人脐带间充质干细胞外泌体对大鼠骨折愈合的影响及其作用机制研究

目的 观察人脐带间充质干细胞外泌体（hucMSC-Exos）对大鼠骨折愈合的影响,并探讨可能的作用机制。方法 取40只大鼠,成功复制股骨干骨折大鼠模型30只,随机分为对照组（注射PBS缓冲液50 μL、水凝胶100 μL至骨髓腔）、外泌体组（注射hucMSC-Exos 100μg、水凝胶100 μL至骨髓腔）、复合组（注射hucMSC-Exos 100 μg、水凝胶100 μL至骨髓腔,腹腔注射XAV939 1 mg/只）,每组10只。干预后2周、4周行Micro-computed tomography活体扫描、生物力学测试最大载荷,Western blotting检测骨痂组织β-连环蛋白（β-catenin）、p-β-catenin、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、Runx2蛋白的表达。结果 对照组、外泌体组、复合组大鼠干预后2周、4周骨小梁数量（Tb.N）、骨体积分数（BV/TV）比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点Tb.N、BV/TV有差异（F =23.584和31.267,均P =0.000）;②3组大鼠Tb.N、BV/TV有差异（F =85.512和54.796,均P =0.000）,与对照组、复合组比较,外泌体组Tb.N较多,BV/TV较高,促进骨折愈合效果相对较好;③3组大鼠Tb.N、BV/TV变化趋势有差异（F =19.417和25.461,均P =0.000）。外泌体组最大载荷、最大载荷恢复率高于对照组和复合组（P <0.05）。与外泌体组比较,对照组组织学评分降低（P <0.05）,复合组组织学评分升高（P <0.05）。与对照组比较,外泌体组p-β-catenin/β-catenin、Runx2蛋白相对表达量升高（P <0.05）,GSK-3β蛋白相对表达量降低（P <0.05）;与外泌体组比较,复合组p-β-catenin/β-catenin、Runx2蛋白相对表达量降低（P <0.05）,GSK-3β蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 hucMSC-Exos可促进大鼠股骨干骨折愈合,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

LncRNA FEZF1-AS1调控特发性肺间质纤维化的机制研究

目的 探讨FEZ家族锌指1-反义RNA 1（LncRNA FEZF1-AS1）对肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质相互作用（EMT）的影响及其作用机制。方法 将转化生长因子-β₁（TGF-β₁）作用于A549细胞,诱导肺间质纤维化细胞模型,将其分为空白对照组（A549细胞组）和模型组。Western blotting检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达,观察模型复制是否成功;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。根据实验目的和转染质粒不同,将A549细胞分为空白对照组（Blank组）、TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组、TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组。CCK-8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。结果 模型组E-cadherin蛋白相对表达量较空白对照组降低（P <0.05）,N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量较空白对照组升高（P <0.05）;模型组LncRNA FEZF1-AS1 基因相对表达量较空白对照组升高（P <0.05）,miR-200c-3p 基因相对表达量较空白对照组降低（P <0.05）。与Blank组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组细胞增殖、迁移、侵袭能力升高（P <0.05）;与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低（P <0.05）。与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量及N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）;与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组和Blank组miR-200c-3p 基因相对表达量升高（P <0.05）。结论 LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。     

EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 取对数生长期人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、空载组及沉默组，分别转染Lipofectamine^TM 2000、含无义随机序列（siRNA-NC-PGCsi3.0）和EphA2干扰序列（EphA2-siRNA-PGCsi3.0）质粒和脂质体的复合物。稳定转染后，Brd U法检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell小室实验检测细胞侵袭能力，qRT-PCR和Western blotting分别检测细胞中EphA2、Wnt1、β-连环蛋白（β-catenin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）mRNA及蛋白相对表达量。结果 对照组、空载组、沉默组Brd U阳性率分别为（26.48±2.79）%、（23.52±2.57）%、（13.29±2.06）%，Brd U阳性率组间比较，差异有统计学意义（F =38.560，P =0.000）。与对照组、空载组比较，沉默组Brd U阳性率降低（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞划痕愈合率分别为（83.16±8.31）%、（82.35±7.24）%、（34.24±5.27）%，细胞划痕愈合率组间比较，差异有统计学意义（F =78.869，P =0.000）。与对照组、空载组比较，沉默组细胞划痕愈合率降低（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组穿膜细胞数分别为（326.74±33.15）个、（331.27±34.59）个、（126.23±26.18）个，穿膜细胞数组间比较，差异有统计学意义（F =68.997，P =0.000），与对照组、空载组比较，沉默组穿膜细胞数减少（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），与对照组、空载组比较，沉默组Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA相对表达量降低（P <0.05），E-cadherin mRNA相对表达量升高（P <0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），与对照组、空载组比较，沉默组EphA2、Wnt1、β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05），E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。对照组和空载组上述指标比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用，其机制可能与阻止Wnt/β-catenin信号通路相关。     

阿托伐他汀对转化生长因子β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化过程的影响

目的 研究阿托伐他汀对TGF-β1诱导的A549细胞上皮间质转化（EMT）过程的影响。方法 体外培养肺癌A549细胞,阿托伐他汀以不同的浓度（0.5、1、2μmol/L）预处理A549细胞24h,随后,在无血清条件下加入TGF-β1（1ng/ml）,共同作用48h,Western blot法检测EMT过程标志性蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质细胞标志蛋白波形蛋白（vimentin）的表达。体外培养A549细胞,阿托伐他汀预处理24h后,将A549细胞种板于Transwell迁移小室,观察阿托伐他汀对TGF-β1诱导的EMT过程的细胞迁移能力的影响。异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽用来显影肌动蛋白纤维,共聚焦荧光显微镜观察肌动蛋白应力纤维的变化,研究阿托伐他汀对TGF-β1诱导的肌动蛋白应力纤维的影响。Western blot法检测EMT过程转录因子的表达变化。结果 阿托伐他汀预处理的A549细胞在TGF-β1的作用下向间质样细胞形态的转变过程受到抑制。以TGF-β1诱导EMT过程,阿托伐他汀处理组细胞E-Cadherin的表达高于阳性对照组细胞,相反,阿托伐他汀处理组细胞vimentin的表达低于阳性对照组细胞,提示阿托伐他汀抑制A549细胞EMT过程。A549细胞细胞经阿托伐他汀预处理24h后,加入TGF-β1作用24h,阿托伐他汀处理组的细胞内应力纤维的数量低于阳性对照组细胞。Transwell迁移实验,TGF-β1刺激和不刺激细胞时,阿托伐他汀预处理24h的A549细胞迁移至下室的细胞数皆少于阴性对照组细胞。阿托伐他汀预处理的A549细胞在TGF-β1的作用下,转录因子ZEB1的表达低于阴性对照组细胞,且两组细胞的Snail和Slug的表达差异无统计学意义,而在TGF-β1的作用下Snail和Slug表达都逐渐增高。结论 阿托伐他汀能部分抑制TGF-β1诱导的A549细胞的上皮间质转化过程,使转录因子ZEB1的表达降低,肌动蛋白应力纤维束形成减少,TGF-β1诱导的细胞迁移受阻。     

星状神经节阻滞术对大鼠急性心肌梗死后炎症反应的影响

目的 探讨星状神经节阻滞术（SGB）对大鼠急性心肌梗死（AMI）后心肌细胞炎症的保护作用。方法 选取8周龄雄性SPF级Wistar大鼠60只,体重200～250 g,随机分为假手术组、AMI组和SGB组,每组20只。假手术组只打开胸腔暴露心脏,不结扎冠状动脉;AMI组结扎冠状动脉左前降支复制AMI模型;SGB组在AMI模型复制成功后行SGB。模型复制成功后1周采集各组大鼠血清及心脏组织,qRT-PCR检测各组大鼠心肌组织中炎症因子（IL-6、IL-1β及TNF-α）mRNA;酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中炎症因子（IL-6、IL-1β及TNF-α）,全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中心肌酶（AST、LDH和CK-MB）。结果 各组大鼠心肌组织中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA的相对表达量均较AMI组降低（P <0.05）。各组大鼠血清中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,AMI组、SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平较假手术组升高（P <0.05）,SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平较AMI组降低（P <0.05）。各组大鼠血清AST、LDH及CK-MB表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,AMI组、SGB组AST、LDH及CK-MB表达水平较假手术组升高（P <0.05）,SGB组AST、LDH和CK-MB表达水平较AMI组降低（P <0.05）。结论 SGB对大鼠AMI后心肌细胞炎症有一定的保护作用。     

MicroRNA-137通过Wnt信号通路对宫颈癌细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用研究

目的 探究microRNA-137（miR-137）通过Wnt信号通路对人宫颈癌细胞HeLa的增殖与凋亡,以及对裸鼠移植瘤的作用。方法 将人宫颈癌细胞HeLa分别转染miR-137-mimic质粒（miR-137组）和空载质粒（NC组）,另设空白组只加入等量转染试剂不做其他处理。待细胞稳定转染后,采用CCK-8法检测细胞活性。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Wnt、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）、分泌型蛋白Dickkopf-1（DKK1）、miR-137 mRNA相对表达量;采用Western blotting检测Wnt、MMP-7、DKK1蛋白的相对表达量。将稳定转染的细胞接种于裸鼠背部,观察裸鼠移植瘤的生长情况,绘制生长曲线并计算抑瘤率。结果 空白组、NC组、miR-137组12 h、24 h、48 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）;②3组的OD值有差异（P <0.05）,miR-137组OD值较空白组和NC组低,相对细胞活性较低;③3组OD值的变化趋势有差异（P <0.05）。miR-137组细胞凋亡率高于空白组和NC组（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt和MMP-7 mRNA相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1和miR-137 mRNA相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt、MMP-7蛋白相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1蛋白相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。NC组裸鼠移植瘤的抑瘤率与miR-137组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,miR-137组裸鼠移植瘤的抑瘤率增加。空白组、NC组、miR-137组裸鼠不同时间点的肿瘤体积比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的肿瘤体积有差异（P <0.05）;②3组的肿瘤体积有差异（P <0.05）,miR-137组与空白组和NC组相比,肿瘤生长缓慢,相对抑瘤效果较好;③3组肿瘤体积的变化趋势有差异（P <0.05）。结论 在人宫颈癌细胞中过表达miR-137可以促进癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖,该作用可能与Wnt及其上下游MMP-7/DKK1信号通路有关。     

不同剂量咪达唑仑对术前中重度焦虑结直肠癌老年患者术后早期认知功能的影响

目的 探讨不同剂量咪达唑仑对术前中重度焦虑的结直肠癌老年患者术后早期认知功能的影响。方法 选择南方医科大学顺德医院择期行结直肠癌根治术的80例老年患者，术前评估为中重度焦虑，随机分为空白对照组（C组）和不同剂量咪达唑仑组（M₁组、M₂组、M₃组），每组20例。患者麻醉诱导时，C组不注射咪达唑仑，M₁组、M₂组、M₃组分别静脉注射0.05 mg/kg、0.10 mg/kg、0.15 mg/kg咪达唑仑。观察并记录4组患者的血流动力学变化、Riker镇静-躁动评分（SAS）、苏醒时间、拔除气管导管时间和视觉模拟评分（VAS）。记录4组患者术前1 d、术后第1天、术后第7天的简易智力状态检查量表（MMSE）和术后早期认知功能障碍的发生率。检测并记录4组患者于麻醉前、术后第1天、术后第7天的血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）及中枢神经特异性蛋白（S-100β）水平。结果 4组患者不同时间点的平均动脉压（MAP）、心率（HR）有差异（P <0.05），4组的MAP、HR无差异（P >0.05），4组的MAP、HR变化趋势无差异（P >0.05）。M₃组患者苏醒时间长于其他组（P <0.05），M₁和M₂组患者的拔管时间短于C组和M₃组（P <0.05），C组患者VAS评分高于其他组（P <0.05），躁动发生率亦高于其他组（P <0.05）。4组患者不同时间点的MMSE评分有差异（P <0.05），4组的MMSE评分有差异（P <0.05），4组MMSE评分变化趋势有差异（P <0.05）。根据MMSE评估结果，术后第1天C组和M₁组患者术后早期认知功能障碍的发生率高于M₂组和M₃组（P <0.05）。术后第7天，C组仍有25%患者术后认知功能障碍，高于其他组（P <0.05）。4组患者不同时间点的IL-1β水平无差异（P >0.05），4组的IL-1β水平无差异（P >0.05），4组IL-1β水平变化趋势无差异（P >0.05）。4组患者不同时间点的IL-6、S-100β水平有差异（P <0.05），4组的IL-6、S-100β水平有差异（P <0.05），4组的IL-6、S-100β水平变化趋势有差异（P <0.05）。结论 术前中重度焦虑的老年结直肠癌患者使用0.10 mg/kg咪达唑仑进行麻醉诱导，安全可靠，苏醒质量好，炎症反应减轻，术后早期认知功能得到改善。     

自拟补肾祛瘀方对多囊卵巢综合征模型大鼠的作用及机制研究

目的 探究自拟补肾祛瘀方治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的疗效及机制。方法 选取SD雌性大鼠,复制PCOS模型后随机分为对照组、模型组、西药组及联合组。对照组和模型组根据大鼠体重给予1 mL/（kg·d）氯化钠溶液灌胃,联合组每天根据体重给予补肾祛瘀汤剂11 g/kg和4.5 mg/kg二甲双胍灌胃,西药组仅给予4.5 mg/kg二甲双胍灌胃。药物干预后分别采用Western blotting、qRT-PCR、免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子κB（NF-κB）、核因子IκB（IκBα）的蛋白、mRNA及阳性表达。比较各组大鼠的体重及血清睾酮（T）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平。结果 各组大鼠药物干预前的体重比较,差异无统计学意义（P >0.05）;各组大鼠药物干预28 d后的体重比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组的体重高于另外3组（P <0.05）,西药组高于联合组和对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）。各组大鼠血清T、FSH、LH水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组血清T、FSH、LH水平高于另外3组（P <0.05）,西药组高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB蛋白相对表达量高于另外3组,IκBα蛋白相对表达量低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB蛋白相对表达量高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα蛋白相对表达量低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB mRNA相对表达量高于另外3组,IκBα mRNA相对表达量低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB mRNA相对表达量高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα mRNA相对表达量低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB的OD值高于另外3组,IκBα的OD值低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB的OD值高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα的OD值低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。结论 自拟补肾化瘀方治疗PCOS可通过影响TNF-α调控的NF-κB/IκBα信号通路促进LH、FSH、T的恢复。     

鱼腥草对糖尿病大鼠肾脏组织中BMP-7和TGF-β1表达的影响

[目的]探讨鱼腥草对糖尿病肾脏组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白-7(BMP-7)表达的影响。[方法]建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型,随机分为模型组、鱼腥草组和洛汀新组,另设正常组;观察8周后肾质量/体质量比值、肾小球面积及24h尿β₂微球蛋白、24h尿白蛋白和肌酐清除率,并应用免疫组化检测肾脏组织中TGF-β1、BMP-7的蛋白表达。[结果]鱼腥草给药可明显抑制糖尿病模型大鼠肾小球的肥大,降低24h尿β₂微球蛋白、24h尿白蛋白排泄率和肌酐清除率(P<0.05);免疫组化半定量显示,与模型组比较,鱼腥草组TGF-β1表达明显减少(P<0.05),BMP-7表达增多(P<0.05),而与洛汀新组比较无显著差异(P>0.05)。[结论]鱼腥草对糖尿病肾脏组织有明显的保护作用,其机制可能与其降低肾脏中TGF-β1表达,增加BMP-7的表达有关。     

前列地尔联合强化阿托伐他汀预防糖尿病肾病患者对比剂急性肾损伤的临床研究

目的 探讨前列地尔联合强化阿托伐他汀能否减轻行经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的糖尿病肾病（DN）患者由对比剂引起的急性肾损伤。方法 选取拟行PCI且伴DN的196例患者为研究对象。将入选患者随机分为对照组、强化阿托伐他汀组、前列地尔组及联合治疗组4组,每组49例。入选所有患者常规给予抗血小板、抗凝、降血脂、降血压、控制血糖、扩冠等基础治疗。4组患者分别均于术前12h至术后12h内给予相同水化治疗。前列地尔组及联合治疗组患者术前30min,术后12、36、60h分别静脉注射前列地尔20μg,对照组及强化阿托伐他汀组则在对应时间点应用等剂量安慰剂（0.9%氯化钠注射液2ml）。强化阿托伐他汀组及联合治疗组患者于术前3天起每日加服阿托伐他汀20mg（总量至40mg/d）。观察4组患者术前及术后48、72h CysC、Scr、β₂-MG、hs-CRP的变化情况,并比较这4组患者对比剂肾病（CIN）的发生率。结果 4组患者PCI前CysC、Scr、β₂-MG、hs-CRP水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;前列地尔组、强化阿托伐他汀组及联合治疗组3组患者PCI后48及72h的CysC、β₂-MG、hs-CRP水平均低于对照组（P<0.05）。而联合治疗组CysC、β₂-MG、hs-CRP水平较其他组都低（P<0.05）。PCI后72h前列地尔组、联合治疗组及强化阿托伐他汀组患者Scr水平均低于对照组（P<0.05）。联合治疗组患者Scr水平最低（P<0.05）。联合治疗组患者对比剂肾病发生率为36.7%,明显低于其余3组（P<0.05）。结论 静脉注射前列地尔联合强化阿托伐他汀可减轻由对比剂引起的急性肾损伤,并降低CIN发生率。