补体旁路激活致血管平滑肌细胞增殖活化及干预研究

目的研究补体旁路途径激活诱导人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活化及其干预作用。方法采用CVF特异激活血浆补体旁路途经。将VSMC与补体旁路激活产物共同孵育,采用倒置相差显微镜和MTT法分别检测细胞形态变化和增殖活性,ELISA法检测培养上清中E-selectin、ICAM-1和VCAM-1含量,Western blot检测p-NF-κB p65、IKK和NF-κB p65蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测NF-κB p65转录活性,采用PDTC对上述指标的变化进行干预。结果补体旁路激活导致VSMC增殖活化,上调表达E-selectin、ICAM-1和VCAM-1,其中ICAM-1和VCAM-1含量在6 h达到高峰,E-selectin在12 h出现明显上调;VSMC经补体旁路激活产物刺激后,NF-κB p65磷酸化明显增加,NF-κB p65核内转录活性升高,IKK和NF-κB p65蛋白表达上调,PDTC对上述相关指标的变化有明确的干预作用。结论补体旁路激活可导致VSMC增殖活化,其机制与NF-κB信号通路活化有密切关系,且NF-κB抑制剂PDTC对其增殖活化具有明显的干预作用。     

川芎嗪对补体旁路激活致内皮细胞炎症反应的干预作用

目的研究川芎嗪(TMP)对补体旁路激活致人微血管内皮细胞(HMEC)炎症反应的干预作用及其可能的分子机制。方法以眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)来激活正常人血清的补体旁路,用激活产物作用于HMEC,作用前加入不同浓度TMP预处理细胞,然后将细胞暴露在该激活产物中,采用ELISA方法检测细胞培养上清中可溶性黏附分子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)和炎症介质(IL-6、TNF-α)的含量变化;双萤光素酶报告基因检测试剂盒测定NF-κB核内转录活性。结果 HMEC受补体旁路激活产物刺激后,引起黏附分子和炎症介质的表达上调,以及NF-κB核内转录活性的上调。不同浓度的TMP对上述炎症反应相关指标的上调均有干预作用,且表现出剂量依赖性。结论 TMP对补体旁路特异激活HMEC炎症反应有明显的干预作用,其机制可能与抑制NF-κB的核内转录活性有关。     

补体旁路激活致内皮细胞纤溶凝血功能的改变及干预研究

目的研究补体旁路激活导致的微血管内皮细胞纤溶凝血功能的变化以及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)和白藜芦醇(Res)的干预作用。方法采用眼镜蛇毒因子激活血清补体旁路途径。将补体旁路活化的血清作用于人微血管内皮细胞(HMEC),检测多个时间点细胞培养上清的水解发色底物活性变化和对凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响,并制备细胞悬液,检测细胞表面的抗凝血功能变化情况。采用PDTC、Res对上述变化指标进行干预研究。结果 HMEC经补体旁路活化产物刺激后,细胞培养上清的发色底物酶解活性明显上调;细胞培养上清导致正常血浆的APTT明显缩短,同时,对PT也有缩短的作用;经补体旁路活化产物刺激HMEC后制备的各时间点细胞悬液对正常血浆的APTT有明显的缩短作用,6 h刺激组的细胞悬液也表现出缩短PT的作用。PDTC和Res未能抑制发色水解活性的上调,但Res对APTT的缩短有明显的干预作用,而PDTC能在一定程度上抑制PT的缩短。结论补体旁路活化产物会导致HMEC纤溶凝血功能的失调,而PDTC和Res有一定的干预作用。     

丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的ECV304细胞NF-κB、IκB-α表达及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞株ECV304NF-κB、IκB-α及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。方法通过建立TNF-α诱导的ECV-304细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为对照,间接细胞ELISA方法定量检测NF-κB、IκB-α的表达,RT-PCR方法检测各组细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达。结果TNF-α可增加ECV304细胞转录因子NF-κB的表达,同时降低其抑制因子IκB-α的表达,低浓度的丹参酮ⅡA对TNF-α引起的ECV304细胞NF-κB的表达升高无明显抑制作用,但可增加其IκB-α的表达;高浓度的丹参酮ⅡA可明显抑制NF-κB的表达,同时增加其抑制因子IκB-α的表达。同时丹参酮ⅡA抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表达。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子NF-κB的激活及其相关粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达,这有利于抑制动脉粥样硬化过程中的炎症从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞TLR4及炎症蛋白表达

目的评价银杏内酯B对高糖诱导内皮细胞TLR4表达的影响以及分子机制。方法使用人原代脐静脉内皮细胞,用高糖刺激内皮细胞,用Western blot分析TLR4、炎症蛋白表达以及Akt磷酸化。免疫荧光检测NF-κB核转位。结果高糖(30 mmol·L-1)刺激内皮细胞TLR4和PAF受体表达明显增加,PAF受体抑制剂银杏内酯B(0.6 g·L-1)和CV3988(30μmol·L-1)分别抑制了TLR4及PAF受体表达。银杏内酯B有效地抑制了高糖刺激内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达。分子机制的研究表明,银杏内酯B明显抑制了高糖诱导的Akt磷酸化,以及NF-κB p65的核转位。结论高糖刺激内皮细胞TLR4和PAF受体表达增高,银杏内酯B能够抑制高糖刺激TLR4、PAF受体和炎症蛋白表达,分子机制与抑制Akt磷酸化以及NF-κB活化相关。     

绿原酸、咖啡酸和阿魏酸对补体旁路激活致内皮细胞炎症相关分子表达的干预

目的研究绿原酸及其代谢产物咖啡酸和阿魏酸对补体旁路激活导致人微血管内皮细胞炎症反应相关分子表达的干预作用。方法采用眼镜蛇毒因子激活人血清补体旁路,将补体旁路激活产物作用于人微血管内皮细胞,分别取不同时间点的细胞培养上清,采用ELISA方法检测ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的含量;采用不同浓度的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸预处理内皮细胞,然后将细胞暴露于补体旁路激活产物,检测不同时间点细胞培养上清中ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的含量变化。结果补体旁路激活产物作用于人微血管内皮细胞后,引起ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的表达上调。50、100、250μmol·L~(-1)的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸对ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的上调表达均有干预作用,其中对ICAM-1和IL-8的干预作用最明显。咖啡酸表现出最好的干预作用,其次为阿魏酸。结论一定浓度的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸能有效抑制补体旁路激活引起的人微血管内皮细胞表达ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的上调,提示绿原酸、咖啡酸、阿魏酸对微血管内皮细胞的炎症反应有一定的干预作用。     

黄芩苷对脂多糖致内皮细胞炎症反应的保护作用及机制研究

目的研究黄芩苷对脂多糖(LPS)致人微血管内皮细胞(HMEC)炎症反应的保护作用及作用机制。方法采用LPS作用HMEC,建立炎症反应模型;以不同浓度的黄芩苷预处理细胞,然后将细胞暴露于LPS,ELISA检测炎症因子ICAM-1、IL-6和MCP-1的含量;荧光观察Ca^2+内流并采用流式细胞仪检测细胞内Ca^2+水平;免疫荧光法检测NF-κB p65入核情况;双荧光素酶报告基因方法检测NF-κB核内转录活性;Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65及TLR4的表达。结果HMEC暴露于LPS后,出现了明显的Ca^2+内流,NF-κB p65发生磷酸化,核内转录活性上调,ICAM-1、IL-6及MCP-1表达上调。不同浓度的黄芩苷均能抑制LPS刺激HMEC后产生的Ca^2+内流、NF-κB p65入核及核内转录活性上调,减少ICAM-1、IL-6、MCP-1的表达,下调NF-κB p65、p-NF-κB p65及TLR4的表达,且抑制作用呈现一定的量效关系。结论黄芩苷能抑制LPS诱导的HMEC炎症反应,其机制与抑制Ca^2+内流和NF-κB信号通路的活化,从而降低炎症反应的水平有关。     

NF-κB p65 siRNA对延迟性排斥反应的抑制作用

目的 探讨核因子kappa B(NF-κB) p65的小干扰RNA (siRNA)对延迟性排斥反应的抑制作用.方法血管内皮细胞(EOMA)分为7组:A组(空白对照),B组(阴性对照),C组(TNF-α处理),D组(siRNA处理),E组(scramble siRNA处理),F组(TNF-α+ siRNA处理),G组(TNF-α+scramble siRNA处理).用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000作为转染试剂将化学合成的小鼠NF-κB p65 siRNA转染入相应的EOMA细胞,24 h后在C组、F组和G组中加入TNF-α(终浓度为20 ng/ml).于TNF-α加入后的6h提取各组细胞总RNA,RT-PCR法测定EOMA细胞内E选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素1α(IL-1α)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平.结果 F组EOMA细胞内E-selectin、ICAM-1、IL-1α和VCAM-1表达明显高于A组,的明显低于C组和G组(P＜0.01).结论 特异性siRNA抑制NF-κB p65表达可以有效抑制延迟性排斥反应.     

AS炎性信号通路与中医药干预

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是血管内皮损伤导致的慢性炎症反应性血管疾病,该文就AS炎性信号通路相关因子,如细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、核因子-κB(NF-κB)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),以及中医药在抗AS中调节这些炎性信号通路方面研究进展做一综述。     

若干天然活性分子对微血管内皮炎症反应的干预作用

目的微血管内皮炎症反应与一系列重要病征的发病机制高度关联,本研究以微血管内皮炎症反应为靶标挖掘和评价贵州民族药若干重要活性分子的药理功效。方法分别建立补体旁路激活诱导的微血管内皮细胞炎症反应模型和小鼠急性肺损伤模型,研究绿原酸、淫羊藿苷、白藜芦醇、黄芩苷、川芎嗪等活性分子对炎症反应的干预作用。结果基于细胞模型的研究表明,绿原酸、淫羊藿苷、白藜芦醇、黄芩苷、川芎嗪等活性分子能抑制NF-κB信号通路的活化和核内转录活性的上调,下调黏附分子和炎症介质的表达;小鼠模型的结果表明,上述活性分子可以降低支气管肺泡灌洗液中的蛋白含量、炎性细胞数目、IL-6和TNF-α以及ICAM-1的含量以及肺组织匀浆的髓过氧化物酶活性,并可显著降低血清中IL-6,TNF-α和ICAM-1的水平,肺组织中的炎性细胞浸润明显减轻,NF-κB P65的磷酸化水平也显著降低。结论绿原酸、淫羊藿苷、白藜芦醇、黄芩苷、川芎嗪等活性分子可明显抑制补体旁路激活导致的微血管内皮炎症反应,其机制与抑制炎症相关信号通路的活化从而有效干预炎症反应有关。     

New molecules

Presentation of six drugs: clopidogrel, raloxifene, mecillinam, natiglinide and repaglinide, pneumococcal conjugate vaccine. For each, positive and negative arguments, questions on hold and rating.     

Monitor: molecules

Monitor provides an insight into the latest developments in drug discovery through brief synopses of recent presentations and publications together with expert commentaries on the latest technologies. There are two sections: Molecules summarizes the chemistry and the pharmacological significance and biological relevance of new molecules reported in the literature and on the conference scene; Profiles offers commentary on promising lines of research, emerging molecular targets, novel technology, advances in synthetic and separation techniques and legislative issues.     

Novel antitumour molecules

Monitor provides an insight into the latest developments in drug discovery through brief synopses of recent presentations and publications together with expert commentaries on the latest technologies. There are two sections: Molecules summarizes the chemistry and the pharmacological significance and biological relevance of new molecules reported in the literature and on the conference scene; Profiles offers commentary on promising lines of research, emerging molecular targets, novel technology, advances in synthetic and separation techniques and legislative issues.