siRNA靶向沉默TET2基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过siRNA靶向沉默TET2(ten-eleven translocation 2)基因,以研究TET2基因对于人肝癌细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法:RT-PCR和Western印迹法检测人肝癌细胞株和正常人肝星状细胞LO2中TET2表达情况。siRNA转染入Bel-7404和SMMC-7721肝癌细胞内,并设置阴性对照组(NC组)。靶向沉默TET2基因后,CCK-8法检测肝癌细胞增殖能力,FITC AnnexinⅤ-Apoptosis Detection KitⅠ检测肝癌细胞的凋亡;Western印迹法检测下游信号通路中Caspase-3和Caspase-8蛋白表达。结果:与正常人肝星状细胞LO2相比,TET2基因在人肝癌细胞中高表达。siRNA转染入SMMC-7721和Bel-7404细胞后,TET2基因的表达显著降低。与NC组相比,转染48 h后肝癌细胞的增殖水平显著降低(P<0.05)。肝癌细胞的凋亡水平率显著升高,下游信号通路中,Capase-3蛋白和Capase-8蛋白的表达量显著上调。结论:siRNA靶向沉默TET2基因可通过促进肝癌细胞凋亡的发生抑制其增殖。     

Rab23基因的siRNA干扰诱导肝癌Huh7细胞凋亡

目的 观察信号通路Sonic bedgehog(Shh)抑制因子Rab23的RNA干扰对人肝癌细胞株Huh7增殖和凋亡的影响.方法 实验细胞分为转染组、隐性对照组和空白对照组.设计针对Rab23基因的siRNA,通过Liperfectemin 2000将其转染进Huh7细胞株,噻唑蓝(MTT)比色法试验检测沉默Rab23基因后第0、8、16、24和48 h的细胞数和MTr的D(λ)值;流式细胞术检测沉默Rab23基因48 h细胞凋亡情况.结果 转染组与空白对照组比较,加入siRNA后,8 h时细胞增殖数无明显减少,16、24和48 h时细胞数明显减少(P＜0.01),24、48 h时细胞存活率差异有统计学意义.隐性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Huh7细胞经siRNA作用48 h后,可见亚二倍体核型峰-凋亡峰.其中,转染组凋亡率为28%,隐性对照组及空白对照组未见凋亡峰.结论 Rab23对肝细胞癌的增殖起维持作用;通过沉默该基因可以抑制肝癌细胞增殖,并促进细胞凋亡.     

特异性阻断Shh信号通路对肝细胞癌细胞系Hep-3B增殖和凋亡的影响

目的 观察阻抑胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog(Shh)对人肝癌细胞系Hep-3B增殖和凋亡的影响.方法 将实验细胞分为转染组、隐性对照组和空白对照组.设计针对Shh信号通路中Smo基因的siRNA,通过Lipedectemin2000将其转染进Hep-3B细胞株,噻唑蓝(Mar)比色法检测沉默Smo基因后第0、8、16、24和48 h的细胞数和MTr的D(入)值;流式细胞术检测沉默Smo基因48 h细胞凋亡.结果 转染组与空白对照组比较,加入siRNA后,8 h时细胞增殖数无明显减少,16、24和48 h时细胞数明显减少(P<0.01),24和48 h时细胞存活率差异有统计学意义.阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Hep-3B细胞经siRNA作用48 h后,可见亚二倍体核型峰-凋亡峰.其中,转染组凋亡率为30%,阴性对照组与空白对照组未见凋亡峰.结论 Shh信号分子对肝细胞癌的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制肝癌细胞增殖,并促进细胞凋亡.     

RNA干扰沉默Cathepsin L基因表达对肝癌细胞生物学特性影响的实验研究

目的 探讨RNA干扰技术沉默Cathepsin L基因对肝癌细胞生物学特性的影响.方法 实验组为肝癌细胞CathepsinL siRNA转染基因沉默组(沉默组),实验对照为肝癌细胞空白对照组(空白组)和siRNA转染荧光蛋白对照组(荧光对照组).观察时间为Cathepsin L siRNA转染后1、3和6 d.观察各组肝癌细胞Cathepsin L siRNA转染效率.用免疫荧光、RT-PCR法及WB法检测肝癌细胞Cathepsin L表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,侵袭小室法测定肝癌细胞侵袭力变化.结果 沉默组与空白组、荧光对照组比较,Cathepsin L mRNA水平和蛋白水平显著下降,细胞生长受抑制,增殖指数显著下降,细胞凋亡率显著增加,肝癌细胞侵袭力显著下降.结论 RNAi可有效沉默肝癌细胞Cathepsin L表达,降低肝癌细胞增殖活力及细胞侵袭力.     

ITGB1通过激活MAPK/ERK通路促进前列腺癌细胞侵袭

目的 研究ITGB1基因在前列腺癌中的表达情况及对前列腺癌细胞侵袭行为的影响和可能作用机制.方法 实时荧光定量PCR检测ITGB1在前列腺癌标本和前列腺癌细胞株PC3和LNCaP中的表达水平.设计小干扰RNA干扰ITGB1的表达,观察干扰效率以及干扰后对前列腺癌PC3和LNCaP细胞的迁移和侵袭能力的影响.结果 ITGB1 mRNA在前列腺癌标本中表达水平上调(t =5.12,P＜0.05),在前列腺癌细胞株LNCaP和PC3中表达水平也较正常前列腺上皮高(P＜0.01).siRNA成功干扰ITGB1表达后,划痕实验显示,前列腺癌Lncap和PC3细胞迁移能力显著下降.Transwell侵袭实验显示干扰ITGB1后,前列腺癌细胞的侵袭能力较对照组也显著下降.GCBI基因网络分析显示,ITGB1与MAPK通路具有显著相关性.进一步行蛋白质免疫印迹杂交实验显示,干扰ITGB1后,MAPK通路中ERK蛋白和磷酸化的ERK的蛋白表达下降,并且下游MMP9蛋白水平也呈现下降.结论 ITGB1通过激活MAPK信号通路,促进前列腺癌细胞迁移和侵袭.     

抑制乙肝病毒X蛋白表达对肝癌细胞上皮-间质转化和凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞转移能力的影响及其机制.方法 采用siRNA干扰技术抑制MHCC97H细胞的HBx表达.通过Transwell小室和裸鼠肺转移模型实验比较HBx抑制前后MHCC97H细胞转移能力的变化.应用Western blotting技术检测肝癌细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡相关基因的表达变化.结果 将HBx-siRNA导人MHCC97H细胞可以抑制HBx的表达及其转移能力,可下调EMT相关分子Twist和N-cadherin的表达,并上调E-cad-herin表达而抑制EMT,同时还可通过Twist-P53途径诱发细胞的凋亡.结论 抑制HBx表达可以通过改变上皮-间质转化和诱发凋亡而减弱高侵袭肝癌细胞MHCC7H的转移能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and possible mechanism of action of inhibiting hepatitis B virus X protein (HBx) expression on liver cancer metastasis. Methods The suppression of HBx expression in MHCC97H cells was performed by siRNA interference technique, and the effects of HBx suppression on the metastasis of MHCC97H cells were detected by Matrigel invasion assays and in a lung-metastasis mouse model. The expression levels of related epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis proteins were examined by Western blotting. Results Introduction of HBx-siRNA into MHCC97H cells inhibited the expression of HBx and the ability to metastasize,downregulated the expression of Twist and N-cadherin, and upregulated E-cadherin expression. These changes resulted in inhibiting EMT of MHCC97H cells. Meanwhile, apoptosis involved in the Twist-P53 pathway was also found. Conclusions Inhibiting expression of HBx can decrease the metastatic a-bility of MHCC97H cells by changing EMT and inducing apoptosis.     

乙肝病毒X蛋白通过激活核因子-κB信号通路上调MDR1的表达

目的 探讨核因子(NF)-κB信号通路是否是乙肝病毒X蛋白(HBx)上调多药耐药基因(MDR1)的途径之一.方法 建立稳定转染HBx基因的L02(L02/HBx)细胞系,用NF-kB信号通路阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阻断NF-κB信号通路.采用荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF-κB信号通路的激活失活,同时用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测转染前后及PDTC加入前后MDRl的表达.结果 转染HBx基因后NF-κB信号通路被激活,MDRI表达明显上调(P<0.05);PDTC加入后NF-κB信号通路被阻断,MDRi表达明显下调(P<0.05).结论 NF-κB信号通路可能是HBx介导肝癌多药耐药,上调多药耐药基因MDR1的途径之一.     

靶向NRF2逆转肝癌对索拉非尼耐药的实验研究

目的:探讨NRF2通路与肝癌对索拉非尼耐药的机制。方法:采用浓度梯度递增法建立肝癌细胞系Hep G2和Huh7的耐药细胞株Hep G2-SR和Huh7-SR,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,验证细胞耐药特性。采用Western blot和实时定量PCR检测NRF2蛋白和mRNA的表达水平,验证索拉非尼对NRF2影响及调节水平。采用s i RNA阻断NRF2,验证对索拉非尼耐药的逆转作用。结果 :索拉非尼在Huh7及HepG2细胞促进细胞凋亡的作用明显强于Huh7-SR、HepG2-SR细胞(P0.05)。耐药细胞株中NRF2蛋白的表达水平明显高于亲本细胞株(P0.05),亲本细胞株中索拉非尼可上调NRF2蛋白的表达水平(P0.05),但NRF2 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。采用si RNA阻断NRF2,可逆转肝癌对索拉非尼耐药,两者协同可促进细胞凋亡。结论:索拉非尼经转录后水平调解激活NRF2,诱导肝癌对索拉非尼耐药;而抑制NRF2可逆转肝癌对索拉非尼耐药。     

DEPDC1基因在胰腺癌的表达及其siRNA对胰腺癌细胞的影响

目的:探讨DEPDC1基因在人胰腺癌细胞株、胰腺癌组织和癌旁组织的表达;应用RNA干扰技术靶向沉默胰腺癌细胞株PANC-1中DEPDC1基因,研究其对细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:应用半定量RT-PCR方法检测4个胰腺癌细胞株、4例胰腺癌组织和癌旁组织DEPDC1基因的表达;靶向DEPDC1的siRNA载体转染胰腺癌细胞株PANC-1,采用实时定量PCR和Western印迹法检测基因沉默前、后DEPDC1基因及蛋白表达变化,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡的变化。结果:胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中DEPDC1基因呈高表达,癌旁组织呈低表达甚至不表达;转染siRNA的PANC-1细胞与对照组比较,DEPDC1基因及其蛋白表达下调,细胞增殖被显著抑制(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.01或P     

受体作用蛋白在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡耐受中的作用

目的 观察受体作用蛋白(RIP)基因的表达变化在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡耐受中的作用.方法 以肝癌细胞HepG2、Hep3B为研究对象,制备RIP siRNA的细胞模型,应用流式细胞仪分析两种细胞模型对TRAIL作用后细胞周期的变化,Western blot检测其在RIP基因沉默前后凋亡信号传导蛋白Caspase-8、Caspase-3、DFF-45的表达变化.结果 转染RIP siRNA后,细胞恢复了对TRAIL诱导凋亡的敏感性,当TRAIL浓度为100 μg/L时,HepG2及Hep3B转染组的细胞生存率为(60.02±5.23)％和(50.78±3.76)％,显著低于对照组的(96.44±5.43)％和(101.85±6.41)％(P＜0.01);细胞生存周期SubG1期为(76.89±6.68)％和(72.45±7.31)％,显著高于对照组的(0.78±0.07)％和(3.62±0.38)％(P＜0.01).转染组TRAIL单独作用,可以引起HepG2 siRNA及Hep3B siRNA凋亡传导通路上传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解.结论 肝癌细胞对TRAI诱导凋亡的耐受可能与其传导通路上RIP蛋白的表达相关,抑制其表达可以导致凋亡传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解,促使凋亡的发生,恢复肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

Frequency of complications of manipulation of the spine

Summary A survey of all members of the Swiss Medical Association of Manual Medicine was undertaken for the year 1989. Informative data were given by 425 respondents on the frequency of complications of manipulation as related to the spine. The number of thoraco-lumbar manipulations during 1989 (225 working days) was 805 for each respondent, and the number manipulations of the cervical spine 354. Thus, the total number of thoraco-lumbar manipulations was 342 125, and the total number of cervical manipulations was 150 450. The overall incidence of side-effects of transient complications due to cervical spine manipulation such as disturbance of consciousness or radicular signs was 1: 16716. Seventeen patients (ratio 1: 20 125) after manipulation of the lumbar spine presented, in addition to increased pain, a transient sensorimotor deficit with precise radicular distribution. Nine of the 17 patients (ratio 1: 38013) developed a progressive radicular syndrome with sensorimotor defict and radiologically verified disc herniation and had to be referred for surgery. Side effects and complications of cervical and lumbar spine manipulation are rare. Taking in to account the yearly number of manipulations performed by a single physician in Switzerland and the rate of complications, it can be calculated that a physician practicing manual medicine will encoutner one complication due to manipulation of the cervical spine in 47 years and one complication due to lumbar spine manipulation in 38 years of practice. However, it is important that a careful clinical assessment is carried out to avoid complications due to manipulation carried out on the basis of inappropriate indications. Furthermore, the decision as to which technique is indicated for any particular functional disorder of the spine should be made on the basis of rational criteria resting on a knowledge of clinical biomechanics, functional anatomy and neurophysiology. The authors recommend a prospective morbidity study to be carried out among physicians, chiropractors, osteopaths and physiotherapists, taking into account the different indications and therapeutic techniques in relation to complications.     

骨盆骨折的治疗进展

对于骨盆骨折的治疗 ,传统方法以卧硬板床 ,股骨髁上持续骨牵引 ,骨盆兜等保守治疗为主 ,常常引起下肢不等长 ,骶髋痛 ,步态失常等而严重影响生活质量 ,同时长期卧床易引发肺部感染、褥疮、应激性溃疡、泌尿系统结石等并发症而危及生命。下面就骨盆骨折的治疗进展作一综述。1     

Oddi括约肌肌电活动实验模型的建立

目的建立研究Oddi括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法将双极金属钩状电极通过浆膜层置入Oddi括约肌，记录不同条件干预下家兔的Oddi括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果不同条件干预下的家兔Oddi括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔Oddi括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究Oddi括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

鼻尖、鼻翼缺损修复方法的探讨

１９５７年以来共收治鼻尖、鼻翼缺损１１９例，据情分别采用以下四种方法修复：①全层皮片移植２７例；②游离耳廓复合组织片移植３６例；③鼻唇沟皮瓣移转１２例；④上臂内侧皮管移植４４例，效果较为满意。我们在文章中就选用的原则、手术方法及注意事项等进行了探讨     

食管穿孔83例分析

８３例不同原因引起的食管穿孔，保守治疗５７例；手术２６例，行单纯食管修补术２０例、开胸行纵隔和／或胸腔引流２例、切除贲门肿物行胃食管吻合１例、颈部食管外置２例（其中１例并行二期结肠代食管手术）、１例开胸取异物形成食管瘘后，行二期修补瘘术。全组死亡８例，其中死于纵隔胸腔感染和主动脉破裂出血各４例。总治愈率８５％。并指出异物假牙造成食管穿孔的重要性，对严重的腐蚀性食管灼伤应早期行食管镜检，并针对食管穿孔部位、种类、间隔期、纵隔与胸腔的感染程度及病人具体情况采取相应的治疗措施。     

手部深度烧伤的临床治疗分析

目的 总结手部深度烧伤的临床治疗经验. 方法 46例54只深度烧伤手,其中深Ⅱ度烧伤30例33只手,Ⅲ度烧伤16例21只手.根据伤情不同,早期选择不同手术方式修复创面,术后早期进行功能锻炼. 结果 54只手的修复方式:中厚皮片移植33只手,异体脱细胞真皮与自体薄皮片复合移植12只手,腹部带蒂皮瓣1只手,前臂骨问背动脉逆行皮瓣3只手,股前外侧皮瓣5只手.治疗后,51只手移植皮片、皮瓣均成活,仅3只手移植皮片后有局灶性坏死,创面得到有效覆盖.按关节活动范围( range of motion,ROM)评定,本组优31只手(57.4％),良17只手(31.5％),中4只手(7.4％),差2只手(3.7％). 结论 手部深度烧伤后,选择合适术式,早期手术修复创面及功能锻炼,可取得很好的疗效.