）作用72h促进高糖环境下足细胞增殖,对细胞周期作用不明显,高糖刺激后24h足细胞P27^Kip1mRNA表达上调,EGCG对足细胞细胞周期依赖型蛋白激酶抑制P21^Cip1mRNA和P27^Kip1表达无明显影响,提示EGCG促高糖环境下足细胞增殖作用可能还存在其他机制。     

高糖对原代培养人系膜细胞表达FN与IL-6的影响

目的：了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达FN、IL-6的影响,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制。方法：取自愿水囊引产的胎儿肾,解剖取肾皮质剪碎,应用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞。ELISA方法检测FN、IL-6的表达。结果：与正常组相比较,高糖组FN、IL-6在24 h、48 h、72 h均显著升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论：高糖能够升高系膜细胞FN、IL-6分泌,这可能与肾小球系膜细胞细胞外基质积聚和糖尿病肾病发病密切相关。     

金雀异黄素对终末糖基化产物刺激大鼠系膜细胞终末糖基化产物受体表达的影响

目的 研究金雀异黄素(Gen)对终末糖基化产物(AGEs)刺激下其系膜细胞受体(RAGE)表达的影响。方法 以AGEs刺激高糖培养的SD大鼠系膜细胞,采用细胞免疫组化法检测系膜细胞RAGE表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞内.RAGEmRNA水平;比色法检测细胞内丙二醛(MDA)水平。结果 AGEs刺激高糖培养的系膜细胞后RAGE表达及RAGEmRNA水平明显增加(P<0.05);MDA水平显著增加(P<0.01)。Gen能有效抑制RAGE及其:mRNA的表达,减少MDA水平,且呈时间和浓度依赖效应,以200μmol／L作用48 h效果最显著(P<0.01)。结论 体外模拟糖尿病环境下,AGEs刺激使。肾系膜细胞内RAGE高表达。Gen可以下调AGEs刺激后系膜细胞RAGE的异常表达,其可能的机制是阻断了氧化应激介导的AGEs-RAGE之间的正反馈途径,表现为细胞内MDA含量减低。     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞TIMP-1表达的影响

目的探讨金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞表达基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法实验分组：对照组，低糖DMEM培养液(不含金雀异黄素)；实验组，高糖DMEM培养液 不同浓度金雀异黄素(含0、5、10、50、100、200μmol／L金雀异黄素)。各组分别培养12、24、48h。ELISA法检测细胞培养上清液TIMP-1含量；半定量RT—PCR法检测TIMP-1 mRNA表达。结果在实验48h内，金雀异黄素浓度和时间依赖性地抑制系膜细胞外TIMP-1的蛋白水平。对照组及高糖 不同浓度金雀异黄素作用24h后TIMP-1 mRNA表达量分别为0．797、1．286、1．186、1．013、0．954、0．939、0．823；对照组、高糖组及高糖 50μmol／L金雀异黄素组作用不同时间(12、24、48h)后TIMP-1 mRNA表达量分别为0．801、1．084、0．970、0．865、0．820。结论在体外高糖条件下，一定浓度的金雀异黄素可降低大鼠肾小球系膜细胞TIMP-1的蛋白水平及其mRNA的表达，提示金雀异黄素可能通过促进细胞外基质(ECM)的降解而减少ECM的积聚，延缓糖尿病肾病进展。     

转化生长因子-β对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及细胞外基质成分表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质(ECM)成分表达的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术,观察不同时间TGF-β1对HMCs CTGF mRNA及其蛋白质表达的影响,同时观察对Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原和纤维结合蛋白(FN)mRNA表达的影响.结果:在正常培养情况下,HMCs有CTGF mRNA及其蛋白质的表达.HMCs在TGF-β1刺激后,CTGFmRNA表达明显增加,6 h达到高峰,可持续增高到24 h;CTGF蛋白表达12 h达到高峰,可持续增高至24 h.Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA表达逐渐增加,24 h明显增加并达到高峰.FN mRNA12 h达到高峰,24 h后开始回落.结论:HMCs可表达CTGF.TGF-β可诱导体外培养的HMCsCTGF及ECM成分高表达.     

megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞增殖和基质金属蛋白酶2及其抑制因子表达的影响

目的 观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）的表达及Ⅳ型胶原水平的影响,探讨megsin与系膜细胞增殖和细胞外基质代谢的关系。 方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别于培养12、24、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度;Western印迹法检测系膜细胞megsin、MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平;放免法检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。 结果 高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、TIMP-2表达上调,MMP-2表达下调,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高。megsin基因转染后上述变化趋势更加显著。 结论 megsin可诱导系膜细胞增殖,并通过上调TIMP-2、下调MMP-2抑制细胞外基质降解,是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

通络保肾复方对LPS刺激的肾小球足细胞增殖及其nephrin表达的影响

目的:探讨通络保肾复方对肾小球足细胞增殖及肾小球足细胞表达nephrin的影响。方法:将5%含药血清培养基加入体外培养的肾小球足细胞,分别于脂多糖(LPS)刺激肾小球足细胞12 h、24 h、36 h、48 h后,MTT方法检测各组肾小球足细胞的增殖情况,以及Western-blot方法检测LPS刺激36 h时肾小球足细胞nephrin的表达。结果:LPS刺激12 h后肾小球足细胞开始增殖,36 h达到高峰,48 h后开始下降。通络保肾复方能够抑制肾小球足细胞的增殖,其中以通络保肾复方大剂量组效果显著,与LPS组比较差异有统计学意义(P0.05)。同时通络保肾复方可以上调36 h时由LPS刺激导致的肾小球足细胞nephrin的表达。结论:本研究结果提示,通络保肾复方可以抑制LPS诱导的肾小球足细胞的增殖,上调肾小球足细胞nephrin的表达,减少足细胞的损伤,降低蛋白尿的发生,从而延缓糖尿病肾病的进一步发展。     

糖肾汤对糖基化蛋白诱导培养下系膜细胞MMP-2表达的影响

目的：研究糖基化蛋白诱导培养下，糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性及mRNA的影响。方法：采用血清药理学及体外大鼠肾小球系膜细胞培养方法，用糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）刺激肾小球系膜细胞，以明胶酶谱法检测培养上清MMP-2的活性，并提取细胞RNA，采用RT-PCR法检测系膜细胞MMP-2mRNA表达。结果：糖基化蛋白可抑制MMP-2的活性及mRNA表达，糖肾汤能提高MMP-2活性及mRNA表达。结论：糖肾汤对糖尿病肾病金属蛋白酶系统紊乱具有一定的调节作用。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。