舒芬太尼调控 miR-1抑制肝癌细胞 MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,qRT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufent-anil+miR-1)组.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果 不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)％比(16.34±1.72)％]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)％比(29.85±3.10)％]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05).结论 舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关.     

RNA干扰沉默DDX1基因的胶质瘤细胞系的建立

目的以短发夹核糖核酸(RNA)慢病毒载体建立DEAD-box解旋酶1(DDX1)基因稳定沉默的胶质母细胞瘤细胞株。方法针对DDX1基因设计2组短发夹RNA序列,退火形成的双链DNA与线性p LKO. 1-puro-e GFP质粒载体连接,构建慢病毒质粒载体,测序正确后进行慢病毒包装;将获得的重组慢病毒转染人胶质瘤U251细胞,转染细胞分为对照组和干扰组,对照组转染对照慢病毒(sh NC);干扰组转染慢病毒载体p LKO. 1-puro-e GFP-shRNA-DDX1(sh DDX1-1,sh DDX1-2)。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,进行嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量聚合酶链式反应(PCR)、蛋白免疫印迹法检测转染后U251细胞中DDX1 mRNA及蛋白表达。结果测序证实成功构建对照组和靶向DDX1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,病毒悬液滴度均> 3×10~8TU·m L^-1。荧光显微镜下观察显示,对照组和干扰组转染效率高于85%;嘌呤霉素筛选后,干扰组sh DDX1-1、sh DDX1-2中DDX1 mRNA的抑制率分别为85. 44%和71. 66%,DDX1蛋白表达水平分别下降了99. 1%和96. 7%,均较对照组(100%)显著降低(均P <0. 01)。结论成功构建沉默DDX 1基因的胶质瘤细胞系,为研究DDX1对胶质瘤生物学行为的影响提供细胞模型。     

转移相关基因干扰对肝癌转移潜能的影响

目的：通过干扰高转移潜能肝癌细胞（ MHCC97?H）中的骨桥蛋白（ OPN）、肿瘤增殖性因子肿瘤生长因子β1（ TGFβ1）基因,使之减少OPN、TGFβ1表达,观察MHCC97?H转移能力的变化情况。方法对MHCC97?H细胞行OPN、TGFβ1基因干扰,qPCR法检测干扰效果。 MHCC97?H细胞迁移细胞学实验采用transwells法。肺转移动物模型制作方法：裸鼠尾静脉注射各组细胞,含细胞数5×106个／只,隔天连续注射3次,2周后观察肺脏组织。离体肺脏组织标本制作,DAPI 染核处理10 min,甘油PBS 封片,置于荧光显微镜下观察。免疫荧光法检测裸鼠动物模型整合素αvβ3表达。结果经基因干扰后MHCC97?H表达OPN和TGFβ1明显降低（ P＜0．05）。细胞学实验显示与对照组比较,经OPN和TGFβ?1干扰组MHCC97?H细胞迁移数量明显减少（ P＜0．01）。动物模型实验显示与对照组比较,OPN和TGFβ1干扰组肺组织中肝癌细胞较少,定量分析显示OPN和TGFβ1干扰组肺脏组织中肝癌细胞IOD值明显低于对照组（ P＜0．05）。 OPN和TGFβ1干扰组与对照组比较整合素αvβ3表达IOD值差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论经OPN和TGFβ1基因干扰的MHCC97?H细胞肺转移能力有明显的下降,尤其是TGFβ1基因干扰组下降更加明显,但经OPN和TGFβ1基因干扰的MHCC97?H细胞表达整合素αvβ3能力无变化,整合素αvβ3介导参与了OPN和TGFβ1共同作用肝癌转移行为的变化。     

甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭迁移的影响及其机制研究

摘要：目的 检测甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭转移的影响并探讨其机制。方法 应用Western blot、免疫组 化以及 Real-time PCR 等方法检测 37 例肝癌及对应癌旁组织标本中 SETDB2 蛋白及 mRNA 表达情况。将靶向 SETDB2 的短发卡 RNA（sh-SETDB2）和空载体（sh-NC）分别转染至人肝癌 MHCC97H 细胞构建稳转细胞系,应用 Tanswell侵袭实验、细胞划痕实验检测2组细胞的侵袭和迁移能力。通过基因芯片检测敲低SETDB2后表达有变化 的基因。敲低SETDB2后,运用Real-time PCR检测PTEN的mRNA的表达变化以及Western blot检测PTEN和组蛋白 H3第9位赖氨酸的三甲基化（H3K9me3）的表达变化,CHIP 检测H3K9me3在PTEN 的启动子区域的变化。在敲低 SETDB2的同时敲低PTEN的表达,Tanswell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 （1）Western blot和Real-time PCR的结果均表明肝癌组织中SETDB2蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织;SETDB2表达的高低与肝癌组织学 分级和TNM分期有关。（2）转染sh-SETDB2的MHCC97H细胞的侵袭和迁移能力均明显低于sh-NC组。（3）基因芯 片、Western blot以及Real-time PCR等实验结果显示敲低SETDB2后PTEN表达上调。（4）在敲低SETDB2后H3K9me3 表达下调,PTEN启动子区域的H3K9me3减少。（5）与敲低SETDB1组相比,敲低SETDB2的同时敲低PTEN后细胞的 侵袭能力恢复。结论 SETDB2通过下调PTEN的表达促进肝癌细胞的侵袭迁移。     

改进型颈动脉注射法构建裸鼠脑转移瘤模型

目的 建立桡足类超绿色荧光蛋白（copepod super green fluorescent protein，copGFP）与纳米荧光素酶（nano luciferase，Nluc）标记的MHCC97-H人肝癌细胞株，通过改进型颈动脉注射法构建应用小动物活体成像系统观察的裸鼠脑转移模型。方法 使用携带目的基因的慢病毒载体质粒通过磷酸钙法转染293FT细胞，包装慢病毒后感染MHCC97-H细胞，经嘌呤霉素筛选感染阳性细胞，通过有限稀释法纯化得到稳定表达copGFP及Nluc的单克隆细胞株。通过改进型颈动脉注射法构建裸鼠脑转移模型，应用活体成像系统监测颅内转移灶生长情况。结果 成功建立了copGFP与Nluc标记的MHCC97-H肝癌细胞稳定株。分别使用稳定株与原始株细胞通过改进型颈动脉注射法造模，2组荷瘤裸鼠体质量变化及生存曲线无统计学差异，使用稳定株造模裸鼠可通过活体成像系统实时监测到脑转移的形成，所检测生物发光信号强度随肿瘤生长逐渐增强。结论 经copGFP与Nluc标记的MHCC97-H人肝癌细胞通过改进型颈动脉注射法成功构建裸鼠脑转移模型，可通过活体成像系统进行无创、连续可视化监测，为肝癌脑转移机制的研究及治疗药物的研发提供理想的动物模型。     

趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在肝癌侵袭 转移中的作用及机制

目的 探讨趋化因子受体 CXCR4 及其配体 CXCL12（CXCL12/CXCR4）在原发性肝癌侵袭转移中的作用 及机制。方法 分别采用 Western blot、免疫组化和 Real-time PCR 等方法检测 60 例肝癌及对应癌旁组织标本中 CXCL12/CXCR4 蛋白及 mRNA 表达水平。常规培养 4 种肝癌细胞（Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B）和正常肝细胞 （7702）,Real-time PCR 检测上述细胞中 CXCL12、CXCR4 mRNA 的表达,筛选合适的实验细胞。将 CXCR4 干扰质 粒（sh-CXCR4）和对应空载体（sh-control）分别转染至 MHCC97h 构建稳转细胞系。Transwell 侵袭实验、细胞划痕实 验、MTT 实验分别检测 2 组细胞的侵袭、迁移和增殖能力。取稳定表达的 sh-control 和 sh-CXCR4 MHCC97h 细胞, 接种至 6 只裸鼠皮下,观察瘤体生长情况。Western blot 检测 sh-control 和 sh-CXCR4 MHCC97h 细胞及对应裸鼠移 植瘤中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达,同时对转染 CXCR 过表达质粒的 MHCC97h 中 VEGF-C 的表达水平 进行检测。结果 （1）Western blot、免疫组化和 Real-time PCR 的结果均证实肝癌组织中 CXCL12/CXCR4 蛋白及 mRNA 表达水平均高于癌旁组织。（2）Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B 细胞中 CXCL12/CXCR4 mRNA 表达水平均高 于 7702 细胞,选取 MHCC97h 为实验细胞。转染 sh-CXCR4 的 MHCC97h 细胞的侵袭、迁移和增殖能力均明显低于 sh-control 组,同时接种含 sh-CXCR4 的 MHCC97h 细胞的裸鼠移植瘤的生长速度也明显小于 sh-control 组。（3）体外 和体内实验均证实 sh-CXCR4 组的 VEGF-C 表达水平均低于 sh-control 组,而过表达 CXCR4 后,VEGF-C 的蛋白表 达明显上调。结论 CXCL12/CXCR4 在原发性癌组织和肝癌细胞中呈现高表达,CXCL12/CXCR4 可能通过调控 VEGF-C 蛋白表达从而抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

NLRC3低表达对人肺正常上皮细胞BEAS-2b侵袭迁移的影响

目的 探讨NLRC3(NLR family CARD domain containing 3)低表达后对人肺正常上皮细胞株BEAS-2b侵袭和迁移的影响及其机制。方法 采用Lipofectamin 2000转染试剂将NLRC3基因的小干扰片段siNLRC3转染至BEAS-2b细胞;荧光定量PCR检测干扰片段siNLRC3的干扰效率;Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验检测NLRC3低表达后BEAS-2b细胞迁移和侵袭能力的变化;Western Blot检测NLRC3低表达后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、钙粘蛋白E-cadherin表达的影响。结果 荧光定量PCR实验结果表明siNLRC3干扰效率为77%。Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验结果表明NLRC3低表达后BEAS-2b细胞迁移和侵袭能力增加（P<0.05）。Western blot结果显示NLRC3低表达后BEAS-2b细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平上调,E-cadherin蛋白表达水平明显下降（P<0.01）。结论 NLRC3基因低...     

JWA基因在不同转移潜能人肝癌细胞中的表达及意义

目的 探讨JWA基因在不同转移潜能人肝癌细胞中的表达及意义.方法 分别应用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测无转移潜能人肝癌细胞株Hep G2、低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L、高转移潜能人肝癌细胞株MHCC97H及较高转移潜能人肝癌细胞株HCCLM3的JWA mRNA和蛋白表达水平.结果 Hep G2细胞JWA mRNA和蛋白水平最高,HCCLM3细胞的JWA mRNA和蛋白水平最低,JWA基因表达水平随着肝癌细胞转移潜能增高而递减.结论 JWA mRNA和蛋白表达水平随着肝癌细胞转移潜能增高而递减,可能与肝癌的发生、发展及转移密切相关.     

SERPINB7对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(SERPINB7)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用及其可能机制。方法 将人乳腺癌细胞系MCF-7分为sh-SERPINB7组、空白对照组(BC组)和阴性对照组(NC组);其中,sh-SERPINB7组和NC组分别转染SERPINB7 RNA干扰慢病毒和阴性对照慢病毒。采用qRT-PCR法检测SERPINB7 mRNA表达,CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,Western blot法检测SERPINB7、Bax、Bcl-2、Snail、Slug、转化生长因子β(TGF-β)、Smad3和磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达。结果 MCF-7细胞中SERPINB7蛋白表达高于人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P<0.05)。与BC组和NC组相比,sh-SERPINB7组MCF-7细胞中SERPINB7 mRNA表达以及Bcl-2、Snail、Slug、TGF-β、p-Smad3蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,细胞划痕愈合率和侵袭细胞数减少,Bax蛋白表达增加(P<0...     

RNA 干扰抑制人舌鳞癌细胞 MMP-1表达对细胞侵袭、转移能力的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶‐1（MMP‐1）短发夹RNA（shRNA）的慢病毒表达载体在人舌鳞癌细胞株CAL27中对MMP‐1表达及细胞侵袭、转移的作用。方法设计合成用于干扰人MMP‐1的shRNA并与载体 PLKO ．1连接,构建重组的慢病毒载体质粒 PLKO ．1／MMP‐1‐shRNA ,稳定感染CAL27细胞。Western blot检测CAL27细胞中MMP‐1蛋白表达,划痕实验和Transwell实验分别检测CAL27细胞的迁移和侵袭能力。结果成功构建慢病毒载体 PLKO ．1／MMP‐1‐shRNA ;其能明显下调CAL27细胞中MMP‐1蛋白表达,抑制CAL27细胞迁移和侵袭能力。结论慢病毒载体PLKO ．1／MMP‐1‐shRNA能有效抑制MMP‐1表达、细胞迁移和侵袭。MMP‐1可能是舌鳞癌细胞转移的重要调节因子。     

Degraded and undegraded carrageenans and experimental gastric and duodenal ulceration

The prevention of histamine-induced gastric and duodenal ulceration in the guinea-pig has been examined using a series of undegraded and degraded carrageenans. Undegraded carrageenans were active at lower doses than degraded carrageenans. The high viscosity of the undegraded carrageenans in solution prevented their use in larger doses. Degradation of carrageenan without serious loss of sulphate, gives a product which allows the dose to be increased to an extent that its effect more than offsets the slight loss in activity caused by the degradation. No single feature of carrageenan structure can be related to anti-ulcer activity although degradation, and hence reduction of molecular size, generally reduces activity. Sulphate contents over 30% have little apparent effect on activity; κ-carrageenans were not consistently different in anti-ulcer activity from Λ-carrageenans. This contrasts with the antipeptic activity of carrageenans where κ-carrageenans are less active than their Λ-counter-parts. As with antipeptic activity, the degree of anti-ulcer activity is probably determined by a combination of structural features which includes molecular size and polyanionic properties.     

Affective and Anxiety Disorders and Alcohol and Drug Dependence:

Depression and anxiety frequently coexist in patients with substance use disorders. This clinically-oriented article examiens the relationship between these conditions and emphasizes data showing that substances of abuse can cause signs and symptoms of both depression and anxiety. These substance-related syndromes appear to have a different course and prognosis than uncomplicated, independent anxiety and major depressive disorders, and clinicians should consider the role of alcohol and other drugs in all patients presenting with these complaints. The authors will also outline an approach for diagnosing and managing patients with the combination of a substance use and depressive or anxiety disorder.     

Alcohol and Substance Use and Abuse in Women and Children

No abstract available for this article.     

Synthesis and anti-nociceptive and anti-inflammatory effects of gaultherin and its analogs

The synthesis of gaultherin (1) and its analogs was carried out to provide 11 glycosides under phase-transfer catalytic conditions. The activities of all synthesized compounds were evaluated by nitric oxide production inhibitory assay in vitro. Methyl 2-O-(4-O-β-d-galactopyranosyl)-β-d-glucopyranosylbenzoate (5f) showed significantly anti-nociceptive and anti-inflammatory effects by the evaluation in vivo. Structure–activity relationships within these compounds were discussed.