益肾胶囊对高糖环境下小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响

目的:通过探讨益肾胶囊含药血清干预高糖环境下培养的小鼠足细胞nephrin、podocin的表达,以期为益肾胶囊防治糖尿病肾病提供理论依据。方法:将体外培养的小鼠足细胞随机分为7组:正常组、高糖组、等渗组、益肾低剂量组、益肾中剂量组、益肾高剂量组、贝那普利组;按照上述分组培养48 h后,用CCK-8法检测足细胞的增殖;免疫荧光方法检测足细胞nephrin、podocin的表达;用Western blot检测足细胞nephrin、podocin的表达。结果:与正常组相比,高糖组足细胞的增殖明显降低(P0.01),nephrin及podocin的蛋白表达明显下调(P0.01);与高糖组相比,益肾高剂量组与贝那普利组足细胞的增殖显著升高(P0.01),nephrin及podocin的蛋白表达明显上调(P0.01);与贝那普利组相比,益肾高剂量组足细胞的增殖、nephrin及podocin的蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论:高糖环境下足细胞nephrin、podocin的表达明显减少;益肾胶囊含药血清可能是通过上调nephrin、podocin的表达,从而保护了肾小球足细胞,其具体机制有待进一步研究。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的：探讨柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响。方法：通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）复制大鼠IgAN模型,分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球形态学和超微结构变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞nephrin蛋白及mRNA的表达。结果：与正常组相比,IgAN组大鼠Upr显著升高（P〈0.01）,肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。经柴芩肾安方治疗后上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。结论：柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复肾小球足细胞nephrin表达有关。     

复方积雪草防治局灶节段性肾小球硬化模型大鼠足细胞损伤的实验研究

目的:探讨复方积雪草对局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulo sclerosis,FSGS)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白nephrin、podocin表达的影响,阐述其延缓肾小球硬化的部分分子生物学机制。方法:采用左肾摘除+阿霉素重复静脉注射方法建立FSGS模型。复方组分别予高中低剂量复方积雪草膏剂灌胃;对照组予苯那普利混悬液;于第8周末留取24h尿蛋白定量,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和血浆蛋白(Alb);留取右肾标本,光镜标本行HE染色;用免疫组化法观察裂孔膜蛋白nephrin和podocin表达;RT-PCR法检测肾组织nephrin和podocinmRNA表达。结果:各复方组24h尿蛋白定量及血Scr、BUN、TC、TG较模型组有显著改善,且与西药组疗效相似。RT-PCR及免疫组化结果显示模型组足细胞裂孔膜蛋白表达较正常组明显降低(P<0.05)。而各治疗组表达较模型组均有明显增加(P<0.05),且与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方积雪草能通过上调模型大鼠肾小球内nephrin和podocin分子表达,减轻足细胞损伤,延缓肾小球硬化。     

保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05),肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P<0.01);保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P<0.01),肾脏病理改善,肾小球凋...     

哇巴因诱导人足细胞凋亡的作用机制

目的足细胞凋亡在狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)发病过程中有重要作用。内源性哇巴因为强心甾类固醇中的一种,在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者体内表达上调,在5/6肾切除所模拟的慢性肾衰竭大鼠模型体内可诱导肾间质细胞转分化。本研究主要探讨哇巴因在LN中诱导人足细胞(human podocytecell,HPC)凋亡的作用机制。方法 (1)体内实验:选取肾脏肿瘤患者被切除的正常肾组织作为对照组,系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)评分大于5分的活动性LN患者的肾组织作为研究组,通过免疫组织化学检测肾活检组织中nephrin的表达改变。(2)体外实验:培养HPC,以不同浓度哇巴因(0 nmol/L,0.1nmol/L,1 nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)刺激HPC不同时间(24 h、48 h、72 h)后,用MTT法观察并测定哇巴因对HPC增殖凋亡的影响;以不同浓度哇巴因处理HPC 24 h后,采用Hoechst-33258染色检测细胞凋亡;收集各个浓度哇巴因处理的细胞,用蛋白免疫印迹法检测钠钾ATP酶α1(Na~+-K~+-ATPaseα1,NKAα1)、p-Src、nephrin的表达情况。(3)HPC用Src激酶抑制剂PP2(1μmol/L)提前1 h预处理,随后加入不同浓度哇巴因孵育24 h,收集蛋白,行蛋白免疫印迹,检测p-Src、nephrin的表达。结果 (1)哇巴因以剂量和时间依赖方式诱导HPC凋亡。(2)正常对照肾组织中nephrin的表达沿肾小球基底膜外侧呈均匀、线状分布,且表达强;LN组肾组织中nephrin在肾小球的分布不均,且表达较正常肾组织明显减弱。(3)随着哇巴因浓度增加,HPC细胞中NKAα1、p-Src的表达先上调再下降,同时可检测到nephrin蛋白表达逐渐减少。(4)PP2预处理HPC,阻断哇巴因对Src的活化,使得pSrc表达下调,逆转上述效应,逐渐恢复nephrin的表达,使nephrin表达增加。结论哇巴因通过NKAα1/Src下调nephrin蛋白的表达参与HPC凋亡。     

血管紧张素Ⅱ对足细胞nephrin 磷酸化水平的影响

目的 通过建立血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)输注大鼠模型及体外足细胞培养,观察AngⅡ刺激对足细胞nephrin磷酸化水平的影响.方法 30只SPF级Wistar大鼠皮下埋置渗透性微泵,随机分为AngⅡ组(AngⅡ400 ng· kg-1·min-1,n=12)、替米沙坦(Tel)组(AngⅡ+Tel 3 mg· kg-1·d-1,n=12)和正常对照组(生理盐水代替AngⅡ,n=6),于实验0、7、14、21、28 d测量大鼠尾动脉收缩压,收集24 h尿液,检测尿白蛋白.分别在14、28 d处死动物,收集血液标本,检测血肌酐;收集肾脏标本,透射电镜观察肾小球足细胞形态,放免法检测血浆及肾组织AngⅡ水平;Western印迹检测nephrin表达及其磷酸化水平.体外培养小鼠永生化足细胞,AngⅡ (10-6 mol/L)刺激不同时间,并行洛沙坦(10-5 mol/L)干预,Western印迹法检测足细胞nephrin 表达及其磷酸化水平.异硫氰酸荧光素( FITC)-鬼笔毒环肽(phalloidin)染色标记足细胞F-actin,用外周F-actin环评分系统(CFS)半定量分析足细胞骨架运动.结果 (1)与正常对照组同时间点相比,AngⅡ组大鼠自7d起尾动脉收缩压开始升高(P＜0.05),随着作用时间的延长,血压持续升高.AngⅡ输注7d大鼠开始出现蛋白尿,并持续增加.各组大鼠血肌酐、尿肌酐及内生肌酐清除率无明显变化.AngⅡ输注大鼠血浆及肾组织AngⅡ浓度明显增高(均P＜0.05).(2)与正常对照组相比,AngⅡ输注组大鼠肾小球足细胞nephrin表达明显减少,其磷酸化水平亦显著下降(P＜0.05).(3)与正常对照组相比,AngⅡ刺激早期(3～6 h),足细胞nephrin磷酸化表达即明显下调(P＜0.05),刺激12～24 h维持低水平表达.(4)AngⅡ刺激后,F-actin排列紊乱,逐渐向细胞外周分布形成F-actin环,CFS评分显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 正常状态下足细胞nephrin维持一定水平磷酸化状态,AngⅡ可以诱导足细胞nephrin磷酸化水平下调.nephrin磷酸化水平改变可能是AngⅡ诱导足细胞骨架重排、足突融合的重要分子机制.     

益肾活血方抑制足细胞转分化减缓FSGS模型大鼠疾病进展的实验研究

目的:通过观察益肾活血方对局灶节段性肾小球硬化模型大鼠尿蛋白,肾组织结构,足细胞特异性蛋白WT1、nephrin,转分化相关指标α-SMA的影响。探讨益肾活血方对局灶节段性肾小球硬化的调控机制。方法:7～8周龄雄性Sprague Dawley大鼠,尾静脉注射多柔比星(4 mg·kg~(-1)·次~(-1)) 2次,制备FSGS模型。成模后,按24 h尿蛋白定量随机分为模型组、贝那普利组(5 mg/kg)、益肾活血方高剂量组(2 g/kg)、益肾活血方低剂量组(1 g/kg),每组9只;选择另外10只同周龄大鼠为正常组。连续给药8周。在实验结束时,检测体重、24 h尿蛋白定量(24 h U-Pr)、血肌酐、尿素氮;行肾脏组织HE、PAS染色; Western blot法检测WT1、nephrin、α-SMA蛋白表达。结果:与模型组相比,高剂量组24 h U-Pr显著降低(P 0. 05),体重显著升高(P 0. 05),肾小球硬化程度显著改善(P 0. 05); WT1蛋白在高低剂量组肾组织中的表达显著升高(P 0. 05); nephrin在治疗后有增加趋势;α-SMA模型组中表达增加(P 0. 01),益肾活血方治疗后表达下调(P 0. 05)。结论:益肾活血方能够减少尿蛋白排泄,减轻肾组织病理损害,降低肾小球硬化程度;其作用机制可能与抑制足细胞转分化,保护足细胞结构和数量(nephrin、WT1),减少足细胞损伤有关。     

nephrin通过PI3K-Akt途径抑制血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞凋亡

目的 研究nephrin在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导足细胞凋亡中的作用,以及可能的分子机制。 方法 体外培养永生化小鼠足细胞（MPC）,以不同浓度AngⅡ处理MPC和10-8 mol/L AngⅡ刺激不同时间,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量PCR、免疫荧光和Western印迹法检测nephrin的表达和分布;Western印迹法检测Akt磷酸化水平。脂质体法转染pcDNA3.1-mNPHS1质粒,G418筛选稳定转染细胞系。用Akt抑制剂LY294002或与AngⅡ共孵育刺激MPC和pcDNA3.1-mNPHS1转染细胞,检测Akt磷酸化水平和细胞凋亡率。 结果 （1）AngⅡ以剂量和时间依赖方式诱导MPC凋亡。AngⅡ受体拮抗药氯沙坦与AngⅡ共孵育18 h,显著降低AngⅡ单独刺激的足细胞凋亡率（P < 0.05）。（2）10-8 mol/L AngⅡ刺激12 h后,nephrin mRNA和蛋白较对照组显著降低,24 h nephrin mRNA约为正常对照的50%（P < 0.05）。正常足细胞nephrin主要分布于核膜周围的胞质和细胞膜,随刺激时间延长,胞膜和胞质nephrin表达逐渐降低。（3）10-8 mol/L AngⅡ刺激15 min后,Akt磷酸化显著降低,约为正常对照细胞的50%（P < 0.01）。（4）AngⅡ与LY294002共孵育12 h后,细胞凋亡率显著高于AngⅡ和LY294002单独刺激（均P < 0.05）。（5）pcDNA3.1-mNPHS1稳定转染显著上调足细胞Akt磷酸化水平（P < 0.05）,抑制 AngⅡ诱导的细胞凋亡（P < 0.05）。 结论 AngⅡ通过AngⅡ受体诱导小鼠足细胞凋亡,抑制足细胞nephrin表达。nephrin通过PI3K-Akt信号通路调节足细胞存活状态。     

基于玄府理论的固本通络方对IgA肾病大鼠Nephrin和CD_2AP表达的影响

目的:观察固本通络方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞Nephrin和CD_2AP表达的影响。方法:采用牛血清白蛋白(BSA)+四氯化碳(CCl4)+蓖麻油(CO)+脂多糖(LPS)的方法建立IgAN大鼠模型,分为正常组、模型组、中药组和氯沙坦钾组,治疗4周后,检测各组大鼠24 h尿蛋白量,观察肾小球形态学变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞Nephrin和CD_2AP的蛋白及mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白量显著升高(P0.01),肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞Nephrin和CD_2AP的蛋白及mRNA表达均明显下调(P0.01);经固本通络方治疗后上述指标均明显改善,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:固本通络方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变并具有一定的时效关系,其作用可能与调节肾小球足细胞Nephrin、CD_2AP的表达有关。     

Rac1抑制剂上调糖尿病小鼠肾小球nephrin的表达

目的：探讨Rac1抑制剂（NSC33766）对STZ诱导的糖尿病小鼠肾小球内nephrin水平的影响。方法：采用腹腔单剂注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ,150mg/kg）的方法建立小鼠糖尿病模型,检测NSC33766对正常和糖尿病小鼠尿白蛋白排泄率、血清肌酐水平的影响,采用PAS染色观察肾脏组织学的改变,透射电镜观察超微结构的改变;采用免疫组化观察NSC33766对肾组织内足细胞骨架蛋白nephrin表达的影响。结果：NSC33766降低糖尿病小鼠尿白蛋白排泄率;减少肾组织内系膜区细胞外基质的积聚和基底膜的厚度,改善肾小球滤过膜足突融合,上调nephrin表达,未发现NSC33766具有降低血糖的作用。结论：Rac1抑制剂NSC33766可能通过上调肾小球内nephrin水平,改善足细胞骨架的方式,对糖尿病肾脏损伤具有保护作用。     

雷公藤甲素干预足细胞 snail1、nephrin 表达的研究

目的：通过观察高糖刺激对小鼠足细胞 snail1、nephrin 表达的影响及雷公藤甲素（triptolide，TP）的干预作用，探讨 TP 保护足细胞的分子机制。方法：以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象，将其分为正常糖组、高糖组、甘露醇组、TP 干预组，培养时间为48 h。采用荧光定量 PCR 法和 western blot 分别检测各组足细胞 snail1、nephrin mRNA 和蛋白的表达量。结果：与正常糖组相比，高糖刺激可以上调足细胞 snail1表达、下调 nephrin 表达；与高糖组相比，TP 干预组 snail1表达减少，而 nephrin 表达增加。结论：TP 可以减轻高糖引起的 snail 表达上调和 nephrin 表达下调，这可能是雷公藤甲素发挥足细胞保护作用的重要分子机制。     

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78、Caspase-12表达的影响

目的:观察通络益肾方含药血清对高糖培养下大鼠系膜细胞(MC)增殖及GRP78、Caspase-12 mRNA表达的影响,从内质网应激角度探讨该方的肾保护机制。方法:肾小球MC随机分为6组:正常组、模型组、通络益肾方大、中、小剂量组及西药组,分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MC增殖情况,RT-PCR检测各组MC、GRP78、Caspase-12 mRNA的表达水平。结果:(1)模型组MC在各时间点均明显增殖(P0.05或P0.01);与模型组比较,中药大、中、小剂量组在24 h、48 h、72 h均能抑制MC增殖(均P0.01),其中以大剂量组效果最佳(P0.01);西药组MC增殖在12 h、24 h低于中药大剂量组(均P0.05),而在48 h、72 h两组之间差异无统计学意义(P0.05)。(2)与正常组比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降(P0.05,P0.01)。四个给药组之间GRP78 mRNA比较,48 h时呈西药组中药小剂量组中剂量组大剂量组,72 h时呈西药组中药小剂量组大剂量组(均P0.05,P0.01)。同时各给药组GRP78 mRNA表达呈现出从24 h、48 h到72 h持续缓慢增加的趋势,表明药物可延缓GRP78增幅、延缓ERS而持续发挥其保护细胞的作用。(3)Caspase-12 mRNA结果显示:与正常组比较,模型组48 h、72 h时Caspase-12mRNA明显增加(P0.01),而各给药组Caspase-12 mRNA均较模型组明显下降(P0.05或P0.01),48 h时三个中药组Caspase-12 mRNA表达明显低于西药组(P0.05);72 h时三个中药组呈小剂量组中剂量组大剂量组(P0.01或P0.05),提示casspase-12 mRNA表达与给药剂量呈负相关。结论:高糖条件下大鼠肾小球MC内质网应激明显,通络益肾方可明显抑制MC的增殖,推测其作用机制与延缓GRP78增幅、下调Caspase-12 mRNA的表达有关。     

从内质网应激途径探讨中药对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾脏的保护作用

目的:观察中药保肾方对系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠模型蛋白尿水平、肾脏病理及肾组织细胞凋亡的影响,并从调节内质网应激(ERS)相关蛋白——蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)的表达,探讨保肾方的作用机制。方法:建立系膜增生性肾小球肾炎模型,随机将28只雄性SD大鼠分成4组,以雷公藤多甙片为阳性对照药物,中药保肾方干预。分别于造模后治疗前、治疗后14周末检测大鼠24 h尿蛋白定量,14周末留取血尿标本后处死各组大鼠,取肾组织染色后观察其组织形态学变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,Western Blot法和Q-PCR检测肾组织PERK的表达。结果:(1)与空白组相比,模型组24 h尿蛋白定量明显升高,并出现系膜细胞增生、轻度纤维化;肾组织PERK表达明显增强,细胞凋亡率明显升高(P均0.05)。(2)与模型组相比,保肾方可降低大鼠24 h尿蛋白定量,明显改善大鼠肾脏损害,明显抑制PERK及PERKmRNA的高表达,降低细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P均0.05)。结论:保肾方减轻系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾脏损伤及肾组织细胞凋亡,其机制可能与通过降低肾组织PERK表达,抑制内质网应激有关。     

通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素β1、白细胞介素10表达的影响

目的：探讨中药复方“通脉口服液”对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖及其产生白细胞介素融（IL-β1）和白细胞介素10（IL-10）的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定通脉口服液含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PEn）法测定系膜细胞IL—β1 mRNA和IL-10mRNA表达及其蛋白水平。结果：通脉口服液含药血清在5％～20％浓度范围明显抑制脂多糖（LPS）刺激的系膜细胞增殖；在观察的2个时间点（6h、24h）上，LPS均可刺激系膜细胞IL-β1 mRNA的表达及提高IL-β1 分泌水平，在6h时间点上LPS可刺激系膜细胞IL-10mRNA的表达及提高IL-10分泌水平；而通脉口服液在10％浓度上能够明显抑制LPS诱导的系膜细胞IL-β1 分泌及其mRNA的表达，在6h时间点上促进LPS诱导的系膜细胞IL-10分泌及其mRNA的表达。结论：中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-β1 的产生，促进LPS诱导的系膜细胞IL-10的产生；肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之-。     

滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。     

血管紧张素Ⅱ灌注诱导nephrin表达改变与足细胞凋亡

目的 研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）灌注对大鼠足细胞裂隙膜分子nephrin表达及足细胞凋亡的影响，以及探讨AngⅡ引起蛋白尿及肾小球硬化的机制。方法 36只雄性Sprague Dawley大鼠分为AngⅡ灌注组(400 ng&#8226;kg-1&#8226;min-1)、生理盐水灌注组和正常对照组，测定28 d内大鼠血压及尿蛋白。分别于14、28 d处死动物取肾，观察组织学改变，并用免疫荧光、免疫电镜检测nephrin分布。RT-PCR及Western印迹法分别检测nephrin mRNA及蛋白表达。TUNEL法检测足细胞凋亡。结果 (1) AngⅡ灌注组大鼠血压升高，14 d达峰值并维持该水平至28 d；AngⅡ灌注7 d即出现蛋白尿，并持续增加。(2) AngⅡ灌注14 d时，足细胞裂隙膜变窄；灌注28 d时，足突增宽及节段性融合，部分足细胞有凋亡小体形成，少数肾小球出现节段性硬化。TUNEL法检测发现足细胞凋亡[（2.7±1.6）个/肾小球切面]，凋亡数与蛋白尿量呈正相关（r = 0.86，P < 0.01）。(3) AngⅡ灌注14 d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达上调（P < 0.05）。nephrin由正常的沿毛细血管袢线状分布向粗颗粒、团块状分布模式转变。AngⅡ灌注28 d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达下降（P < 0.05），且nephrin蛋白表达与足细胞凋亡数呈负相关（r = －0.63，P < 0.01）。 结论 AngⅡ灌注诱导的nephrin表达及分布改变可能导致了足细胞凋亡及肾小球硬化的发生与发展。     

苦参素对人肾小球系膜细胞磷酸化信号传导和转录激活因子3及其蛋白抑制剂表达的影响

目的 观察苦参素对脂多糖（LPS）诱导下人肾小球系膜细胞（HMC）增殖时磷酸化信号传导和转录激活因子3（p-STAT3）、活化的信号传导和转录激活因子3蛋白抑制剂（PIAS3）蛋白和mRNA表达的影响,并探讨其相互关系。 方法 体外培养HMC,并分为对照组、LPS模型组及苦参素干预组。培养12、24、48 h时以MTT法检测HMC的增殖情况;ELISA法检测细胞上清Ⅳ型胶原蛋白（ColⅣ）含量;同时收集同时间点细胞,采用Western印迹法检测p-STAT3和PIAS3的蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测STAT3和PIAS3的mRNA表达。 结果 LPS组细胞增殖较对照组显著加快（P < 0.01）,ColⅣ的表达显著高于对照组 （P < 0.01）。苦参素干预后细胞增殖和ColⅣ的表达显著低于模型组（P < 0.01）。LPS诱导 12 h时细胞p-STAT3表达开始上调,各时间点p-STAT3表达量显著高于对照组（P < 0.01）。苦参素干预后,与同时间点LPS模型组相比显著下调（P < 0.01）。LPS诱导下PIAS3各时间点表达量显著下调（P < 0.01）。苦参素干预后,与同时间点LPS模型组相比均显著上调（P < 0.01）。 结论 苦参素对LPS诱导HMC增殖过程中p-STAT3蛋白及mRNA表达有下调作用,对PIAS3有上调作用。苦参素可能影响HMC增殖过程中JAK-STAT信号传导通路。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对糖尿病肾病小鼠肾组织的保护作用及机制

目的通过对糖尿病肾病小鼠模型的研究,探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,AcSDKP)对糖尿病肾病小鼠肾组织的保护作用及可能机制。方法将18只小鼠随机分为正常组(n=6)、模型组(n=12)。通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptocozin,STZ)建立糖尿病小鼠模型,糖尿病模型建立成功后再分为糖尿病组(n=6)、糖尿病+AcSDKP组(n=6)。糖尿病+AcSDKP组小鼠予AcSDKP口服(1 mg·kg~(-1)·2 d~(-1),溶于饮用水瓶中),糖尿病组予常规饮用水。12周后测量小鼠血压、心率、血糖,收集小鼠血、尿标本用于检测生化指标及尿白蛋白/肌酐比值。处死大鼠后留取肾组织标本,通过普通光镜和电镜观察肾脏形态学及超微结构改变。采用免疫荧光法检测肾组织中足细胞蛋白(nephrin)的表达改变,采用免疫印迹法检测肾组织纤连蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达改变。结果(1)与对照组相比,糖尿病小鼠出现血糖明显升高,建模成功后12周出现明显白蛋白尿,足细胞出现足突融合、增宽,肾脏出现纤维化,肾小球表面面积及系膜区面积明显增加,肾小球nephrin表达明显减少,而糖尿病小鼠血压无明显改变。(2)AcSDKP可减少糖尿病小鼠蛋白尿,减轻足细胞足突融合及增宽,缓解肾小球肥大及系膜增殖,改善肾脏纤维化。(3)AcSDKP可减少肾组织fibronectin、α-SMA的表达,部分恢复肾脏nephrin的表达。结论 AcSDKP可减轻糖尿病小鼠肾组织病变,其保护作用与减轻足细胞nephrin表达有关,为糖尿病肾病提供新的治疗手段及理论依据。     

方格星虫提取物对膜性肾病模型的治疗作用及机制初探

目的:初步探讨方格星虫粗提物(SNP)对膜性肾病(MN)的治疗作用及其可能机制。方法:50只SD大鼠随机分为模型组和对照组,模型组大鼠腹腔一次注入抗FxlA血清建立被动性Heymann肾炎模型,模型建立1周后依24 h尿蛋白排泄量(24 h UPE)随机将Heymann肾炎大鼠分为SNP治疗组和未治疗组,治疗组用SNP灌胃治疗。考马斯亮蓝法每周测定24 h UPE。治疗4周结束后处死大鼠取双肾,光镜、电镜观察肾脏病理改变,RT-PCR法检测肾组织nephrin mRNA和podocin mRNA的表达量。结果:SNP治疗4周后大鼠24 h UPE较未治疗组降低(P<0.05);模型组大鼠肾小球基底膜增厚,上皮下电子致密物沉积,足细胞足突融合等病理改变,SNP治疗组大鼠上述病变较未治疗组减轻,经测定,足细胞足突融合率较未治疗组显著降低(P<0.01);SNP治疗组nephrin mRNA和podocin mRNA表达量较未治疗组升高(P<0.05)。结论:SNP可通过上调膜性肾病大鼠足细胞nephrin和podocin基因表达水平,一定程度上减轻足细胞足突融合,进而减少尿蛋白滤过,可能对人类膜性肾病具有辅助治疗作用。     

雷公藤内酯醇干预高糖影响小鼠肾脏足细胞Nephrin蛋白表达的研究

目的：通过观察雷公藤内酯醇（triptolide,TP）及对照药物缬沙坦（valsartan,Val）干预高糖环境培养的足细胞肾小球足细胞裂孔隔膜（GPSD）核心蛋白nephrin的表达,来深入探讨雷公藤治疗糖尿病肾病（DN）蛋白尿的分子生物学机制。方法：（1）将培养成熟的足细胞分为对照组1、对照组2、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组（干预组均设低、中、高3个剂量）,培养24h后以RT-PCR法检测各组足细胞nephrin mRNA的表达。（2）将培养成熟的足细胞设为对照组、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组,培养24h后行间接免疫荧光法检测nephrin蛋白的表达。结果：（1）与模型组相比,不同剂量TP和Val组均能提高nephrin mRNA表达（P〈0.05）,并且中剂量TP组和高剂量Val组效果最好（P〈0.05）。（2）与对照组相比,间接免疫荧光法可见模型组nephrin表达下降。经TP和Val干预24h后,TP和Val组足细胞nephrin蛋白的表达均有一定程度提高。结论：雷公藤内酯醇和缬沙坦均能上调高糖诱导的足细胞nephrin的表达下降,这可能是雷公藤及缬沙坦在临床上有效治疗DN蛋白尿的机制之一。