Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响。方法组织贴块法培养大鼠VSMC细胞,采用TNF-α诱导其增殖,加入不同浓度的Roscovitine预处理15 h,将细胞分为:对照组、TNF-α组、Roscovitine 5、10、15、30μmol·L~(-1)组。MTT比色法检测细胞增殖活性;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA);流式细胞仪检测细胞周期;荧光定量RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白(Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4、CDK5)、细胞周期抑制蛋白(p53、p21、p27)的表达。结果 Roscovitine能抑制VSMC增殖;抑制细胞周期从G_0/G_1期向S期转化。与TNF-α组比较,Roscovitine 5、10、15、30μmol·L~(-1)组能降低细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E蛋白表达,降低细胞周期蛋白依赖激酶CDK4、CDK5蛋白表达,升高细胞周期抑制蛋白p53、p21、p27蛋白表达(P<0.05)。结论 Roscovitine可抑制大鼠VSMC细胞周期进程及增殖活性。     

土槿乙酸抑制人卵巢癌SKOV_3细胞增殖并诱导G_2/M期阻滞

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞周期的影响。方法 MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞术检测细胞周期;Real time-PCR和Western blot检测周期相关基因Cyclin B1、CDK1和CyclinD1的表达变化。结果 PLAB明显抑制SKOV3细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P<0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为2.44、1.60、2.94μmol.L-1。5μmol.L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P<0.05),同时伴有Cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P<0.05),Cyclin D1呈低表达状态(P<0.05)。结论 PLAB可抑制SKOV3细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随Cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关。     

蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达。结果与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg.L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达。结论蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导。     

氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其机制

目的观察氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用氯喹20,40和80μmol·L~(-1)分别处理MDA-MB-231细胞24和48 h,采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白即细胞周期蛋白D3、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和CDK4,细胞凋亡相关蛋白即活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及自噬标志蛋白即自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和自噬底物SQSTM1表达水平。结果氯喹20,40和80μmol·L~(-1)与MDA-MB-231细胞作用24和48 h后,均能有效抑制细胞增殖(P<0.01)。与细胞对照组相比,氯喹20和40μmol·L~(-1)处理24 h,G_0/G_1期细胞百分比显著增高(P<0.01);80μmol·L~(-1)组G_2/M期细胞百分比升高(P<0.01),且细胞凋亡率增加(P<0.01)。处理48 h,与细胞对照组相比,氯喹用药3组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。氯喹3组处理24 h,与细胞对照组相比,细胞周期蛋白D3、CDK2和CDK4表达水平降低(P<0.01),活化胱天蛋白酶3和活化PARP表达增强(P<0.01),LC3B和SQSTM1表达水平显著升高(P<0.01)。结论氯喹可通过抑制MDA-MB-231细胞自噬、阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡而抑制其增殖。     

松果菊苷通过性别决定区Y框蛋白4对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响研究

摘要：目的:研究松果菊苷（Echinacoside）对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:胃癌AGS细胞分成对照组和Echinacoside组,对照组不用松果菊苷处理,Echinacoside组分别用5,10,20,40,80μmol·L-1的松果菊苷培养。CCK-8法检测细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、性别决定区Y框蛋白4（SOX4）蛋白表达。在胃癌AGS细胞中转染SOX4过表达载体,给予松果菊苷处理,同样测定细胞增殖、周期、凋亡和Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、SOX4蛋白表达。结果:5,10μmol·L-1的松果菊苷处理后的胃癌AGS细胞光密度（OD）值无明显变化,20,40,80μmol·L-1的松果菊苷处理后的胃癌AGS细胞OD值明显降低（P<0.05）,因此选择20,40,80μmol·L-1松果菊苷处理胃癌AGS细胞。与对照组比较,Echinacoside组(20,40,80μmol·L-1松果菊苷处理)胃癌AGS细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、SOX4蛋白表达水平下降,并且松果菊苷对胃癌AGS细胞周期和凋亡的影响随着作用浓度的升高而增加（P<0.05）。SOX4过表达载体能够逆转松果菊苷对胃癌AGS细胞增殖抑制、周期阻滞、凋亡促进、Bax蛋白表达促进和Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、SOX4蛋白抑制作用（P<0.05）。结论:松果菊苷通过SOX4抑制胃癌AGS细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

新型化合物XN4抑制急性粒细胞白血病细胞增殖与其诱导氧化性的DNA损伤的关系

目的研究XN4在体外抑制急性粒细胞白血病细胞(AML)增殖的作用与诱导DNA损伤的关系。方法 MTT法检测XN4对AML细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测AML细胞反应性氧自由基(ROS)、DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡;Western blot探讨XN4对相关蛋白表达的影响。结果 XN4明显抑制AML细胞增殖,半数抑制率(IC50)分别为(2.79±0.15)μmol·L-1和(2.76±0.20)μmol·L-1;XN4增加细胞ROS水平和r-H2AX的表达,诱导细胞阻滞在S期并增加细胞凋亡率;XN4能增加H2AX、ATM的磷酸化以及Parp和Caspase-3的切割,而减少CDK2和Cyclin E1的表达。结论 XN4通过激活ROS,诱导DNA的损伤和细胞周期S期阻滞,抑制DNA损伤修复和诱导细胞的凋亡,抑制HL-60及KG1α细胞的增殖,抗氧化剂NAC(N-乙酰半胱氨酸)能减少ROS的产生逆转XN4的作用。     

木栓酮调控K562细胞增殖和细胞周期机制的初步研究

目的观察木栓酮对人慢性髓系白血病(CML)细胞株K562增殖和细胞周期的影响和机制。方法将K562细胞分为对照组和木栓酮组,木栓酮组包括10、20、50、100μmol/L组,培养24、48、72h。采用四甲基固氮唑盐(MTT)法测定木栓酮对K562细胞增殖的影响,流式细胞仪检测木栓酮对K562细胞细胞周期的影响。实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)mRNA表达水平。蛋白印迹法检测细胞中CDK1蛋白表达水平。结果 50μmol/L木栓酮组和100μmol/L木栓酮组K562细胞的增殖抑制率明显高于对照组,并具有一定的时间和剂量依赖性。进一步研究发现,50μmol/L和100μmol/L木栓酮可以阻滞细胞周期于G0/G1期。高浓度木栓酮作用后,CDK1mRNA及蛋白表达均明显低于对照组。结论木栓酮能够抑制K562细胞的增殖,并使K562细胞周期阻滞在G2期,其机制可能与下调CDK1的表达有关。     

降钙素基因相关肽对大鼠血管平滑肌细胞CDK2和Cyclin E的影响

目的:研究降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠血管平滑肌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)的影响,为阐明CGRP抑制血管平滑肌细胞增殖的细胞周期机制提供实验依据。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分别用CGRP或/和10%FBS处理细胞。噻唑蓝比色法(MTT)观察CGRP对10%FBS诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期;Western blot检测CDK2和Cyclin E的表达。结果:CGRP能抑制10%FBS诱导的血管平滑肌细胞增殖,升高G0/G1期细胞百分比,降低S+G2+M期细胞百分比,抑制细胞内CDK2和Cyclin E表达。结论:CGRP能通过阻滞细胞周期由G0/G1期进入S期而抑制血管平滑肌细胞增殖,其作用机制可能与降低CDK2和Cyclin E表达有关。     

氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制作用及机制研究

目的观察氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7周期、周期蛋白相关基因及产物表达的影响,探讨氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其机制。方法MTT检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR技术检测细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA的表达;Western blot检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21的蛋白表达。结果氨氯地平剂量和时间依赖性的抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol.L-1。经7.22μmol.L-1(1/2IC50)、14.439μmol.L-1(IC50)、28.88μmol.L-1(2IC50)的氨氯地平作用人乳腺癌MCF-7细胞48h,G0/G1期细胞较对照组明显增高(P<0.05);并使人乳腺癌MCF-7细胞中cyclinD1mRNA及蛋白表达降低;p21mRNA及蛋白表达升高。结论氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞具有抗增殖作用,并使细胞阻滞于G1期。其G1阻滞机制可能与调控细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA及蛋白的表达相关。     

曲古抑菌素A对甲状腺鳞癌细胞中Cyclin D1、CDK4、pRB表达的影响

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺鳞癌(SW579)细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、视网膜母细胞瘤基因(RB)的蛋白产物(pRB)表达的影响。方法:体外培养SW579细胞,以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组,另设空白对照(未作任何处理)组,观察50、100、200、400nmol·L-1TSA对SW579细胞生长抑制率的影响,及细胞中Cy-clin D1、CDK4、RB基因和蛋白的表达情况。结果:与溶剂对照组和空白对照组比较,各剂量TSA作用后SW579细胞的细胞生长抑制率明显升高(P<0.01),且呈剂量依赖性。与空白对照组比较,各剂量TSA作用后SW579细胞中Cyclin D1 mRNA表达明显降低(P<0.01),且随剂量增加表达降低,但CDK4、RB mRNA表达和溶剂对照组中这2个基因的表达均无明显变化(P>0.05);与空白对照组比较,各剂量TSA作用后细胞中Cyclin D1和pRB蛋白表达明显降低(P<0.01),且随剂量增加表达降低,但CDK4蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:TSA能明显抑制SW579细胞的生长,且呈剂量依赖性;其机制可能与Cyclin D1基因和蛋白、pRB蛋白的表达有关。