重组人肝细胞生长因子对心脏移植冠状血管内皮细胞免疫原性的影响

目的 探讨重组人肝细胞生长因子(rh-HGF)对大鼠心脏移植冠状血管内皮细胞免疫原性的影响.方法 近交系健康雄性Wistar大鼠80只和雄性SD大鼠40只,建立腹腔异位心脏移植模型.实验分3组:同系移植组,异系移植包括对照组(CsA组)和实验组(HGF组).分别于术后15、60 d采集各组标本,沿冠状动脉切取心肌组织,进行免疫组织化学检测冠状血管内膜细胞间黏附分子(ICAM)-1的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测冠状血管内膜γ-干扰素(IFN-γ)mRNA表达,以及观测冠状血管病理变化.结果 实验组移植心脏冠状动脉内皮细胞完整,管腔轻度狭窄,少量淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润,病理改变明显轻于对照组.免疫组织化学测定实验组ICAM-1(0.86±0.06)、(1.26±0.19)明显低于对照组(1.39±0.20)、(2.05±0.31)表达(P＜0.01);RT-PCR测定实验组IFN-γmRNA(1.38±0.22)、(1.06±0.12)明显低于对照组(1.97±0.34)、(1.63±0.25)表达(P＜0.01).结论 rh-HGF可能具有免疫调节功能,抑制移植心脏冠状血管内皮细胞免疫活性,减轻内皮细胞损伤,降低CAV发生易感性.     

葡萄糖调节蛋白78和94蛋白在直肠腺癌中的表达及其意义

目的探讨葡萄糖调节蛋白(GRP)78和GRP94蛋白在直肠腺癌的癌组织中的表达及其临床意义。方法收集直肠腺癌手术标本45例,常规石蜡包埋后切片,应用En Vision TM免疫组织化学法检测GRP78和GRP94蛋白在直肠腺癌的癌组织及相应癌旁组织中的表达水平。结果 1在45例直肠腺癌的癌组织中GRP78和GRP94蛋白表达阳性率明显高于其在对应的癌旁组织中的表达(GRP78:χ2=16.200,P0.001;GRP94:χ2=14.221,P0.001)。2 GRP78和GRP94蛋白在直肠腺癌的癌组织中的阳性表达均与病理分化类型、Dukes分期和淋巴结转移有关(P0.05),尚未发现GRP78和GRP94蛋白在直肠腺癌的癌组织中的阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小等临床特征有关(P0.05)。3在24例GRP78蛋白表达阳性病例中,GRP94蛋白表达阳性者为18例,21例GRP78蛋白表达阴性病例中,GRP94蛋白表达阳性者为6例,两者在直肠腺癌中的表达呈正相关(rs=0.464,P0.01)。结论 GRP78和GRP94蛋白在直肠腺癌的癌组织中呈高表达,并与其转移和侵袭有关,可作为判断直肠腺癌恶性程度的有用指标。     

靶向小干扰RNA对小鼠肺缺血/再灌注损伤时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白的作用

目的 观察靶向小干扰RNA (siRNA)对小鼠肺缺血/再灌注损伤(PIRI)时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的影响.方法 荧光标记法观察靶向siRNA在小鼠体内的分布并评估转染效率.C57BL/6J小鼠50只,随机分为5组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、I/R+载体组(VR+ Vehicle组)、I/R+阴性对照组(I/R+ Control-siRNA组)和I/R+ CHOP-siRNA组(I/R+ CHOP-siRNA组).取左肺,检测肺湿/干重比(W/D)、总肺水含量(TLW)和肺泡损伤定量评估(IQA),光镜和电镜观察肺组织结构改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测CHOP、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) mRNA和蛋白表达水平,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI).结果 靶向siRNA通过滴鼻法可有效分布于肺脏中.与Sham组比较,I/R组中CHOP、GRP78 mRNA和蛋白表达水平(0.80±0.03、0.80±0.02;0.80±0.04、0.84±0.02)均升高(P ＜0.05),W/D(5.24±0.49)、TLW(4.24 ±0.49)、IQA[(42.80 ±4.21)％]和AI[(34.50±1.51)％]均明显增加(P＜0.01)；肺组织形态结构发生明显损伤；与I/R+ Vehicle组和I/R+ Control-siRNA组比较,I/R+ CHOP-siRNA组中GRP78 mRNA和蛋白表达水平(0.84±0.04、0.85±0.04)无明显变化(P＞0.05),而CHOP mRNA和蛋白表达水平(0.40±0.03、0.44±0.04)均降低(P＜0.05),W/D(2.54±0.24)、TLW(1.54±0.24)、IQA[(16.71±2.33)％]和AI[(11.50±1.58)％]亦均降低(P＜0.01)；肺组织形态结构损伤减轻.结论 靶向siRNA对I/R损伤肺具有良好的保护作用,其机制可能与其对抗过度的未折叠蛋白反应(UPR)中CHOP介导的细胞凋亡有关.     

热休克蛋白70-2基因沉默对大鼠精子附睾成熟的影响

目的 观察热休克蛋白(HSP)70-2基因沉默对大鼠附睾中精子成熟的影响.方法 构建HSP70-2特异的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,注入大鼠附睾中,1周后处死大鼠,无菌切取附睾,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测附睾中HSP70-2 mRNA表达,Western blot观察HSP70-2蛋白表达,应用苏木素-伊红(HE)染色检测附睾管内精子密度.结果 空白对照组HSP70-2蛋白表达量为1.31±0.10,附睾管内成熟精子密度为(63.46±14.43)%.基因沉默组HSP70-2蛋白表达量为0.93±0.13,附睾管内成熟精子密度为(31.51±10.67)%,与对照组比较均显著减少,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HSP70-2基因沉默影响附睾中精子成熟.     

膀胱出口梗阻后大鼠逼尿肌细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的观察膀胱出口部分梗阻后膀胱重构中,逼尿肌平滑肌细胞内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达情况,探讨内质网应激在膀胱重构机制中可能的作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组10只,梗阻2周组15只,梗阻4周组15只,采用经会阴途径球部尿道部分结扎的方法建立膀胱出口部分梗阻模型。采用透射电子显微镜观察逼尿肌平滑肌细胞的超微结构,通过免疫组化和Real-time PCR分别检测逼尿肌中GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果假手术组、梗阻2周组和梗阻4周组大鼠膀胱逼尿肌细胞GRP78蛋白阳性表达率分别为(3.37±0.38)%、(51.22±0.27)%、(27.02±1.85)%,梗阻2周组大鼠膀胱逼尿肌中GRP78阳性表达明显增多,与假手术组相比有明显差异(P0.01),梗阻4周组大鼠逼尿肌中GRP78阳性表达增多,与假手术组相比有明显差异(P0.01),但比梗阻2周组表达量减少(P0.01)。各组GRP78mRNA表达量分别为(22.21±1.58)、(30.62±2.49)、(24.52±2.24),梗阻2周组大鼠膀胱逼尿肌细胞GRP78mRNA表达较假手术组明显增加(P0.01);与梗阻2周组相比,梗阻4周组大鼠膀胱逼尿肌细胞GRP78mRNA表达量下降,有显著性统计学意义(P0.01),梗阻4周组与假手术组相比无统计学意义。结论在梗阻后膀胱重构过程中,逼尿肌平滑肌细胞内质网形态有明显损伤性变化,GRP78蛋白及mRNA表达水平明显增加,提示内质网应激参与膀胱重构的进展。     

内质网应激在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激途径在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞损伤中的作用。方法:42只雄性Wistar大鼠于鼠龄4周末随机化分为两组:对照组(12只)和高脂组(30只),分别给予普通饲料和高脂高热量饲料喂养建立高脂血症大鼠模型。第10周末(即鼠龄14周)全自动生化分析仪检测外周血甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,TUNEL法检测睾丸组织中凋亡生殖细胞,免疫组化法检测睾丸组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12蛋白表达,RT-PCR法检测睾丸组织GRP78及caspase-12 mRNA的表达。结果:高脂组大鼠血清TG、TC[(3.00±0.92)mmol/L、(3.04±0.39)mmol/L]较对照组[(1.43±0.41)mmol/L、(1.55±0.23)mmol/L]显著升高(P0.01),睾丸生殖细胞凋亡指数[(37.17±2.74)%]较对照组[(5.16±0.81)%]显著升高(P0.01);以精原细胞和精母细胞凋亡为主。高脂组睾丸组织中GRP78蛋白(0.32±0.03)及caspase-12蛋白(0.34±0.02)表达较对照组(0.19±0.01、0.12±0.01)明显升高(P0.01),GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA(0.86±0.05、0.87±0.01)较对照组(0.37±0.03、0.34±0.03)明显增加(P0.01)。结论:高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多;内质网应激可能是高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡的主要途径之一。     

热休克蛋白70对大鼠离体心脏细胞凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对离体大鼠供心心肌细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响.方法 Wistar大鼠18只,分为2组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4 ℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2 h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1 μmol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法旧C组.运用免疫组织化学SP法测定心肌HSP70含量、bcl-2、bax蛋白的含量并做统计学处理比较.结果 HSPT0含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P＜0.01),bel-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P＜0.01),bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P＜0.01),bel-2/bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高(P＜0.05).结论 心肌HSP70高表达能促进心肌抗凋亡蛋白bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白bax表达,增加bel-2/bax比率,抑制心肌细胞凋亡.     

甲基化结合域蛋白1调控内质网分子伴侣GRP78对胰腺癌侵袭转移的影响

目的 观察甲基化结合域蛋白1( MBD1)和葡萄糖调节蛋白78( GRP78)在胰腺癌侵袭转移中的作用.方法 检测毒胡萝卜素(Tg)处理后的BxPC-3细胞GRP78的表达及细胞迁移能力的变化;对MBD1-siRNA转染后的BxPC-3细胞MBD1和GRP78的表达、细胞侵袭能力的变化进行分析;免疫组织化学法检测40例胰腺癌组织和15例正常胰腺组织中MBD1和GRP78的表达.结果 Tg处理BxPC-3细胞后,GRP78表达明显上升,细胞的迁移能力增加;MBD1 -siRNA转染Bxpc-3细胞后,MBD1和GRP78的表达同时下降,细胞侵袭力减弱;MBD1和GRP78在胰腺癌中的表达明显高于正常胰腺组织(P＜0.05),两者的阳性表达呈正相关(r =0.594,P＜O.01),并均与淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 GRP78可能受到MBD1的甲基化调控,并与胰腺癌的侵袭转移有关.     

葡萄糖调节蛋白78kD和热休克蛋白20在左半及右半结肠癌差异表达的初步研究

目的分析左半结肠癌与右半结肠癌肿瘤组织中差异蛋白表达情况。方法收集人左半结肠癌和右半结肠癌组织标本各7例．提取组织蛋白并进行二维凝胶电泳、质谱分析及生物信息学分离．鉴定二者中差异表达蛋白质。应用免疫组织化学sP法检测葡萄糖调节蛋白78kD（GRP78）和热休克蛋白20（HSP20）在50例左半和50例右半结肠癌组织中的表达情况。结果筛选并成功鉴定出左半和右半结肠癌中16种差异表达蛋白质：与右半结肠癌比较,左半结肠癌10种蛋白表达上调,6种蛋白表达下调,其中GRP78在左半结肠癌中表达上调,HSP20在左半结肠癌中表达下调。免疫组织化学检测示．GRP78在左半和右半结肠癌组织的阳性表达率分别为78％（39／50）和56％（28／50）,差异有统计学意义（P〈0．05）;HSP20在左半和右半结肠癌的阳性表达率分别为34％（17／50）和72％（36／50）,差异亦有统计学意义（P〈0．05）。GRP78表达与肿瘤分化程度、浸润层次、TNM分期、有无淋巴结转移以及有无肝转移有关（P〈0．05）,而HSP20的表达与肿瘤大体形态、TNM分期以及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论左半结肠癌和右半结肠癌的蛋白质组存在蒡异．这些可能是左半与右半结肠癌生物学行为存在差异的原因。     

异迷迭香酸苷介导乳腺癌细胞凋亡的作用及机制

目的:研究异迷迭香酸苷介导乳腺癌细胞凋亡的作用及机制。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,在培养液中加入不同浓度异迷迭香酸苷(0.1、1、10μmol/L)进行干预。MTT法检测细胞增殖率,AO/EB法观察细胞凋亡情况,Western blotting分析内质网应激通路及凋亡相关蛋白表达。结果:异迷迭香酸苷浓度为0.1、1、10μmol/L时,细胞增殖率分别为(81.56±6.76)%、(69.33±6.40)%、(44.54±7.37)%,较空白对照组[(100.00±7.69)%]降低(P0.05,P 0.01);细胞凋亡比例分别为(155.67±14.38)%、(183.14±15.18)%、(224.52±17.26)%,较空白对照组[(100.00±16.54)%]增加(P 0.05,P 0.01);GRP78表达量分别为(1.78±0.16)、(1.83±0.27)、(2.52±0.25),较空白对照组(1.00±0.12)增加(P 0.05,P 0.01);ATF4表达量分别为(1.67±0.15)、(1.69±0.08)、(2.21±0.29),较空白对照组(1.00±0.05)增加(P 0.05,P 0.01);CHOP表达量分别为(1.12±0.07)、(1.23±0.07)、(2.06±0.20),较空白对照组(1.00±0.07)增加(P 0.05,P 0.01);p-PERK表达量分别为(1.14±0.07)、(1.18±0.13)、(1.42±0.10),较空白对照组(1.00±0.04)增加(P 0.05);p-eIF2α表达量分别为(1.54±0.02)、(1.65±0.12)、(1.67±0.17),较空白对照组(1.00±0.18)增加(P 0.05,P 0.01);c-caspase3表达量分别为(1.30±0.14)、(1.51±0.22)、(2.01±0.18),较空白对照组(1.00±0.17)增加(P 0.05,P 0.01);Bcl-2/Bax表达量分别为(0.80±0.06)、(0.74±0.10)、(0.42±0.08),较空白对照组(1.00±0.10)降低(P 0.05,P 0.01)。结论:异迷迭香酸苷可诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其机制包括上调GRP78/CHOP信号通路和干扰Bcl2/Bax平衡两方面,从而激活内质网应激反应,诱发细胞凋亡。     

Basic metabolism: protein

Proteins serve a wide variety of functions. They are made by the sequential incorporation of amino acids in an order that is determined by genes and which in turn determine the final structure and thus the function of the protein. Proteins are constantly being synthesized and broken down at rates which exceed the amount of protein consumed in the diet and the equivalent amount of nitrogen that is excreted as urea in the urine. Some amino acids can be synthesized in the body (non-essential amino acids) but others (essential amino acids) must be supplied from dietary proteins in amounts that match the amounts that are oxidized. Hence the criterion of adequacy of a diet with respect to protein is its ability to maintain nitrogen balance in an adult and its ability to support normal growth in a child. During some critical illnesses there appears to be a constraint on the rate at which some non-essential amino acids can be synthesized, so that clinical benefits have been seen from supplementing the diet with these ‘conditionally-essential’ amino acids. Moreover, following surgery or during severe illness there is an increase in amino acid oxidation that can lead to muscle wasting. It is important to minimize the loss of lean tissue, but it may not be possible to prevent it completely by dietary means.     

脑胶质瘤中p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白的表达及其意义

目的 探讨p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法 应用免疫组织化学技术检测60例脑胶质瘤中p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白的表达。结果 p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤和正常脑组织中的阳性表达率分别为43.3％和90％（P＜0.05）；36.7%和80％（P＜0.05）；41.7%和0（P＜0.05）。脑胶质瘤中p16蛋白及nm23蛋白缺失率在死亡组和生存组分别为73.7%和31.8%（P＜0.05）；84.2%和36.3%（P＜0.05）；c-erbB－2蛋白过度表达率在死亡组和生存组为68.4%和27.2%（P＜0.05）。结论 p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白过度表达与脑胶质瘤发生、发展密切相关。     

Role of protein phosphatases in genitourinary cancers

The prevalence of genitourinary cancers has been increasing rapidly worldwide over the past 10 years. Advances in diagnosis and treatment have improved the oncological outcomes of patients with genitourinary cancer. However, the precise mechanisms of cancer development are largely unknown. Among various biological mechanisms, reversible phosphorylation is crucial for regulating the activities of many proteins in cancer cells. In contrast to protein kinases, the roles of cellular protein phosphatases have not been fully elucidated. However, emerging evidence suggests that various protein phosphatases are involved in genitourinary cancer development and have potential for cancer treatment. In the present review, we focus on recent progress in protein phosphatases regarding genitourinary cancers. We also explore the development of new strategies for cancer therapy using protein phosphatase and related molecules.     

X盒结合蛋白1、免疫球蛋白结合蛋白在肝癌组织中的表达及意义

目的 检测X盒结合蛋白1( XBP1)、免疫球蛋白结合蛋白(Bip)在肝癌组织中的表达,探讨其在肝癌生长中的作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测术中所取的42例肝癌标本、15例同个体癌旁1.0 cm肝组织和15例正常肝组织中XBP1、Bip的mRNA表达.应用Western blot法验证57例肝癌组织和正常肝组织标本中XBP1、Bip在蛋白水平的表达.结果 肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBP1 mRNA相对表达量分别为0.4396±0.0241、0.4152±0.0252、0.4095±0.0149,XBP1 mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05);肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中Bip mRNA相对表达量分别为0.4772±0.0401、0.4332±0.0488、0.4301±0.0398,Bip mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05).实验对肝癌组织和正常肝组织中XBP1和Bip的蛋白表达进行了定性验证:在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织.结论 在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应(UPR)的激活.在肝癌组织中XBP1、Bip mRNA和蛋白的表达一致,均呈高表达.这些基因和蛋白表达的改变可能与肝癌的发生、生长及转移密切相关.     

Sperm protein carbonylation

The cryopreservation of sperm is a well established technique that plays an essential role in dissemination of elite germplasm of livestock. Despite having numerous advantages, the cryopreservation induces certain stresses on sperm including structural and functional damages leading to impaired sperm quality and fertility, which might be associated with production of reactive oxygen species (ROS). In addition, the ROS upon reacting with sperm lipids, DNA and proteins may lead to a cascade of sperm damages. The sperm membrane contains a rich amount of polyunsaturated fatty acids, which increases their susceptibility to oxidative stress induced damages, leading to formation of secondary products. These secondary products result in oxidation of sperm proteins via carbonylation. The carbonylation could lead to disturbances in specific proteins that are involved in capacitation. The present review deals with sperm protein carbonylation.     

cAMP反应元件结合蛋白与神经病理性疼痛

神经病理性疼痛(neuropathic pain)是指由于外周或者中枢神经系统的直接损伤或功能紊乱引起的疼痛。常表现为自发性和诱发性疼痛。其确切机制尚不清楚。目前研究认为与初级感觉神经元的异常兴奋;交感神经的芽生和交感-感觉耦联;初级传入末梢在脊髓背角的异常分布;中枢敏感以及大脑皮层的功能重塑等有关[1,2]。这种慢性改变涉及基因表达的改变,基因表达的关键是基因转录的调控。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response-element binding protein,CREB)是转录/翻译因子家族的一员,通过与顺式作用元件结合,改变DNA的局部构象而影响基因转录水…     

骨肉瘤中Survivin蛋白表达及其与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达的相关性

目的探讨Survivin蛋白在骨肉瘤中的表达及其与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达的相关性。方法采用免疫组化S—P法检测凋亡抑制基因Survivin在骨肉瘤、骨软骨瘤和正常骨组织中的表达及P-糖蛋白、bcl-2蛋白在骨肉瘤中的表达。结果Survivin蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率为63．15％,在骨软骨瘤和正常骨组织中未见表达;Survivin阳性表达与患者的年龄、性别及肿瘤部位无关,与Enneking分期及WHO组织学分型有相关性;P-糖蛋白和bcl-2蛋白在骨肉瘤中的阳性表达率分别为47．36％和55．26％。在骨肉瘤中．Survivin的表达与P-糖蛋白、bcl-2蛋白表达密切相关。结论①Survivin在骨肉瘤中呈高表达,与临床耐药密切相关．有望成为骨肉瘤靶向治疗的一个新靶点。②Survivin与bcl-2蛋白表达密切相关．二者协同发挥抗凋亡效应。     

Reactivation of motility of demembranated hamster spermatozoa: role of protein tyrosine kinase and protein phosphatases

Demembranated cauda epididymidal spermatozoa of hamster, following reactivation with 1 mm ATP, exhibited either a loop or planar type of motility. The spermatozoa with planar motility exhibited increased progressive velocity (VSL), straightness (STR), linearity (LIN) and beat cross frequency (BCF) compared to the spermatozoa with loop type motility. cAMP was observed to have differential effects on the motility parameters of the demembranated spermatozoa depending on the type of motility. For instance, in the loop type, average path velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and VSL were increased in the presence of cAMP unlike in the planar type. Furthermore, in an attempt to understand the role of protein kinases and protein phosphatases in regulation of sperm motility, the effects of various inhibitors of these enzymes on the motility and phosphorylation of proteins of reactivated demembranated spermatozoa were studied. Inhibitors of PTKase (protein tyrosine kinase) and protein phosphatases inhibited the motility of reactivated demembranated hamster spermatozoa. The activity of the respective enzymes associated with demembranated spermatozoa was concurrently inhibited, thus providing evidence that the effect of the inhibitors on motility was mediated through their inhibitory effects on the activities of the enzymes. The results also demonstrated that two phosphotyrosinylated proteins of molecular weight 65 and 80 kDa showed reduced phosphorylation in the presence of PTKase inhibitors, thus indicating their possible role in reactivation of motility of demembranated hamster spermatozoa.