肝癌缺失基因-1与肝癌关系研究

肝癌缺失基因（DLC-1）是一种肿瘤抑制基因，位于人类染色体8p21．3-22，在人类多种肿瘤中呈低表达或缺失，因其与肝癌发生，转移乃至复发关系密切，使其在早期发现肝癌，早期预测肝癌的转移复发及预后方面扮演重要角色。     

微小RNA-518b在乳腺浸润性导管癌中的表达及其功能

目的 观察miR-518b在乳腺癌中的表达,以及对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、细胞周期、凋亡和侵袭能力的影响.方法 运用定量逆转录聚合酶链反应(PCR)检测乳腺癌及正常组织中miR-518b的表达量,结合临床病理资料,分析其异常表达与各病理因素的相关性.并运用噻唑蓝(MTT)比色法了解其增殖,流式细胞仪分析细胞的周期、凋亡,Transwell 实验观察其对细胞侵袭能力的影响.结果 乳腺癌组织中miR-518b表达水平为2.751 585±5.856 351,正常组织中为7.334841±9.843 424,癌组织中miR-518b表达明显低于正常组织(P＜0.01).miR-518b在乳腺癌中的表达异常与淋巴结转移相关(P＜0.01),与病理分期、肿瘤大小、原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER-2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、p53无明显相关性.在48h浓度为150 nmol/L时,miR-518b对乳腺癌细胞的抑制作用最明显,抑制率为59.9％.与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(75.52±1.78)％,S期无明显减少(9.52±0.91)％,早期凋亡细胞比例未见明显升高(2.60±0.06)％(P＞0.05).Transwell实验结果显示随着miR-518 bmimics浓度的增加,穿出小室膜肿瘤细胞大致呈递减趋势,并与对照组差异明显(P＜0.01).结论 miR-518b在乳腺癌患者中异常表达,癌组织中的表达明显低于正常组织,miR-518b对乳腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有明显抑制作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着抑癌基因的角色.     

微RNA-21在肝细胞癌中的表达及其靶基因研究

目的 探讨微RNA(miRNA)-21在肝细胞癌中的表达特征及其功能,筛选并鉴定miRNA-21可能调控的靶基因.方法 用PAGE/Northern blot方法分析miRNA-21在10例肝细胞癌患者组织标本中的表达特征,并在3种肝癌细胞株中加以验证.用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法克隆靶基因的调控区序列,利用荧光素酶双报告基因系统筛选,并通过Western blot、流式细胞仪在蛋白质水平进行分析验证.用体外细胞侵袭实验分析miRNA-21与肝癌细胞侵袭能力的关系.结果 miRNA-21在10例肝细胞癌患者中均表达上调,与癌旁组织比较,表达量增加10倍以上.在3种肝癌细胞株中也得到相似的结果.筛选并确认了RECK为miRNA-21的调控靶基因之一.抑制miRNA-21的表达可明显降低肝癌细胞的侵袭.结论 miRNA-21在肝细胞癌中表达失控,通过抑制RECK表达促进肿瘤细胞侵袭.     

肝癌缺失基因1与原发性肝癌的研究进展

肝癌缺失基因-1（DLC-1）是从原发性肝癌组织中分离出来的一种肿瘤抑制基因。它在人类多种恶性肿瘤中表达缺失或下调,是近年来研究比较热门的肿瘤抑制基因之一。本文将对DLC-1基因的结构及生物学功能作一介绍,结合目前关于DLC-1在肝癌中的最新研究成果,探讨DLC-1基因在肝癌发生发展中的作用机制,并对DLC-1在肝癌中表达缺失的遗传学和表观遗传学机制进行了深入讨论。     

微小RNA-10b在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织和癌旁组织中微小RNA(miR)-10b的表达差异及其临床意义.方法 采用SYBR Green Ⅰ荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测78例胃癌患者手术切除癌组织及配对癌旁组织标本中miR-10b的表达水平.结果 miR-10b在胃癌组织中的相对表达水平(6.758±2.301)显著高于其在配对癌旁组织中的表达(8.516±1.870),差异有统计学意义(P＜0.01).胃癌组织中miR-10b的表达水平与临床TNM分期(P＜0.01)、肿瘤大小(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.01)以及肿瘤浸润深度(P＜0.01)密切相关,而与年龄、性别、分化程度无明显相关(P＞0.05).结论 胃癌组织中miR-10b的高表达可能与胃癌的发生、发展、侵袭、转移相关.     

微小RNA-130b在嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤中的作用及机制

目的探讨微小RNA-130b(miR-130b)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的足细胞损伤中的作用及机制。方法小鼠肾脏足细胞系MPC5予以PAN 25、50、100μg/mL干预,实时定量PCR检测MPC5细胞系内miR-130b及其宿主基因2610318N02Rik(RIK)表达;转染miR-130b抑制剂(miR-130b inhibitor)或对照(NC inhibitor)后予以PAN 100μg/mL刺激,24 h后采用Western blot检测足细胞裂孔膜蛋白Synaptopodin和Nephrin蛋白表达变化;采用鬼笔环肽染色检测足细胞骨架改变;采用流式细胞技术检测细胞凋亡变化;采用Targetscan 7.2预测miR-130b潜在靶基因,Western blot检测miR-130b模拟物(mimic)对于潜在靶基因PGC1α蛋白表达的影响;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-130b mimic对于荧光活性的影响。结果 PAN可以抑制足细胞内的miR-130b及宿主基因RIK表达;与转染NC inhibitor组比较,miR-130b inhibitor提高足细胞裂孔膜蛋白synaptopodin和nephrin表达;鬼笔环肽染色显示抑制miR-130b可以部分缓解PAN诱导的足细胞骨架紊乱及重组;流式细胞技术检测结果示干扰足细胞miR-130b表达可以减少PAN诱导的细胞凋亡;Targetcan 7.2分析显示PGC1α是miR-130b的潜在靶基因,Western blot结果显示,转染miR-130b mimic可以降低足细胞内PGC1α表达;双荧光素酶报告基因系统结果示,与NC mimic及突变的PGC1α3'-UTR共转染组比较,miR-130b mimic与野生型PGC1α3'-UTR共转染组荧光素酶活性降低。结论 miR-130b通过靶向抑制PGC1α表达参与PAN诱导的足细胞损伤。     

微小RNA-126在食管鳞癌中的表达及作用机制

目的 观察微小RNA-126(miR-126)在食管鳞癌组织中的表达及其可能调控的靶基因.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法,检测75例患者食管鳞癌组织和其匹配的癌旁组织中miR-126的表达水平,应用软件预测miR-126的靶基因,免疫组织化学法分析靶蛋白在癌组织中的表达,在食管鳞癌细胞中提高或降低miR-126表达水平,验证其对靶基因的调控作用.结果 对75组配对标本分析,癌组织中miR-126的相对表达量为0.28±0.32,癌旁组织为0.45±0.47,差异有统计学意义(P＜0.01);miR-126低表达与食管鳞癌分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度和临床分期相关(P＜0.05);胰岛素受体底物-1(IRS-1)在食管鳞癌组织中过表达,与肿瘤分化程度有关(P＜0.01);上调食管鳞癌细胞Eca9706、Eca109、TE-1中miR-126的表达会导致IRS-1蛋白的表达量(0.785±0.337、1.873±0.684、1.938±1.081)较空白组(1.188±0.336、2.756±1.097、3.028±0.789)下降(P＜0.01),下调食管鳞癌细胞中miR-126的表达会导致IRS-1蛋白的表达量(2.543±0.610、5.182±1.897、5.940±0.997)相对升高(P＜0.01).结论 食管鳞癌组织中miR-126表达水平下降,IRS-1蛋白的表达受miR-126的负调控,IRS-1可能是miR-126在食管鳞癌中发挥抑癌基因功能的靶基因之一.     

微小RNA-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义

【摘要】〓目的〓探讨微小RNA(miR)-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法〓实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌及配对癌旁组织中miR-150表达。原位杂交技术(ISH)进一步验证肝癌和配对癌旁组织miR-150表达差异。将肝癌组织中miR-150表达与临床病理特征进行关联分析。Kaplan-Meier法检测miR-150阴性组和阳性组生存曲线。Cox单因素回归模型分析miR-150表达与患者术后总生存的相关性。结果〓qRT-PCR结果显示:与癌旁组织相比,12例中有8例肝癌组织低表达miR-150,肝癌组织中miR-150表达明显降低(P=0.034)。ISH结果与qRT-PCR结果相一致,即肝癌组织大部分为阴性或弱阳性表达,62%癌旁组织ISH染色强度高于配对的肝癌组织(P<0.001)。关联分析提示miR-150表达与AFP、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、脉管癌栓存在明显负相关(P<0.05)。miR-150阳性组患者术后总生存明显高于miR-150阴性组(P=0.004,Kaplan-Meier法)。Cox单因素回归分析提示肝癌组织低表达miR-150是患者不良预后指标(P=0.005)。结论〓肝癌组织低表达miR-150与肿瘤侵袭表型相关,提示不良预后。     

肝癌边缘群细胞抑癌基因Tg737杂合性缺失的检测及其意义

目的 检测肝癌边缘群(SP)细胞中Tg737基因的杂合性缺失(LOH),探讨其与肝癌临床特征的关系及意义.方法 胶原酶结合机械消化法分别制备95例肝癌细胞及癌旁正常肝细胞悬液,Hoeehst33342染色并结合流式细胞仪分别分选肝癌及癌旁的边缘群细胞,分别提取DNA后以同一患者的外周血DNA为对照,采用PCR-SSCP-银染方法 检测肝癌和癌旁中SP细胞Tg737基因5个微卫星位点的LOH,然后进一步分析微卫星LOH情况与原发性肝癌临床特征的关系及意义.结果 95例肝癌边缘群细胞中,Tg737基因5个位点LOH发生的平均频率是71.24%,频率最高点为G64212(78.75%),其中24例(25.30%)标本中检出3个以上微卫星标记位点存在LOH.其中SHGC-57879和G64212的LOH与肝癌的转移和TNM分期密切相关(P<0.01).结论 肝癌边缘群细胞中Tg737基因的高频率LOH与原发性肝癌的临床分期和远处转移相关,提示肝癌干细胞中的基因组不稳定性是影响肝癌病理进程的重要因素.     

微小RNA-125b靶向调控乳腺癌易感基因相关蛋白1调节胰腺癌细胞增殖及侵袭

目的探究微小RNA(miR)-125b可否通过调节乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)调节胰腺癌细胞的发生与发展进程, 探讨其在胰腺癌中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测2018年1月至2020年12月21例在我科接受手术患者的胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞系中miR-125b和其靶蛋白的表达水平。通过细胞克隆实验、流式细胞凋亡检测技术、划痕实验以及细胞侵袭实验检测转染前后胰腺癌细胞增殖、凋亡、细胞迁移和侵袭能力, 组间比较采用t检验。结果 miR-125b在胰腺癌组织中的表达显著上调(2.48±0.46比0.68±0.15, t=13.991, P<0.01)。过表达miR-125b组的BAP1的表达明显低于对照组(465.57±11.28比933.80±15.46, t=5.894, P<0.01)。过表达miR-125b组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组(214.56±8.45比78.43±5.15, t=3.482, P<0.01)。过表达BAP1组Panc-1和BxPC-3A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显...     

MACC1和C-MET蛋白在肝细胞癌组织中的表达研究

目的 探讨MACC1和C-MET蛋白在肝细胞癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化和Western blot检测51例肝细胞癌组织、相应癌旁组织和13例正常肝脏组织中MACC1和C-MET蛋白的表达情况,同时对患者进行随访,并分析患者生存率与临床病理资料间的关系.结果 MACC1和C-MET蛋白在肝细胞癌组织中总的阳性表达率分别为80.4％和76.5％,相对表达量分别为0.645±0.047和0.504±0.023,均明显高于相应癌旁组织及正常肝脏组织(分别F=173.308,252.817,均P=0.000),且两者表达呈正相关(r=0.870,P=0.001);MACC1和C-MET蛋白表达阳性患者的3年生存率明显低于阴性患者(分别x2 =3.934,4.439,均P＜0.05),两者的阳性率及表达量均与肝细胞癌的TNM分期、门脉癌栓、病理分型及包膜侵犯显著相关(P＜0.05). 结论 MACC1和C-MET的异常表达与肝细胞癌的恶性进展相关,MACC1有作为进展期肝癌预后的独立分子指标和肝癌治疗新靶点的潜在价值.     

原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义

目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.     

肝移植在肝癌治疗中的地位与评价

以肝移植治疗原发性肝细胞性肝癌(简称肝癌)，应严格地选择适当的病例：单个肿瘤直径不超过5cm，多发性肿瘤直径小于3cm和肿瘤总数不超过3个，肿瘤没有血管和淋巴结侵犯和肝外转移。如果病人患乙型或丙型肝炎，适当地以有效的抗病毒治疗，病人长期存活率可高达79％。这存活率和肝移植治疗良性末期肝硬化十分接近。没有足够证据显示手术前、后辅助性化疗可提高肝移植治疗肝癌的疗效，适量的免疫功能抑制，有助减低肝癌的复发率。如肝癌病人等待肝移植的时间长，可考虑以TACE，射频或微波治疗以减慢肝癌生长速度。肝移植和部分肝切除的长期治疗结果相差不大，在一小部分病人，如肝硬化程度严重，肝移植可比部分肝切除疗效好。肝移植用于治疗纤维板层肝癌和偶然发现肝癌疗效好。由于肝移植对于其它肝肿瘤例如胆管癌，血管肉瘤和转移性肝肿瘤疗效甚差，因此这些肝肿瘤不宜用肝移植作治疗。     

microRNA在肝细胞癌发生发展及诊治中的作用

MicroRNA(miRNA)是一类内源性的,长度为21～23个核苷酸的非编码单链小RNA,广泛分布于真核生物中,它们通过调节基因表达和转录后翻译在细胞增生、凋亡,机体生长、发育等方面发挥着广泛而重要的调控作用.miRNA与肝细胞癌的发生发展存在密切关系,部分miRNA充当癌基因或抑癌基因作用.已发现若干miRNA如miR-30d、miR-221、miR-222及miR-101等的异常表达与肝细胞癌的发生发展有关.本文就近年来miRNA与肝细胞癌的相关研究作一总结.     

RASSF1A基因在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的观察人肝癌组织RASSF1A的表达情况。方法应用半定量反转录聚合酶联反应技术检测62例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中RASSF1A的表达情况。结果69．4％（43/62）的肝癌组织中RASSF1A表达缺失，而癌旁组织中仅30．6％（19／62）该基因表达缺失，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中晚期肝癌中RASSF1A表达处于失活状态，其可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断。     

Heparanase-1和Syndecan-1与肝细胞癌侵袭转移的关系

目的探讨heparanase-1（HPR-1）和syndecan-1在孤立性大肝癌、结节性肝癌和小肝癌中的表达及其临床意义。方法选用30例肝细胞癌（HCC）癌组织和癌旁组织标本，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测标本中的HPR1和Syndecan-1的表达，并结合临床病理资料进行分析。结果HPR-1 mRNA在HCC中的表达较癌旁肝组织高，差异有显著性意义（P=0．037）；Syndecawl在HCC中的表达较癌旁组织低，差异有显著性意义（P=0．007）。本研究显示HPR-1的高表达和Syndecanl的低表达同有无包膜、静脉浸润密切相关，而同性别、细胞分化程度、肝硬化程度无关。将30例HCC分为孤立性大肝癌组，结节性肝癌组和小肝癌组分析发现：孤立性大肝癌组同结节性肝癌组HPR-1mRNA的表达有着显著性差异（P〈0．05）。结论HPR1基因和Syndecan-1基因与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关；孤立性大肝癌较结节性肝癌具有较好的生物学行为。     

内皮细胞分化基因-1和丝切蛋白-1在原发性肝细胞癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨内皮细胞分化基因-1(EDG-1)、丝切蛋白-1(CFL-1)在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其与临床病理特征和两者之间的相互关系.方法 采用免疫组织化学方法,检测EDG-1、CFL-1在57例原发性肝细胞癌组织(实验组)及15例癌旁组织(对照组)中的表达,并与临床病理资料进行比较分析.随访所有病例术后的生存时间,并进行生存分析.结果 EDG-1 、CFL-1阳性表达分别为54.4％ (31/57)和66.7％ (37/57),均明显高于正常肝组织的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),且呈正相关(P＜0.05).EDG-1、CFL-1在肿瘤转移组及低分化组中的表达阳性率明显高于无肿瘤转移组及高+中分化组,差异有统计学意义(P＜0.05).COX多因素回归分析的结果提示,肿瘤转移、癌栓、病理分型、EDG-1及CFL-1的表达为影响预后的独立因素.结论 EDG-1 、CFL-1可能作为判断HCC恶性程度的预测指标,其表达水平有助于评价肝细胞癌患者的预后.     

原发性肝细胞癌中错配修复基因hMLH1的表达及其意义

目的　探讨错配修复基因hMLH1在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其意义。方法　采用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测48例肝癌组织、2 3例癌旁组织和2 5例正常肝组织中hMLH1蛋白和mRNA的表达情况,同时采用原位末端标记法测定癌组织的细胞凋亡指数。结果　48例肝癌组织、2 3例癌旁组织和2 5例正常肝组织的hMLH1mRNA表达分别为62 .5 % (3 0 /4 8)、10 0 .0 % (2 3 /2 3 )和10 0 .0 % (2 5 /2 5 ) ,蛋白表达分别为60 .41% (2 9/4 8)、91.3 0 % (2 1/2 3 )和10 0 .0 0 % (2 5 /2 5 )。hMLH 1表达与肝癌组织的临床分期有明显相关,hMLH1表达阳性的肝癌组织的细胞凋亡指数升高为(3 .5 62±0 .2 3 3 ) %。结论　hMLH1在肝癌组织中低表达,提示错配修复基因hMLH1功能缺陷在肝癌的发生、发展过程中起重要作用     

SIPA1基因在肝癌中的表达及其与肝癌预后的关系

目的研究SIPAI（signal-induced proliferation-associated gene 1）基因在肝细胞癌（HCC）中的表达情况及其临床意义。方法采用实时定量PCR检测30例新鲜HCC标本中SIPA1 mRNA相对含量。用免疫组织化学S-P法检测86例石蜡HCC标本和8例正常肝组织中SIPA1的表达情况,研究其与HCC临床病理学资料及预后的关系。结果与癌旁组织比较,在癌组织中SIPA1 mRNA表达下调（t=2.216,P=0.045）。86例HCC中,SIPA1在癌组织的阳性表达率和癌旁组织中阳性表达率分别为43.0%（37/86）和87.2%（75/86）（χ^2=36.96,P〈0.01）。有静脉侵袭的肝癌标本中癌旁组织SIPA1呈低表达（U=647.50,P=0.019）。SIPA1蛋白在癌旁组织中表达存在个体差异,低表达组术后复发率较高（P=0.000）,生存期较短（P=0.006）。结论SIPA1在HCC中可能发挥肿瘤抑制基因的作用,且对抑制HCC的复发转移有重要作用。