羟基红花黄色素A对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶-1(MKP-1)基因转录及蛋白表达之间的关系。方法 HSYA 10μmol.L-1和ox-LDL 35 mg.L-1与VSMC共培育48 h,MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期,逆转录PCR(RT-PCR)观察ERK1/2和MKP-1基因表达,Western印迹法观察ERK1/2和MKP-1蛋白表达。结果与ox-LDL 35 mg.L-1模型组比较,加入HSYA 10μmol.L-1组细胞存活率明显下降,G0/G1期细胞明显增多,ERK1 mRNA表达下降了42.2%(P<0.01),MKP-1 mRNA显著增加了86.9%(P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达降低了39.9%(P<0.01),MKP-1蛋白表达增加了80.6%(P<0.01);加入PD98059 10μmol.L-1组,细胞存活率明显降低了58.3%(P<0.01),G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),ERK1 mRNA表达下降了45.9%(P<0.01);p-ERK1/2蛋白表达下降了45.9%(P<0.01);PD98059 10μmol.L-1+HSYA 10μmol.L-1同时加入,细胞生存率下降了61.9%(P<0.01),G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),ERK1 mRNA表达进一步减少(P<0.01),MKP-1 mRNA增加了110%(P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达下降了51.2%(P<0.01),MKP-1蛋白表达增加了62.4%(P<0.01)。结论 HSYA通过增强MKP-1蛋白表达、降低p-ERK1/2蛋白活性和抑制细胞周期运转的机制抑制VSMC增殖。     

黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系

目的：研究黄色素(SY)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及机制。方法：以培养的家兔VSMC为材料,用细胞计数和³²P-参入法,观察SY对VSMC的增殖及3种蛋白激酶活性。结果：SY抑制VSMC的增殖,且呈剂量和时间依赖性,1.0 mg.mL^-1作用最强,抑制率为54.6%; SY抑制VSMC的DNA合成,1.0 mg.mL^-1作用2 d,抑制率为80.2%;在一定浓度范围内,随着SY浓度的升高,VSMC中3种蛋白激酶(TPK,PKC及MAPK)活性下降。结论：SY对VSMC的增殖有抑制作用,可能是通过抑制TPK和PKC依赖的MAPK信号传导途径而发挥作用。     

羟基红花黄色素A对体外培养人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用

红花具活血通经，散瘀止痛的功效，其主要水溶性组分为红花黄色素，红花黄色素的主要成分是羟基红花黄色素A。临床上红花多用于治疗冠心病、脑血栓、高血脂、肿瘤等。近年来人们对红花黄色素和羟基红花黄色素A的研究多集中在抗心肌缺血，抗血栓等心血管药理活性上，对它们在抗肿瘤方面的研究国内外鲜见报道。笔者通过建立非极性大孔树脂柱层析法，从红花中提取分离了羟基红花黄色素A，并观察到其能显著抑制鸡胚尿囊膜上新生血管的生成。     

抵抗素通过ERK 1/2信号途径诱导人血管平滑肌细胞增殖

抵抗素与动脉粥样硬化具有相关性。血管平滑肌的增殖是动脉粥样硬化形成的关键步骤。血管平滑肌表达抵抗素。研究旨在评估抵抗素是否诱导血管平滑肌增殖以及其具体机制。人血管平滑肌细胞以不同浓度抵抗素干预。3H-掺入法检测提示抵抗素呈剂量依赖性诱导细胞增殖。为获得更多抵抗素作用机制我们研究了细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号途径。抵抗素作用后人血管平滑肌细胞出现ERK 1/2磷酸化。ERK磷酸化特异抑制剂U0126显著抑制抵抗素诱导的人血管平滑肌细胞ERK 1/2磷酸化以及细胞增殖。研究结果表明抵抗素通过ERK 1/2信号途径诱导人血管平滑肌细胞增殖。这可能是抵抗素导致动脉粥样硬化的机制之一。     

重组平颏海蛇磷脂酶A2对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察重组平颏海蛇磷脂酶A2(rPLA2)对离体大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果:各组的细胞增殖率分别为对照组(0.781±0.463);rPLA2100mg·L-1组(0.415±0.205);rPLA210mg·L-1(0.942±0.258);rPLA21mg·L-1组(1.005±0.350),,其中高剂量rPLA2100mg·L-1组与对照组相比细胞增殖率有显著差异(P<0.05);低剂量rPLA210mg·L-1和rPLA21mg·L-1组与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术测定的结果显示rPLA2100mg·L-1组可以使VSMC大部分处于G0/G1期,与对照组相比有明显差异(P<0.01)。结论:重组平颏海蛇磷脂酶A2对大鼠血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。     

羟基红花黄色素A对创伤性颅脑损伤大鼠MAPK通路的影响

目的:观察羟基红花黄色素A对大鼠创伤性颅脑损伤后神经功能的作用及对海马MAPK信号通路的影响。方法:建立大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)模型,90只雄性SD大鼠分为假手术组(SHAM)、颅脑损伤组(TBI)和羟基红花黄色素A治疗组(HSYA),各组又分为创伤后15,30,60 min3个时间点,每组10只。应用转棒仪评价大鼠综合运动能力,采用Western blotting检测大鼠海马p-ERK,p-JNK和p-p38表达。结果:创伤后15,30,60 min三个时间点TBI组综合运动能力均明显低于SHAM组(P<0.01,P<0.01,P<0.01),HSYA组与TBI组相比均显著回升(P<0.05,P<0.05, P<0.05)。与SHAM组相比,TBI组大鼠海马区p-ERK和p-JNK在创伤后15 min(P<0.01,P<0.05)和30 min(P<0.05,P<0.05)均明显升高,30 min后逐渐下降。与TBI组相比,HSYA显著下调TBI大鼠创伤后15 min、30 min p-ERK水平(P<0.05, P<0.05)和15 min p-JNK水平(P<0.05)。而p-p38表达在各组均没有明显变化。结论:羟基红花黄色素A可改善大鼠脑创伤后神经功能损伤,其机制与调节创伤性颅脑损伤后海马区ERK1/2和JNK信号活化水平有关。     

细胞外信号调节激酶1/2信号通路对B淋巴细胞的影响

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated proteinkinase,MAPK)普遍存在于低等原核细胞和高等哺乳类细胞内,且具有生物进化的高度保守性。MAPK信号通路能将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,并引起细胞多种生物学反应。目前已发现多条并行的MAPK信号通路,其中细胞外信号调节激酶     

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。     

羟基红花黄色素A对大鼠血栓形成和血小板聚集功能的影响

一类新药羟基红花黄色素A为从传统中草药红花中提取的有效成分,为探讨其抗缺血性脑损伤机制是否与抗血栓形成和抑制血小板聚集有关,我们参照文献[1,2]测定其对大鼠血小板聚集功能和体内动静脉旁路血栓形成的影响.     

通过ERK/MAPK通路观察水飞蓟素对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响

目的 探究水飞蓟素对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响,以及对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的调控机制。方法 50只SD大鼠随机选取40只建立梗阻性黄疸大鼠模型,余10只大鼠为假手术组,建模成功的大鼠随机分为模型组及水飞蓟素低、中、高(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)剂量组,每组10只。灌胃给予药物处理,4周后检测肝功能指标;采用酶联免疫吸附试验检测白介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;观察肝脏组织病理学变化以及肝细胞凋亡;采用免疫组化法检测肝组织胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9蛋白表达;蛋白免疫印迹法检测肝组织ERK/p38MAPK通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较,水飞蓟素各剂量组大鼠的肝组织病变随药物剂量升高而逐渐减轻,且肝细胞凋亡率也逐渐降低(P <0.05);...     

Hydroxysafflor yellow A inhibits hypoxia/reoxygenation-induced cardiomyocyte injury via regulating the AMPK/NLRP3 inflammasome pathway

Hydroxysafflor yellow A (HSYA) is an effective therapeutic agent that alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury (MIRI), but the exact mechanisms remain elusive. The aim of this study was to investigate the potential protective effect of HSYA against MIRI through mechanisms related to NLRP3 inflammasome regulation. In this study, hypoxia/reoxygenation (H/R)-induced H9c2 cardiomyocytes were treated with HSYA or the AMPK inhibitor, compound C (CC). Our results showed that HSYA pretreatment improved cardiomyocyte viability, maintained mitochondrial membrane potential, reduced apoptotic cardiomyocytes, decreased caspase-3 activity, and inhibited NOD-like receptor 3 (NLRP3) inflammasome activation during H/R injury. Moreover, the inhibition of AMPK activation by the CC inhibitor partially abolished the effects of HSYA treatment, including suppressing the upregulation of NLRP3 inflammasome components (NLRP3, caspase-1 and interleukin-1β) and promoting autophagy (LC3-II/LC3-I and p62). In conclusion, the protective mechanism of HSYA in H/R-induced cardiomyocyte injury is associated with inhibiting NLRP3 inflammasome activation through the AMPK signalling pathway.     

下调PCNA和VCAM-1表达参与山柰酚抑制人前列腺癌细胞增殖

目的探讨山柰酚对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用MTT、细胞计数、流式细胞学等方法检测山柰酚对PC-3细胞增殖及凋亡的作用;使用West-ern blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)及血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule 1,VCAM-1)的表达。结果山柰酚抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖,降低PCNA及VCAM-1的表达水平,诱导PC-3细胞阻滞于S期及G2/M期,但山柰酚对PC-3细胞凋亡无影响。结论山柰酚诱导PC-3细胞阻滞于S期及G2/M期,山柰酚抑制PC-3细胞增殖的作用与该药下调PCNA及VCAM-1的表达有关。     

Hydroxysafflor yellow A induces apoptosis in activated hepatic stellate cells through ERK1/2 pathway in vitro

A key feature in the molecular pathogenesis of liver fibrosis requires maintenance of the activated hepatic stellate cells (HSCs) phenotype by inhibition of apoptosis. The induction of apoptosis in activated HSCs has been proposed as an antifibrotic treatment strategy. This study aims at evaluating the effect of hydroxysafflor yellow A (HSYA) on apoptosis of culture-activated HSCs and further elucidating the underlying mechanisms. Primary HSCs were isolated from rats. The analysis of the cell cycle be performed by flow cytometry, detection of apoptosis by Annexin V-FITC/ PI staining, and the results were confirmed by DNA fragmentation, and cleavage of caspase-3 and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). Real-time polymerase chain reaction and Western blotting were used to analyze the expression of genes. Our results revealed that HSYA significantly induced apoptosis in a dose- and time-dependent manner. HSYA suppresses the activation of ERK1/2 and ERK1/2-regulated gene expression, including Bcl-2, Cytochrome c, caspase-9, and caspase-3, leading to the enhancement of apoptosis. Pharmacological blockade of ERK1/2 kinase abrogation this action of HSYA. Our data provide a molecular basis for the anti-hepatic fibrosis activity of HSYA.     

杜鹃素通过降低Cx43的表达抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖

目的研究Cx43在杜鹃素抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法体外培养原代大鼠VSMCs细胞,随机分为对照组、AngⅡ刺激组(模型组)、AngⅡ+杜鹃素组(给药组)。CCK-8法检测细胞活力,Ed U法检测细胞增殖活性,流式细胞术观察细胞周期,real-time PCR和Western blot法检测细胞中Cx43的表达。用si RNA干扰Cx43的表达并测定细胞Ed U结合率和细胞周期。结果浓度为60μmol·L^-1的杜鹃素可使AngⅡ诱导的大鼠VSMCs的细胞增殖活性和Ed U结合率均明显降低(P<0.05),并阻止VSMCs由G0/G1期向S期的转化。Real-time PCR和Western blot结果显示,与模型组比较,杜鹃素能明显降低Cx43的m RNA和蛋白表达水平(P<0.01)。用si RNA干扰Cx43的表达后,杜鹃素对AngⅡ诱导的VSMCs增殖的抑制作用明显减弱。结论杜鹃素可明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖,抑制VSMCs有丝分裂,使其停滞于G_0/G_1期,其作用可能与杜鹃素抑制Cx43的表达有关。     

Hydroxysafflor yellow A inhibits rat brain mitochondrial permeability transition pores by a free radical scavenging action

Hydroxysafflor yellow A (HSYA), the major and most active antioxidant from Carthamus tinctorius L., has been clinically prescribed in China to treat patients with cerebral ischemia, but the detailed mechanism is not known. This study examines the effect of HSYA on mitochondrial permeability transition pores (mtPTP) in the rat brain. HSYA at 10-80 micromol.l(-1) inhibited Ca(2+)- and H(2)O(2)-induced swelling of mitochondria isolated from rat brains. The addition of Ca(2+) generated reactive oxygen species (ROS) in isolated mitochondria. HSYA (10-80 micromol.l(-1)) inhibited Ca(2+)-induced generation of ROS. At the same time, HSYA significantly improved mitochondrial energy metabolism, enhanced ATP levels and the respiratory control ratio. These results suggest that HSYA inhibits the opening of mtPTP by a free radical scavenging action in the brain, and this may contribute to the neuroprotective effect of HSYA.     

羟基红花黄色素A上调低氧状态下血管内皮细胞中缺氧诱导因子-1α的表达

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是从菊科植物红花中提取的查尔酮类化合物。本实验观察HSYA对低氧状态(1% O₂)下人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)增殖的促进作用及其调节Eahy 926细胞中林希氏基因(von Hippel-Lindau gene，VHL)，抑癌基因p53(tumor suppressor gene p53，p53)和降解缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α)的作用。采用MTT法测定低氧状态下HSYA(100、 10和1 μmol·L^-1)对Eahy 926细胞增殖率的影响。免疫组织化学方法测定VHL与p53蛋白表达数量和定位。RT-PCR方法检测细胞中VHL、 p53和HIF-1α的转录水平。Western blotting方法检测VHL、 p53和HIF-1α的蛋白表达。与低氧模型对照组相比，HSYA(100 μmol·L^-1)促使细胞增殖率升高，HIF-1α转录和蛋白表达水平显著增强，呈时间依赖性。给药8 h后，VHL与p53的蛋白表达和转录水平均明显降低。HSYA诱导HIF-1α表达增加并提高低氧状态下细胞增殖率的作用，可能通过抑制VHL和p53两种HIF-1α的降解调节因子实现。     

HPLC法检测蒙成药心舒安中羟基红花黄色素A的含量

目的：建立蒙成药心舒安含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A的含量,色谱柱为ZORBAXSB-C18柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：2：72）,检测波长为403nm。结果：羟基红花黄色素A的线性范围为0.1111～1.1112μg,范围内呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均加样回收率为97.35%,RSD为0.8%。结论：该方法具有简便、快速、准确等特点,可用于本品的质量控制。     

HPLC法测定舒胸片中羟基红花黄色素A的含量

目的：建立舒胸片含量测定方法。方法：采用HPLC法对舒胸片中红花所含的羟基红花黄色素A作含量测定,色谱柱为Welchrom Materials柱C18,250mm×4.6mm,5μm,以甲醇-0.7%磷酸溶液（28∶72）为流动相;检测波长为403nm。结果：羟基红花黄色素A的线性范围为0.0303～0.3030mg·ml-1,平均加样回收率为99.55%,RSD为1.4%。结论：本法简便、灵敏、准确、专属性强,具有一定的实用性,为舒胸片中羟基红花黄色素A的含量测定提供了科学依据。