黑曲霉VVTP84生产果糖转移酶

从产果糖转移酶的 11株菌株中筛选出一株黑曲霉VVTP84菌 .该菌株在含蔗糖的培养基中 ,最佳摇瓶发酵时间为 30h ,pH值为 7.0 ;当蔗糖质量浓度在 2 5 0g/L以内时 ,产酶与蔗糖质量浓度呈正相关 ;MgSO4 ·7H2 O和KH2 PO4 的添加量分别以控制在 1.5 g/L和 1.0 g/L为宜     

低聚果糖合成酶──果糖转移酶的部分酶学性质研究

研究从土壤中筛选得到的黑曲霉ＡＳ００２３菌株所产的β－果糖转移酶的一些酶学性质。该酶的最适ｐＨ为５．０，最适温度为５０℃，有较好的热稳定性和较宽的ｐＨ（３．５～１０）适宜范围；并研究了１２种化学物质对酶活的影响和底物的特异性。结果显示，钴离子对该酶有一定的激活作用；底物分子越大其反应速度越慢。该酶的米氏常数Ｋ＿ｍ＝４７ｍｍｏｌ，葡萄糖是酶反应的竞争性抑制剂，其Ｋ＿ｉ＝３３０ｍｍｏｌ．当５０％（Ｗ／ｖ）蔗糖与酶在ｐＨ５．０和５０℃作用１６ｈ时，得到５２％（产物／总糖）低聚果糖。     

离子交换树脂固定果糖转移酶

超声波破碎黑曲霉细胞提取游离果糖转移酶,然后选择D201大孔阴离子交换树脂为载体,通过先吸附后交联的方法固定果糖转移酶.优化的固定化条件:加酶量为每克湿树脂400U,吸附pH值为5.0～5.5,吸附温度为30℃,吸附时间为8h,交联剂戊二醛(终)质量浓度为0.01～0.05g/dL,交联时间为8h,交联温度为1～4℃.固定化酶活最高回收率为30.2%.     

固定化黑曲霉增殖细胞生产低聚果糖的研究

黑曲霉孢子经海藻酸钙包埋３３ｈ后得到的固定化增殖细胞其酶活性达到最高，机械强度仍保持较高水平（为起始时８０％），最适ｐＨ为５．０，与游离酶相同，最适温度为５５℃，比游离酶高５℃；有害离子对其影响较小，其Ｋｍ（以蔗糖为底物）为８２ｍｍｏｌ．将固定化增殖细胞装入填充式反应柱，产品中低聚果糖含量在５０％～５５％，操作一个月活性保持不变。     

发酵法生产高纯度低聚果糖

将筛选得到的酵母添加于固形物质量分数为 2 5 %的普通级低聚果糖 (FOS)溶液中 ,以消除产品中的副产物葡萄糖 ,提高FOS的含量 .研究了固形物质量分数、起始 pH值、酵母添加量对消除葡萄糖的影响 ,得到了不含葡萄糖且FOS质量分数达 82 .85 %的产品 .后者再经果糖转移酶作用 ,于 5 0℃、pH 5 .5下反应 10h ,FOS质量分数可提高至 85 .2 3% .     

利用酵母提高低聚果糖纯度

将黑曲霉AS0023生产的果糖转移酶作用于底物蔗糖,可制备含量为55%的低聚果糖,但该产品中亦含有30%的副产物葡萄糖.利用酵母消化低聚果糖产品中的葡萄糖,可生产高纯度低聚果糖.将筛选得到具有较弱转化酶活性的酵母SK2.003,经培养后添加于总糖浓度为20%的低聚果糖中,经30℃、250r/min反应24h,制得纯度为80.24%的低聚果糖.     

一株曲霉果糖转移酶的发酵条件及转果糖基活性

对一株曲霉果糖转移酶菌株的产酶培养条件进行了研究。确定了最佳培养基组成：初始蔗糖质量浓度15～18g／dL，氮源为酵母膏，K2HPO4对果糖转移酶的产生具有明显的促进作用，添加0．2g／dLCMC能够使果糖转移酶活力提高到原来的1．3倍，在pH5．5，30℃条件下，果糖转移酶最高酶活力为30．42U／mL。HPLC分析结果表明，转糖基产物为总质量的55．8％。     

黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的酶学特性

纯化的黑曲霉Aspergillus niger WM20-11所产的酸性β-甘露聚糖酶经Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE分别测得相对分子质量为39 000和40 000;IEF-PAGE测得酶的等电点为4.0;最适作用pH值和温度分别为3.5和70℃;糖质量分数19.6%;Mg2 、Ca2 、Li 、Na 、K 对酶有激活作用,Pb2 、Co2 、Fe3 、Mn2 、Hg2 对酶有抑制作用;酶对角豆胶的Km和Vmax分别为66.7 g/L和333μmol/(min.mg);酶蛋白的氨基酸组成中Asp和Glu含量最高;HPLC分析角豆胶酶水解液的主要产物是低聚糖。     

含有低聚果糖洗护发产品的去屑和控油临床评价

目的:观察受试者使用含有低聚果糖洗护发产品后的去屑和控油效果。方法:专业人员使用sebumeter SM815检测受试者头皮不同区域的皮脂,使用数码智能头发分析系统和相机EOS60d拍摄受试者头皮皮脂和头屑状况,受试者本人评价头皮皮脂、头屑和瘙痒程度。结果:使用该洗护发产品8天和16天后,头皮不同区域的皮脂分泌明显降低,头屑显著减少,头皮瘙痒明显缓解(P0.05,P0.01)。结论:含有低聚果糖的洗护发产品具有明显的去屑和控油效果。     

Aspergillus ficuum菊粉酶的分离纯化及其酶解菊粉制备低聚果糖

采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内切菊粉酶。进一步对所得到的内切菊粉酶组分酶解菊粉制备低聚果糖进行了研究，研究了底物浓度、加酶量、反应温度和反应pH对低聚果糖制备的影响，确定其最适反应条件为：底物浓度50g／L、加酶量10U／g底物，反应温度45℃，反应PH6．0。在此条件下反应72h，菊粉酶解率达74％，低聚果糖得率可达50％以上，酶解产物以DP2～DP4为主。     

黑曲霉产木聚糖酶的特性

研究了木聚糖酶产生菌黑曲霉(A.niger)238的产酶特性和麸曲的浸提条件,并对其浸提酶液进行浓缩.结果表明,菌株黑曲霉(A.niger)238产木聚糖酶受诱导物的影响,发酵时间在68～72h期间达到产酶高峰,酶活力为286U/mL.最佳氮源为(NH4)2SO4,装料量为每瓶10g,接种量为每瓶0.3mL.其发酵麸曲用固液比为1∶5的2g/dLCaCl2溶液,30℃浸提1.5h;浸提液采用25℃,40kPa,冷却水温度18℃条件超滤浓缩可获得90%以上回收率.     

黑曲霉原生质体的制备、再生及转化条件

为了建立原生质体介导的黑曲霉转化系统，研究了菌龄、酶系统、渗透压稳定剂、酶解时间对葡萄糖淀粉酶生产菌株黑曲霉CICIMF0410原生质体形成与再生的影响。结果表明，培养4d的幼嫩菌丝体最适于制备原生质体；综合考虑原生质体形成与再生的情况，作者选用1mol／L山梨醇为最适渗透压稳定剂，1g／dL蜗牛酶-1g／dL纤维素酶-0．1g／dL溶壁酶为最适裂解酶组合，30℃酶解2．5～3h，最适合的原生质体的再生培养基为含0．6mol／LMgSO4的TZ培养基。在PEG和CaCl2存在条件下，以潮霉素B为选择性标记，质粒pBC-Hygro转化原生质体，每微克DNA可获得4～5个转化予。     

黑曲霉496-1菌株植酸酶的分离纯化及酶学性质

黑曲霉(A.niger)496 1菌株所产胞外植酸酶,经透析浓缩、DEAE cellulose离子交换层析及SephadexG 75,Sephacryl100凝胶过滤,获得了2个植酸酶,其相对分子质量分别为64200及41100.该2个植酸酶的最适pH分别为6.0和3.0,最适温度分别为55℃和40℃.初步确定一个是中性植酸酶,另一个为酸性植酸酶.     

同步糖化发酵菊芋生产酒精中黑曲霉菌株的选育

使用以菊粉为惟一碳源的培养基从自然界中分离出6株产菊粉酶较强的菌种，其中黑曲霉SL-08还可以最大程度地提高塞尔雏亚酵母Z—06的发酵活力和耐酒精能力，通过紫外和亚硝基胍诱变，得到菌株SL-09，酶活提高近两倍。以菊芋粉为底物，利用黑曲霉SL-09和塞尔雏亚酵母Z-06采用同步糖化与发酵法，30℃发酵60h，使发酵醪酒精体积分数达到19．0％，转化率为理论转化率的86％。     

酵母蔗糖酶的提取方法

采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶,经质量分数50%的乙醇分级沉淀、Mono Q阴离子交换柱层析纯化后,制得高纯度的酵母蔗糖酶。比较了上述3种提取方法并对该酶的部分性质进行了研究。纯化的酶经等电聚焦测定,等电点为5.6,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为60kD。以蔗糖为底物测得酵母蔗糖酶的表观米氏常数Km为0.013mol/L。结果显示3种提取方法各有优劣,冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。其中SDS抽提法的效率最高,加之其操作简便,更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。