参麦注射液对IL-1β体外诱导兔软骨细胞增殖的影响

目的：观察参麦注射液对白细胞介素-1β（IL-1β）体外诱导兔软骨细胞增殖的影响。方法：采用IL-1β体外诱导兔软骨细胞的方法,建立变性软骨细胞模型,将其分为空白组、模型组、1％参麦组、5％参麦组和10％参麦组。空白组采用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养;模型组采用含10ng／mLIL-1β的DMEM培养液培养;1％、5％、10％参麦组采用含10ng／mg/mLIL-1βDMEM培养液培养24h,再分别采用含1％、5％、10％参麦注射液的DMEM培养液培养。采用MTT比色法检测软骨细胞的增殖情况。结果：模型组吸光度值（OD值）低于空白组,2组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）,说明IL-1β可抑制软骨细胞的增殖,建立变性软骨细胞模型。模型组及不同浓度参麦组间的OD值比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）,不同浓度的参麦注射液均可明显促进变性软骨细胞的增殖,其增殖作用与参麦注射液浓度呈正相关。结论：参麦注射液能够明显促进IL-1β体外诱导兔软骨细胞的增殖,这可能是参麦注射液防治关节退变的机理之一。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。     

β-蜕皮甾酮抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞退变的实验研究

目的:探讨β-蜕皮甾酮(β-Ecd)抑制IL-1β诱导关节软骨细胞退变的作用及机制。方法:进行关节软骨细胞的分离、培养和制备空白血清、β-Ecd含药血清。取对数生长期第三代软骨细胞按1×10~5接种于两块96孔酶标板中,分为4组,A组:正常软骨细胞+20%空白血清;B组:正常软骨细胞+20%β-Ecd含药血清;C组:IL-1β诱导软骨细胞+20%空白血清;D组:IL-1β诱导软骨细胞+20%β-Ecd含药血清。4组同一时间培养,并相同时间对C组和D组的正常软骨细胞加入10μg/L的IL-1β进行诱导退变,诱导时间为48 h。RT-PCR计数检测各组关节软骨细胞中胶原(I、II、X型)和软骨细胞外基质中金属蛋白酶(MMP-13、MMP-9)的表达。结果:关节软骨细胞中胶原表达结果显示:与A组比较,C组I型胶原mRNA表达升高(P0.05),B组差异无显著性(P0.05);与C组比较,D组差异无显著性(P0.05)。与A组比较,B组和C组Ⅱ型胶原mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01);与C组比较,D组Ⅱ型胶原mRNA表达均明显升高(P0.01)。与A组比较, C组X型胶原mRNA表达明显升高(P0.05),B组差异无显著性(P0.05);与C组比较,D组差异无显著性(P0.05)。关节软骨细胞外基质中金属蛋白酶表达结果显示:与A组比较,C组MMP-9、MMP-13 mRNA表达均明显升高(P0.01),B组差异无显著性(P0.05);而与C组比较,D组MMP-9、MMP-13 mRNA表达均明显降低(P0.01)。结论:β-Ecd可能通过影响膝关节软骨细胞胶原和金属蛋白酶的表达而延缓关节软骨细胞的退变。     

参麦注射液对急性束缚性应激大鼠大脑皮质Bcl-2/Bax表达及炎症因子的影响

目的观察参麦注射液预处理对急性束缚性应激大鼠大脑皮质Bcl-2/Bax及炎症因子表达的影响,并探讨其作用机制。方法将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、参麦对照组、模型组、参麦预处理组,每组6只。采用专业大鼠固定器束缚大鼠2h来模拟急性应激状态。参麦预处理组于制模前30min、参麦对照组于相应时间腹腔注射参麦注射液15mg/kg;正常对照组和模型组则给予等量0.9%氯化钠注射液。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测制模前、后血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)水平;制模后,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大脑皮质Bcl-2、Bax mRNA表达,蛋白质免疫印迹试验(Western Bolt)检测大脑皮质组织Bcl-2、Bax蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大脑皮质组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平。结果大鼠急性束缚性应激后血浆ACTH和CORT水平均明显高于应激前(P0.01)。与正常对照组比较,模型组大脑皮质组织Bcl-2 mRNA表达明显降低,Bax mRNA和蛋白表达明显增高(均P0.01),炎症因子TNF-α和IL-6表达量明显增加(均P0.01)。与模型组比较,参麦预处理组大脑皮质组织Bcl-2 mRNA表达明显增高(P0.01),Bax mRNA和蛋白表达明显降低(均P0.01),炎症因子TNF-α和IL-6表达量明显降低(均P0.01)。各组间大脑皮质Bcl-2蛋白表达差异均无统计学意义(P0.05)。参麦对照组各指标影响与正常对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论参麦注射液预处理可以维持急性束缚性应激大鼠皮质组织Bcl-2/Bax和炎症因子TNF-α和IL-6表达,从而缓解急性束缚性应激后的急性脑损伤。     

龙须藤总黄酮对膝关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响研究

目的：探讨龙须藤总黄酮对膝关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其对长链非编码核糖核酸（LncRNA）MEG3 的调控作用。方法：分离培养大鼠软骨细胞,对照 1 组为正常培养的软骨细胞,对照 2 组在含 10 ng/L 白细胞介素-1β（IL-1β）的培养基培养 24 h,药物 1 组在含 1 μg/mL 龙须藤总黄酮及 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,药物 2 组在含 2 μg/mL 龙须藤总黄酮及 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,药物 3 组在含 3 μg/mL 龙须藤总黄酮及 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,药物 3+si-NC 组 用 si-NC 转染入软骨细胞后加入含 3 μg/mL 的龙须藤总黄酮与 10 ng/L IL-1β 的培养基共同处理 24 h,药物 3+si-MEG3 组用si-MEG3 转染入软骨细胞后加入含 3 μg/mL 的龙须藤总黄酮与 10 ng/L IL-1β 的培养基共同处理 24 h。分别将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-MEG3 转染至软骨细胞,用含有 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,分别记为 pcDNA3.1 组、pcDNA3.1-MEG3 组。检测各组细胞存活率、凋亡率及 MEG3、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、P21、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）、B 淋巴细胞瘤-2 相关 X 蛋白（Bax）表达情况。结果：与对照 1 组比较,对照 2 组细胞存活率及 MEG3 表达降低 （P＜0.05）,凋亡率及 P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达升高 （P＜0.05）;与对照 2 组比较,药物 1 组、药物2 组、药物 3 组细胞存活率及 MEG3 表达升高（P＜0.05）,凋亡率及 P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达降低（P＜0.05）;与 pcDNA3.1 组比较,pcDNA3.1-MEG3 组细胞存活率及 MEG3 表达升高 （P＜0.05）,凋亡率及 P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达降低 （P＜0.05）;与药物 3+si-NC 组比较,药物 3+si-MEG3 组细胞存活率及 MEG3 表达降低 （P＜0.05）,凋亡率及P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达升高 （P＜0.05）。结论：龙须藤总黄酮可能通过上调 MEG3 表达促进膝关节炎软骨细胞增殖及抑制细胞凋亡,同时抑制炎症反应从而保护软骨细胞。     

菊花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2mRNA表达的影响

目的观察菊花总黄酮含药血浆对大鼠泪腺上皮细胞干眼症模型中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法将培养生长状态良好的大鼠泪腺上皮细胞随机分为无雄激素培养组(空白组)、雄激素培养组(雄激素组)、无雄激素培养黄酮组(菊花总黄酮组),分别加入空白血浆、丙酸睾酮、菊花总黄酮含药血浆干预48 h,然后加入100μmol/L H_2O_2继续培养60 min诱导细胞凋亡。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达情况。结果雄激素组和菊花总黄酮组Bax mRNA表达量均明显低于空白组(P均0.05),Bcl-2 mRNA表达量均明显高于空白组(P均0.05),雄激素组和菊花总黄酮组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论菊花总黄酮含药血浆有可能通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA表达及促进Bcl-2 mRNA表达的途径,起到抑制泪腺上皮细胞凋亡的作用。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:研究补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax、IL-2表达的影响。方法:1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞制作病理细胞模型,分组:正常组;模型组;补肾益气组。Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡;Real-time PCR和Western blotting法检测Bcl-2、Bax、IL-2的表达。结果:皮质酮诱导胸腺细胞凋亡率显著升高(P0.01);bax表达显著升高,bcl-2/bax比值、IL-2表达降低(P0.05)。与模型组比较,补肾益气组凋亡率降低(P0.05);Bax mRNA表达降低,bcl-2/bax比值、IL-2表达升高(P0.05)。结论:补肾益气方含药鼠血清能通过改善模型细胞bcl-2/bax的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡,提高胸腺依赖性免疫功能。     

绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。     

参麦注射液对脂多糖诱导HUVECs细胞损伤的影响

目的研究参麦注射液对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响。方法将原代人脐静脉内皮细胞分成空白组、模型组、2%参麦注射液组、5%参麦注射液组。采用RT-PCR和Western blot检测细胞炎症因子和细胞黏附因子的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白组比较,LPS处理24 h后细胞炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)、黏附因子(ICAM-1、 VCAM-1)表达升高(P0.01);给予2%、5%参麦注射液组后,炎症因子与黏附因子均降低(P0.05,P0.01)。结论参麦注射液能有效抑制由LPS诱导的炎症因子及黏附因子表达。     

基于Caspase-3/PARP通路探究龟鹿二仙胶及拆方对IL-1β诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶含药血清及鹿角胶含药血清,采用酶消法体外培养C57BL/6小鼠软骨细胞。将软骨细胞分为5组,空白组加入空白血清培养,模型组加入IL-1β和空白血清培养,龟鹿组加入IL-1β和龟鹿二仙胶含药血清培养,龟板组加入IL-1β和龟甲胶含药血清培养,鹿角组加入IL-1β和鹿角胶含药血清培养,干预24 h后,采用CCK-8法检测软骨细胞活性,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法检测Caspase-3、PARP-1表达情况,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测细胞中Caspase-3、PARP-1、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白及mRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性明显降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中Cas...     

益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、凋亡的影响及 相关机制。方法将分化完全的CFs 随机分为空白血浆组、模型组、益心泰含药血浆组,每组6 个复孔。除 空白血浆组外,其余各组以AngⅡ（10-7 mol·L-1）诱导构建细胞增殖及纤维化模型。空白血浆组及模型组以15% 空白血浆培养,益心泰含药血浆组以15%益心泰含药血浆培养,干预24 h。采用CCK-8 法检测CFs 细胞增殖 情况;ELISA 法测定细胞中Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）及转化生长因子（TGF-β1）含量;流 式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western Blot 法检测细胞中TGF-β1、B 细胞白血病/淋巴瘤-2（Bcl-2）及 Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）的蛋白表达水平;RT-qPCR 法检测CFs 的增殖细胞核抗原（PCNA）、α-平滑肌肌动蛋 白（α-SMA）、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平。结果15%益心泰含药血浆对CFs 无明显的促细胞增殖或抑制作 用。与空白血浆组比较,模型组细胞G0/G1 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率 明显升高（P＜0.01）;细胞凋亡率有所下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;Ⅰ/Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平 均显著升高（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显上调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显下调（P＜0.01）; PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,益心泰含药血浆组细胞 的G0/G1 期细胞百分率明显升高（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡率明 显升高（P＜0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平明显降低（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显下 调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显上调（P＜0.01）;PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显降 低（P＜0.01）。结论益心泰含药血浆能够抑制CFs 细胞增殖分化及纤维化,可能与其调控Bax/Bcl-2 平衡及 下调纤维化相关因子表达有关。     

内热针通过调控Bcl-2/Bax平衡改善大鼠膝骨关节炎损伤

目的:观察内热针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效并探究其相关分子机制。方法:32只大鼠随机分为常组、模型组、电疗组和治疗组4组各8例。经过3周治疗后,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠膝关节软骨组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠滑膜液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)的分泌水平,RT-qPCR及Western blot分别检测软骨组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-Associated X(Bax)mRNA及蛋白表达水平,TUNEL染色观察各组大鼠膝骨关节中软骨细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠软骨组织的病理学变化,下调滑膜液中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-17的表达水平(P<0.01);上调软骨组织中Bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),下调Bax在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),且能显著抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡。结论:内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对Bcl-2/Bax平衡的调控密切相关。     

灰树花提取物对脾虚小鼠脾脏Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨灰树花提取物对脾虚小鼠脾脏凋亡相关基因Bcl-2和Bax的影响.方法:健康雄性清洁级昆明种小鼠48只随机分为6组,即空白组、脾虚组、阳性药组(香菇多糖,2 mg·kg-1)、灰树花提取物低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),每组8只.采用番泻叶-劳倦过度复合因素法造模14 d,之后灰树花提取物和香菇多糖溶液滤菌后ip 10 d,第11天处死动物.免疫组化法观察脾脏凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定脾细胞凋亡相关基因Bcl-2,Bax mRNA的表达情况.结果:给予灰树花提取物后,Bcl-2阳性产物平均灰度值比脾虚组明显降低(P＜0.01),Bax阳性产物平均灰度值比脾虚组明显升高(P＜0.01).给予灰树花提取物后,Bcl-2 mRNA表达显著升高(P＜0.01),Bax mRNA表达显著降低(P＜0.01).结论:灰树花提取物可以通过促进Bcl-2蛋白与mRNA的表达、抑制Bax蛋白与mRNA的表达,提高Bcl-2/Bax的比值,可以通过影响线粒体途径来抑制脾淋巴细胞凋亡的发生.     

芪玉三龙汤平衡肺癌小鼠Th1/Th2漂移相关机制

目的:探讨芪玉三龙汤对肿瘤细胞的促凋亡作用以及对肺癌小鼠辅助T细胞(Th cells)因子免疫生物调节作用。方法:采用Lewis肺癌细胞培养移植法(LLC)建立肺癌荷瘤小鼠模型,模型成功后随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤组、联合组,每组8只,另设8只正常小鼠为空白组;观察小鼠的生存状态,称取瘤重,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化,判断芪玉三龙汤是否可诱导肿瘤细胞凋亡;采用酶联免疫(ELISA)法检测各组小鼠脾脏中白细胞介素(IL)-2,干扰素-γ(IFN-γ),IL-4,IL-10含量的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肿瘤组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的转录水平。结果:中药组、联合组生存状态明显优于化疗组。与模型组比较,芪玉三龙汤组、化疗组和联合组能显著抑制肿瘤生长(P0.01)。芪玉三龙汤组电镜下可见肿瘤细胞的变化以凋亡为主,亦有坏死,化疗组电镜下可见多个凋亡小体,联合组电镜下可见典型坏死细胞。各组Bcl-2 mRNA表达水平显著低于模型组(P0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤组和联合组Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P0.01)。各组Bax mRNA表达水平较模型组明显升高(P0.05)。与模型组和化疗组比较,芪玉三龙汤组IL-2,中药组、联合组的IFN-γ含量显著增加(P0.01)。芪玉三龙汤组及联合组IL-4,IL-10较模型组明显降低(P0.05),而联合组较化疗组IL-4,IL-10浓度显著降低(P0.01)。结论:芪玉三龙汤可以改善肺癌小鼠的生存状态,诱导肺癌细胞凋亡,凋亡机制可能与下调Bcl-2,上调Bax有关。芪玉三龙汤能够增加IL-2,IFN-γ,降低IL-4,IL-10表达,从而平衡Th1/Th2漂移,改善免疫功能,抑制肿瘤细胞的免疫逃逸。     

基于PERK/eIF2α信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞凋亡的作用机制

目的：观察龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖（LPS）诱导的大鼠退变软骨细胞中蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/真核起始因子2α(eIF2α)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨龟鹿二仙胶治疗KOA的作用机制。方法：制备龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨提取软骨细胞并进行体外培养,用甲苯胺蓝染色法对软骨细胞进行鉴定。采用CCK-8法筛选最佳含药血清浓度进行后续实验。用10μg/mL LPS诱导F2代软骨细胞复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、龟鹿二仙胶组、PERK抑制剂组,干预24 h后,分别采用CCK-8法检测软骨细胞活性;TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况;RT-qPCR法检测软骨细胞PERK、eIF2α、前凋亡基因C/EBP同源蛋白（CHOP）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA的表达;Western Blot检测软骨细胞p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：与空白组比较...     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖的影响

研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖以及Bcl-2,Bax,TP53 mRNA及蛋白表达的影响,以期探讨西黄丸抗乳腺癌的作用特点和机制。大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组(Control)和西黄丸含药血清组(XH),以含药血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Bcl-2,Bax,TP53 mRNA的表达,免疫荧光法检测Bax蛋白的表达。结果显示,西黄丸大鼠含药血清可抑制MDA-MB-435细胞增殖(P0.05),西黄丸大鼠含药血清可以提高MDA-MB-435细胞中TP53和Bax mRNA以及Bax蛋白的表达(P0.05),降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。同时西黄丸含药血清可以上调MCF-7细胞中Bax mRNA,并降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05),而西黄丸含药血清干预MCF-7细胞后TP53 mRNA和Bax蛋白表达无显著性差异。结果表明,西黄丸含药血清可诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡,机制有可能是通过上调TP53 mRNA表达,从而诱导凋亡蛋白Bax表达,促进Bax向线粒体转移,最终发挥诱导细胞凋亡作用。     

甘草酸抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的机制研究

目的:研究甘草酸抑制中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的机制。方法:以不同浓度的甘草酸作用于人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞),噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用30 mJ/cm~2的UVB照射Ha Ca T细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)法检测Bax、Bcl-2 m RNA表达水平变化;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01);细胞总凋亡率显著显著升高(P0.01);Bax m RNA表达水平显著升高,Bcl-2m RNA表达水平显著降低(P0.01);Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01)。与UVB组比较,1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞总凋亡率显著降低(P0.01);Bax m RNA表达水平显著降低,Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P0.01,P0.05);Bax蛋白表达量显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.01,P0.05)。结论:甘草酸能抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡,其机制与其下调促凋亡基因Bax m RNA和蛋白的表达,上调抑凋亡基因Bcl-2 m RNA和蛋白的表达有关。     

木棉花提取物通过调控miR-30b-3p/PDCD5的表达对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其机制研究

目的:研究木棉花提取物对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及潜在的作用机制。方法:用浓度分别为15、30、60 mg/L的木棉花提取物处理骨关节炎软骨细胞作为木棉花提取物组,以无木棉花提取物处理的细胞作为对照组;将miR-NC、miR-30b-3p、anti-miR-NC、anti-miR-30b-3p、si-NC、si-PDCD5质粒转染至骨关节炎软骨细胞中,分别记为miR-NC组、miR-30b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-30b-3p组、si-NC组、si-PDCD5组;将anti-miR-NC、anti-miR-30b-3p质粒转染至骨关节炎软骨细胞后再用60 mg/L的木棉花提取物处理48 h,记为木棉花提取物+anti-miR-NC组和木棉花提取物+anti-miR-30b-3p组;转染均采用脂质体法。qRT-PCR检测骨关节炎软骨细胞中miR-30b-3p、PDCD5 mRNA表达;Western blot检测Bcl-2、Bax、PDCD5蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-6、IL-1β含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测荧光活性。结果:与对照组比较,随着木棉花提取物浓度的升高,培养上清中IL-6、IL-1β含量及骨关节炎软骨细胞的凋亡率逐渐降低;miR-30b-3p、Bcl-2表达水平逐渐升高,PDCD5、Bax表达水平逐渐降低(P0.05)。miR-30b-3p过表达和抑制PDCD5表达可显著降低培养上清中IL-6、IL-1β含量,降低骨关节炎软骨细胞的凋亡率(P0.05)。miR-30b-3p靶向调控PDCD5的表达,抑制miR-30b-3p表达逆转了木棉花提取物对骨关节炎软骨细胞的凋亡抑制作用。结论:木棉花提取物可抑制骨关节炎软骨细胞IL-6、IL-1β的分泌及其凋亡,其机制可能与调控miR-30b-3p/PDCD5的表达有关。     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。