五子衍宗方对生精障碍模型大鼠睾丸TGF-β_1/Smads信号转导通路的影响

目的:观察五子衍宗方对生精障碍模型大鼠睾丸TGF-β1/Smads信号转导通路的影响,探讨其治疗男性不育症的作用机制。方法:采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、甲基睾酮组和五子衍宗方低、高剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠按醋酸棉酚50mg/kg体质量灌胃给药,制备生精障碍模型。正常组和模型组大鼠灌服蒸馏水,甲基睾酮组大鼠灌服甲基睾酮混悬液,五子衍宗方低、高剂量组大鼠分别给予低、高浓度(含1.75g、3.5g生药/mL)五子衍宗方混悬液灌胃,每天1次,连续30天。光镜下观察大鼠睾丸组织结构变化,免疫组化法检测大鼠睾丸组织TGF-β1、Smad2、Smad4蛋白表达量。结果:棉酚可造成大鼠睾九曲细精管萎缩、退化,管壁变薄,生精细胞减少,排列紊乱,精子发生障碍;睾丸组织TGF-β1表达上调(P0.01),Smad2、Smad4表达下调(P0.01)。五子衍宗方能显著下调大鼠睾丸TGF-β1表达(P0.01),上调Smad2、Smad4表达(P0.01),拮抗棉酚造成的大鼠睾丸组织结构损伤。结论:通过调控TGF-β1/Smads信号转导通路,改善大鼠睾丸的生精功能,可能五子衍宗方治疗不育症的作用机制之一。     

五子衍宗方的临床运用及现代研究

目的：综述近年来五子衍宗方的临床运用、药理、质控等研究概况。方法：对10余年来该方的临床运用和药理研究文献进行了回顾和总结。结果：该方现代临床用于治疗生殖泌尿、内科及抗衰老、轻度认知障碍等多种疾病;药理研究表明具有提高生殖器官重量、增加雄性激素分泌,降低血糖,提高机体免疫功能,抗衰老及增强学习记忆能力等作用,长期毒性研究证实安全无毒;初步建立五子衍宗丸质量控制标准。结论：五子衍宗方具有多种临床用途,其中促进学习记忆的作用机制仍需进一步研究。     

加味五子衍宗方对记忆障碍小鼠空间学习记忆成绩的影响

[目的]初步探讨加味五子衍宗方改善学习记忆障碍的物质基础及其作用机制。[方法]以东莨菪碱建立小鼠记忆获得障碍模型,以Morris水迷宫系统检测模型小鼠空间辨别性学习记忆成绩。[结果]模型组小鼠定位航行实验搜索策略、空间探索实验穿越目标区域次数成绩较空白对照组明显减退(P<0.05),而加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分处理的动物上述成绩显著优于模型组(P<0.05),其中总多糖组分的作用有优于原复方的趋势。[结论]提示加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分对中枢胆碱能系统损伤的学习记忆障碍有保护作用。该复方总黄酮、总多糖组分是其促智的有效组分,其中总多糖组分的作用更为突出。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠DNA损伤的影响

目的观察五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)致小鼠DNA损伤的影响,并探讨其作用机制。方法将BalB/c小鼠随机分为正常组、模型组、五子衍宗方低剂量组、五子衍宗方高剂量组。五子衍宗方低、高剂量组预给药1周后,除正常组外,其余各组腹腔注射CTX 100 mg/kg造模,隔日1次,共3次,同时五子衍宗方低、高剂量组继续给药,末次给予CTX后12 h处死小鼠,分离血清,ELISA检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量,应用单细胞凝胶电泳技术检测骨髓细胞DNA损伤。结果五子衍宗方低、高剂量组能够降低血清中8-OHdG的含量,使小鼠骨髓细胞彗星图像的Olive尾矩、尾距、尾长和尾部DNA含量降低。结论五子衍宗方对CTX致小鼠DNA损伤具有较好的保护作用。     

五子衍宗方对实验性隐睾小鼠生精功能的保护作用

目的:研究五子衍宗方对实验性隐睾小鼠生精功能的保护作用。方法:取5～6周龄BALB/c小鼠,手术建立小鼠隐睾模型,分为假手术组,模型组,五子衍宗方低、高剂量(100,200 mg.kg-1)组,手术14 d后给药,用药14 d,于末次给药24h后检测小鼠的睾丸质量、精子密度、活率,光、电镜观察睾丸组织学结构的变化,检测小鼠睾丸内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:五子衍宗方能够显著增加模型小鼠的睾丸质量(P<0.01),明显增加精子密度(P<0.05),提高精子活率(P<0.01),改善隐睾小鼠睾丸组织的病理性变化,显著升高SOD和GSH-Px活性(P<0.05或P<0.01),显著降低MDA含量(P<0.01)。结论:五子衍宗方提高睾丸组织内抗氧化损伤能力,从而减轻隐睾对小鼠睾丸生殖功能的损害。     

五子衍宗方通过调节miR-let-7-Imp轴对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

目的:通过miR-let-7-Imp轴探讨五子衍宗方(WZ)对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制。方法:将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WZ低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WZ低、中、高剂量组分别灌胃给药0. 4,0. 8,1. 6 g·kg~(-1),青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测miR-let-7,Imp mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光检测睾丸精原干细胞增殖相关信号通路磷酸化(p)-两面神激酶2(JAK2)/JAK2,p-信号传导及转录激活因子3(STAT3)/STAT3蛋白的表达与定位,免疫荧光检测精原干细胞数量及增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学变化。结果:Real-time PCR结果显示,与青年组比较,老龄模型组miR-let-7 mRNA表达水平显著升高(P 0. 01),Imp mRNA表达水平显著降低(P 0. 01),而给予WZ干预后,miR-let-7 mRNA水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01),Imp mRNA表达水平明显升高(P 0. 05); Western blot和免疫荧光结果显示,精原干细胞增殖相关信号通路蛋白p-JAK2,p-STAT3表达降低(P 0. 01),WZ处理后,p-JAK2,p-STAT3表达明显增多(P 0. 05,P 0. 01);免疫荧光结果显示,与青年组比较,老龄模型组中精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,WZ处理后,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调; HE结果也显示,WZ能够明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态结构变化。结论:WZ能够促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内miR-let-7-Imp轴有关。     

加味五子衍宗方的神经保护作用机制研究现状

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性记忆认知障碍、行为异常、人格改变为主要特征的神经退行性疾病,目前全球对AD的治疗效果不佳,其原因主要在于AD发病因素复杂,干预过晚,越来越多的学者提出治疗AD应及早着手,多靶点干预。本课题组在中医"补肾益精促智"和"未病先防"原则的指导下,采用现代生物医学技术,对补肾益精促智方"加味五子衍宗方"防治阿尔茨海默病前期——轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)的作用及机制进行了深入研究。临床研究证实该方可改善MCI患者的临床症状,延缓MCI患者向AD发展。高效液相色谱-光电二极管阵列检测器-串联质谱分析方法共检出58种复方主要成分,并对其饮片来源进行了归属。鉴定或推测了其中51种成分的结构,建立了加味五子衍宗方的HPLC指纹图谱。整体及离体药理研究证实加味五子衍宗方及其有效组分可有效改善AD大鼠的行为学症状,并可从多条通路、多个靶点发挥调节中枢胆碱能系统,拮抗Aβ神经毒性、氧化应激损伤及炎症损伤等AD致病因素的作用,这为该方的科学应用及开发提供了实验室依据。     

加味五子衍宗方总黄酮对大鼠海马锥体细胞VGCC通道的影响

目的:探讨加味五子衍宗方总黄酮成分对Aβ_(25-35)作用后的大鼠海马CA1区锥体神经元电压门控钙通道电流的作用.方法:应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元I_(Ca)电流,采用内向电流的幅度作为观察指标,观察模型药物及干预药物对其的作用.采用出生7 d的乳鼠取海马后制成脑片,选取立体感强、状态好的锥体细胞形成全细胞膜片钳记录,从-50 mV到+50 mV范围(步进为5 mV)一系列去极化电压脉冲刺激(脉冲宽度500 ms),以激发出电压依赖性的内向钙离子电流.记录电流后加入Aβ_(25-35)后,再加入总黄酮进行干预.结果:Aβ_(25-35)淀粉蛋白可以通过增强I_(Ca)可引起胞内钙超载,正常幅度平均为-(157.1±19.9)pA,Aβ_(25-35)作用后增大为-(323.2±23.4)pA,125,250,500 mg·L~(-1)的总黄酮作用之后,分别下降为-(257.9±31.6),-(196.4±29.8),-(169.3±34.0)pA.结论:引起胞内钙离子超载可能是Aβ_(25-35)产生神经毒性作用的机制之一,加味五子衍宗方总黄酮成分可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用.     

基于内质网应激研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用

基于内质网应激(ERS)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用。将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg^-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg^-1),另购买2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只。给予普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用。苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态;Western blot法检测睾丸组织中内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6及其介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。HE结果显示,五子衍宗方能明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态变化。Western blot结果显示,与自然衰老组相比,五子衍宗方能显著升高自然衰老大鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6的表达水平;显著降低内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。综上所述,五子衍宗方可通过调节内质网应激减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用

目的研究五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)诱导的小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,五子衍宗方低、高剂量组,每组10只。五子衍宗方组预给药一周之后,除正常对照组之外,其余各组注射CTX(100 mg/kg)隔天给药共3次,末次注射CTX 12 h后处死小鼠。检测小鼠的肝脏指数,血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活力。硫代巴比妥酸法检测肝脏中丙二醛(MDA)的量,ELISA检测肝脏中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的量,单细胞凝胶电泳技术检测肝脏细胞的DNA损伤。结果五子衍宗方能够升高小鼠的肝脏指数,降低ALT、AST的活力,降低肝脏中的8-OHd G、MDA的量,五子衍宗方组均可以使小鼠Olive尾矩、尾长、尾距和尾部DNA%降低。结论五子衍宗方能拮抗CTX造成的小鼠肝脏细胞的DNA损伤,提高肝脏的抗氧化能力。     

五子衍宗汤加味治疗男性不育及对精子质量和激素水平的影响

目的:观察五子衍宗汤加味治疗男性不育精子活动率和活动力(a%+b%)以及对激素水平的影响。方法:将98例精子活动质量低下患者随机分为治疗组50例和对照组48例,治疗组采用五子衍宗汤加味,对照组采用六味地黄丸治疗,2组均以3个月为1个疗程。观察2组治疗前后精子活动率和活动力(a%+b%)、卵泡刺激素(Fllicle-SimulatingHrmone,FSH)、黄体生成激素(Luteinizing hormone,LH)、睾酮(Testosterone,Tes)的变化,并重点对其临床总疗效观察。结果:2组临床总有效率分别为76.00%和54.89%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组治疗后激素FSH、LH、Tes均有显著调节。结论:五子衍宗汤加味能有效促进生殖系统附属性腺功能分泌,从而改善了精子活动质量,促进下丘脑-垂体-性腺轴功能,有利激素水平调节;同时表明中医经典中药方剂具有类激素对精子生长、获能以及提高精子质量的机理研究颇有重要的参考价值。     

六味地黄汤对生精障碍模型大鼠精子及其血清NO的影响

目的:观察六味地黄汤对生精障碍模型大鼠促进生精的作用及其对大鼠血清一氧化氮(NO)的影响。方法:用醋酸棉酚建造Wistar雄性大鼠生精障碍模型后,用分煎和合煎的六味地黄汤灌胃给药治疗,以市售六味地黄丸和甲基睾酮为对照,计数各组精子数量,观察各组精子的活力,测定大鼠血清NO水平。结果:模型组大鼠的精子数量与六味地黄汤分煎组、六味地黄汤合煎组、市售六味地黄丸对照组、西药对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);各治疗组、对照组的精子活力也显著优于模型组。模型组大鼠血清NO水平与各组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);血清NO水平和精子数量、精子质量基本成正相关。结论:六味地黄汤对生精障碍大鼠有显著的促生精作用,同时可升高大鼠血清NO水平,显著提高大鼠精子的质量。     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的 :研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果 :五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失 (P <0 0 1) ,提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成 (P <0 0 5,P <0 0 1) ;枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失 (P<0 0 5,P <0 0 1)。结论 :五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

麻杏石甘汤对哮喘大鼠白三烯B4、C4表达的影响

目的:观察麻杏石甘汤对哮喘大鼠白三烯B4、C4表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制。方法:将30只大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、哮喘模型组及麻杏石甘汤治疗组,用ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织匀浆中白三烯B4、C4表达水平,并对BALF进行白细胞计数。结果:模型组白细胞计数高于正常组和治疗组(P<0.05);模型组白三烯B4、C4表达明显高于正常组(P<0.01),治疗组明显低于模型组(P<0.01)。结论:麻杏石甘汤可抑制哮喘大鼠白三烯B4、C4的表达。     

枳术丸煎剂与枳术汤对模型动物胃肠运动影响的研究

目的探讨枳术丸与枳术汤对胃肠运动减弱模型动物的影响。方法实验组分剂量灌胃给药5d后，吗啡皮下注射造模，同时给予半固体糊灌胃，20min后处死剖腹，取胃肠测算胃内残留率与小肠推进率。结果枳术丸大、小剂量组及枳术汤大、小剂量组的胃内残留率与模型组没有差异；枳术丸与枳术汤大剂量组的小肠推进率高于模型组，有非常显著意义。结论枳术丸与枳术汤对吗啡造成的胃排空迟缓没有改善，但大剂量能够对抗吗啡造成的小肠推进迟缓。     

六味地黄汤对2型糖尿病大鼠环磷酸腺苷及脂肪磷酸二酯酶3B的影响

目的观察六味地黄汤对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠环磷酸腺苷(c AMP)及脂肪组织磷酸二酯酶3B(PDE3B)的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为空白组和造模组,造模组采用高脂高糖喂养加腹腔注射STZ造模。将成模大鼠分为模型组、罗格列酮组、六味地黄汤组。各给药组每日给予相应药物灌胃,模型组和空白组给予等量生理盐水,连续30 d。常规检测大鼠空腹血糖(FBG),ELISA检测大鼠血清c AMP和胰岛素(INS)水平,Western Blot检测脂肪组织PDE3B蛋白表达,实时荧光定量PCR检测脂肪组织PDE3B m RNA表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠FBG、FINS水平降低(P0.05,P0.01);六味地黄汤组大鼠脂肪组织PDE3B蛋白及m RNA表达升高、血清c AMP浓度降低(P0.01)。结论六味地黄汤可上调脂肪组织PDE3B因子表达,降低c AMP浓度,这可能是其改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用机制之一。     

热哮方对哮喘大鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 观察热哮方对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响,探讨热哮方的作用机制.方法 选用Wistar大鼠40只,随机分为窄白对照组、模型组、热哮方组、普米克令舒组、热哮方联合普米克令舒组.制作哮喘动物模型,分别观察不同实验药物对大鼠血清白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(INF-γ)含量、中性粒细胞蛋白酶水解酶(NE)、基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制剂(TIMP-1)、大鼠肺组织病理形态学改变的影响.结果 各用药组哮喘大鼠血IL-4、INF-γ、NE均降低;TIMP-1含量降低及TIMP-1/MMP-9比值得到改善;气道黏膜及平滑肌厚度变薄,气道炎症细胞的浸润改善.且热哮方联合普米克令舒组效果优于热哮方组及普米克令舒组.结论 热哮方能减轻气道炎症,抑制气道重塑,且热哮方联合普米克令舒效果最佳.     

四君子汤对脾虚证大鼠血清性激素和甲状腺激素水平的影响

目的:观察四君子汤对实验性脾虚证大鼠血清性激素和甲状腺激素水平的影响。方法:选用SD大鼠,随机分为正常对照组(n=10),脾虚模型组(n=12),四君子汤组(n=10),采用大黄复制脾虚证动物模型,观察各组动物血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)水平的变化。结果:脾虚模型组大鼠血清E2含量比正常对照组升高(P<0.01),T含量降低(P<0.05),T3、T4含量比正常对照组下降(P<0.01)。而四君子汤能降低实验性脾虚证大鼠体内E2、E2/T含量(P<0.05~0.01),提高T3、T4和rT3的含量(P<0.01)及胸腺、肾脏的脏器指数(P<0.05)。结论:四君子汤能改善脾虚证大鼠的脾虚症状,其作用机理与调节性激素与甲状腺激素水平有关。     

疏肝、健脾、疏肝健脾方药对肠易激综合征模型大鼠的治疗作用及机理探讨

目的:观察疏肝、健脾、疏肝健脾方药对肠易激综合症(IBS)模型大鼠的治疗效果,并探讨其作用机理.方法:采用新生鼠母子分离复合避水应激大鼠模型,测定用药前后大鼠腹部收缩反射痛阈值、应激诱导的排便粒数及结肠中五羟色胺与P物质的含量变化.结果:柴胡疏肝散、痛泻要方均能明显提高大鼠痛阈值,显著减少应激诱导的排便粒数,降低结肠中五羟色胺与P物质的含量,其中痛泻要方的作用优于柴胡疏肝散.结论:疏肝健脾的代表方痛泻要方对IBS模型大鼠具有显著的治疗作用,其疗效优于单纯疏肝方药柴胡疏肝散;其作用机理可能与降低结肠中5-HT、SP含量有关.     

抑睾调经汤对多囊卵巢综合征模型大鼠排卵功能障碍的干预作用

目的:研究抑睾调经汤对多囊卵巢综合征模型大鼠排卵功能障碍的干预作用,为健脾化痰,活血化瘀法应用于PCOS的治疗提供科学依据.方法:将雌性SD大鼠60只随机分为正常对照组、模型对照组、达英-35对照药组、抑睾调经汤高剂量治疗组、抑睾调经汤低剂量治疗组五组各12只,采用Poresky L法,皮下注射绒毛膜促性腺激素(HCG)、中性胰岛素,制备出PCOS模型大鼠.各组动物等容灌胃,正常对照组和模型对照组给予生理盐水,达英-35组、抑睾调经汤高、低剂量分别灌胃14 d,日2次.观察大鼠胰岛素(INS)、黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、卵巢病理组织学的变化.结果:①抑睾调经汤组可显著降低PCOS模型大鼠血清LH水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);并能升高FSH,与模型组比较差异有统计学意义.②抑睾调经汤组能明显降低PCOS模型大鼠血清INS水平,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).③抑睾调经汤组能使PCOS模型大鼠恢复排卵,增加卵泡壁颗粒细胞层数和黄体组织数量.结论:抑睾调经汤具有调整下丘脑—垂体—卵巢轴,降低胰岛素水平,恢复排卵的作用.