c-Kit＋Lin -细胞体外扩增及体内分化的实验研究

目的：研究移植刚分选及扩增后雄性小鼠的骨髓c-Kit＋Lin-细胞到酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内后,模型小鼠的肝脏形态改变、肝功能变化和移植细胞的分布、分化及归巢情况。方法采用酒精灌胃法建立酒精性肝纤维化雌性小鼠模型,造模成功后随机选取8只模型小鼠（模型组）与正常小鼠8只（对照组）比较两组肝功能变化。剩余模型小鼠再随机选取32只,分为4组处理,并再随机选取8只正常小鼠（第1组）与其对照。模型小鼠的4组分别为：移植前取血处死组（第2组）,移植新鲜分选的c-Kit＋Lin-细胞组（第3组）,移植扩增后的c-Kit＋Lin-细胞组（第4组）,仅予以注射Buffer组（第5组）。采用免疫磁珠法分选雄性小鼠骨髓c-Kit＋Lin-细胞;利用SCF＋HGF＋FL＋LIF ＋TPO＋IL-3因子组合对其进行体外扩增;将刚分选及扩增后c-Kit＋Lin-细胞移植入酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内,检测两组肝功能改变、肝脏纤维化改善、含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA（Sry）的移植细胞在受体肝内定居分化情况。结果（1）两移植组在移植30天后,较移植前肝脏纤维化改善明显;（2）两移植组在移植30天后AST、ALT、ALB与移植前比较差异有显著性意义（P＜0．05）;（3）两移植组均可见含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA（ Sry）的移植细胞,并同时表达ALB mRNA,计数细胞比例,比较差异无显著性意义（P＞0．05）。结论移植c-Kit＋Lin-细胞后能在受体肝内定居并转化成有功能新生肝细胞;移植c-Kit＋Lin-细胞后能明显改善肝损伤小鼠的肝功能及肝脏纤维化;扩增对c-Kit＋Lin-细胞的归巢、在体内分化没有明显影响。     

18F-FDG对于乳腺癌模型小鼠治疗作用的研究

[目的] 探讨18氟-氟代脱氧葡萄糖（ 18F-FDG）诱导乳腺癌细胞的凋亡作用及分子机制。[方法] 使用0～7.4×10 6  Bq/mL 18F-FDG作用于体外培养乳腺癌细胞MCF-7,应用γ高能计数仪测定细胞摄取射线量;接种MCF-7细胞至24只雌性裸鼠腋下构建小鼠乳腺癌模型,成瘤后分别由尾静脉注射生理盐水、3.7 MBq、11.1 MBq和37 MBq 18F-FDG,观察肿瘤生长情况,Micro-animal PET进行瘤体显像;Western Blot方法检测肿瘤瘤体凋亡相关蛋白BCL-2及cleaved CASPASE-3表达情况。[结果] 体外MCF-7细胞摄取实验表明,在一定剂量范围内,随着射线剂量的增加,对数生长期的MCF-7细胞摄取射线剂量基本呈线性增长;治疗后,各治疗组小鼠肿瘤体积增长速度明显放缓,而高剂量组（11.1 MBq与37 MBq）较低剂量组（3.7 MBq）显示出更低的增长速度。Micro-animal PET显示荷瘤裸鼠的肿瘤部位可见 18F-FDG浓聚,治疗组浓聚程度低于对照组,且随着治疗剂量增加,浓聚程度亦随之降低。Western Blot结果显示注射 18F-FDG后,荷瘤裸鼠瘤体cleaved CASPASE-3相对表达量各治疗组（37 MBq、11.1 MBq、3.7 MBq 18F-FDG）分别为4.935±1.521、5.560±1.459及2.138±0.844,均高于对照组的0.019±0.049（P<0.05或P<0.01）,尽管在11.1 MBq剂量组与37 MBq剂量组间表达差异无显著性意义（P>0.05）,但两组均高于3.7 MBq剂量组（P<0.05）;BCL-2蛋白相对表达量分别为1.489±0.691、1.929±0.949、3.421±1.554,均低于对照组的5.143±1.813（P<0.05或P<0.01）,尽管11.1 MBq剂量组与37 MBq剂量组间差异无显著性意义（P>0.05）,但两组均低于3.7 MBq剂量组（P<0.05）。[结论] 18F-FDG在适量情况下,能下调肿瘤BCL-2蛋白的表达和激活CASPASE-3表达诱导乳腺癌细胞凋亡。     

间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗小鼠肝损伤的研究

目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）和单个核细胞（MNCs）在四氯化碳（CCl4）诱导性小鼠肝损伤治疗中的作用。方法：无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Balb/c小鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组。2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻（T0）、输入后第1（T1）、7（T2）、14（T3）、28（T4）、42 d（T5）断尾取血检测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。6周后处死小鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测大鼠Sry基因片段植入小鼠肝脏的情况。结果：MSCs CD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1~5时点ALT和AST浓度差异有统计学意义（P＜0.05）;与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1~5时点均降低; MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在。结论：体外分离培养及扩增的大鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤小鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤。     

Sry监测体外扩增造血细胞植入效果的实验研究

目的：探讨Y染色体性别决定基因(Sry)作为评价和追踪造血细胞移植后植入状态检测指标的可行性。方法：根据Sry DNA序列设计引物及制备探针，然后进行PCR检测、斑点杂交和原位杂交．动态追踪经不同条件下体外扩增的纯系雄性小鼠BMMNC回输至雌性小鼠后的植入状态。结果：PCR结果显示在各移植组小鼠的骨髓有核细胞、脾细胞及外周血白细胞中均有Y染色体特异性序列的存在；斑点杂交结果显示在各回输组间并无明显差别，但用脾脏组织作原位杂交的结果则发现基质细胞支持扩增回输组的阳性颗粒数目与输注新鲜细胞组相似，但略少于雄性小鼠；而输注细胞因子扩增细胞实验组小鼠则明显少于雄性动物的阳性对照标本和基质细胞支持扩增回输组。结论：(1)经重复检测表明上述方法的重复性好，结果可信．可作为检测性别不同时造血干细胞移植效果的一种检测手段；(2)证实基质细胞支持下的体外扩增的造血细胞具有较好的植入能力。     

肝细胞与骨髓间质干细胞共移植提高移植效率

目的:探讨肝细胞与骨髓间质干细胞(MSC)共移植提高肝细胞移植效率的可行性。方法:分为共移植组、肝细胞移植组和移植对照组,分别将雄性小鼠肝细胞与雌性小鼠MSC(1∶1)、雄性小鼠肝细胞与雌性小鼠肝细胞(1∶1)、雄性小鼠肝细胞与雌性裸鼠肝细胞(1∶1)植入雌性裸鼠脾脏,14d后,应用实时荧光定量PCR技术检测受体肝脏中Y染色体性别决定区(sex-determining region Y,Sry)基因;并由标准曲线计算出移植细胞在受体肝脏中的比例。结果:共移植组Sry的含量明显比其他两组为高[(32.04±0.36)vs(36.97±0.66),P=0.030;(32.04±0.36)vs(35.50±0.62),P=0.045],肝细胞移植组与移植对照组无明显差异[(36.97±0.66)vs(35.50±0.62),P=0.837];共移植组整合的移植肝细胞仅占受体肝脏的(1.09±0.01)%。结论:肝细胞与骨髓间质干细胞共移植较单一移植可以提高肝细胞的移植效率。     

PM2.5对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及机制

【摘要】目的 探讨细颗粒物PM2.5对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化（AS）斑块的影响及相关分子机制。方法 将32只8周龄的SPF级雄性ApoE-/-小鼠随机分为两组,分别给予高脂饲料喂养8周,同时对照组气管滴注生理盐水,PM2.5组气管滴注PM25的生理盐水混悬液（30 mg〖DK〗·kg-1·d-1）。8周后采用电感耦合等离子体质谱法测定两组小鼠全血中的PM2.5浓度。免疫组化评估主动脉根部斑块面积、胶原、巨噬细胞和平滑肌细胞表达。实〖JP2〗时荧光定量PCR法检测降主动脉中白介素 6（IL 6）、白介素 12（IL 12）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS)、精氨酸酶 1（Arg 1）、〖JP〗CD206、细胞间黏附分子 1（ICAM 1）、单核细胞趋化蛋白 1（MCP 1）以及脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp PLA2）的表达。结果 与对照组比较,PM2.5组重金属成分含量显著升高（P＜005）,动脉粥样硬化斑块面积增大（P＜005）,斑块中巨噬细胞数量增加（P＜005）,胶原含量降低（P＜005）,平滑肌数量无明显差异（P＞005）。与对照组比较,PM25组小鼠主动脉粥样硬化斑块内IL 6、iNOS、IL 12、ICAM 1、MCP 1、Lp PLA2的表达显著上调（均P＜005）,Arg 1,CD206的表达显著下调（均P＜005）。结论 PM2.5暴露促进了ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的发生、发展,其原因可能与动脉粥样斑块内相关炎症因子表达变化有关。     

小鼠造血干细胞衰老体内模型构建及相关生物学研究

目的:构建小鼠造血干细胞(Homatopoietic stem cell,HSCs)衰老体内模型,并探讨其生物学特点,为延缓HSCs衰老的研究提供平台.方法:免疫磁性分选法分离、纯化雄性鼠的Sca-1+HSCs,流式细胞术鉴定分选纯度,免疫荧光检测Sca-1表达.将1×104个雄性供体鼠Sca-1+HSCs经尾静脉移植给9Gy60Coγ射线全身辐射的雌性受体鼠.PCR检测移植后受体鼠造血细胞Y染色体性别决定(Sex-determining region of Y chromosome,Sry)基因,混合造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析HSCs衰老的生物学特点;计数受体鼠脾集落形成单位(CFU-S)、测定脾脏和胸腺指数,检测受体鼠外周血指标(WBC、RBC、PLT、HCT),评价供体鼠Sca-1+HSCs在受体鼠内衰老和造血功能重建情况.结果:免疫磁性分选法得到的Sca-1+HSCs纯度达87.2%以上.雌性受体鼠的造血细胞均能检测出342 bp的Sry基因.供体鼠Sca-1+HSCs连续2次移植后,形成CFU-Mix集落数量和形成集落的细胞数明显减少;HSCs出现G1期阻滞,G0+G1期细胞比例增高,S期比例下降;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率明显增高;脾脏与胸腺指数明显降低;CFU-S形成能力下降;外周血各项指标均有下降.结论:雄性供体Sca-1+HSCs移植能有效重建受体鼠造血功能,连续尾静脉移植2次能初步建立HSCs复制性衰老的体内模型.     

大蒜多糖对慢性酒精中毒小鼠肝损伤的保护作用

目的：通过大蒜多糖对小鼠酒精性肝损伤的干预效果研究,阐明其对慢性酒精中毒小鼠肝脏损伤的保护作用及机理,为研制开发防治酒精性肝病的天然抗氧化药物提供实验依据。方法：70只昆明小鼠随机分为对照组、模型组以及大蒜多糖低、中、高剂量（100、150和200 mg•kg^-1•d^-1）组,每组14只,采取剂量递增法,用56°白酒建立小鼠慢性酒精中毒模型,同时用大蒜多糖进行干预。实验8周后,测定小鼠体质量、肝质量指数、肝脏丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平、检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、Na⁺-K⁺-ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,光镜下观察小鼠肝脏组织形态学改变。结果：与对照组比较,模型组小鼠体质量明显下降（P<0.05）,肝质量指数、血清ALT和AST活性及肝脏MDA水平均明显增高（P<0.05）,Na⁺-K⁺-ATP、GSH-Px和SOD活性及GSH水平明显降低（P<0.05）;肝脏出现明显脂肪空泡、炎细胞浸润等病理学改变。与模型组比较,大蒜多糖各剂量组小鼠肝质量指数、血清ALT和AST活性明显降低（P<0.05）,GSH水平增加(P<0.05),GSH-Px和SOD活性明显增高（P<0.05）;高、中剂量组小鼠体质量和Na⁺-K⁺-ATP活性明显增加（P<0.05）,MDA水平明显降低（P<0.05）,肝组织病变减轻。结论：持续过量饮酒可导致小鼠酒精中毒并对肝脏产生严重损伤;大蒜多糖对小鼠酒精性肝损伤有一定的保护作用,机理与其增强机体抗氧化能力有关。     

肝纤维化小鼠骨髓源性肝干细胞动员及确定

目的 建立小鼠四氯化碳性及酒精性肝纤维化模型并初步探讨干细胞动员情况,确定骨髓源性肝干细胞的表面标记.方法 四氯化碳皮下注射和酒精灌胃法使小鼠形成肝纤维化,分别取其骨髓干细胞,采用流式细胞仪检测肝纤雏化模型中不同干细胞标记的细胞群体包括c-kit Lin-,Thy1.2 Lin-,CD34 Lin-,Sca 1 Lin-的数量变化,寻找可能的肝干细胞动员情况.结果 与对照组相比,两组纤维化模型小鼠骨髓内c-kit Lin-细胞显著增高,其他干细胞类型细胞数量变化小.结论 c-kit Lin-细胞的数量在肝纤维化模型小鼠中存在明显动员情况,可能参与肝脏的修复,并成为肝干细胞的标记物.     

丹皮酚对心肌纤维化模型大鼠的干预效果及作用机制研究

【摘要】目的 探讨丹皮酚对心肌纤维化模型大鼠的干预效果及作用机制。方法 选取60只雄性SPF级SD大鼠，其中50只用于构建心肌纤维化大鼠模型，40只成功建立心肌纤维化模型，随机分为模型组、低剂量丹皮酚组（10mg·kg-1）、中剂量丹皮酚组（15mg·kg-1）、高剂量丹皮酚组（20mg·kg-1）各10只，另选取正常组10只。检测大鼠左心室舒张末期压力（LVEDP）、左心室收缩压（LVSP）、左心指数；观察心肌组织病理改变；计算心肌胶原容积分数（CVF）；酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、乳酸脱氢酶(LDH）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌氨酸酐致活酶MB（CK MB）水平；Western blot检测TGF β1/Smad3通路相关蛋白。结果 低、中、高剂量丹皮酚组大鼠左心指数、CVF、MDA、LDH、AST、CK MB低于模型组，LVEDP、LVSP、SOD、CAT水平高于模型组（P＜005）。高剂量丹皮酚组大鼠左心指数、CVF、MDA、LDH、AST、CK MB低于低、中剂量丹皮酚组，LVEDP、LVSP、SOD、CAT水平高于低、中剂量丹皮酚组（P＜005）。低、中、高剂量丹皮酚组大鼠TGF β1、Smad2、Smad3蛋白水平低于模型组（P＜005）。高剂量丹皮酚组TGF β1、Smad2、Smad3蛋白水平低于低、中剂量组（P＜005）。结论 丹皮酚能够改善大鼠心功能，通过激活TGF β 1/Smad3通路调控氧化应激相关因子水平，从而抑制心肌纤维化发展。     

大豆异黄酮载药纳米颗粒对肝纤维化大鼠的抗过氧化作用

目的　观察大豆异黄酮载药纳米颗粒对肝纤维化大鼠的抗过氧化作用。　方法　　采用四氯化碳灌胃法建立肝纤维化大鼠模型,随机分成对照组、肝纤维化组、空白纳米颗粒组（SPIO组）、大豆异黄酮组（SI组）、载药纳米颗粒组（SI-SPIO组）,每组24只。对照组给予生理盐水尾静脉注射,其他各组除四氯化碳灌胃外,分别给予生理盐水尾静脉注射、SPIO、大豆异黄酮和SI-SPIO载药纳米颗粒尾静脉注射治疗,观察对照组和治疗组之间肝脏生化指标、过氧化损伤指标和肝脏组织学变化。　结果　　8周后对各组大鼠的肝脏生化指标和肝纤维化程度进行评估,SI组和SI-SPIO组明显优于肝纤维化组和SPIO组;过氧化指标检测,与对照组相比,肝纤维化组和SPIO组MDA明显升高（2.45±0.77,2.69±1.01,P<0.05）,GSH-Px和SOD明显降低（300.74±16.25,299.18±15.57和409.77±20.46,431.56±19.25,P<0.05）;与肝纤维化组相比,SI组和SI-SPIO组MDA明显降低（0.85±0.12,0.90±0.02,P<0.05）,GSH-Px和SOD明显升高（340.25±11.85,366.45±14.83和467.27±16.11,485.75±22.54,P<0.05）。SI-SPIO组过氧化指标较SI组改善更为明显（P<0.05）。　结论　　大豆异黄酮具有抗氧化作用,能够抑制大鼠肝纤维化形成,载药纳米有助于药效的发挥。     

大鼠间充质干细胞在小鼠肝损伤中的作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在四氯化碳(CCl4)导致小鼠肝损伤中的作用,为临床进行细胞移植治疗肝脏疾病提供新策略.方法 无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓,分离培养及流式细胞仪检测MSC;采用CCl4制作雌性BALB/c小鼠肝损伤模型,肝损伤小鼠随机分为MSC移植组和肝损伤对照组.MSC移植组在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSC,6周后处死小鼠,检测小鼠肝损伤程度和大鼠MSC植入情况.结果 流式细胞仪结果显示:第3代大鼠MSC CD45-/CD90 细胞为94.54%,CD45-/CD44 细胞为91.25%;肝组织学观察显示:MSC移植组肝损伤修复程度明显好于肝损伤对照组;PCR方法证实只有MSC移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在.结论 体外分离培养及扩增的大鼠MSC移植到CCl4肝损伤小鼠体内,可参与肝损伤修复,减轻CCl4导致的肝损伤.     

小鼠c-Kit+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究

目的 评价小鼠c-Kit^＋Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法 供体为纯系BALB／C雄性小鼠．c-Kit^＋Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB／C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit^＋lin-骨髓细胞。接受c-Kit^＋lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果 移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常．肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论 小鼠c-Kit^＋Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。     

加减沙参麦冬汤辅助治疗肺癌患者对免疫功能及不良反应的影响

目的 探讨加减沙参麦冬汤辅助治疗对肺癌患者免疫功能及不良反应的影响。方法 遴选非小细胞肺癌(NSCLC)患者106例随机分为对照组和观察组各53例,对照组给予GP方案化疗（顺铂注射液+盐酸吉西他滨）,观察组在对照组治疗基础上给予加减沙参麦冬汤辅助治疗,对比两组临床疗效,观察治疗前及治疗8w后的中医症状积分、T细胞亚群水平和不良反应。结果 观察组的临床总有效率和病灶稳定率分别为5283%和8302%,显著高于对照组的32.08%和62.26%(P＜0.05);治疗后,两组中医症状积分中咳嗽、痰血、神疲乏力、心烦不眠、低热盗汗、大便干结的积分显著降低(P＜0.05),观察组变化幅度显著大于对照组(P＜0.05);治疗后,分析T细胞亚群指标发现,观察组的CD3+、CD4+占比及CD4+/CD8+值显著增加(P＜0.05),对照组CD8+占比显著增加(P＜0.05),CD4+/CD8+值有所降低(P＜0.05),组间治疗后对比,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组的骨髓抑制、胃肠道反应及感染发生率分别为15.09%、5.66%及0.00%,显著低于对照组的32.08%、22.64%及9.43%(P＜0.05)。结论 加减沙参麦冬汤辅助GP化疗方案治疗对阴虚内热型NSCLC患者疗效显著,不良反应少,可有效改善患者相关症状,提高免疫系统功能。     

骨髓间质干细胞肝向诱导分化前后肝功能代偿能力的比较

目的探讨不同分化状态骨髓间质干细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠的肝功能重建的影响,并进行综合比较评估。方法以D一氨基半乳糖胺（D—gal）构建的雌性大鼠急性肝衰竭模型后大鼠,随机分为4组：BMSCs移植组,幼稚肝细胞移植组,成熟肝细胞移植组和空白对照组,结合多项血生化指标对不同分化阶段BMSCs的肝功能代偿能力进行综合评估。并以sry基因为分子标志,采用PCR技术检测植入细胞在受体动物体内的存留状态及定位情况。结果各组肝衰模型动物经细胞移植后,所测各项血清生化指标均有显著变化。血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）的水平明显下降,白蛋白（ALB）的水平有所上升。各移植组之间相比,诱导至成熟肝细胞状态的细胞无论对肝功能的改善或是降低动物死亡率,效果均为最优。细胞移植后的第30天,仍能在受体动物肝脏内检查到sry基因信号。结论体外诱导分化至不同阶段的BMSCs均能在一定程度上代偿衰竭肝脏的功能,而诱导分化至成熟状态的细胞对肝功能的代偿能力最强,可作为代偿肝功能的重要细胞源之一.     

复方保肝宁减轻小鼠肝纤维化的机制:抑制肝脏组织中的IDO1进而促进树突状细胞表型成熟

目的 观察中药复方保肝宁对肝纤维化模型小鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法 本研究分为两部分,第1部分：按 0.6 mL/（kg·d）予以腹腔注射25% CCl4（CCl4∶橄榄油=1∶3）的方式诱导野生型小鼠建立肝纤维化病理模型,随机分为对照组、模型组、阳性对照组及保肝宁低、中、高浓度组,10只/组。造模给药8周后处死小鼠,取小鼠血清检测AST、ALT水平。另取肝组织做HE、天狼星红染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色并检测吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）的表达水平。流式细胞仪检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的数量和表型变化。第2部分：按3×1011 v.g/只尾静脉注射IDO1过表达腺相关病毒,取正常野生型小鼠随机分为腺相关病毒阴性对照（AAV9-NC）干预组、IDO1过表达腺相关病毒（AAV9-IDO1）干预组及高浓度保肝宁+IDO1过表达腺相关病毒联合干预组,6只/组。干预4周后,取肝组织做IDO1免疫组化染色并检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的表型变化。结果 与模型组比较,保肝宁高浓度组能有效降低肝纤维化小鼠血清中AST、ALT水平（P< 0.01）;改善肝组织病理损伤,减少肝纤维组织的形成及α-SMA和IDO1的沉淀（P<0.05）。保肝宁高浓度治疗组肝纤维化小鼠肝脏中CD11C+DCs、CD11C+CD80+DCs、CD11C+CD86+DCs、CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs细胞和CD3+T、CD3+CD4+T细胞比例与模型组相比均呈不同程度的升高（P<0.05）。高浓度保肝宁干预后可显著降低IDO1过表达腺相关病毒干预小鼠肝脏中IDO1的表达水平及上调CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs和CD3+CD4+T细胞比例（P<0.05）。结论 保肝宁对CCl4所致小鼠肝纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与降低肝组织中IDO1的表达水平继而促进肝脏中DCs表型成熟使DCs刺激T细胞增殖能力增强有关。     

胚胎干细胞来源的肝细胞对急性肝功能衰竭小鼠的移植治疗作用

目的观察胚胎干细胞（ESC）来源的肝细胞对急性肝功能衰竭（FHF）小鼠的移植治疗方法和作用。方法选用小鼠D3-KS细胞,利用转化生长因子、成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子等进行肝细胞方向诱导分化;用反转录聚合酶链反应、免疫细胞化学等方法检测肝细胞标记物甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）和葡萄糖6磷酸酶（G6P）等的表达;观察阳性细胞的空间分布规律,用细胞铲分选阳性区域细胞并将其移植入同系（129系）小鼠肝脏内,利用四氯化碳诱发FHF,然后观察小鼠生存时间、肝功能指标和移植细胞生长状态等情况。结果（1）AFP、白蛋白和G6P等最早于第3天开始表达并逐渐增强。（2）移植组平均生存时间（60h）与对照组（22h）差异有统计学意义（P〈0．05）;移植组肝功能指标均较对照组明显改善（P〈0．05）。（3）移植细胞表达ALB,移植部位未发现肿瘤形成。结论ESC来源的肝细胞可表达成熟肝细胞功能,移植后能对小鼠FHF起到较好的治疗作用。     

非酒精性脂肪性肝纤维化动物模型的改良和建立

目的：构建一种较为简便可靠的非酒精性脂肪性肝纤维化（NASF）小鼠模型。方法：选择C57BL/6J雄性小鼠,采用蛋氨酸-胆碱缺乏饲料（MCD）联合每周1次腹腔注射10% CCl4-橄榄油溶液（剂量为2 mL/kg）,造模第4周、第6周末处死动物采血和肝组织,检测各组血清肝功能（ALT、AST、TBIL）水平,血清和肝脏甘油三酯（TG）含量,观察各组肝组织HE染色、油红O染色、Masson染色情况,采用免疫组织化学方法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。结果：相比对照组,模型组小鼠血清ALT、AST、TBIL活性明显升高（P＜0.01）;肝脏TG含量显著增加（P＜0.01）;模型组肝组织出现广泛炎症反应、脂肪变性、胶原沉积;半定量分析显示,脂滴面积、胶原染色面积及α-SMA蛋白阳性表达面积显著增加（P＜0.01）;其中6周模型组较4周模型组病理改变更为明显。结论：采用MCD联合反复低剂量腹腔注射CCl4可成功建立NASF小鼠模型。     

骨髓间充质干细胞改善高氧致肺纤维化的研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）移植对高氧致新生大鼠肺纤维化的影响。方法：将SD雄性大鼠来源的BM-MSCs移植入受体大鼠体内。将受体大鼠分为正常对照组、正常BM-MSCs移植组、高氧对照组、高氧BM-MSCs移植组4组。实验第14天取各组大鼠肺组织行病理学检查和羟脯氨酸含量测定;提取雌性大鼠肺组织DNA,PCR检测性别决定基因Sry基因表达。结果：高氧对照组肺组织结构紊乱,纤维化明显,羟脯氨酸含量较正常对照组明显升高,高氧BM-MSCs移植组病理改变较高氧对照组减轻,羟脯氨酸含量亦明显降低;PCR结果显示,正常BM-MSCs移植组和高氧BM-MSCs移植组均可检测到Sry基因,高氧BM-MSCs移植组较正常BM-MSCs移植组表达增高。结论：体内移植BM-MSCs可减轻高氧致新生大鼠肺纤维化。     

血府逐瘀汤联合替莫唑胺对脑胶质瘤大鼠ERK/MAPK信号通路的调节作用

【摘要】 目的 探讨血府逐瘀汤联合替莫唑胺对脑胶质瘤大鼠ERK/MAPK信号通路的调节作用。方法 将60只大鼠随机分为空白对照组、脑胶质瘤组、血府逐瘀汤组、替莫唑胺组及联合给药组,每组各12只,除空白对照组,其余各组大鼠采用颅内注射胶质瘤C6细胞的方法建立脑胶质瘤大鼠模型,血府逐瘀汤组按照20g/kg灌胃给予血府逐瘀汤,替莫唑胺组给予替莫唑胺(25mg/kg),联合给药组同时给予血府逐瘀汤及替莫唑胺,空白对照组及脑胶质瘤组给予蒸馏水,1次/d,连续5w,测定大鼠瘤重占脑重比、抑瘤率、外周血CD4+CD25+调节性T细胞及CD8+T细胞百分比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒测定肿瘤组织白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,苏木精-伊红(HE)染色法检测病理学变化,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测脑胶质瘤组织ERK、p38MAPK mRNA水平,免疫印迹(Western blot)及免疫组化检测大鼠脑胶质瘤组织ERK、p38MAPK表达。 结果 与空白对照组比较,脑胶质瘤大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞、IL-10、TGF-β1、肿瘤组织EPK及p38MAPK mRNA水平及蛋白水平、免疫组化IOD水平均增高（均P＜0.05）,CD8+T细胞数、IL2水平均降低（P＜0.05）。与脑胶质瘤组大鼠比较,血府逐瘀汤组、替莫唑胺组及联合给药组大鼠瘤重占脑重比、外周血CD4+CD25+调节性T细胞数、肿瘤组织IL-10、TGF-β1、肿瘤组织ERK及p38MAPK mRNA水平及蛋白水平、免疫组化IOD水平均显著降低(P＜0.05),抑瘤率、外周血CD8+T细胞数、肿瘤组织IL-2水平显著升高(P＜0.05),且联合给药组上述指标变化与血府逐瘀汤组及替莫唑胺组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05)。 结论 血府逐瘀汤联合替莫唑胺能够抑制脑胶质瘤大鼠肿瘤进展,调节大鼠免疫功能,其机制可能与调节ERK/MAPK信号通路有关。