线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂对在体大鼠肺缺血后处理的作用及其机制

目的 探讨缺血后处理(IPO)对大鼠在体肺缺血-再灌注损伤(I/R)的保护作用及线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)在缺血后处理效应中的作用.方法 将Wistar大鼠35只随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、缺血再灌注损伤+5-羟基葵酸盐组(I/R+5-HD组)、缺血后处理+5-羟基葵酸盐组(IPO+5-HD组).观察各组肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、湿/干比值(W/D)以及病理形态学改变.结果 I/R组与Sham组比较MDA含量增加[(5.07±1.60)nmol/mg prot比(1.43±0.41)nmol/mgprot,P＜0.01],SOD活性减低[(12.38±2.24)U/mg prot比(45.51±5.42)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值增高(5.45±0.82比3.05±0.47,P＜0.01),肺组织形态及超微结构明显受损;IPO+5-HD组与IPO组比较MDA含量增加[(3.74±0.71)nmol/mg prot比(2.60±0.43)nmol/mg prot,P＜0.01],SOD活性减低[(22.91±2.71)U/mg prot比(28.74±2.03)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值增高(4.64±0.79比3.89±0.60,P＜0.01),肺组织形态及超微结构明显受损;IPO组与I/R组比较,肺组织MDA含量减少[(2.60±0.43)nmol/mg prot比(5.07±1.60)nmol/mg prot,P＜0.01],SOD活性增高[(28.74±2.03)U/mg prot比(12.38±2.24)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值减低(3.89±0.60比5.45±0.82,P＜0.01),肺组织病理形态学改变轻于I/R组;I/R+5-HD组与I/R组比较,肺组织MDA含量[(5.14±1.30)mol/mg prot比(5.07±1.60)mol/mg prot,P＞0.05)、SOD活性[(11.65±1.82)U/mg prot比(12.38±2.24)U/mg prot,P＞0.05]、W/D比变化(5.54±0.61比5.45±0.82),差异无统计学意义(P＞0.05),肺组织病理形态学改变无明显差异.IPO+5-HD组的各项指标介于IPO组和I/R组之间.结论 缺血后处理能减轻大鼠在体肺缺血再灌注损伤,mitoKATP参与了肺缺血后处理效应.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of ischemic postconditioning (IPO) on lung ischemic reperfusion (L/R) in rats in vivo and the mechanism of mitochondrial ATP-sensitive potassium channel (mitoKATP) blocker in the ischemic postconditioning. Methods Thirty five Wistar rats were randomly divided into 5 groups: sham group, I/R group, ischemic postconditioning (IPO) group, I/R +5-hydroxydecanoate (I/R + 5-HD) group, IPO + 5-HD group. The concentration of malondialdehyde (MDA) and activity of superoide dismutase (SOD) were determined in the lung homogenate, wet to dry weight ratio (W/D) was measured and pathological changes were also observed. Results The levels of MDA[(5.07±1.60) vs (1.43 ±0.41) nmol/mg prot,P＜0. 01]and W/D (5.45 ±0.82 vs 3.05 ±0. 47,P ＜0. 01 ) were increased significantly in I/R group as compared with sham group, while the activity of SOD[( 12. 38 ±2. 24) vs (45.51 ±5.42) U/mg prot,P ＜0. 01]was decreased, and the injury of lung tissues was significantly aggravated in IPO + 5-HD group as compared with IPO group[MDA: (3.74 ±0. 71 ) nmol/mg prot vs (2. 60 ± 0. 43 ) nmol/mg prot , P ＜ 0. 01]; W/D: 4. 64 ± 0. 79 vs 3. 89 ± 0. 60,P＜0.01; SOD:[(22.91 ±2.71) U/mg prot vs (28.74±2.03) U/mg prot,P＜0. 01]. The levels of MDA[(2.60±0.43) vs (5.07 ±1.60) nmol/mg prot,P＜0. 01]and W/D (3.89 ±0.60 vs 5.45 ±0. 82,P ＜0. 01 ) were decreased significantly in IPO group as compared with I/R group, the activity of SOD[(28.74±2.03) vs (12.38 ±2.24) U/mg prot,P＜0. 01]increased and lung tissue histological damage attenuated. The difference in MDA[(5.14 ± 1.30) vs (5.07 ± 1.60) nmol/mg prot, P ＞ 0. 05],W/D (5.54±0.61 vs5.45 ±0.82,P＞0.05) and SOD[(11.65 ±1.82) vs (12.38 ±2.24) U/mgprot,P ＞ 0. 05]levels had no statistical significance between I/R + 5-HD group and I/R group, and the injury of lung tissues had no significant difference too. Each index in IPO + 5-HD group was between IPO and I/R groups. Conclusion Ischemic postconditioning can attenuate the lung I/R injury, and mitoKATP plays a vital role in the protective procession of ischemic postconditioning on lung ischemic reperfusion.     

他达拉非对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨5型磷酸二酯酶抑制剂他达拉非在大鼠睾丸缺血再灌注模型中的保护作用。方法:将84只健康成年雄性SD大鼠随机分成4组,A组:假手术组;B组:小剂量他达拉非组;C组:大剂量他达拉非组;D组:安慰剂组。每组21只,B、C、D组建立右侧睾丸扭转复位模型(720°,2 h)。术后立即予A、B组按他达拉非剂量为0.5 mg/(kg·d)灌胃,C组按他达拉非剂量为2 mg/(kg·d)灌胃,D组用等剂量的生理盐水灌胃,用药3、7、14 d后,取各组7只大鼠扭转侧睾丸,检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并光镜检测睾丸组织病理学参数。结果:B组[3 d:(254.46±7.43)n U/mg prot;7 d:(278.49±8.33)n U/mg prot;14 d:(317.99±3.31)n U/mg prot]、C组[3 d:(277.12±8.80)n U/mg prot;7 d:(309.40±2.14)n U/mg prot;14 d:(320.39±4.72)n U/mg prot]SOD活性均显著高于同期D组[3 d:(223.21±4.65)n U/mg prot;7 d:(231.45±4.16)n U/mg prot;14 d:(248.28±5.74)n U/mg prot],MDA含量均显著低于同期D组。C组3、7 d的SOD活性显著高于同期B组(P0.01),而MDA含量显著低于同期B组(P0.01),14 d时的SOD与MDA两组间没有显著性差异(P0.05)。睾丸组织的病理学改变:A组睾丸组织未见明显损伤,B组3、7、14 d之间病理学参数(生精上皮层数、睾丸结构得分、生精小管直径)存在显著差异(P0.01),B组14 d时和C组7 d时测得的生精上皮层数、睾丸结构评分、生精小管直径与A组14 d时没有显著性差异。结论:他达拉非可明显改善睾丸扭转后的缺血再灌注损伤,改善程度与用药时间、用药剂量呈明显的相关性。     

色甘酸钠对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨色甘酸钠对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康清洁级雄性蒙古沙土鼠24只,体重55～70 g,随机分为3组(n=8):假手术组(SH组)、缺血再灌注组(M组)及缺血再灌注+色甘酸钠组(CS组).分离双侧颈总动脉,夹闭10 min后恢复血流2 h,建立前脑缺血再灌注模型.SH组仅游离双侧颈总动脉,但不阻断脑血流;CS组于再灌注即刻和再灌注1 h时,分别经舌静脉注射色甘酸钠25 mg/kg(生理盐水稀释为25 mg/ml);M组给予等容量生理盐水.再灌注2 h时处死大鼠,取脑组织,光镜下观察病理学结果,并进行病理学评分;测定脑组织水、丙二醛(MDA)及组胺含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 与SH组比较,M组病理学评分、脑组织水、MDA及组胺含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01);与M组比较,CS组病理学评分、脑组织水、MDA及组胺含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01).结论 色甘酸钠可减轻沙土鼠前脑缺血再灌注损伤,其机制可能与减少组胺释放和减轻氧化应激反应有关.     

虾青素在奥硝唑致少弱精子症大鼠氧化损伤中的保护作用研究

目的:探讨虾青素(AST)对奥硝唑(ORN)致少弱精子症大鼠精子质量的改善作用及其机制。方法:40只成年雄性SD大鼠,随机分成5组,每组8只。分别为A组(溶剂对照组):0.5%羧甲基纤维素钠溶剂+1 ml玉米油、B组(ORN低剂量造模组):ORN 400 mg/(kg·d)、C组(ORN高剂量造模组):ORN 800 mg/(kg·d)、D组(ORN低剂量造模+AST治疗组):ORN 400 mg/(kg·d)+AST 20 mg/(kg·d)、E组(ORN高剂量造模+AST治疗组):ORN 800 mg/(kg·d)+AST 20 mg/(kg·d),灌胃3周后水合氯醛腹腔麻醉大鼠;取1侧附睾尾部检测精子浓度和活力,另1侧附睾组织匀浆,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与A组相比,B组附睾尾精子活力,附睾GSH-Px、SOD活性显著降低,MDA含量显著上升(P﹤0.05);C组附睾尾精子活力、浓度、睾丸系数,附睾组织GSH-Px、GR、CAT、SOD活性均显著降低,而MDA含量显著上升(P﹤0.05)。AST治疗组:与B组相比,D组附睾尾精子活力和附睾组织SOD活性显著增加[(45.3±8.7)%vs(66.3±8.9)%;(116.7±25.3)U/mg prot vs(146.1±23.8)U/mg prot,P﹤0.05],而MDA含量显著下降[(1.68±0.45)nmol/mg prot vs(1.19±0.42)nmol/mg prot,P﹤0.05];与C组相比,E组实验后体重增量、精子活力显著增加,而MDA含量显著下降[(89.0±9.5)%vs(99.9±4.1)%;(17.9±3.5)%vs(27.3±5.3)%;(2.03±0.30)nmol/mg prot vs(1.52±0.41)nmol/mg prot,P﹤0.05]。结论:AST可提高ORN致大鼠少弱精子症模型的精子质量,其机制可能是提高了大鼠附睾的抗氧化能力。     

盐酸戊乙奎醚对心肺转流心瓣膜置换术患者脑氧代谢功能的影响

目的 观察盐酸戊乙奎醚对心肺转流(CPB)心瓣膜置换术脑氧代谢功能的影响.方法 60例行心瓣膜置换术患者,随机均分为三组:麻醉诱导后Ⅰ组、Ⅱ组分别静脉注射盐酸戊乙奎醚0.04 mg/kg和0.02 mg/kg,Ⅲ组注射等容量生理盐水.采集诱导后即刻(T1)、阻断升主动脉前(T2)、心脏复跳后(T3)、停止CPB(T4)及术毕(T5)桡动脉及颈静脉球部血样行血气分析,记录并计算颈内动脉、静脉乳酸含量及差值(Laca、Lacjv、Laca-jv)、血氧分压及差值(PaO、PjvO2、Pa-jvO2)、二氧化碳分压及差值(PaCO2、PjvCO2、Pa-jvCO2)、血氧饱和度及差值(SaO2、SjvO2、Sa-jvO2)、颈内动脉、静脉血氧含量及差值(CaO2、CjvO2、Ca-jvO2)及脑氧摄取率(CEO2).结果 与T1时比较,T3～T5时三组Lacjv、Laca-jv均增高,T5时三组Pa-jvO2增高(P＜0.05).Ⅰ组的Lacjv、Laca-jv低于Ⅱ组和Ⅲ组,而SjvO2、Sa-jvO2高于Ⅱ组和Ⅲ组(P＜0.05);T3～T5时Ⅱ组Lacjv、Laca-jv低于Ⅲ组(P＜0.05).T4、T5时Ⅲ组Pa-jvO2诋于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05).与T1时比较,T3～T5时三组CaO2、CjvO2、CEO2值均明显降低(P＜0.05).T3～T5时Ⅰ组Ca-jvO2、CFO2高于Ⅱ组、Ⅲ组(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚可有效提高CEO2,增加脑组织氧含量并促进脑能量代谢,对脑组织氧供需平衡的维护起到积极作用.     

不同麻醉对腹腔镜胆囊切除术患者二氧化碳气腹时脑氧合的影响

目的 观察不同麻醉对腹腔镜胆囊切除术患者二氧化碳气腹时脑氧合的影响。方法 腹腔镜胆囊切除术患者60例，ASAⅠ级或Ⅱ级，随机分为3组（n=20）：异氟醚组（Ⅰ组）、硬膜外复合异氟醚组（Ⅱ组）和硬膜外复合异丙酚组（Ⅲ组）。分别于气腹前即刻、气腹10、30min取桡动脉血和颈内静脉球部静脉血行血气分析，记录动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、动脉血氧饱和度（SaO2）、血红蛋白（Hb）浓度、颈内静脉血氧分压（PjvO2）和颈内静脉血氧饱和度（SjvO2）。根据Fick公式分别计算脑动脉和颈内静脉血氧含量及脑动静脉血氧含量差（Da-jvO2）。结果 与气腹前即刻比较，Ⅰ组、Ⅱ组气腹10、30min时SjvO2升高、Da-jvO2降低（P〈0．01）;与Ⅲ组比较，气腹10、30min时Ⅰ组、Ⅱ组SjvO2升高、Da-jvO2降低（P〈0.05）;与Ⅱ组比较，气腹10、30 min时Ⅰ组SjvO2升高、Da-jvO2降低（P〈0．05）。结论 硬膜外复合异丙酚静脉麻醉可改善术中脑组织的氧合，是腹腔镜手术患者较适宜的麻醉方法。     

主动脉弓置换手术中的选择性脑正行灌注效果及影响因素

主动脉弓置换术是常见的大血管手术之一。由于将头臂血管重新吻合到替换的主动脉弓，因此术中需要中断头部血流。目前临床上有多种技术用于此期间的脑保护，如深低温停循环(DHCA)、选择性脑逆行(RCP)或正行灌注(ASCP)等。后者是目前最为提倡的方法之一。本研究拟以颈静脉窦血氧饱和度(sjvO2)和氧分压(PjvO2)(温度校正和非校正的)为指标，观察主动脉弓置换术中行ASCP时，灌注流量、灌注血中的氧分压(PaO2)和二氧化碳分压(PaCO2)对其影响，为合理应用该技术提供依据。     

依达拉奉对深低温停循环肺的保护作用

目的 观察深低温停循环(DHCA)肺缺血期间经肺动脉灌注含依达拉奉保护液对术后肺组织及肺功能的影响,并探讨其可能的机制. 方法 24只健康新西兰大耳白兔随机分为3组,对照组:建立DHCA体外循环(CPB)模型;低钾右旋糖酐(LPD)组:在DHCA开始后经肺动脉灌注LPD保护液;依达拉奉组:在DHCA开始后经肺动脉灌注含依达拉奉(5 mg/kg)的LPD保护液.观察3组基础状态、恢复通气时、恢复通气1h、2h的肺氧合指数和肺顺应性变化,比较3组术后肺功能的变化,并检测肺静脉血中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量.3组兔均于术后处死,取肺组织行HE染色、免疫组化检测,观察肺组织结构、炎症反应情况,采用透射电子显微镜观察肺组织超微结构改变. 结果 3组肺氧合指数、肺顺应性、MDA和SOD在基础状态下差异均无统计学意义(P＞0.05),恢复通气后3组氧合指数和肺顺应性均有不同程度恶化,对照组和LPD组氧合指数和肺顺应性于恢复通气时、恢复通气1h、2h均明显低于依达拉奉组[恢复通气时氧合指数对照组与依达拉奉组比较:(198.25±11.02)mm Hg vs.(244.87±13.05) mm Hg;恢复通气1h肺顺应性对照组与依达拉奉组比较:(45.88±1.64) ml/cm H2O vs.(59.75±2.38) ml/cm H2O;P＜0.05].CPB结束后3组MDA浓度均有不同程度上升,对照组和LPD组血MDA浓度于CPB结束、CPB结束1h、2h均明显高于依达拉奉组(P＜0.05).CPB结束后3组SOD活性均有不同程度降低,对照组和LPD组血SOD活性于CPB结束、CPB结束1h、2h均明显低于依达拉奉组(P＜0.05).HE染色显示依达拉奉组肺组织结构清晰、红细胞渗出少、炎症细胞浸润较少、肺泡内液体聚集少;免疫组化检测显示依达拉奉组IL-6的光密度积分(IOD)值与LPD组(14.44±1.75 vs.20.18±2.22,P＜0.05)和对照组比较明显降低.电子显微镜观察依达拉奉组基膜结构完整,血气屏障结构清晰,Ⅱ型上皮细胞数量明显增多,胞质内线粒体及板层小体丰富,未见肿胀;而LPD组和对照组肺组织均有不同程度的破坏. 结论 采用肺动脉灌注低温肺组织保护液可明显减轻DHCA CPB中的肺组织损伤,在低温保护液中加入依达拉奉可进一步减轻肺组织损伤,保护肺氧合功能.     

肠缺血再灌注对大鼠脑组织小胶质细胞活化的影响

目的 探讨肠缺血再灌注对大鼠脑组织小胶质细胞活化的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠128只,体重250-300 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=64):假手术组(S组)和肠缺血再灌注组(I/R组).I/R组采用夹闭肠系膜上动脉90 min后再灌注的方法制备肠缺血再灌注损伤模型.于再灌注2、6、24、48 h时观察肠粘膜病理学结果,并行Chiu评分;取脑组织,计数活化的小胶质细胞,计算小胶质细胞活化率,测定脑组织活性氧(ROS)、MDA含量及SOD活性、NO含量、一氧化氮合酶(NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性.结果 与S组比较,I/R组肠组织Chiu评分、脑组织活化的小胶质细胞数、小胶质细胞活化率、ROS、NOS和iNOS活性、MDA和NO含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01);I/R组再灌注6-48 h脑组织ROS、NOS和iNOS活性、MDA和NO含量依次升高,脑组织SOD活性及肠组织Chiu评分依次降低,脑组织活化的小胶质细胞和小胶质细胞活化率于再灌注24h时达峰值(P＜0.05或0.01).结论 肠缺血再灌注可通过激活脑组织小胶质细胞,激活NOS和促进ROS生成,从而诱发脂质过氧化反应,该作用作为肠缺血再灌注诱发大鼠脑损伤的机制.     

罗布麻宁治疗少弱精子症模型小鼠的作用机制

目的:探讨罗布麻宁在少弱精子症模型小鼠中的治疗作用及其治疗机制。方法:40只雄性小鼠随机分为空白组、模型组、罗布麻宁低剂量治疗组(200μg/ml)和高剂量治疗组(1 000μg/ml),每组10只。除空白组外的各组小鼠腹腔注射环磷酰胺60 mg/(kg·d),连续5 d,构建少弱精子症小鼠模型;罗布麻宁低、高剂量治疗组小鼠给予不同浓度罗布麻宁饮用水,空白组和模型组给予等量洁净水,每只小鼠饮水量(5.1±0.4)ml/d,给予30 d的治疗后,检测小鼠精子质量、睾丸组织病理改变以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化。结果:罗布麻宁治疗后,少弱精子症小鼠的精子浓度由模型组的(2.94±0.57)×106/ml升高到低剂量治疗组的(3.88±0.43)×10~6/ml和高剂量治疗组的(4.12±0.53)×10~6/ml,前向运动精子百分率由模型组的(6.25±3.40)%升高到低剂量治疗组的(8.03±6.71)%和高剂量治疗组的(17.50±2.74)%;病理分析发现治疗组小鼠的睾丸组织损伤有所恢复,小鼠睾丸组织中的MDA水平由模型组的(1.34±0.22)nmol/mg prot分别降低到罗布麻宁低剂量治疗组的(1.13±0.19)nmol/mg prot和高剂量组的(0.98±0.19)nmol/mg prot,SOD水平由模型组的(26.46±4.36)U/mg prot提高到罗布麻宁低剂量治疗组的(32.46±3.28)U/mg prot和高剂量组的(37.39±5.77)U/mg prot,且差异显著(P均0.05)。结论:罗布麻宁可以显著提高少弱精子症小鼠的精子质量,可能是通过清除活性氧自由基,提高机体抗氧化能力实现的。罗布麻宁可用于男性不育的治疗和预防。     

不同脑保护方法下主动脉术后脑脊髓液S100β及IL-6的变化

目的通过对主动脉手术围手术期脑脊髓液生化指标变化的比较,评价两种不同脑保护方法的效果。方法2004年11月至2005年4月接受手术治疗的主动脉瘤患者14例,其中I型主动脉夹层11例,Ⅲ型主动脉夹层2例,假性胸腹主动脉瘤1例。在单纯深低温停循环（DHCA）下行胸降主动脉替换5例（DHCA组）;在DHCA结合选择性顺行脑灌注（ASCP）下行主动脉弓部置换9例（ASCP组）。于术前及术后0、6、12、24、48和72h检测脑脊髓液S10013蛋白（S100β）及白细胞介素6（IL-6）水平。结果ASCP组停循环时间长于DHCA组。两组脑脊髓液中S100β及IL-6的术前水平无显著差别。两组S100β于术后12h达到峰值;术后6—72h各时间点两组S100β水平差异有统计学意义（P〈0．05）。两组IL-6分别于术后12h和0h达到峰值;术后6h及12h两组IL-6水平差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在两种脑保护方法下主动脉手术中发生的缺氧性脑损伤均属轻型。DHCA结合单侧ASCP具有比单纯DHCA更好的脑保护效果,围手术期的脑损伤较轻。     

Cerebral metabolism during deep hypothermic circulatory arrest vs moderate hypothermic selective cerebral perfusion in a piglet model: a microdialysis study

Background: Few data exist regarding antegrade selective cerebral perfusion (ASCP) and its application in newborn and juvenile patients. Clinical data suggest ASCP alone to be superior to deep hypothermic circulatory arrest (DHCA); however, the effects of moderate hypothermia during ASCP on cerebral metabolism in this patient population are still unclear. Methods: After obtaining the approval from animal investigation committee, 16 piglets were randomly assigned to circulatory arrest combined with either ASCP at 27°C or DHCA at 18°C for 90 min. Cerebral oxygen extraction fraction (COEF) from blood as well as cerebral tissue glucose, glycerol, lactate, pyruvate, and the lactate/pyruvate ratio (L/P ratio) by microdialysis were obtained repeatedly. Results: COEF was lower during cooling and rewarming, respectively, in the DHCA18 group compared to the ASCP27 group (30 ± 8 vs 56 ± 13% and 35 ± 6 vs 58 ± 7%, respectively). Glucose decreased in both the DHCA18 and ASCP27 groups during the course of cardiopulmonary bypass (CPB), but were higher in the ASCP27 group during ASCP, compared to the DHCA18 group during circulatory arrest (0.7 ± 0.1 vs 0.2 ± 0.1 mm ·l^?1, P < 0.05). Pyruvate was higher (ASCP27 vs DHCA18: 53 ± 17 vs 6 ± 2 μm ·l^?1, P < 0.05), and the L/P ratio increased during circulatory arrest in the DHCA18 group, compared to the selective perfusion phase of the ASCP27 group (DHCA18 vs ASCP27: 1891 ± 1020 vs 70 ± 28, P < 0.01). Conclusions: In this piglet model, both cerebral oxygenation and microdialysis findings suggested a depletion of cerebral energy stores during circulatory arrest in the DHCA18 group, compared to selective cerebral perfusion combined with circulatory arrest in the ASCP27 group.     

深低温停循环逆行脑灌注脑组织自由基变化的实验研究

研究深低温停循环（ＤＨＣＡ）与逆行脑灌注（ＲＣＰ）时脑组织自由基的变化。健康杂种犬１４只，随机等分为ＤＨＣＡ组和ＲＣＰ组，在停循环前（Ａ点）、ＤＨＣＡ／ＲＣＰ３０分（Ｂ点）、ＤＨＣＡ／ＲＣＰ６０分（Ｃ点）ＤＨＣＡ／ＲＣＰ９０分（Ｄ眯）和复温再灌注３０分（Ｅ点）取脑皮层ｌｇ，检测丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）水平。结果见两组在Ａ点ＭＤＡ和ＳＯＤ无差别。在Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ点，ＤＨＣＡ组ＭＤＡ     

静脉移植血管的线粒体氧化损伤机制研究

目的 利用大鼠自体颈部静脉移植模型观察动脉化的静脉移植血管氧化应激对线粒体的损伤,探讨冠脉搭桥术后静脉桥再狭窄的发病机制.方法 将动物分成对照组和实验组,对照组将静脉血管桥吻合于颈静脉,实验组吻合于颈动脉,术后4周取材行病理检查,检测移植血管组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)水平及线粒体膜电位,线粒体膜流动性.结果 对照组和实验组比较:血管内膜增厚[(1.92±0.87)μm比(32.66±5.32)μm],血管组织ROS升高(23.57±9.21比69.33±15.76),MDA水平升高[(5.32±0.49)nmol/mg pro比(16.83±3.53)nmol/mg pro],SOD活性下降[(14.74±3.58)U/mg pro比(4.77±2.07)U/mg pro],上述各组数据差异均有统计学意义(P＜0.01);对照组和实验组移植血管组织的线粒体膜电位降低[(162.74±10.66)mV比(97.53±12.82)mV],线粒体膜黏滞系数η升高(0.226±0.025比0.417±0.069),上述各组数据差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 静脉移植物处于氧化应激状态,ROS通过损伤线粒体诱导内膜增生,其机制可能和静脉承受了高氧的动脉血流有关.     

二氮嗪对幼龄大鼠深低温脑缺血再灌注后氧自由基及细胞凋亡的影响

目的 探讨二氮嗪对幼龄大鼠深低温脑缺血再灌注后氧自由基和细胞凋亡的影响及相关的脑保护作用机制.方法 将54只3周龄健康sD大鼠随机分为假手术组、模型组和二氮嗪组,每组18只,建立深低温脑缺血再灌注模型.于术后24 h处死大鼠,检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛的含量,Western Blot法检测脑组织细胞质细胞色素C含量,免疫组化法检测脑组织细胞质Caspase-3含量.结果 模型组脑组织中SOD含量为(198±41)U/mg,低于假手术组的(321±36)U/rag(P<0.01);丙二醛含量为(212±21)nmol/mg,高于假手术组的(100±23)nmol/mg(P<0.01);细胞色素C蛋白表达(0.72±0.09)和Caspase-3蛋白表达(83±10)均高于假手术组(0.17±0.02和115±9)(P<0.01).二氮嗪组脑组织SOD含量为(264±34)U/rag,高于模型组(P<0.05);而丙二醛含量(174±19)nmol/mg、细胞色素C蛋白表达(0.41±0.05)和Caspase-3蛋白表达(99±11)均低于模型组(P<0.05).结论 二氮嗪对幼龄大鼠深低温脑缺血再灌注损伤具有脑保护作用,其机制与抑制氧自由基产生和细胞凋亡有关.     

L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注损伤中的作用

目的 观察L-精氨酸(L-Arg)和氨基胍对大鼠肺移植后缺血再灌注的保护作用.方法 建立大鼠左单肺移植模型,术后随机分为A组(对照组,腹腔注射生理盐水),B组(腹腔注射L-Arg)、C组(腹腔注射氨基胍)和D组(腹腔注射L-Arg和氨基胍),每组6只.移植肺再灌注2 h后,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性并测定移植肺干湿重比(W/D)及静脉血中一氧化氮(NO)含量,观察移植肺的病理学形态.结果 再灌注2 h后,B组移植肺的W/D(5.10±0.21)、MPO(1.74±0.26)U/g和MDA(20.87±2.90)μmol/g均低于A组W/D(5.74 ±0.14)、MPO(2.36±0.32)U/g和MDA(31.33 ±3.46)μmol/g;SOD活性(424.29±27.86)U/mgprot、NO含量(175.12 ±17.40)μmol/L、iNOS活性(3.62 ±0.26)U/mgprot和eNOS活性(5.36±0.28)U/mgprot均较A组SOD活性(268.01±26.06)U/mgpro、NO含量(98.29±6.95)μmol/L、iNOS活性(2.53 ±0.22)U/mgprot和eNOS活性(3.57 ±0.40)U/mgprot高(P＜0.05).C组的NO含量(84.13±5.18)μmol/L、iNOS活性(1.81 ±0.09)U/mgprot均较A组低(P＜0.05).D组的W/D(4.79 ±0.19)、MPO(1.24±0.13)U/g、MDA(14.60±4.14)μmol/g、iNOS活性(1.99±0.17)U/mgprot低于A组,SOD活性(493.75±24.95)、NO含量(149.61±10.70)μmol/L、eNOS活性(5.50±0.27)U/mgprot高于A组(P＜0.05).与B组比较,D组的W/D、MPO、MDA、NO含量、iNOS活性降低,SOD升高(P＜0.05).病理形态学检查显示D组炎细胞浸润及渗出最轻,B组次之,A组和C组最差.结论 移植后再灌注早期应用L-Arg可减轻缺血再灌注损伤,应用氨基胍并不能减轻移植肺的损伤,但联合应用L-Arg和氨基胍优于单纯应用L-Arg.

Abstract：

Objective To investigate the effects of L-arginine (L-Arg) and aminoguanidine on ischemia-reperfusion injury following rat lung transplantation. Methods The models of rats lung transplantation were established and 4 groups ( n = 6 each) were randomly set up: group A ( normal control group)and treated groups B, C and D. In these groups, different medicines (NS, group A; L-Arg, group B;aminoguanidine, group C; L-Arg and aminoguanidine, group D) were intraperitoneally administered to the recipient rats before reperfusion. After reperfusion for 2 h, the lung graft was harvested for measurements of lung wet/dry ratio ( W/D ) , myeloperoxidase ( MPO ) , malondialdehyde ( MDA ) , superoxide dismutase (SOD) , endothelial nitric oxide synthase (eNOS) , inducible nitric oxide synthase (iNOS). The contents of plasma nitric oxide (NO) were determined. The pathological changes in the lung grafts were observed.Results After reperfusion for 2 h, W/D (5. 10 ±0.21), MPO (1.74 ±0.26) U/g, MDA (20.87 ±2. 90) μmol/g in group B were significantly lower [W/D (5. 74 ± 0. 14), MPO (2. 36 ± 0. 32) U/g,MDA (31. 33 ±3.46) μmol/g] (P ＜ 0. 05), and the levels of SOD (424. 29 ± 27. 86) U/mg protein,NO (175. 12 ± 17. 40) μmol/L, iNOS (3. 62 ±0. 26) U/mg protein and eNOS (5. 36 ±0. 28) U/mg protein were significantly higher than in group A [SOD (268.01 ±26.06) U/mg protein, NO (98.29 ±6.95) μmol/L, iNOS (2.53 ±0.22) U/mg protein and eNOS (3. 57 ±0.40) U/mg protein] (P＜0. 05). The contents of NO (84. 13 ±5. 18) μmol/L and iNOS (1. 81 ±0. 09) U/mg protein in group C were significantly lower than in group A (P ＜ 0. 05). W/D (4. 79 ± 0. 19) , MPO (1. 24 ± 0. 13 ) U/g,MDA (14. 60 ±4. 14) μmol/g, iNOS (1. 99 ±0. 17) U/mg protein were significantly lower than in group A (P ＜0. 05) , and SOD (493. 75 ±24. 95) , NO (149. 61 ± 10. 70) μmol/L and eNOS (5. 50 ±0. 27)U/mg protein in group D were significantly higher than in group A (P＜0. 05). W/D, MPO, MDA, NO and iNOS in group D were significantly reduced as compared with group B (P ＜ 0. 05 ) , and SOD was significantly increased in group B ( P ＜ 0. 05 ) . The pathological examination revealed that the inflammatory cell infiltration in group D was the mildest, followed by groups B, A and C. Conclusion The L-Arg could alleviate the lung ischemia-reperfusion injury after transplantation, the combined used of L-Arg and aminoguanidine could obtain better effects than L-Arg used alone. The aminoguanidine used alone could not alleviate ischemia-reperfusion injury after transplantation.     

Nrf2 / HO-1通路在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用

目的:观察核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用。方法:40只健康雄性新西兰大白兔,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组和全反式维甲酸组(n=10)。采用夹闭股动脉3 h、再灌注4 h的方法制备兔肢体缺血再灌注模型;电针组、全反式维甲酸组于模型制备前1～4 d(30 min/次,1次/d)及模型制备过程中电针足三里穴和肺俞穴,采用疏密波2/15 Hz,强度以兔出现轻微肌颤为宜;全反式维甲酸组于模型制备前30 min腹腔注射Nrf2抑制剂全反式维甲酸7 mg/kg。再灌注4 h时采集颈动脉血样,随后处死兔取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,计算肺湿/干重(W/D)比值;测定肺组织MDA含量及SOD活性,采用Western blotting法检测肺组织Nrf2总蛋白、Nrf2核蛋白及HO-l蛋白表达水平。结果:模型组、电针组和全反式维甲酸组再灌注4 h时肺损伤评分分别为5.43±0.82、4.03±0.56、6.21±0.75,均明显高于假手术组(0.92±0.21,P0.05);肺组织W/D比值分别为6.42±1.00、4.45±0.68、7.08±1.12,均明显高于假手术组(2.04±0.29,P0.05);MDA含量分别为(4.82±0.51)nmol/mg、(3.56±0.45)nmol/mg、(5.18±0.47)nmol/mg,均明显高于假手术组(2.10±0.23)nmol/mg,P0.05;SOD活性分别为(50.6±6.3)U/mg、(63.1±7.7)U/mg、(47.2±5.6)U/mg,均明显低于假手术组(72.6±6.3)U/mg,P0.05;Nrf2总蛋白、Nrf2核蛋白及HO-l蛋白表达水平均明显高于假手术组(P0.05)。与模型组比较,电针组再灌注4 h时肺损伤评分、肺组织W/D比值、MDA含量均明显降低(P0.05),SOD活性、Nrf2总蛋白、核蛋白及HO-l蛋白表达水平均明显升高(P0.05)。与电针组比较,全反式维甲酸组再灌注4 h时肺损伤评分、肺组织W/D比值、MDA含量均明显升高(P0.05),SOD活性、Nrf2总蛋白、核蛋白及HO-l蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。结论:Nrf2/HO-1信号通路激活参与了电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤的过程。     

星状神经节阻滞对兔机械通气所致肺损伤的保护作用

目的 探讨星状神经节阻滞(stellate ganglion block,SGB)对兔呼吸机相关性肺损伤(ventilator associated lunginjury,VALI)的影响. 方法 40只成年日本大耳兔按随机数字表法分为两组(每组20只):空白对照组(Ⅰ组)和SGB组(Ⅱ组).Ⅰ组全身麻醉气管插管后椎旁注入生理盐水(0.5 ml),Ⅱ组全身麻醉气管插管后给予SGB.分别于机械通气后1 h(T1)、2 h(T2)、4 h(T3)、6 h(T4)4个时间点经耳缘静脉抽取静脉血3ml后处死白兔,检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)、TNF-α浓度及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;取左肺组织测量湿/干重比(wet/dry,W/D);取一部分右肺组织H-E染色后光镜和电镜观察其病理变化,另一部分匀浆后检测MDA含量、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)及SOD活性. 结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组肺组织的W/D[(6.07±0.12)比(8.58±0.48)]和SOD活性[(64±10) U/mg比(77±11) U/mg]明显降低(P＜0.01);Ⅱ组肺组织的MDA含量[(0.89±0.12) μmol/g比(0.63±0.11) μmoFg]和MPO活性[(0.46±0.09) U/g比(0.28±0.07)U/g]明显升高(P＜0.01).H-E染色后光镜和电镜观察Ⅱ组肺组织病变轻于Ⅰ组.与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清MDA、TNF-α在T2～T4时间点降低(P＜0.05),Ⅱ组血清SOD在T2-T4时间点升高(P＜0.05). 结论 SGB可以减轻机械通气兔肺组织的损伤,产生肺保护作用.     

衰老雄性大鼠睾丸组织脂质过氧化与睾酮水平和bcl-2基因表达的研究

目的:探讨衰老雄性大鼠睾丸组织脂质过氧化对血清睾酮(T)水平和睾丸间质(Leyd ig)细胞bcl-2基因表达的影响。方法:由D-半乳糖建立亚急性衰老模型,SD大鼠20只随机均分为对照(C)组和D-半乳糖(D)组,用分光光度计检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量、放免法检测血清中T水平以及免疫组化检测Leyd ig细胞bcl-2基因表达情况。结果:①SOD活性:D组(116±18.09)U/mg.prot显著低于C组(156±31.02)U/mg.prot(P<0.01);②MDA含量:D组(1.77±0.41)nmol/mg.prot明显高于C组(1.19±0.15)nmol/mg.prot(P<0.05);③血清T:D组(2.39±0.90)nmol/L显著低于C组(8.95±2.53)nmol/L(P<0.01);④bcl-2基因表达:D组(35.1±3.6)%明显低于C组(49.6±7.4)%(P<0.01)。结论:衰老大鼠睾丸组织脂质过氧化的变化影响T水平和Leyd ig细胞bcl-2基因表达。