诃子抗内毒素活性组分的分离及活性评价

目的从诃子中分离制备具有拮抗内毒素作用的活性组分.方法应用离子色谱技术等方法,从诃子水提物中分离制备具有拮抗内毒素活性的组分;并应用生物传感器技术,对所得到的组分进行与Lipid A结合活性的筛选;利用鲎试剂动态浊度法,对筛选出的活性组分在体外进行中和内毒素活性的测定;观察其对LPS刺激的小鼠RAW 264.7细胞释放炎症介质的抑制作用;观察其对致死剂量(20 mg/kg)内毒素攻击小鼠的保护作用.结果应用离子色谱技术从诃子中分离出4个组分,其中有3个组分具有一定的结合Lipid A的活性,以3#组分结合活性最强;在体外实验中3#组分对内毒素具有直接的中和作用(P＜0.01);对LPS刺激的小鼠RAW 264.7细胞释放TNF-α具有显著的抑制作用(P＜0.01);并对致死剂量内毒素攻击的小鼠具有明显的保护作用(P＜0.01).结论从诃子中分离出的3#组分具有显著的拮抗内毒素活性.     

利用MTT法检测肝癌化疗药物的敏感性

目的：探讨肝癌对化疗药物的敏感性,筛选个体敏感的化疗药物。方法：采用MTT比色法,对27例原发性肝癌患者癌细胞进行7种抗癌药物敏感性测定。结果：7种化疗药物的敏感率为奥沙利铂（OXA）92．5％,丝裂霉素（MMC）88．88％,顺铂（DDP）81．48％,吉西他滨（GEM）66．66％,表阿霉素（EADM）62．96％,5-氟脲嘧啶（5-FU）51．85％,羟基喜树碱（HCPT）40．74％。结论：MTT法是一种简便、快捷的肿瘤细胞体外药敏试验方法,为肝癌临床个体化治疗提供了实验依据。     

人胎肝细胞生长刺激物质的分离纯化及活性测定

从人胎肝组织纯化肝细胞生长刺激物质（ｈＨＳＳ）,经过匀浆、热处理、乙醇沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤,聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳及ＩＳＣＯＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ转移浓缩电泳等步骤,分离出具有ＨＳＳ活性的蛋白质。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示５３ＫＤ与１８ＫＤ两条带。     

血管活性肠肽对培养大鼠肝癌细胞作用的细胞化学观察

研究血管活性肠肽（ＶＩＰ）对大鼠肝癌细胞碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）的影响。方法：采用细胞化学方法对大鼠肝癌细胞ＶＩＰ和ＡＬＰ进行染郄定位。应用显微分光光度计对肝癌细胞ＡＬＰ进行定量分析，并用图像分析技术对细胞ＡＤＨ进行定量分析，并用图像分析技术对细胞ＳＤＨ进行定量。结果：培养的大鼠肝癌细胞有明显的ＡＬＰ阳性反，反应产物遍布于整个细胞，胞浆着色较为显著。与对照相比，ＶＩＰ处理后，细     

菝葜体外抗肝癌细胞活性物质筛选

〔目的〕筛选菝葜抗肝癌细胞的活性物质,为临床应用菝葜辅助治疗肝癌提供实验依据。〔方法〕采用不同工艺制备菝葜提取物,将菝葜提取分离为乙醇粗提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位,利用MTT法检测4种物质部位对肝癌细胞H22、Hep G-2、BEL-7402的体外生长抑制。〔结果〕从菝葜分离提取的4种物质部位均有不同程度抗肝癌细胞活性,其中乙酸乙酯部位抗肝癌细胞增殖活性最强,并在浓度范围内呈现良好的量效关系。〔结论〕乙酸乙酯部位为菝葜主要抗肝癌细胞活性物质。     

MTT法指导分离壁虎抗肿瘤活性成分的实验研究

目的 采用四氮唑盐（MTT）法指导壁虎抗肿瘤活性成分的分离,寻找壁虎抗肿瘤活性单体化合物,并初步观察其抗肿瘤作用.方法 常规培养人肝癌Bel-7402细胞、人肺癌Bel-95C细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态及数量,采用MTT法检测多批次壁虎活性成分提取物对体外培养的肿瘤细胞株的生长抑制作用,计算肿瘤抑制率.结果 经过11批次重复药筛实验,逐步分梯次指导分离纯化,得到壁虎抗肿瘤活性单体化合物＂守宫咪唑衍生物＂.该化合物可明显抑制人肝癌Bel-7402细胞的生长,用药后前3d的抑瘤率分别为71.24%,91.37%,94.45%,在显微镜下发现肿瘤细胞变圆、体积变小.结论 用MTT法结合倒置显微镜观察细胞状态,指导中药壁虎抗肿瘤活性成分的提取分离,得到抗肿瘤作用明显的壁虎单体化合物.     

溪黄草抗乙肝及抗肿瘤活性成分的体外筛选

目的 对溪黄草抗乙肝抗肿瘤活性部位进行初步筛选,为进一步分离活性成分奠定基础.方法 首先在HepG2.2.15细胞模型上对三种不同方法萃取所得的溪黄草提取物进行抗乙肝活性筛选,以用于进一步分析提纯.用MTT实验检测细胞毒性,ELISA和实时定量PCR检测细胞上清液中HBsAg、HBeAg的分泌及乙肝病毒DNA含量.然后,用硅胶柱色谱法进一步提取分离活性最大的提取物,用MTT和ELISA检测所分离各组分的抗乙肝活性.最后,在MCF-7,BGC-823和HepG2细胞中检测细胞毒性最大的三个组分的抗肿瘤活性.结果 乙酸乙酯萃取分离所得的提取物抗乙肝活性最大,可显著降低HepG2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg抗原的分泌,并抑制乙肝病毒DNA的复制,被用来进一步分离提纯.从乙酸乙酯提取物中分离出14个组分,其中A3和A5组分对HBsAg有较好的抑制作用,A9组分对HBeAg有较好的抑制作用,并均存在明显的量效关系,且治疗指数均比乙酸乙酯提取物的要高.A6,A7和A11组分细胞毒性大,对不同的肿瘤细胞有不同的抑制活性.结论 溪黄草的乙酸乙酯提取物及其分离成分具有很强的抑制乙肝病毒复制的作用,从而具有很好的抗乙肝病毒活性,进一步提取分离有利于有效成分的纯化而具更强的活性.此外,一些分离成分对不同的肿瘤细胞还有很高的细胞毒性,具一定的抗肿瘤作用.本实验为溪黄草在临床的使用及其作为潜在的高效抗乙肝和肿瘤药物的进一步研究开发工作提供了理论基础.     

CB125等四种合成物对人肝癌细胞体外增殖的抑制作用

目的观察CB125等四种合成物对人肝癌SMMC7721细胞体外增殖的抑制作用。方法采用MTT比色法，观察CB125等四种合成物对人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响。结果1．CB125对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-8～10^-4 mol.L^-1，（与对照组比较，P〈0．01。），抑制率为55％～73％，呈现明显的剂量依赖性；2．CB97对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-17～10^-4mo1．L^-1（与对照组比较，P〈0．05或P〈0．01。），抑制率为60％～63％；3．JS86对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-7～10^-4mol．L^-1（与对照组比较，P〈0．01。），抑制率为59％～72％，呈现明显的剂量依赖性；4．JS146对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制浓度为10^-6～10^-14mol．L^-1（与对照组比较，P〈0．05或P〈0．01。），抑制率为60％～65％。结论CB125等四种合成物对人肝癌SMMC7721细胞的生长均有抑制作用。其中CB125抑制作用较明显。     

海洋来源微生物的分离培养与抗肿瘤活性筛选

目的 从海洋环境样品中分离纯化微生物,经发酵培养与活性筛选,获取抗肿瘤活性菌株以供筛选药源活性产物,获无活性菌株以供核糖体工程转化研究。方法 通过单菌落挑选与划线培养分离纯化微生物菌株,经摇床发酵和提取操作制备活性测试样品。采用MTT法结合显微镜下细胞形态学检测的方法,测试样品的抗肿瘤活性。结果 从渤海湾驴驹河潮间带海泥样品中分离得到了微生物127株,其中真菌80株、放线菌47株。在127株中100 mg·L^-1样品浓度下对K562细胞的抑制率大于40%的活性菌株为8株,占菌株总数的6.3%(其中放线菌4株,占放线菌数的8.5%,真菌4株,占真菌数的5%),抑制率在20%～40%的放线菌6株,占放线菌数的12.7%。结论 从渤海湾海泥样品中分离得到真菌80株、放线菌47株,从中获得抗肿瘤活性真菌4株、放线菌10株,从放线菌中获得抗肿瘤活性菌株的频率远远高于真菌。活性菌株为寻找药源活性产物提供了菌株,无活性菌株则为核糖体工程拓展药源菌株来源研究提供了资源。     

新型合成的类核苷潜在免疫调节活性的筛选

目的从30多个新合成的含噻唑烷酮环的类核苷化合物中筛选出无细胞毒性反应、具有促进T淋巴细胞增殖（免疫调节）活性的化合物。方法取健康Balb/c小鼠脾细胞制备单个细胞悬液,采用MTT法检测化合物对小鼠脾细胞及ConA活化的T淋巴细胞增殖的影响。结果筛选出的化合物CH1a、CH2a、CH1b和CH2b可促进活化的T淋巴细胞增殖。结论化合物CH1a、CH2a、CH1b和CH2b具有潜在免疫调节活性。     

中药成分联用抑制肝癌细胞增殖及机制研究进展

肝癌属难治性恶性肿瘤,癌细胞增殖迅速且拥有抵御药物干预的复杂分子应激网络,是其难以治愈的重要原因。发展包含中医药在内的综合治疗手段,开发新药（如中药提取物或有效成分）,开展联合用药研究,具有一定的应用前景。通过综述中药成分联用抑制肝癌细胞增殖及机制研究,以期为肝癌的综合治疗及中医药相关研究提供参考。     

天名精内生真菌的分离鉴定及抗肝癌活性研究

目的 对天名精内生真菌进行分离和鉴定,并从中筛选出具有抗肝癌作用的活性菌株,为寻找新的抗肝癌先导化合物提供菌株资源。方法 采用植物组织切块法和平板划线法对天名精内生真菌进行分离纯化;MTT法筛选对肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用的活性菌株,并计算活性显著内生真菌的IC₅₀值;运用形态学鉴定和分子鉴定的方法对活性菌株进行鉴定。结果 从天名精中共分离得到60株内生真菌,其中TMJ-03、TMJ-13、TMJ-15、TMJ-23、TMJ-54为活性内生真菌,其发酵物抑制HepG2细胞增殖的IC₅₀值分别为19.49（TMJ-C-03）、31.13（TMJ-C-13）、88.65（TMJ-C-15）、37.42（TMJ-D-23）、17.22（TMJ-D-54）、32.72（TMJ-C-54） μg·mL^-1。5株活性菌株均鉴定到种,分别为Aspergillus terreus、Chaetomium globosum、Alternaria tillandsiae、Fusarium proliferatum、Alternaria arborescens。结论 首次从天名精中筛选出对HepG2细胞增殖具有抑制作用的活性内生真菌,为寻找新的抗肝癌药物提供了菌株资源。     

肝癌、胎肝及正常肝组织中性糖脂纯化和分析

取肝癌、胎肝及正常肝组织，经氯仿：甲醇提取总脂，通过ＤＥＡＥ─ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５层析，碱水解和ｆｌｏｒｉｓｉｌ层析获得纯化的中性糖脂。经高效薄层色谱层析和薄层扫描分析，与标准中性糖脂比较，正常肝ＣＤＨ与ＣＭＨ表达减弱；肝癌ＣＤＨ和ＣＭＨ表达增加，胎肝ＣＤＨ也增加。肝癌中性糖脂的表达存在异质性。经乳酸脱氢酶法证实，肝癌中性糖脂对正常人外周血ＮＫ细胞的活性有明显的抑制作用。本文结果提示肝癌组织中性糖脂存在异常合成。     

土鳖虫醇提蛋白的分离纯化及其体外抗肝癌与抑制肝纤维化活性研究

目的 采用体外细胞实验评价土鳖虫醇提物中大分子蛋白各分离产物的抗肝癌与抑制肝纤维化活性,明确土鳖虫的有效部位与成分。方法 采用盐析法从土鳖虫醇提物中回收蛋白类成分,将土鳖虫粗蛋白产物按分子量差异进行超滤,将其分为EEPA、EEPB及EEPC三个不同的蛋白部位,以抑制肝异常细胞增殖活性为导向,筛选最佳活性蛋白部位;接着经过DEAE阴离子层析及Sephadex G-100凝胶层析对活性粗蛋白部位进一步的纯化,从EEPC中分离出一种纯化蛋白PC3-Ⅲ,并对其进行LC-MS/MS分析;最后利用细胞实验评价EEPC及PC3-Ⅲ体外抗肝癌及抑制肝纤维化的活性。结果 在EEPA、EEPB及EEPC中,分子量最大的蛋白部位EEPC表现出最高的抑制肝异常细胞增殖活性;纯化蛋白PC3-Ⅲ分子量为10 kDa左右,经LC-MS/MS鉴定表明,PC3-Ⅲ对同源蛋白A0A0M3STY1的覆盖率达到35%,查库得到的肽段序列为QYSINFISAR、CNGDSCVCTFR和SNNFR;体外细胞实验证明PC3-Ⅲ不仅通过抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移来共同发挥抗肝癌药效,还能抑制活化的肝星状细胞...     

原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的分离培养及抗瘤活性研究

为了解原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞治疗肝癌的临床价值及应用前景，采用Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ法，对ＴＩＬ细胞的分离，培养及抗瘤活性进行了研究。结果８例肝癌病人的ＴＩＬ细胞分离，培养均获得成功，并在培养３－５周后扩增到临床治疗肝癌后需的ＴＩＬ细胞数量。     

CN2006型生物人工支持装置恒温培养系统对胎肝细胞活性的影响

目的观察细胞活性,客观评价CN2006型生物人工肝支持装置恒温培养箱控制系统,为生物人工肝的临床应用提供依据。方法选择16周正常引产的人胎肝,胎肝组织采用两步灌流法进行消化分离。在培养条件为37℃、5%CO2、湿度100%下培养24 h后,倒置相差显微镜观察细胞的生长及形态变化;用MTT法检测细胞活力,以2×105/ml细胞数在酶标仪上所测吸光度作为对照;同时,检测胎肝细胞清除氨的能力,设无胎肝细胞的反应器为空白对照。结果胎肝细胞培养24 h后,在倒置相差显微镜下观察发现细胞呈集落状生长。在装置内反应器中培养24 h后,胎肝细胞在装置的反应器中生长良好,而且得到了增殖。细胞在装置内反应器中培养24 h后,加入氯化铵溶液,通过在不同时间检测氨的浓度表明在装置内反应器中培养的肝细胞具有生物转化功能。结论细胞在CN2006型生物人工肝支持装置中不仅生长良好,而且还具有生物转化功能,说明设计的恒温培养系统适宜细胞生长环境,为生物人工肝的临床治疗提供了坚实的理论基础。     

应用消减免疫法制备抗肝癌单克隆抗体

1　材料和方法1.1　材料　 1实验动物 :BAL B/c雌性小鼠 8wk龄 ,体质量18～ 2 0 g,购自本校实验动物中心 ;2组织细胞 :正常成人新鲜肝组织 ,肝癌组织取自本校外科手术标本 ,部分组织以中性福尔马林固定 ,低温石蜡包埋切片 ,4℃保存备用 .Sp2 /0细胞 ,肝癌细胞株 SMMC- 772 1,HHCC,He PG2由本室保存 ;3主要试剂 :HT,HAT选择培养基 RPMI16 40培养基购自Sigma公司 ,环磷酰胺注射液系连云港德瑞制药有限公司产品 ,Envision购自美国 DAKO公司 .1.2　方法　 1正常成人肝组织于 2 0 0目镍网中研磨后 ,无菌生理盐水悬浮制成肝细胞悬液 …