206例地中海贫血家系产前基因诊断结果分析

目的 总结206例地中海贫血(简称地贫)产前诊断家系资料,分析其地域分布、基因型分布以及胎儿产前基因诊断结果,用于指导临床遗传咨询,避免高风险地区严重类型地贫患儿的出生. 方法 206例地贫产前诊断家系来自2008年1月至2009年12月期间于广州南方医科大学南方医院产前检查的地贫携带者孕妇及其配偶,抽取夫妇双方外周血和胎儿绒毛、羊水或脐血样本并提取DNA,以跨越断裂位点的聚合酶链反应(gap-polymerase chain reaction,gap-PCR)技术和反向点杂交技术(reverse dot blot,RDB)对a和β-地贫常见突变位点进行检测,同时对临床表型阳性而常见突变位点检测结果阴性的样本进行DNA测序.婴儿出生后半年电话随访婴儿表型. 结果 206例产前诊断家系来自包括黑龙江在内的12个不同省份和地区.a-地贫的基因突变类型有--SEA/、-a 3.7/、-a4.2/、αCSα/和αQSα/,全部为试剂盒中可检测的突变类型;而β-地贫的基因突变除常见的试剂盒中可检测到的类型外,还有中国型G γ+(Aγδβ)0、-28(A→C)、CD54-58 (-TATGGGCAACCCT)和CD37(G→A)等4种突变类型无法用常规试剂盒做出诊断.57例α-地贫家系中,产前诊断严重类型地贫11例(19.3％),包括巴氏水肿胎8例和Hb H病3例,杂合子26例(45.6％),正常胎儿20例(35.1％);149例β-地贫产前诊断家系中,严重类型地贫28例(18.8％),杂合子82例(55.0％),正常胎儿39例(26.2％),其中1例β-地贫杂合子合并13-三体.11例严重类型α-地贫胎儿、28例严重类型β-地贫胎儿和1例β-地贫杂合子伴13-三体胎儿均在围产期前后接受了终止妊娠的处理.结论　地贫的发病地域从长江以南各省逐渐扩散至一些北方地区.运用gap-PCR和PCR-RDB技术对地贫家系进行产前基因诊断,检出严重类型地贫胎儿,是降低高危地域严重类型地贫患儿出生的有效手段.但目前的试剂盒覆盖的检测位点在β-地贫筛查中存在漏诊现象,因此对临床表型阳性而常见突变位点检测结果阴性的样本进行DNA测序是十分必要的.此外,在进行地贫产前诊断的同时,也要注意染色体病产前诊断指征的确定.     

产前诊断泰国缺失型α地中海贫血1引起的胎儿巴氏水肿

地中海贫血(地贫)是由于珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白链合成减少或缺乏,所致的一种遗传性溶血性贫血,是我国南方地区最常见、危害最大的遗传病,临床上主要分为α地贫和β地贫两种,以α地贫更为常见.目前,国内报道的α地贫产前基因诊断主要是针对常见的3种α地贫缺失型和非缺失型基因突变类型的胎儿产前基因诊断.本研究报道2例极为少见的泰国缺失型α地贫1和东南亚缺失型α地贫1双重杂合的产前诊断.     

广州市黄埔区5306对夫妇孕期地中海贫血的筛查与诊断分析

目的通过对广州市黄埔区群众的地中海贫血筛查、诊断结果进行总结,了解广州市黄埔区群众地贫基因携带率,地贫类型,为本区制定地贫防治工作提供指导。方法通过对2008年1月至2012年12月在广州市黄埔区参加出生缺陷工程的5 306对夫妇孕早期抽血进行地中海贫血初筛,检查到一方或双方初筛阳性者,夫妇均进一步行地贫基因检查,对携带同型地贫基因的夫妇建议产前诊断。结果共检出地贫基因携带者1 338例,单纯性α地中海贫血801例,检出率为7.55%,单纯性β地中海贫血498例,检出率为4.69%,α复合β地中海贫血双重杂合子39例,检出率为0.37%。地贫高风险家庭48户,经产前诊断,确诊10例重型地贫胎儿,均行引产。结论黄埔区的α地中海发生率较广东其他地区稍低,但β地中海贫血发生率偏高,在预防干预时要重视;α复合β地中海贫血双重杂合子的准确检出对于做好优生优育及产前诊断非常重要。     

地中海贫血高风险胎儿的产前基因诊断

目的　探讨地中海贫血 (简称地贫 )高风险胎儿宫内基因诊断的价值。　方法　 12 8例地中海贫血高风险胎儿于妊娠中期抽取羊水 10～ 2 0 ml或脐血 1m l进行基因诊断。　结果　 12 8例被检胎儿中基因正常 32例 ,α地贫缺失杂合子 38例 ,纯合子 2 7例 ;β地贫单一突变杂合子 18例 ,纯合子 4例 ,双重杂合子 9例 ;β地贫基因突变类型及频率依次为 :CD41- 42 (47.5 % ) ,IVS- - 6 5 4(42 .5 % ) ,CD17(A- T) (7.5 % )及 - 2 8(A- G) (2 .5 % )。无一例发生严重母胎并发症 ,重型地贫胎儿 40例均在知情同意前提下及时终止妊娠。　结论　筛查地贫高风险胎儿并及时进行产前基因诊断安全、有效、准确。在地贫高发区域 ,应作为常规产科检测方法。     

引物延伸预扩增在β-地中海贫血产前基因诊断中的应用研究

目的探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞(NRBC)经引物延伸预扩增(PEP)后在β-地中海贫血产前基因诊断中应用的可行性。方法以2004年7月至2005年6月在广西医科大学第一附属医院行产前诊断,夫妇均为轻型β-地中海贫血,孕龄9～34周的28例孕妇为研究对象。显微操作获取母血中NRBC,PEP对单个NRBC进行全基因组扩增,短串联重复序列(STR)鉴定所取细胞的来源。证实为胎儿细胞的PEP产物作为模板进行β-珠蛋白基因扩增,反向点杂交确定胎儿β-珠蛋白基因型。结果每例发现NRBC4～13个,约43.6%的NRBC来源于胎儿。单个NRBC经PEP后STR及β-珠蛋白基因扩增成功率分别为100.0%和90.8%。经反向点杂交可鉴定胎儿β-珠蛋白基因点突变类型,与传统的产前诊断结果相比较,符合率为85.7%,误诊率14.3%。结论母血中单个胎儿NRBC经PEP后可以进行产前基因诊断,不仅可以应用于β-地中海贫血,也可应用于其它遗传病,是一条可供尝试的无创性产前诊断途径。     

海南地区地中海贫血产前基因诊断的临床研究

目的:研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值。方法:对孕妇夫妇携带地中海贫血的48例风险胎儿的羊水(或脐血)应用单管多重PCR体系和反向点杂交法,进行α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断。结果:共检测出地中海贫血胎儿38例。其中α-地中海贫血14例,包括东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)2例,东南亚缺失型纯合子(--SEA/--SEA)8例,左缺失型杂合子(-α4.2/αα)1例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例,非缺失型点突变(ααT/αα)1例;β-地中海贫血24例,包括CD41-42杂合子16例,CD41-42纯合子2例,-28(A-G)杂合子3例,双重杂合子(IVS2nt654/CD41-42,-28(A-G)/CD71-72(+A),CD41-42/-α3.7)3例。其中10例重型地贫儿引产,1例重型地贫儿产后新生儿死亡,其余均足月分娩存活。所有病例经引产或正常分娩后留取脐带血,作地贫基因诊断,与产前诊断结果一致。结论:应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α-和β-地中海贫血产前基因检测,这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义。     

十个缺失型β-地中海贫血家系的产前诊断

β-地中海贫血(简称β-地贫)是我国南方最常见的单基因遗传病之一,主要是因点突变(或少数几个核苷酸的插入或缺失)使β-珠蛋白肽链合成障碍(减少或缺如)所致[1].此外,由于β-珠蛋白基因簇的大片段缺失而导致的遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(hereditary persistence of fetal hemoglobin,HPFH)和δβ-地中海贫血(简称δβ-地贫)在中国人群中也占有相当的比例,其共同特征是基因发育阶段特异性表达失控而使出生后胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,Hb F)持续增高[2-3],是一组遗传异质性很大的血红蛋白病[4].目前世界上在不同种族中已报道了至少20种此类因β-珠蛋白基因簇的大段缺失而引起的血红蛋白病,中国人群中最常见的类型是中国型Gγ+(Aγδβ)0地贫和东南亚型HPFH[3].缺失型β-地贫杂合子与β-地贫点突变杂合子婚配后,有生育缺失突变复合β-地贫点突变患儿的风险,此类双重杂合子患儿多表现为中间型或重症β-地贫,也是需要重点预防的类型.缺失型β-地贫具有特异的表型,在临床上较易被发现,但目前暂时没有相关的基因检测试剂盒上市,给产前诊断带来一定困难.本研究分析了10例缺失型β-地贫基因携带者的表型,同时因其配偶为常见β-地贫点突变携带者,对这10个地贫家系分别进行了产前诊断,现报道如下.     

应用突变引物延伸扩增技术快速产前诊断β地中海贫血基因突变

目的 探讨综合应用突变引物延伸扩增(MOEA)及巢式聚合酶链反应(PCR)技术进行β地中海贫血产前诊断的可行性.方法 先用一对外侧引物扩增1.5 Kb β珠蛋白基因片段,再用MOEA技术检测β地中海贫血点突变.结果 完成了6例β地中海贫血高危胎儿的产前基因诊断,其中双重杂合子1例,杂合子3例,正常胎儿2例;经分娩或流产后基因分析验证,结果与产前诊断完全一致.结论 MOEA技术适合于已知点突变的基因诊断和产前诊断,具有快速、简便、安全、准确等优点,便于推广应用.     

2 171例地中海贫血产前基因诊断回顾性分析

目的：对广东省妇女儿童医院产前诊断中心1 506例α地中海贫血和665例β地中海贫血产前基因诊断进行回顾性分析。方法：对α地中海贫血产前基因诊断采取裂隙聚合酶链反应（gap-PCR）以及PCR结合反向点杂交（RDB）方法,β地中海贫血产前基因诊断采取PCR结合RDB方法,若夫妇一方携带少见突变则加用DNA测序方法。结果：1 506例α地中海贫血产前基因诊断病例中共检测出262例水肿胎,72例血红蛋白H病。665例β地中海贫血产前基因诊断病例中共检测出174例重型β地中海贫血。结论：地中海贫血产前基因诊断有效减少了水肿胎和重型β地贫患儿的出生,对于优生优育、减少围生期并发症具有重要意义。     

应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断

目的　为了降低 β地中海贫血重症患儿的出生率 ,达到优生的目的。　方法　对 5 2 7对孕妇及其配偶进行血液学筛查 ,用 PCR- RDB法对夫妇双方均为 β地中海贫血携带者的孕期夫妇进行产前基因诊断 ,并取脐血验证结果。　结果　共筛出 β地中海贫血阳性患者 2 8例 ,轻型 β地中海贫血阳性率为 2 .6 6 %。男女阳性率为 1∶ 1.15 ,4例产前基因诊断中 ,确定正常胎儿 1例 ,重症胎儿 3例(纯合子 1例 ,双重杂合子 2例 ) ,重型 β地中海贫血胎儿于诊断后两周内终止妊娠。　结论　 PCR-RDB技术可有效减少 β地中海贫血重症患儿的出生 ,具有重要的优生学意义。     

69例αβ复合型地中海贫血的血液学和基因型研究

目的:分析69例αβ复合型地中海贫血患者基因型、血液学与临床表现的关系,探索和指导这类复杂基因型组合方式的临床诊断.方法:采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分.反向点杂交技术诊断β地中海贫血和α地中海贫血基因点突变,缺口聚合酶链反应技术检测α-地中海贫血缺失突变.结果:45例轻型β地中海贫血合并α地中海贫血(轻型复合型)患者的临床表现与β地中海贫血携带者无异;24例重型β地中海贫血合并α地中海贫血(重型复合型)则从重度贫血到轻度贫血均有,差异较大,但多数表型为中间型地中海贫血.69例患者中,β地中海贫血的突变基因类型共检出8种,α地中海贫血的突变基因类型共检出5种.结论:轻型复合型的临床表现以轻型β地中海贫血的表现为主,α地中海贫血被掩盖;重型复合型则多表现为中间型地中海贫血.这一结果提示我们进行地中海贫血的临床检测时,尤其对β地中海贫血携带者,建议常规同时进行α地中海贫血致病基因的筛查,防止误诊、漏诊发生,进而确保地中海贫血产前诊断的准确性.     

25371例不孕不育患者地中海贫血基因型分布调查

目的:了解重庆及周边地区不孕不育患者地中海贫血(简称地贫)的基因携带率和突变类型,为开展胚胎植入前地贫基因诊断提供基础资料。方法:通过血液学参数分析筛查来我院就诊的不孕不育患者25371例,其中重庆籍16684例,四川籍4253例,贵州籍2050例,云南西藏等其他地区籍贯2384例;对筛查阳性者用Gap-PCR和反向点杂交技术进行地贫基因诊断分析。结果:共检出828例地贫携带者,总携带率为3.26%;其中重庆籍携带率为3.35%,四川籍携带率为3.48%,贵州籍携带率2.93%,云南西藏等地区籍携带率为2.56%;各籍贯间地贫携带率差异无统计学意义(P0.05)。共检测出9种α-地贫基因型和11种β-地贫基因突变类型,其中最常见的α-地贫基因型为-α~(3.7)/αα、-~(SEA)/αα、-α~(4.2)/αα,最常见的β-地贫基因突变类型为CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654。结论:重庆及周边地区不孕不育患者具有较高地贫携带率,在本地区对不孕不育患者提供遗传指导,开展胚胎植入前地贫基因诊断对减少患者负担具有重要临床意义。     

经宫颈绒毛取材用于地中海贫血产前诊断883例分析

目的:对有可能生育地中海贫血(地贫)高危胎儿的孕妇,在早孕期经宫颈绒毛活检(TC-CVS)用于地贫产前诊断,评价,TC-CVS在产前诊断中的应用价值.方法:对883例孕9～11周行地贫产前诊断的孕妇进行经宫颈绒毛活检,抽取绒毛行地贫基因分析产前诊断.随访观察孕妇的取材成功率、流产率、感染率.结果:取材成功率95.36%,自然流产率4.3%,宫内感染率1.13%.地贫基因分析共检出重型地贫儿143例,HbH病26例,α和β地贫杂合子共373例.结论:经宫颈绒毛活栓是一项安全可行的介入性产前诊断方法,用于早孕期地中海贫血产前诊断,可有效地检出重型地贫儿及各种地贫杂合子.     

3405例产前诊断的指证及其结果评价

目的:分析产前诊断指证与胎儿染色体检测结果的关系。方法:3405例有产前诊断指证的孕妇,进行羊膜腔穿刺或脐静脉穿刺术,取羊水细胞或脐血细胞培养,作胎儿染色体核型分析。结果:3405例孕妇共检出胎儿染色体异常88例,染色体异常率为2.6%,显著高于一般人群的异常率(P<0.01)。其中夫妇一方为染色体平衡易位携带者组的胎儿染色体异常率达25.9%(7/27),产前胎儿超声异常标记组、孕母血清唐氏筛查阳性组和高龄孕妇组的异常率分别为6.2%(49/778)、1.7%(22/1283)和1.1%(7/664)。18-或21-三体儿妊娠史组、体外受精组、本次妊娠有先兆流产史组和孕期不良因素接触组,均未检出胎儿染色体异常。结论:出现胎儿染色体异常率最高的指证,依次为夫妇一方染色体平衡易位携带者、产前超声发现胎儿异常标记、孕母血清唐氏筛查阳性和高龄孕妇。有针对性地进行产前诊断,可有效地控制和减少出生缺陷的发生。     

4568例孕妇脊髓性肌萎缩症携带者筛查及产前诊断分析

目的:对4568例孕妇进行脊髓性肌萎缩症(SMA)突变携带者筛查,并对已明确携带者夫妇胎儿进行产前诊断,了解运动神经元生存基因(SMN)变异携带率及SMA产前诊断并分析临床意义.方法:将变性高效液相色谱(DHPLC)分析法及Sanger测序联合应用,对石家庄市第四医院4568例孕妇进行SMN1缺失/点突变检测,进行携带...     

酶标寡核苷酸探针进行β地中海贫血的产前诊断

使用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记７对寡核苷酸探针对血液学常规筛查中检出的夫妇双方均为β地中海贫血的家系实行产前诊断，对２５例高风险胎儿的产前诊断显示，７例为纯合子或双重杂合子，１３例为单一突变的杂合子，说明用基因诊断技术筛查本病准确可靠，有利于优生优育，本文提示目前血液学筛查方法有一定的局限性。     

血友病A的基因诊断研究

目的建立1套简易、快速且诊断率高的血友病A(hemophilia A,HA)的直接基因诊断方法。方法对7例HA患者及家系成员采用倒位PCR(inversion-PCR,Ⅰ-PCR)和序列特异性PCR分别进行凝血因子Ⅷ(F8)基因内含子22和内含子1倒位突变检测,对倒位突变阴性者采用高分辨熔解曲线分析法(high-resolution melting,HRM)针对F8基因所有外显子及外显子-内含子交界区进行突变筛查,筛查阳性片段进一步作测序分析以确定致病突变。对其中1例倒位突变携带者进行了产前诊断。结果检出第22内含子倒位者4例,其中1例患者的母亲为倒位携带者,对此倒位突变携带者于孕27周抽取脐带血进行产前诊断,胎儿性别为男性,经检测确定其为倒位突变者;检出c.986GA(p.Cys329Tyr)点突变者1例,此患者姐姐为此突变携带者;未检出第1内含子倒位突变。本研究中所有患者及家系成员均得到确切诊断,基因诊断率为100%。结论Ⅰ-PCR技术可快速检测F8基因第22内含子倒位突变,可用于患者及携带者的基因诊断,并用于产前诊断。HRM是1种快速、低成本的突变扫描技术,适用于F8基因的突变筛查。采用联合基因诊断方法,即联合应用Ⅰ-PCR、序列特异性PCR、HRM、DNA测序技术进行直接基因诊断,可提高血友病A的诊断率及准确率。     

深圳市孕妇地中海贫血产前筛查及产前诊断

目的：调查深圳市孕妇地中海贫血发病率、基因突变类型，对高风险胎儿进行产前诊断。方法：1998年1月至2002年12月采用二步法对产前检查的4136例孕妇进行地中海贫血筛查。结果：检出地中海贫血阳性病例297例，发病率7．18％，其中。地中海贫血阳性病例172例，发病率4．16％；β地中海贫血阳性病例125例，发病率3．02％。229例被确定了基因型。对19对夫妇均为地中海贫血携带者胎儿进行产前基因诊断，确定正常胎儿3例，α1地中海贫血杂合子4例，β地中海贫血杂合子8例，Bart‘S水肿胎儿2例，β地中海贫血双重杂合子2例。结论：通过产前筛查地中海贫血，确诊重症患儿及时终止妊娠，可有效地避免重症患儿的出生。     

降低出生缺陷关键技术及干预措施的研究

目的：探讨降低出生缺陷的关键技术及干预措施。方法以Duchenne进行性肌营养不良(DMD)、脊肌萎缩症(SMA)、地中海贫血（地贫）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD)、唐氏综合征(DS)、18三体综合征(ES)、神经管缺陷(NTD)等为目标疾病,调查2007年1月至2009年12月昆明市盘龙区、五华区共5004例孕妇补充叶酸的情况;对云南省第一人民医院、第二人民医院、云南省曲靖市第一人民医院、第二人民医院、曲靖市妇幼医院、云南省临沧市人民医院、昆明玛利亚女子医院、昆明市盘龙区妇幼保健所、云南省大理市妇幼保健院进行产前检查的27 660例孕妇,在孕8～20周+6进行血清学筛查;对筛查高风险或有其他产前诊断指征的孕妇,经遗传咨询后进行细胞遗传学产前诊断和胎儿超声检查;对有DMD、SMA、地贫、G6PD患儿生育史或家族史的孕妇,用相应的DNA分析技术进行产前基因诊断;随访妊娠结局后评价干预效果。结果5004例孕妇中围孕期补充叶酸者占30.10％ (1506/5004);接受血清学筛查的27 660例孕妇中发现DS、ES、NTD高风险孕妇2313例,其中2096例孕妇自愿接受细胞遗传学产前诊断（其中2例为双胎）;另有67例DMD、SMA、地贫、G6PD高风险的孕妇通过遗传咨询自愿接受产前基因诊断。对以上2163例高风险孕妇（共2165例胎儿）进行产前诊断,确诊染色体异常胎儿102例、NTD17例、DMD 4例,重型α地贫l例;经遗传咨询后自愿终止妊娠91例严重出生缺陷胎儿,另有l例双胎之一为DS于孕24周胎死宫内,32例染色体平衡易位或倒位胎儿继续妊娠。接受产前诊断的2163例孕妇足月分娩新生儿2071例,羊膜腔穿刺术后l周内流产2例（胎儿染色体均正常）;有4例血清学筛查高风险孕妇因拒绝接受产前诊断而生育了4例DS患儿。随机抽样随访5000例血清学筛查低风险孕妇的妊娠结局,未发现活产儿中有上述目标疾病的患儿。血清学筛查对DS的检出率为84％( 27/32),假阳性率为6.153％( 1702/27 660)。结论孕前及孕早期补充叶酸可降低出生缺陷风险,但育龄期妇女主动补充叶酸者仅占1/3;血清学筛查可高效检出DS、ES和NTD;遗传咨询对诊断高风险和遗传病家族史的人群至关重要;以血清学筛查和产前诊断为关键技术,与常规产前检查相结合,可以降低严重出生缺陷的发生率,应成为我国的新型围产保健策略。     

双胎及三胎妊娠地中海贫血产前基因诊断研究

目的:探讨双胎妊娠和三胎妊娠地中海贫血的产前基因诊断情况。方法:对27例双胎妊娠和三胎妊娠患者进行绒毛膜穿刺或羊膜囊穿刺胎儿取样,采取裂隙聚合酶链反应以及聚合酶链反应结合反向点杂交方法进行产前基因诊断。结果:在进行α地中海贫血产前基因诊断的20例双胎妊娠及1例三胎妊娠中,共对43个胎儿进行取材,共检测出6例Bart's水肿胎,3例血红蛋白H病。在进行β地中海贫血产前基因诊断的6例双胎妊娠中,共对9个胎儿进行取材,共检测到3例中重型β地中海贫血。结论:地中海贫血的多胎妊娠孕妇产前基因诊断能较有效检出Bart's水肿胎和中重型β地中海贫血患儿,可预防重型地中海贫血患儿的出生。