高容量血液滤过对多脏器功能障碍综合征犬CD14+单核细胞白细胞-DR抗原表达的影响

目的 观察高容量血液滤过(HVHF)对多脏器功能障碍综合征(MODS)犬CD14+单核细胞犬白细胞DR抗原(DLA-DR)表达的影响.方法 通过2次打击建立犬MODS模型,随机分HVHF组和MODS组,HVHF组建模后给予HVHF治疗24h,MODS组不给HVHF治疗.监测CD14+单核细胞DLA-DR表达及主要器官功能指标变化.结果 与实验前(6.52±1.47)比较,MODS组CD14+单核细胞DLA-DR明显降低(P＜0.01).在T5、T7、T8、T9时间点HVHF组CD14+单核细胞DLA-DR水平显著高于MODS组(P＜0.05).HVHF组主要器官功能明显改善.结论 HVHF能改善器官功能,提高CD14+单核细胞DLA-DR的表达,有助于重建机体内稳态.     

大鼠脑出血后IL-1β和CD163/HO-1信号通路表达及其与脑水肿的相关性

目的探讨脑出血后CD163/HO-1信号通路与IL-1β表达的动态变化,分析其与脑水肿的关系。方法 SD大鼠90只,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、分别在造模后24小时、72小时、7天处死动物,免疫组化法检测HO-1、CD163、IL-1β的表达,并测定脑组织含水量。结果 ICH大鼠模型组24h后灶周可见IL-1β、HO-1、CD163阳性细胞增多,IL-1β阳性细胞数脑出血组与假手术组相比增多(P0.01),假手术组IL-1β阳性细胞数多于正常对照组(P0.01)。HO-1阳性细胞数脑出血组、假手术组均高于正常对照组(P0.01),脑出血组高于假手术组,在72小时明显增多(P0.01),CD163假手术组在72小时高于正常对照组(P0.01),各时间点脑出血组明显高于假手术组及正常对照组(P0.01)。脑组织含水量72小时最高,与HO-1、CD163正相关(P0.05)。结论 CD163、HO-1与ICH后炎性因子IL-1β的表达相关,CD163/HO-1信号通路与ICH后脑水肿有关。     

连续性血液透析滤过对MODS犬肝肾IL-6和IL-10 mRNA表达的影响

目的：探讨连续性血液透析滤过（CVVHDF）后多器官功能障碍综合征（MODS）犬肝、肾组织白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）mRNA表达水平的变化及意义。方法：15只雄性Beagle犬,采用失血性休克＋复苏灌注＋内毒素血症复制MODS模型,随机分为CVVHDF组（n=8）和MODS组（n=7）,CVVHDF组在内毒素注射完毕后给予CVVHDF治疗12h,MODS组不给CVVHDF治疗。测定各器官功能相关指标,同时应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定两组肝、肾组织中IL-6、IL-10mRNA表达水平。结果：CVVHDF组治疗后肝、肾功能有关指标水平均有不同程度的改善;与MODS组相比,在内毒素注射后3h及以后各时间点,血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平显著降低（P〈0.05）;器官衰竭发生率较MODS组明显降低（37.5%vs85.7%,P〈0.05）;MODS组肝、肾组织IL-6mRNA表达水平显著高于正常对照组和CVVHDF组（P〈0.01）,而CVVHDF组肝、肾组织IL-10 mRNA表达水平显著高于正常对照组和MODS组（P〈0.01）。结论：连续性血液透析滤过能明显改善肾功能,CVVHDF早期应用可以降低MODS肝、肾组织IL-6/IL-10mRNA比值,有助于重建机体免疫系统内稳状态。     

连续性血液透析滤过对多器官功能障碍犬器官功能和细胞因子的影响

观察连续性血液透析滤过（CVVHDF）对多器官功能障碍综合征(MODS)犬器官功能和细胞因子的影响，并探讨CVVHDF治疗MODS的机制。 方法 15只Beagle犬采用失血性休克+复苏灌注+内毒素血症复制MODS模型，随机分为CVVHDF组(n=8)和MODS组(n=7)。内毒素注射完毕后CVVHDF组接受CVVHDF治疗12 h；MODS组未接受CVVHDF治疗。检测各时间点动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、Scr、BUN的水平。ELISA检测血浆TNF-α、IL-6、IL-10浓度。 结果 CVVHDF治疗后血浆IL-6、IL-10显著下降, 在3、6、9及12 h时间点显著低于MODS组，差异均有统计学意义（P < 0.01）；血浆TNF-α浓度无明显变化，两组间各时间点差异无统计学意义。超滤液中检出IL-6、TNF-α，筛选系数分别为0.27±0.13、0.1±0.1，但未能检出IL-10。CVVHDF组各主要器官功能均明显改善, 平均动脉压基本保持在正常水平，尤其在6、9及12 h时间点显著高于MODS组，差异均有统计学意义（P < 0.01）。PaO2逐渐升高，与MODS组在3、6、9及12 h时间点比较，差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 连续性血液透析滤过能有效降低血浆IL-6、IL-10水平,使抗炎反应和促炎反应两方面趋于动态平衡；能明显改善内毒素诱导的低血压，提高动脉血氧分压。     

血必净促进内毒素/脂多糖刺激调节性T淋巴细胞凋亡并介导辅助性T淋巴细胞漂移的作用

目的 了解血必净注射液促进LPS刺激CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)凋亡过程及介导辅助性T淋巴细胞(Th)漂移的调节作用.方法 免疫磁珠法分选获得大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞,分为常规培养对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+LPS组、抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组,培养3 d后应用流式细胞术检测Treg细胞凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达.将CD4+CD25+Treg细胞与CD4+CD25+T淋巴细胞1:1培养,伴刀豆球蛋白A刺激68 h,检测上清液中Th1分泌的γ干扰素(IFN-γ)、Th2分泌的IL-4、Th17分泌的IL-17水平.结果 抗CD3/CD28+LPS+血必净组Treg细胞凋亡率为(45.1±2.7)%,明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.4±1.6)%,P＜0.01];2组Foxp3平均荧光强度分别为95±9、140±18,差异有统计学意义(P＜0.01).同时,抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ分泌水平显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01),IL-4则呈相反变化(P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ/IL-4较对照组升高(P＜0.01);抗CD3/CD28+血必净组IL-17分泌水平较抗CD3/CD28组明显下降(P＜0.05).结论 CD4+CD25+Treg细胞活化介导了Th1向Th2功能性极化;血必净对LPS诱导的T淋巴细胞免疫功能有重要调节作用,可促进CD4+CD25+Treg细胞凋亡并介导Th2向Th1漂移,从而缓解细胞免疫抑制状态.     

不同模式血液净化治疗脓毒症的临床研究

目的 探讨高容量血液滤过(HVHF)和连续性静脉静脉滤过透析(CVVHDF)两种模式治疗脓毒症的效果.方法 18例脓毒症患者按随机数字表法分为两组,A组(HVHF模式,10例)置换液流速4L/h;B组(CVVHDF模式.8例)置换液流速2L/h,透析液流速2L/h.于治疗oh、12h和24 h测定血清和超滤液中自细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的浓度.同时观察两组患者治疗前、后体温、心率、平均动脉压、氧合指数、急性生理学和慢性健康状况评分(APACHEⅡ评分)、尿素氮和肌酐的变化.结果 A、B两组患者治疗后体温较治疗前明显下降(P＜O.01);A组患者治疗后氧合指数较治疗前明显升高(P＜0.05);A组患者氧合改善较B组更明显(P＜0.05);A组患者治疗后APACHEⅡ评分较治疗前明显降低(P＜0.01).B组患者APACHEⅡ评分治疗后较治疗前降低(P＜0.05);A组患者APACHEⅡ评分的降低较B组更明显(P＜0.01);两组患者心率、平均动脉压、尿素氮、肌酐指标治疗前、后比较差异无统计学意义(P＞0.05).A组患者血清IL-6浓度治疗后较治疗前明显降低(P＜0.01);B组患者血清IL-6浓度治疗前较治疗后明显降低(P＜0.05);A组患者血清IL-6浓度降低程度较B组更明显(P＜0.05);A、B组患者血清IL-10浓度治疗后较治疗前有降低趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);A、B组患者超滤液中均检测到IL-6、IL-10.结论 HVHF模式较LWVHDF模式更能降低机体基础代谢率及耗氧量.增加机体组织的氧供,改善脓毒症患者脏器功能的指标;HVHF、CVVHDF‘两种模式均能通过超滤清除炎性介质,HVHF模式清除效果优于CVVHDF模式.     

神农33对急性肺损伤大鼠白介素-1 β基因表达的影响

目的:观察白介素-1 β(IL-1 β)在内毒素(LPS)所致急性肺损伤(ALI)发病过程中的作用及神农33(SN33)注射液对ALI大鼠的保护作用.方法:Wistar大鼠尾静脉注射LPS,建立ALI模型.分别采用ELISA和Northern Blotting方法检测不同时相血清中IL-1 β含量及肺组织IL-1 β mRNA水平的变化;同时以地塞米松为对照,观察SN33对IL-1 β基因表达的影响.光镜、电镜观察大鼠肺病理形态学变化.结果:LPS诱发大鼠ALI过程中血清IL-1β水平显著高于正常对照组(P＜0.01),峰值为LPS攻击后2 h;肺组织IL-1 β mRNA表达明显增高,峰值为LPS攻击后1 h;以SN33保护的大鼠,IL-1 β含量和mRNA表达均明显低于相应时相LPS攻击组;且肺损伤程度减轻.结论:IL-1 β在LPS诱导的ALI过程中起着重要作用;SN33注射液可以抑制IL-1β的释放和表达,对肺脏有一定的保护作用.     

Th1/Th2平衡在高容量血液滤过防治多脏器功能衰竭中的变化及意义

目的探讨多脏器功能衰竭（MODS）发病机制及高容量血液滤过（HVHF）防治MODS的依据。方法采用2次打击法建立猪MODS模型，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清干扰素（IFN）-γ和白细胞介素（IL）-4含量变化；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法测定脾脏IFN-γ、IL-4mRNA水平及辅助T细胞特异性转录因子T-bet和GATA-3mRNA的含量变化。结果HVHF组MODS发生率为20％，显著低于MODS组88．9％（P〈0．01）；血清IFN-γ和IL-4浓度显著低于MODS组（P〈0．05），处死前IFN-γ／IL-4比值明显高于MODS组（P〈0．01）；脾脏IFN-γ和IL-4 mRNA表达量较MODS组明显下降（P〈0．05），IFN-γ/IL-4 mRNA比值明显高于MODS组（P〈0．05）；脾脏GATA3mRNA表达量低于MODS组（P〈0．01），T—bet mRNA表达量下降，差异无统计学意义（P〉0．05），T-bet／GATA3比值显著高于MODS组（P〈0．01）。结论Th1向Th2漂移可能是MODS发生的本质原因之一，HVHF能够在一定程度上遏止Th1向Th2漂移的发生。     

异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

右美托咪啶对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响

目的 评价右美托咪啶对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠54只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和右美托咪啶组(D组).I/R组和D组采用夹闭双侧颈总动脉联合低血压法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型.D组于缺血再灌注即刻静脉注射右美托咪啶3 μg/kg,后以3μg·kg-·h-1的速率静脉输注至再灌注2h.于再灌注6 h(T1)、24 h(T2)和72 h(T3)时行神经功能缺陷评分(NDS评分),然后各组随机处死6只大鼠,取脑组织,观察海马CA1区病理学结果,采用分光光度计法测定髓过氧化物酶(MPO)活性,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β的含量,采用免疫组化法测定胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 与S组比较,I/R组和D组T1 ～3时NDS评分、脑组织MPO活性、TNF-α和IL-1β的含量升高,T2,3时GFAP表达上调(P＜0.05或0.01),海马CA1区病理学损伤明显;与I/R组比较,D组T1 ～3时NDS评分、脑组织MPO活性和TNF-α含量降低,T1,2时脑组织IL-1β含量降低,T2,3时脑组织GFAP表达下调(P＜0.05或0.01),海马CA1区病理学损伤减轻.结论 右美托咪啶可减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制炎性反应有关.     

银杏叶提取物对重症急性胰腺炎大鼠脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平的影响

目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺及脑组织中IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平的影响,探讨SAP脑损害的发病机理及GBE对脑损害的治疗效果。方法 54只Winstar大鼠随机分为正常对照组、模型组及治疗组3组,每组18只。正常对照组开腹仅翻动胰腺;治疗组及模型组采用胰腺被膜下注射5%牛黄胆酸钠法制作SAP模型,每隔8 h分别于腹腔内注射GBE和生理盐水。制模后6、12及24 h时段各组取材,测定血清淀粉酶值,光镜下行胰腺组织病理评分,免疫组化法测定胰腺和脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果血清淀粉酶值及胰腺组织病理评分值治疗组较模型组降低(P<0.01)。24 h与6及12 h时段比较,胰腺组织中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平,在模型组增高(P<0.05或P<0.01),在治疗组无明显变化(P>0.05);脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平,在模型组增高(P<0.05或P<0.01),在治疗组降低(P<0.05或P<0.01)。同时段比较,IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平治疗组均较模型组降低(P<0.01)。结论 SAP时胰腺和脑组织中IL-1β、IL-6及TNF-α的表达明显增加,GBE对SAP时胰腺及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α有抑制清除作用。     

右美托咪定通过c-Fos/NLRP 3/caspase-1级联抑制LP S诱发的小胶质细胞炎症反应

目的探讨右美托咪定通过c-Fos/NLRP3/caspase-1级联抑制脂多糖(LPS)诱发的小胶质细胞炎症反应。方法选取新生的SD大鼠,取其小胶质细胞进行原代培养及分离纯化。采用LPS诱导建立小胶质细胞炎症模型。采用MTT法选取右美托咪定抑制LPS诱导小胶质细胞炎症反应的最适宜浓度。将细胞分为三组:对照组、LPS组和右美托咪定治疗组(D组)。采用实时定量PCR法测定细胞中IL-1β和TNF-α的mRNA表达量;采用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的含量;采用Western blot法检测原癌基因c-Fos、NLRP3和caspase-1的蛋白含量。结果与对照组比较,LPS组小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达量均明显升高(P0.05);D组IL-1β和TNF-α的mRNA表达量明显低于LPS组(P0.05)。与对照组比较,LPS组中小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的含量均明显增加(P0.05);而D组IL-1β和TNF-α的含量明显低于LPS组(P0.05)。与对照组比较,LPS组小胶质细胞中c-Fos、NLRP3和caspase-1的蛋白含量均明显增加(P0.01);而D组c-Fos、NLRP3和caspase-1的蛋白含量明显低于LPS组(P0.05)。结论右美托咪定可抑制LPS诱发的小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达量及蛋白含量,推测其作用机制可能与抑制c-Fos/NLRP3/caspase-1级联反应有关。     

丁酸钠对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠的肺保护研究

目的 探讨丁酸钠(sodium butyrate,SB)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lunginjury,ALI)大鼠是否具有肺保护作用. 方法 40只雄性SD大鼠采用随机数字表法分成4组(每组10只):C组(对照组,静脉注射生理盐水2 ml/kg)、SB组(腹腔注射SB 500 mg/kg)、LPS组(静脉注射LPS 6 mg/kg)和SB+LPS组(于注射LPS后即刻和4h分别腹腔注射SB 500 mg/kg).6h后观察肺组织病理学变化,测定肺组织湿干重比(wet/dry weight ratio,W/D)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量及血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-8、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB-1)、IL-10含量. 结果 与LPS组比较,SB+LPS组肺组织损伤程度明显减轻,W/D下降(4.48±0.23vs4.20±0.11,P＜0.05),组织MPO活性、MDA和NO含量显著降低(0.84±0.05)vs(0.68±0.03),(5.75±0.19)vs(2.74±0.20),(41 ±4)vs(33±7) (P＜0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-8、HMGB-1含量降低(2350±121)vs(1150±154),(395±20)vs(203±18),(89±7)vs(50±5),(115± 12)vs(62±16) (P＜0.05),IL-10含量增加(281±25)vs(101±14)(P＜0.05). 结论 SB能够通过抑制中性粒细胞聚集和促炎症因子的产生,抑制肺部脂质过氧化和硝基化效应,从而减轻肺水肿和细胞损伤,发挥肺保护作用.     

高容量血液滤过对外周血细胞因子的影响

目的研究高容量血液滤过(HVHF)对外周血肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的清除作用。方法18例重症急性肾功能衰竭(ARF)患者,随机选择10例行HVHF,另8例为对照组,行血液透析(HD)。酶联免疫法检测治疗前和治疗1h、2h、4h、6h和8h时血、超滤液及透析液中TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度(单位均为ng/L)。结果(1)HVHF组9/10例、HD组6/8例患者肾功能恢复正常;(2)HVHF组治疗前血TNF-α1784±437、IL-1β960±173、IL-61320±325分别与治疗后4h1267±401、519±127、761±259比较,差异有显著性意义,P＜0.01;超滤液中未能检测出TNF-α,但可持续检测到IL-1β、IL-6;(3)HD组治疗过程中TNF-α、IL-1β、IL-6血中浓度无明显变化,透出液中未检测出上述细胞因子。结论HVHF可通过对流作用清除大量的细胞因子;AN69滤器对细胞因子有吸附作用。     

CD4+T淋巴细胞在IgA肾病中致病作用机制研究

目的探讨CD4~+ T淋巴细胞在IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)中致病作用机制。方法选取2017年8月至2018年8月于复旦大学附属闵行医院肾脏科住院治疗且经首次肾活检证实为IgAN患者作为IgAN组(45例),另外纳入我院体检中心体检健康者作为健康对照组(49例),采集健康对照组和IgAN组患者治疗前后的外周血液样本,分离制备外周血淋巴细胞、单核细胞及血清。采用ELISA检测外周血清CD4~+ T淋巴细胞因子,包括γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin,IL)-4、IL-17、IL-21、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)。采用流式细胞仪检测CD4~+ T细胞的分布比例。采用RT-qPCR及Western blot检测JAK/STAT信号通路各信号分子的表达水平。结果 IgAN组血清IL-4、IL-17、TGF-β1、IL-21水平高于健康对照组(P0.05);而IFN-γ水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。使用激素治疗1月后,IgAN组外周血清IL-4、IL-17、TGF-β1、IL-21水平均显著低于治疗前(P0.01)。与健康对照组比较,治疗前IgAN组患者Th2及Treg细胞在T细胞中占比显著升高(P0.05),而Th1的占比在两组受试者之中差异无统计学意义(P0.05)。RT-qPCR及Western blot结果表明,治疗前IgAN组JAK1、JAK3、STAT3和STAT6表达水平显著高于正常对照组(P0.05),而STAT5表达水平显著低于正常对照组(P0.05),两组JAK2、TYK2、STAT1和STAT4表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD4~+ T细胞亚群失调可能参与IgAN患者的发病机制,与JAK/STAT信号通路表达失衡有关。因此,CD4~+ T细胞因子(IL-4、IL-17、TGF-β1和IL-21)可能成为治疗IgAN的新靶点和监测IgAN病情的无创生物标志物。     

髓系触发受体-1在脆弱类杆菌诱导小鼠脓毒血症中的作用

目的 探讨小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体(Lentivector,LV)TREM-1 vshRNA对脆弱杆菌脓毒血症小鼠脾脏中促炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达及NF-κB通路的影响.方法 将清洁级BALB/c雄性小鼠分成4组,即正常对照组(C组),脆弱类杆菌脓毒症模型生理盐水组(S组),TREM-1 vshRNA干扰实验组(T组)和GFPvshRNA干扰实验组(G组).观察各组中小鼠脾内TREM-1,TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白表达以及IkBa,pDAP12,NF-κB p65的表达情况的变化.结果 与C组比,T组TREM-1 mRNA及蛋白表达均有显著增加(P＜0.01);T,G,S组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较C组显著增加(P＜0.01);T组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较S,G组明显降低(P＜0.01).S组脾细胞中的pDAPl2和核内NF-κB p65蛋白表达水平明显增强,IκBa蛋白表达水平降低;而T组与S组比较,pDAP12和NF-κB p65蛋白的表达水平显著下调.结论 小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体可选择性抑制TREM-1表达,下调脆弱类杆菌诱导的促炎症因子的分泌,而转染可能是通过下调DAPl2的表达,稳定IkBa/NF-κB复合物,抑制TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8基因的转录,而对脆弱类杆菌脂多糖炎症反应产生抑制作用.     

脂多糖所致脓毒症诱导的急性肺损伤肺组织T淋巴细胞活化及共刺激分子表达的研究

目的研究腹腔注射脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型肺组织T淋巴细胞活化状态。方法健康雄性C57BL/6随机分为生理盐水(NS)腹腔注射组,LPS腹腔注射组,每组4只。模型建立后3 h,获取两组小鼠肺组织细胞并进行T淋巴细胞各亚群及活化指标染色,采用流式细胞术检测。结果与对照组(NS)相比,LPS腹腔注射组小鼠肺组织内抑制性共刺激分子PD-1、CD40/CD40L、CTLA-4在CD4~+和CD8~+T细胞表达水平均显著升高(P0.05),协同共刺激分子CD28(MFI:298.50±4.44)表达水平降低;与对照组相比,早期活化分子CD69在LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺组织内CD4~+T(MFI:848.30±95.57;t=6.8670,P0.001)和CD8~+T淋巴细胞的表达水平显著升高(MFI:606.00±95.54;t=4.8780,P0.01);晚期活化分子CD38在CD4~+T细胞表达显著升高(MFI:69.38±2.86;t=4.1150,P0.01),在CD8~+T细胞表达无明显升高。结论 LPS诱导的急性肺损伤能够导致肺组织内T淋巴细胞早期活化,并且能够上调其多种抑制性共刺激分子表达,提示T淋巴细胞可能在ALI中发挥重要作用。     

电刺激对LPS诱导M1型小胶质细胞活化的影响

目的评价电刺激对LPS诱导M1型小胶质细胞活化的影响。方法将生长良好的BV2小胶质细胞采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、LPS组和LPS+电刺激组(LE组)。C组常规培养24 h, LPS组和LE组加入浓度为100 ng/ml的LPS培养基孵育24 h, LE组于LPS孵育前给予100 mV/mm的直流电刺激4 h。采用ELISA法检测上清液TNF-α和IL-1β浓度;免疫荧光染色法检测M1型小胶质细胞表面标志物CD32和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平;qRT-PCR法检测细胞CD32和iNOS的mRNA表达水平。结果与C组相比, LPS组和LE组上清液TNF-α和IL-1β浓度升高, 细胞CD32和iNOS及其mRNA表达上调(P<0.05);与LPS组相比, LE组上清液TNF-α和IL-1β浓度降低, 细胞CD32和iNOS及其mRNA表达下调(P<0.05)。结论电刺激可抑制LPS诱导M1型小胶质细胞活化, 从而减轻炎症反应。     

IL-17A对脂多糖致老年大鼠早期中枢炎症和场景性恐惧实验的作用

目的探讨IL-17A对脂多糖(LPS)致老年大鼠早期中枢炎症和恐惧实验的影响。方法雄性SD大鼠70只,18月龄,首先取30只大鼠随机均分为五组:腹腔注射生理盐水(生理盐水组,A组)、腹腔注射LPS 500μg/kg 6h组(B组)、12h组(C组)、24h组(D组)、48h组(E组)。检测LPS注射后各组大鼠海马IL-17A的表达。随后,将剩余40只大鼠随机均分为四组:空白对照组(O组)、IL-17A抗体组(P组)、LPS腹腔注射组(Q组)、IL-17A抗体+LPS腹腔注射组(R组)。P组和R组大鼠侧脑室给予IL-17A抗体3μl(200μg/μl),O组和Q组给予同体积生理盐水;30min后,Q组和R组大鼠腹腔注射LPS(500μg/kg),O组和P组给予同体积生理盐水,24h后各组行场景性恐惧实验,记录四组大鼠的僵直时间,检测海马TNF-α和IL-6水平及CA1区Iba1阳性细胞的表达。结果 B、C和D组大鼠海马中IL-17A的表达明显高于A组(P0.01),E与A组IL-17A的表达差异无统计学意义;Q组和R组大鼠僵直反应时间明显短于O组(P0.05或P0.01),R组大鼠僵直反应时间明显长于Q组(P0.01);Q组和R组大鼠海马TNF-α和IL-6的水平明显高于O组(P0.01),R组大鼠海马TNF-α和IL-6水平明显低于Q组(P0.01);Q组和R组大鼠海马CA1区Iba1阳性细胞数目明显多于O组,R组大鼠海马CA1区Iba1阳性细胞数目明显少于Q组(P0.05)。结论 IL-17A参与LPS引起的老年大鼠早期中枢炎症因子TNF-α和IL-6的表达、小胶质细胞的活化以及场景性恐惧实验的僵直时间改变。     

淋巴细胞凋亡在高容量血液滤过防治多器官功能障碍中的变化及意义

目的观察高容量血液滤过（HVHF）防治家猪多器官功能障碍（MODS）对淋巴细胞凋亡的影响。方法19头猪采用失血性休克＋复苏灌注＋内毒素血症复制MODS模型，随机分为HVHF组（n=10）和MODS组（n=9）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-10浓度；采用流式细胞仪技术检测淋巴细胞凋亡；采用免疫印迹杂交法检测淋巴细胞膜表面Fas表达。结果HVHF组治疗后IL1β浓度明显下降；IL-10由治疗开始后即明显下降，至6h达到最低点，此后维持在稳定状态；淋巴细胞膜表面Fas表达明显下降，淋巴细胞凋亡率逐渐减少。HVHF组各主要器官功能均明显改善，动物死亡率和MODS发生率显著低于MODS组。结论HVHF通过对促炎／抗炎细胞因子平衡的调节，下调了淋巴细胞膜表面Fas表达，减少淋巴细胞凋亡，恢复其功能，从而对MODS起到一定的防治作用。