ALDH1高表达对乳腺癌细胞MCF-7干细胞特性的影响

目的 探讨ALDH1高表达对乳腺癌MCF-7细胞干细胞特性的影响,为乳腺癌的治疗提供理论依据。方法 构建慢病毒ALDH1RNA,转染乳腺癌MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选稳定高表达ALDH1的亚克隆,命名为MCF-ALDH1细胞株。荧光定量PCR和Western blot法检测MCF-ALDH1细胞株及对照细胞中ALDH1在mRNA和蛋白水平的表达;克隆形成实验、悬浮球形成实验及裸鼠成瘤实验检测MCF-ALDH1及对照组细胞的干细胞特性,MTT法测定细胞的耐药性。结果 与MCF-7组细胞比较,MCF-ALDH1细胞株的ALDH1在mRNA和蛋白表达量明显升高;MCF-ALDH1细胞克隆形成数目为128±22个,高于MCF-ALDH1细胞球克隆形成数（46±15个）;悬浮成球实验,MCF-ALDH1细胞悬浮成球数目明显增多（16±2个）,高于对照细胞悬浮球数（8.0±1.5个）;肿瘤细胞在裸鼠皮下接种后,MCF-7细胞组有3只裸鼠成瘤,MCF-ALDH1有5只成瘤,瘤体积明显大于MCF-7组,差异有统计学意义（P<0.05）。耐药实验显示,MCF-ALDH1对顺铂、紫杉醇的耐药性明显提高。结论 高表达ALDH1的乳腺癌MCF-7细胞干细胞特性增强,ALDH1可能成为乳腺癌治疗的靶点之一。     

吗啡对乳腺癌MCF-7细胞生存素及livin表达的影响

目的:探讨吗啡对人乳腺癌MCF-7细胞生存素(survivin)和livin的表达及细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MCF-7细胞以1×103个/ml密度接种在6孔板内,随机分为对照组,0.1μmol/L吗啡组,1.0μmol/L吗啡组。于吗啡孵育24 h时,分别采用RT-PCR法和蛋白质印迹法测定细胞内生存素及livin mRNA及蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡改变;于吗啡孵育24,48及72 h时采用MTT法检测细胞增殖改变情况。结果:与对照组比较,0.1μmol/L吗啡组及1.0μmol/L吗啡组生存素和livin蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),0.1μmol/L吗啡组及1.0μmol/L吗啡组细胞增殖降低而细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:吗啡通过下调MCF-7细胞生存素和livin的表达,从而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

对-壬基酚对MCF-7人类乳腺癌细胞雌激素受体表达的影响

目的　观察对 -壬基酚 (p- NP)对 MCF- 7人类乳腺癌细胞株雌激素受体 (ER)及 ERαm RNA表达的影响 ,探讨其雌激素样活性。方法　以 RPMI 16 4 0培养液 (含 10 %小牛血清 )对 MCF- 7细胞进行半开放式贴壁培养 ,试验前以 DMEM(不含酚红 )培养液洗涤细胞 ,以含 3% C/D胎牛血清的 DMEM(不含酚红 )培养液继续培养 3d。试验设溶剂对照、阳性对照和 p- NP 5个浓度组 ,采用免疫组织化学法和定量 RT- PCR法分别对 MCF- 7细胞 ER蛋白和 ERαm RNA表达情况进行分析。结果　 1× 10 - 5m ol/L p- NP作用于 MCF- 7细胞 2 4 h下调 ER蛋白表达 ;1× 10 - 6 mol/L～ 1× 10 - 5m ol/L p- NP作用于 MCF- 7细胞 2 h和 2 4 h下调 ERαm RNA表达。p- NP各浓度组均表现出 ER蛋白和 ERαm RNA表达随 p- NP作用于 MCF- 7细胞时间的延长而进一步下降的趋势。结论　 p- NP可模拟雌激素下调 MCF- 7细胞 ER蛋白和 ERαm RNA表达 ,具有雌激素样活性     

龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响

目的 研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响。方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白（MAP-2）的变化。结果 龙葵碱对MCF-7细胞的IC₅₀为22.08 μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期;能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量。结论 龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。     

阿司匹林对MCF-7细胞uPA表达的影响

目的观察阿司匹林对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,探讨阿司匹林新的抗肿瘤作用机制。方法MTT法检测不同浓度的阿司匹林（2．5、5．0和10．0mmol／L）作用于人乳腺癌细胞株MCF-7不同时间（24、48和72h）的细胞增殖抑制率;应用Western blot检测阿司匹林对MCF-7乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂（urokinase type plasminogen activator,uPA）表达。结果阿司匹林各剂量组细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而提高（P〈0．01）;MCF-7细胞uPA的蛋白表达量随药物浓度的增加、作用时间的延长而降低。结论阿司匹林有抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用,并且呈时间依赖性和剂量依赖性;阿司匹林可以抑制MCF-7细胞的uPA表达,这可能是阿司匹林抗乳腺癌的分子机制之一。     

槲皮素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

槲皮素具有广泛的生理及药理活性 [1] ,因其扩张冠脉、调血脂、降低血管通透性被作为心血管药物而在临床广泛应用。已有文献报道槲皮素在体外对肿瘤的化学预防和治疗作用及其机制[2 ,3 ] 。此前 ,已对槲皮素抑制 DMBA (二甲基苯并蒽 )诱导的 SD大鼠乳腺癌的发生及增殖进行了研究并探讨机制 [4,5]。本实验采用 ER(雌激素受体 )阳性的乳腺癌细胞株 MCF- 7,初步观察槲皮素在体外对该细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 ,为进一步探讨其作用机制及其应用于临床治疗乳腺癌提供部分依据。1　材料与方法1 .1　药物与细胞系 :Quercetin (槲皮素 ,…     

siRNA干扰乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C表达及对细胞增殖影响的研究

目的研究慢病毒载体介导的siRNA对乳腺癌MCF-7细胞系血管内皮生长因子(VEGF-C)表达的敲减作用及对乳腺癌增殖和凋亡的影响。方法构建慢病毒VEGF-C/siRNA载体,转染乳腺癌MCF-7细胞,观察其转染效率,采用实时定量PCR检测MCF-7细胞在转染前后VEGF-C的mRNA表达,计算VEGF-C敲减率,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果慢病毒VEGF-C/siRNA转染效率超过80%,VEGF-C的mRNA表达敲减率达50%,MTT结果提示慢病毒VEGF-C/siRNA能有效抑制细胞增殖,流式细胞学实验结果提示VEGF-C/siRNA干扰后S期细胞明显减少,G0/G1期细胞显著增加,细胞凋亡增加。结论慢病毒VEGF-C/siRNA转染率高,能有效敲减VEGF-C的mRNA表达,使细胞增殖受到抑制,凋亡增加。     

siRNA干扰对乳腺癌（MCF-7）ATX表达和侵袭力的影响

目的:研究针对自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗乳腺癌的前景.方法:参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照.在阳离子脂质体的介导下转染人乳腺癌细胞MCF-7,转染后48 h收集细胞,用半定量RT-PCR和western blot检测转染后ATX mRNA和ATX蛋白的表达,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果:体外合成的siRNA在转染乳腺癌细胞48 h后ATX mRNA和蛋白表达降低,转染48 h后测定乳腺癌MCF-7细胞的侵袭力明显降低(P＜0.01).结论:ATX-siRNA能有效抑制人乳腺癌细胞株ATX基因和蛋白的表达,降低人乳腺癌细胞的侵袭力.     

莪术油对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察中药提取物莪术油(zedoray turmeric oil)对人乳腺癌(human breast cancer)细胞系MCF-7的凋亡诱导作用。方法:用不同浓度的莪术油对体外培养的MCF-7细胞进行干预。分别采用MTT、细胞免疫组织化学染色、流式细胞仪检测等方法,观察其对MCF-7细胞增殖的抑制和凋亡诱导作用,并对凋亡相关Bcl-2与Bax蛋白的表达变化进行定性检测。结果:经不同浓度的莪术油处理后的MCF-7细胞,其生长受到明显的抑制,细胞凋亡指数随药物浓度增加而明显增加;莪术油作用后,细胞中Bax蛋白表达明显高于对照组。结论:一定浓度的莪术油能抑制MCF-7细胞增殖,促进其凋亡;其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

敲低膜联蛋白A7对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的：：观察靶向敲低人乳腺癌MCF-7细胞膜联蛋白A7(AXNA7)的表达对MCF-7细胞凋亡的影响。方法：实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MCF-7细胞为siRNA干扰组,另设阴性对照组、空白对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染后MCF-7细胞ANXA7的表达情况,应用流式细胞术检测ANXA7低表达对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：转染后,siRNA干扰组细胞ANXA7的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);敲低ANXA7后,MCF-7细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡。     

洛伐他汀对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞p21的影响

目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(LOV)对高表达BRCA1基因MCF-7乳腺癌细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21的影响.方法应用基因转染技术获得BRCA1高表达的MCF-7乳腺癌细胞(MCF-7BRCA1).8 μmol/L LOV处理细胞1、2、3 d后,通过MTT、Western-blot等方法检测MCF-7及MCF-7BRCA1两种细胞的增殖功能以及周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21表达的改变.结果 LOV处理后,细胞生长减慢,细胞的增殖能力降低,而p21的蛋白表达增加,其中,以BRCA1基因转染的细胞经LOV处理后变化更为显著.结论 BRCA1基因能增强LOV对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用,诱导周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21活性增加,推测这可能是LOV抑制BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞增殖的重要分子机制之一.     

厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及对VEGF表达的影响

目的研究厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及对血管表皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞分别作用24 h、48 h、72 h后的抑制率,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测厄贝沙坦高、中、低三个剂量(7.2μg/ml、3.6μg/ml、1.8μg/ml)对乳腺癌MCF-7细胞干预前后,乳腺癌MCF-7细胞中VEGF表达水平的差异,以顺铂作为阳性对照组(给药浓度为5μg/ml)。结果厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞的半数抑制浓度(IC50)为2.3μg/ml;厄贝沙坦对细胞增殖有显著抑制作用,且随着浓度的增加而增强,三个剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01);厄贝沙坦作用组中VEGF的表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),厄贝沙坦高剂量组和顺铂阳性对照组VEGF的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论厄贝沙坦对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著抑制作用,可以下调血管表皮生长因子的表达水平。     

高表达蛋白LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响

目的 观察高表达蛋白LATS1(Large tumor suppressor,homolog 1)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白GFP的LATS1质粒GFP-C1-LATS1;将构建好的GFP-C1-LATS1质粒转染MCF-7细胞,36 h后荧光显微镜下观察质粒转染效率;然后通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测转染后1~4 d细胞增殖率;通过细胞克隆形成实验检测在乳腺癌MCF-7中高表达LATS1后对细胞克隆形成的影响;最后通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测高表达LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-C1-LATS1构建成功,GFP-C1-LATS1质粒转染效率为80%左右;Western blot检测结果 表明,与空质粒对照GFP-C1相比,转染GFP-C1-LATS1后蛋白LATS1明显高表达;MTT结果 表明高表达蛋白LATS1明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖;细胞克隆形成实验表明高表达蛋白LATS1后明显抑制细胞克隆的形成,对照组和高表达LATS1组的克隆数分别为(136±30)和(53±12)个(P＜0.05);BrdU掺入结果 显示,在MCF-7细胞中,阴性对照组的细胞增殖率为(24±2)%,而高表达蛋白LATS1后细胞增殖率为(13±1)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高表达蛋白LATS1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖.     

干扰素对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用

目的:研究干扰素对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用.方法:MTT法检测干扰素-γ(IFN-γ)、干扰素-α2b(IFN-α2b)单独及联合应用,作用不同时间对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用.结果:IFN-γ、IFN-α2b及二者联合应用均对MCF-7乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用:单独用药时,作用48h的抑制作用较为明显(P<0.05);联合用药时,作用72h效果显著(P<0.05).结论:IFN-γ、IFN-α2b及二者联合应用对MCF-7乳腺癌细胞增殖均有不同程度的抑制作用,二者联合应用药效作用时间延长、作用效果更佳.     

乳腺癌间质细胞对MCF-7细胞Wnt1、Notch 1、β-catenin表达及细胞迁移的影响

目的研究乳腺癌间质细胞对乳腺癌细胞的调控效应,探讨微环境在乳腺癌发生和发展中的作用。方法取5例乳腺癌患者手术后标本进行原代间质细胞的分离、培养和纯化,并行免疫组化鉴定。采用Transwell三维共培养体系,将原代间质细胞与乳腺癌细胞系(MCF-7)共培养3d(实验组),以2?S培养基单独培养MCF-7作为对照组。Real-time PCR检测MCF-7的Wnt1、β-catenin、Notch 1 mRNA表达;迁移实验观察MCF-7迁移状况。结果经免疫组化α-SMA、Vimentin、FSP抗体鉴定,证实纯化的细胞为活化的间质成纤维细胞。实验组MCF-7的Wnt1、Notch1表达明显上调,分别为对照组的2.09倍和3.75倍,而β-catenin表达下调为对照组的0.31倍;实验组MCF-7穿过膜的细胞数明显增多,为对照组的2.3倍。结论乳腺癌原代间质细胞对MCF-7 Wnt、Notch1、β-catenin mRNA表达具有调节作用,并促进MCF-7的迁移。     

乳腺癌间质细胞对MCF-7 细胞Wnt1、Notch 1、β-catenin表达及细胞迁移的影响

目的 研究乳腺癌间质细胞对乳腺癌细胞的调控效应,探讨微环境在乳腺癌发生和发展中的作用. 方法 取5例乳腺癌患者手术后标本进行原代间质细胞的分离、培养和纯化,并行免疫组化鉴定.采用Transwell三维共培养体系,将原代间质细胞与乳腺癌细胞系(MCF-7)共培养3 d(实验组),以2%FCS培养基单独培养MCF-7作为对照组.Real-time PCR检测MCF-7的 Wnt1、β-catenin、Notch 1 mRNA表达;迁移实验观察MCF-7迁移状况. 结果 经免疫组化α-SMA、Vimentin、FSP抗体鉴定,证实纯化的细胞为活化的间质成纤维细胞.实验组MCF-7的Wnt1、Notch1表达明显上调,分别为对照组的2.09倍和3.75倍,而β-catenin表达下调为对照组的0.31倍;实验组MCF-7穿过膜的细胞数明显增多,为对照组的2.3倍. 结论 乳腺癌原代间质细胞对MCF-7 Wnt、Notch1、β-catenin mRNA表达具有调节作用,并促进MCF-7的迁移.     

槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:探索槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:槲皮素体外孵育人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测MCF-7细胞增殖,FCM法测定细胞周期,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡.结果:槲皮素明显抑制MCF-7细胞增殖,高浓度时(≥50μM)促进细胞凋亡,低浓度时(≤20μM)阻滞MCF-7细胞于S期.结论:槲皮素具有抗人乳腺癌MCF-7细胞的生物学活性.     

人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中糖皮质激素受体的表达及其调节

目的研究地塞米松(Dex)在MCF-7细胞中是否具有糖皮质激素受体(GR)的表达,以及Dex对其受体表达的调节。方法采用氨基安替比林法测定GR拮抗剂(RU486)作用MCF-7细胞后能否阻断糖皮质激素的效应,采用放射配体结合分析法检测MCF-7细胞中GR的表达及Dex对其调节作用。结果 RU486可完全阻断Dex对MCF-7细胞活性的诱导作用;在细胞中存在高亲和力、低容量GR;Dex明显降低GR结合活性,且具有时间、剂量依赖性。结论在MCF-7细胞中存在GR,Dex调节MCF-7细胞增殖分化的作用通过 GR介导,Dex对MCF-7细胞GR的结合活性具有向下调节作用,且呈时间、剂量依赖性。     

Let-7a沉默c-myc基因对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的 探讨let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞株的抑制作用及可能的作用机制.方法 用lipofectamineTM2000介导let-7a和阴性对照siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞株,半定量RT-PCR检测各组细胞c-myc mRNA表达;Western blot测定转染24 h后c-myc蛋白的表达水平; CCK-8检测细胞增殖和凋亡.结果 细胞转染后,let-7a转染组的c-myc mRNA表达水平明显低于脂质体对照组和阴性siRNA转染组(0.586±0.032, 0.934±0.029,0.825±0.004,P<0.01);在MCF-7细胞中存在分子量62 kD的特异性条带,与c-myc蛋白分子量相符,let-7a组的特异性条带明显弱于对照组; let-7a对细胞增殖具有一定的抑制作用(P<0.05),且该抑制作用具有时间和浓度的依赖性.结论 Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用,其机制可能与抑制c-myc的基因表达有关.     

巨噬细胞对乳腺癌细胞MCF-7体外杀伤作用的研究

目的:观察巨噬细胞体外扩增特性及其对乳腺癌细胞MCF-7的抗肿瘤作用。方法:将巨噬细胞与乳腺癌细胞MCF-7共培养,获取初期细胞,光镜观察。以MTT法检测巨噬细胞对乳腺癌细胞MCF-7的抑制率。结果:共培养初期细胞膜完整、细胞折光性强;37℃、5%CO2、不换液、不传代培养后,细胞内颗粒增多、折光性变弱,同时死亡、破碎细胞数量增加;继续培养,细胞几乎全部死亡、破碎,培养至18天左右,体积变大、折光性变强等具有活化特征的细胞出现;采用适当方式换液后,这些折光性较强的细胞的体积迅速增大,进入分裂增殖状态;培养50天左右,细胞的分裂、增殖减缓,细胞吞噬加强,巨大细胞的数量逐渐增多。以MTT法检测巨噬细胞对乳腺癌细胞MCF-7的抑制率,在效靶比为5:1、10:1、20:1、40:1时,抑制率随着效靶比的增加而增加,成正相关。而当效靶比为100:1时,反而促进肿瘤细胞的增殖。结论:采用死亡肿瘤细胞悬液可诱导PBMC获得巨噬细胞,巨噬细胞在一定浓度的范围内可抑制肿瘤细胞的生长,而当浓度过高时反而促进肿瘤细胞的生长。