甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞周期的作用机制研究

目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive haemagglutination vaccine,PA-MSHA)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期的作用及其机制.方法 培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞.MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响.流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用.Western blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况.结果 与对照组相比,PA-MSHA显著抑制MHCC97L和HepG2细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性(P＜0.05).PA-MSHA显著诱导肝癌细胞周期阻滞,PA-MSHA作用后G0-G1期和G2-M期细胞比例显著增高,而S期细胞比例则显著下降(P＜0.05).PA-MSHA显著抑制Cyclin D1、CDK2、PCNA蛋白的表达,而促进p21和p27的表达.外源性甘露糖可显著抑制PA-MSHA对肝癌细胞增殖和周期的作用(P＜0.05).结论 PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导HCC细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.这一作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的.     

金荞麦提取物调控DDIT4对肾癌细胞凋亡的影响

目的:探讨金荞麦提取物Fr4对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度Fr4处理肾癌细胞786-O,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测786-O细胞中Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、DDIT4表达。建立过表达DDIT4细胞。在786-O细胞中转染si-DDIT4,并用400μg/ml Fr4处理,研究786-O细胞增殖、凋亡变化。结果:Fr4明显抑制786-O细胞活性(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;不同浓度Fr4显著减少Cyclin D1蛋白表达量,提高P21蛋白水平(P0.05),并呈剂量依赖性。400μg/ml的Fr4明显增加细胞凋亡率和Bax、DDIT4蛋白表达量(P0.05),降低Bcl-2蛋白水平。过表达DDIT4显著抑制24 h、48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平,增加细胞凋亡率、P21和Bax蛋白表达量(P0.05)。抑制DDIT4逆转了Fr4对786-O细胞增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,和对细胞凋亡、DDIT4、P21和Bax蛋白表达的促进作用。结论:金荞麦提取物Fr4通过调控DDIT4表达抑制肾癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

洛伐他汀对多囊肾病肾间质成纤维细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:探讨洛伐他汀对体外培养的常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)肾间质成纤维细胞增殖及细胞外基质表达的影响.方法:用不同浓度的洛伐他汀和香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)处理培养的ADPKD肾间质成纤维细胞,24 h或48 h后,用MTT法检测细胞增殖,用放免法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原.结果:与对照组比较,洛伐他汀抑制ADPKD肾间质成纤维细胞增殖(P<0.05);使细胞Ⅰ型、Ⅳ型胶原的表达水平减少(P<0.05),Ⅲ型前胶原分泌无变化;其作用效果呈浓度依赖性.GGPP能明显逆转洛伐他汀的上述作用.结论:洛伐他汀可能通过抑制GGPP的合成,进而抑制某些参与细胞增殖及细胞周期调控蛋白质的异戊二烯化而达到抑制细胞增殖和细胞外基质表达的作用,从而延缓多囊肾病的发生与发展.     

双氢青蒿素对人增生性瘢痕成纤维细胞体外作用及其机制的研究

目的探究双氢青蒿素在体外对人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblasts, HSFs)的作用及相关的作用机制。方法通过噻唑蓝实验检测双氢青蒿素作用24 h和48 h的细胞毒性;通过锥虫蓝染色计数活细胞检测双氢青蒿素作用24 h和48 h后对细胞增殖能力的影响;通过划痕实验检测双氢青蒿素对人HSFs迁移能力的影响。对双氢青蒿素作用24 h后的细胞进行AV-PI双染色,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。试剂盒染色后用流式细胞仪检测双氢青蒿素作用24 h后细胞周期的变化。应用Western blot对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β, TGF-β1)、半胱天冬蛋白酶3 (caspase3)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和Ⅰ型胶原的蛋白表达进行定量分析。通过实时定量PCR来检测TGF-β1 m RNA的表达量。结果⑴双氢青蒿素呈时间和剂量依赖性地对人HSFs表现出明显的细胞毒性并能显著抑制人HSFs的增殖。⑵双氢青蒿素可以剂量依赖性地抑制人HSFs的迁移。⑶双氢青蒿素可以剂量依赖性地激活caspase3,从而增加人HSFs的凋亡,还可以通过抑制Cyclin D1表达将人HSFs细胞周期阻滞在G0-G1期。⑷双氢青蒿素可以剂量依赖性地抑制人HSFs内TGF-β1和Ⅰ型胶原的表达。结论双氢青蒿素可以时间和剂量依赖性地在体外抑制人HSFs的增殖并可以抑制其迁移,可以剂量依赖性地激活Caspase3来增加人HSFs的凋亡并可以通过抑制Cyclin D1表达引起人HSFs周期发生G0-G1期阻滞。双氢青蒿素的作用机制与其抑制成纤维细胞内TGF-β1和Ⅰ型胶原的表达有关。     

DCPIB对小胶质细胞株BV-2细胞增殖的抑制作用

目的 探讨容积调控性氯离子通道(VRACs)阻断剂DCPIB对小胶质细胞BV-2细胞增殖的影响及作用机制.方法 不同浓度的DCPIB(10、20、40 μmol/L)作用于BV-2细胞相应的时间后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测DCPIB对细胞增殖的抑制率;流式细胞术检测药物处理后BV-2细胞周期的分布;Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达.结果 VRACs阻断剂DCPIB可使细胞生长曲线下移,呈时间和浓度依赖性;DCPIB抑制细胞增殖,作用细胞48 h后的抑制率分别为(29.20±3.99)％、(38.93±2.36)％、(68.52±2.16)％,与正常对照组比较均有明显增高(P＜0.01).细胞周期阻滞在G0/G1期,G2/M期和S期细胞明显减少.DCPIB作用BV-2细胞72 h后,与对照组比较,Cyclin D1蛋白表达明显降低.结论 VRACs阻断剂DCPIB可以抑制BV-2细胞增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期和下调Cyclin D1蛋白的表达有关.     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用实验研究

目的:研究苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其相关作用机制。方法:通过收集手术切除的瘢痕疙瘩进行体外培养成纤维细胞,将细胞分为3组,分别加入10μmol/L,20μmol/L的苦参碱以及对照组(0.9%NaCl)进行实验。MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞技术进行细胞周期分析;Hoechest33258染色检测细胞凋亡情况;Westernblot实验检测苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和自噬相关调控蛋白表达的影响。结果:通过不同浓度的苦参碱处理细胞后,MTT结果发现成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制作用具有剂量依赖性;细胞周期分析发现,苦参碱作用后细胞的G1-S期转化受到了不同程度的抑制;Hoechest 33258染色发现苦参碱可以促进凋亡细胞的增加;Western blot实验结果发现苦参碱可以抑制CDK4、CDK6、Bcl-2和LC3-I蛋白的表达,促进Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达。结论:苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,能够影响细胞增殖、凋亡和自噬相关调控蛋白的表达。     

细胞周期蛋白D1在三氧化二砷抑制人胆囊癌细胞生长中的作用

目的 探讨细胞周期蛋白(Cyclin)D1在三氧化二砷(As2O3)抑制人胆囊癌细胞体外生长中的作用.方法 不同浓度的As2O3作用于胆囊癌细胞GBC-SD,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期分布.Western印迹和RT-PCR检测Cyclin D1、D2、D3和CDK4、K6的蛋白和mRNA表达.构建Cyclin D1的表达质粒并转染GBC细胞,观察Cyclin D1过表达时细胞周期的变化.结果 As2O3能抑制胆囊癌细胞生长,作用呈时间、剂量一效应关系;流式细胞仪检测发现As2O3可将增殖过程中的胆囊癌细胞阻滞于G1期;Western印迹及RT-PCR检测显示Cyclin D1表达下降;过表达Cyelin D1逆转了As2O3对细胞周期的改变.结论 Cyclin D1在As2O3抑制人胆囊癌细胞的生长中起重要作用.     

p27kipl和cyclin D1在肾细胞癌中的表达及生物学意义

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27kipl(p27)和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1)与肾癌生物学行为的关系。方法 采用免疫组化SP法测定41例肾透明细胞癌及21例正常肾组织石蜡切片中p27蛋白和Cyclin D1蛋白的表达。结果 p27在正常肾组织的阳性率分别为82．4％、57．1％、20．0％,p27表达与肾癌的分级呈负相关（P＜0．01）。Cyclin D1在正常肾组织中的阳性率为33．3％。在肾癌组织中的阳性率为68．3％（P＜0．01）。Cyclin D1在G1、G2、G3肾癌组织的阳性率分别为88．2％、71．4％、30．0％,Cyclin D1蛋白的表达与肾癌的分级亦呈负相关（P＜0．05）。p27和Cyclin D1间在肾癌中的表达呈正相关（P＜0．001）,r=0.6。结论 p27和Cyclin D1与肾癌的组织学分级呈负相关,提示p27和Cyclin D1有可能作为判别肾癌分化 程度的标志物,并可能成为判断预后的有用指标。     

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。 方法 用5 μg/L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0~5 μmol/L）MG-132预处理NRK-49F细胞后,MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况;Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。 结果 TGF-β1（5 μg/L）可促进NRK-49F细胞增殖,而MG-132（0.25~5 μmol/L）呈剂量依赖性地抑制这种效应,使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5 μg/L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3.880%±0.365%比4.723%±1.582%）,而MG-132（0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50 μmol/L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8.8％、18.7％、22.8％、31.3％、37.7％、38.9％）。MG-132（2.5 μmol/L）+TGF-β1组及 MG-132（2.5 μmol/L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示,MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达,促进caspase-3的活性片段产生,Bcl-2表达下调,并能使Bax和p21表达上调,但对p27没有明显的影响。 结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖,并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关,提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。     

Tet-on基因表达系统调控HIF-1α表达对肝癌细胞增殖的影响

目的 探讨HIF-1α表达对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响.方法 利用Tet-on基因表达系统调控肝癌细胞系HepG2中HIF-1α的表达,检测细胞周期和细胞增殖的变化.结果 酶切和DNA测序证实Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α构建成功.获得了受强力霉素调控、稳定表达HIF-1α的肝癌细胞.随着强力霉素浓度增加,hiF-1α基因表达增加,HIF-1α在体外明显增加HepG2细胞增殖活性;G0/G1期细胞指数减少,细胞增殖指数增多.RT-PCR检测结果表明,随着HIF-1α基因表达增加,Cyclin A mRNA表达增加(P＜0.001),Cyclin D1和Cyclin E mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 HIF-1α基因在体外可以通过HIF-1α表达水平的增加而促进肝癌细胞增殖活性,通过CyclinA表达增加缩短了肝癌细胞增殖周期.     

熊果酸对HepG2增殖和凋亡的影响及部分机制研究

目的:观察熊果酸对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其部分机制的研究。方法:将不同浓度熊果酸体外培养人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测熊果酸对细胞增殖抑制的情况,利用流式细胞检测术观察熊果酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。同时利用Western blot法检测不同浓度熊果酸干预后人肝癌HepG2细胞pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:不同浓度熊果酸对人肝癌HepG2细胞的增殖均有抑制效应,并呈剂量、时间依赖性(P<0.05);60μmol/L熊果酸作用于人肝癌细胞株HepG2 72 h后达到最大细胞凋亡率(78.723±3.623)%。熊果酸可明显增加G_0/G_1期的细胞含量,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡。熊果酸可抑制pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达,并随着浓度、时间逐渐上调抑制作用更加明显。结论:熊果酸可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,阻滞细胞期于G0/G1期,促进癌细胞凋亡,这一过程可能与下调细胞pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达有关。     

TRIM55对大鼠系膜细胞增殖的调控作用

目的系膜增殖性肾炎是世界范围内高发的肾小球疾病,其发病与系膜细胞异常增殖有关,但调控系膜细胞增殖的内在分子机制尚不明确。本研究旨在探索TRIM55对大鼠系膜细胞(RMCs)增殖的调控作用及机制。 方法向8周龄雄性SD大鼠尾静脉注射2.5 mg/kg抗Thy-1抗体建立抗Thy-1肾炎模型。PAS染色观察肾脏病理表现,qPCR检测大鼠肾小球TRIM55 mRNA表达量;利用质粒及siRNA转染分别得到TRIM55过表达及低表达的RMCs,利用流式细胞仪检测其细胞周期;Western印迹检测p27及Cyclin D1的蛋白表达量。 结果TRIM55在抗Thy-1肾炎模型系膜增殖期高表达(P<0.01,T＝3.625)。体外RMCs中,TRIM55过表达可促进RMCs细胞周期由G1期向G2/S期转化,诱导系膜细胞增殖(P<0.01,T＝13.1);TRIM55低表达可引起RMCs的G1期阻滞,抑制RMCs增殖(P<0.01,T＝5.31)。此外,TRIM55过表达可下调p27表达、上调Cyclin D1;反之,TRIM55低表达可上调p27表达、下调Cyclin D1。 结论TRIM55可通过调节p27及Cyclin D1表达水平影响细胞由G1期到G2/S期的转化,进而调控RMCs的增殖。     

水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响

目的 探讨水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响,为临床应用水蛭素治疗增生性瘢痕提供理论基础.方法 用消化法进行人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的体外培养,用流式细胞仪检测不同浓度水蛭素对不同来源的成纤维细胞细胞周期的影响,用Western印迹法检测部分与细胞周期相关的蛋白（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27及细胞周期蛋白E（cyclin-E）的表达.结果 随着水蛭素浓度的增加,人体正常皮肤及增生性瘢痕组织成纤维细胞G1期细胞增加而S期细胞则减少,周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27的表达上调,细胞周期蛋白E的表达下调.结论 水蛭素通过影响细胞周期调控蛋白的表达,使正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的周期分布发生改变,导致细胞周期G1期阻滞（G1 phase arrest）,从而抑制成纤维细胞增生,因此水蛭素对于瘢痕的防治有一定的作用.     

SB939诱导乳腺癌细胞周期阻滞和凋亡的作用及机制

目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂SB939对乳腺癌细胞株T47D和MDA-MB-231增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 不同浓度SB939处理细胞后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测对细胞增殖影响;碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期变化;膜联蛋白V(Annexin V)/PI 双染法检测细胞凋亡;Western blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)等蛋白表达水平;实时定量聚合酶链反应( Real-time PCR)检测p21及细胞周期蛋白(Cyclin) B1 mRNA水平.结果 SB939 明显抑制上述两种细胞增殖,24h半数抑制浓度(IC50)分别为(2.721±0.320)、(5.647±0.470)μmol/L;1 μmol/L药物作用细胞24h,G2/M期比例增加,分别为(21.20±1.90)％、(28.35±2.25)％,凋亡细胞比例增加,分别为(37.60±1.34)％、(34.40±1.77)％,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);PARP剪切明显增加,bax、p21表达增多,B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、cdc2、细胞周期蛋白(Cyclin) B1表达减少;p21 mRNA水平增加,Cyclin B1 mRNA水平减少.结论 SB939在体外条件下能够明显抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞及促进细胞凋亡,并呈明显的量效关系.     

黄芪甲苷对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的影响

目的探讨黄芪甲苷对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取患者经手术切除的增生性瘢痕组织,从中提取成纤维细胞进行培养。采用MTT试验检测不同浓度的黄芪甲苷对成纤维细胞增殖的影响,并应用流式细胞技术对黄芪甲苷作用后的成纤维细胞的周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法,观察经黄芪甲苷处理的成纤维细胞的凋亡情况。采用Western blot和RT-PCR验证黄芪甲苷对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果不同浓度的黄芪甲苷对成纤维细胞增殖均有一定的抑制作用,且随着药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用愈发明显。大多数的成纤维细胞阻滞于G1期,而进入S期的细胞比例呈下降趋势,且细胞周期受到阻断;通过黄芪甲苷对抑制细胞周期蛋白Cyclin D1和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来影响细胞周期的进程并诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论黄芪甲苷能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并诱导其凋亡,适于对增生性瘢痕的预防和治疗。     

miR-27a-3p调控Ras/Raf/MEK/ERK信号通路抑制肾透明细胞癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-27a-3 p对肾透明细胞癌细胞Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的作用,观察其对肾透明细胞癌细胞增殖的影响.方法 使用脂质体试剂lipofectamine 2000将miR-27a-3p模拟物或miR-NC转染至肾透明细胞癌细胞株Caki-1和A-498;qRT-PCR和Western blot检测miR-27a-3p的靶基因KRAS及下游通路蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖能力.结果 KRAS基因和下游通路蛋白的表达降低;转染miR-27a-3p后的肾透明细胞癌细胞周期明显被抑制,G0/G1期的细胞比例上升(P<0.01);肾透明细胞癌细胞活力和增殖能力降低(P<0.05).结论 过表达miR-27a-3p在体外可以显著降低肾透明细胞癌细胞Ras/Raf/MEK/ERK蛋白的表达,进而显著抑制其增殖能力.     

大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖影响及作用机制研究

目的:探讨大蒜素对体外培养结肠癌HT29细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对HT29细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达。结果:MTT显示大蒜素能抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示10μg/ml大蒜素可明显诱导HT29细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期;可降低癌基因蛋白Bcl表达,而促进Bax表达。结论:大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖具有抑制作用,可能与细胞周期阻滞和凋亡相关蛋白表达有关。     

大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及细胞周期作用的实验研究

目的观察大黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法将切取于增生性瘢痕患者的瘢痕组织标本分成A（对照组）、B、C、D四组,每组6个标本,行体外成纤维细胞培养,采用0、50、100、200μg/ml的大黄素依次对A、B、C、D组的成纤维细胞进行干预,应用MTT比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果B、C、D组标本中成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制于G0/G1期（P〈0.05）,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。而且大黄素在50～200μg/ml的范围内,对成纤维细胞增殖的抑制有浓度的依赖性。结论大黄素具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗人增生性瘢痕的有效药物。     

富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白及其肽段对人系膜细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白（SPARC）的全长蛋白及其2．1肽段对人肾小球系膜细胞（HMC）增殖、凋亡及细胞周期的影响，初步探讨SPARE全长蛋白及其肽段对HMC作用的可能机制。方法 采用体外传代培养的HMC，用不同浓度的SPARC全长蛋白及其肽段分别作用不同时间。采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡；应用Western印迹检测SPARC全长蛋白及肽段对HMC细胞周期调控蛋白cyclin D1、p21^Wafl表达的影响。结果 （1）与对照组比较，不同浓度（12．5、25、50μg／ml）SPARC全长蛋白及其肽段作用48h都能明显抑制HMC的增殖，并呈剂量和时间依赖性，96h达到高峰。（2）12．5μg／ml SPARC全长蛋白及其肽段作用96h，能明显影响细胞周期，使G0／G1期细胞增加，S期细胞减少，可使HMC的细胞周期阻滞在G0／G1期。（3）SPARC全长蛋白及其肽段可在体外诱导HMC细胞凋亡。（4）cyclin D1的表达明显减弱、而p21^Wafl的表达明显增强。结论 SPARC全长蛋白及其肽段可剂量依赖性地抑制HMC的增殖，其作用可能通过抑制cyclin D1的表达、上调p21^Wafl的表达，使细胞周期阻滞在G0／G1期。这为临床治疗原发性、继发性系膜增生性肾小球肾炎提供了线索。     

昆布多糖硫酸酯对PC-3细胞PTEN和P27kip1基因表达的影响

目的:研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3的作用,以及对PC-3细胞PTEN和P27kip1基因表达的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:分别用0、50、100、200μg/ml浓度的LAMS作用于PC-3细胞,用WST-8法检测其对细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察PC-3细胞形态的变化,RT-PCR和Western印迹检测细胞增殖、凋亡相关基因PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达。结果:LAMS能抑制PC-3细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同浓度LAMS诱导PC-3细胞出现剂量依赖性S期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后凋亡率增加,并出现凋亡的形态学改变,相关基因PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达呈剂量依赖性增加。结论:LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S期阻滞和凋亡,PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达明显增加,可能是其抑制前列腺癌生长的机制之一。