血浆外泌体miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病中的表达及诊断价值

目的 研究miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病血浆外泌体中的表达差异性及其诊断价值。方法 通过生物信息学网站筛选结核病外泌体中具有差异性表达的miRNAs(miR-26a-5p和miR-151a-3p)。再以70例结核病患者(结核病组),58例体检健康者(健康对照组)样本进行临床验证：采用差速离心法提取血浆外泌体,透射电子显微镜,粒径分析,Western blot对其鉴定,采用RT-qPCR检测血浆外泌体中miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病组和对照组中的表达水平,并通过ROC曲线评价二者在结核病中诊断价值。结果 透射电镜、粒径分析、Western blot鉴定到典型的外泌体特性,即成功提取到血浆外泌体。在临床验证中,以内参和外参同时校准,结核组患者血浆外泌体中miR-26a-5p表达水平低于对照组(P<0.000 1),结核组患者血浆外泌体中miR-151a-3p表达水平高于对照组(P<0.000 1),与生物信息学结果一致。作为诊断标记,以内参为基准,血浆外泌体miR-26a-5p、miR-151a-3p鉴别结核病的曲线下面积(AUC)分...     

lncRNA PWAR5通过靶向miR-30a-5p/SOCS3分子轴降低心肌炎心肌细胞的损伤

目的 研究长链非编码(lncRNA)PWAR5在脂多糖诱导心肌炎时对心肌细胞的保护作用及分子机制.方法 分离培养大鼠原代心肌细胞,分别采用载有PWAR5序列的慢病毒(PWAR5组)和空载慢病毒(Control组)进行感染,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染效率.采用脂多糖诱导心肌炎后,MTS法检测PWAR5对...     

miR-26a-5p通过JAK2/STAT3 信号通路对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

探讨miR-26a-5p对人类风湿关节炎（RA）-成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡及炎性因子分泌的影响,阐明其作用机制。     

miR-21a-5p靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤的实验研究

目的 miR-21a-5p对脂多糖( LPS)处理的 RAW264. 7 巨噬细胞的调控作用及分子机制研究.方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测不同浓度 LPS处理的巨噬细胞中 miR-21a-5p水平;应用 miR -21a-5p模拟物( mimics)和阴性对照( miRNA-NC)分别转染 LPS处理...     

miR-34a-5p在ox-LDL引起内皮细胞损伤中的作用机制

目的 研究miR-34a-5p在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)引起内皮细胞损伤中的作用及机制。方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为对照组、ox-LDL组、阴性对照(NC)组、NC+ox-LDL组、miR-34a-5p敲低+ox-LDL组,采用荧光定量PCR检测miR-34a-5p的表达水平,采用western blot检测沉默信息调节因子1(Sirt1)、p53、核因子κB(NF-κB)的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a-5p靶向Sirt1,采用试剂盒检测细胞活力A₄₉₀水平及凋亡率,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)。结果ox-LDL组中miR-34a-5p、p53、NF-κB的表达水平高于对照组,Sirt1的表达水平低于对照组(P<0.05);Sirt1基因mRNA 3′UTR中含有miR-34a-5p的互补结合位点,miR-34a-5p组Sirt1的荧光素酶活性低于NC组(P<0.05);NC+ox-L...     

miR-21-5p通过调控自噬减轻肥厚性心肌病小鼠的心肌损伤

目的 探讨miR-21-5p对主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction, TAC)所致的肥厚性心肌病小鼠心肌损伤的保护作用及潜在机制。方法 40只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(TAC组)、miR-21-5p激动剂处理组(ago^miR-21-5p组)和miR-21-5p激动剂+PI3K抑制剂处理组(ago^miR-21-5p+LY294002组),每组10只,采用主动脉弓缩窄术建立心肌肥厚模型。qRT-PCR法检测miR-21-5p、α-肌球蛋白重链(alpha myosin heavy chain,α-MHC)、β-肌球蛋白重链(beta myosin heavy chain,β-MHC)和心房利钠肽(atrial natriuretic peptide, ANP)的mRNA表达情况,超声心动图检测心脏功能,测定心脏质量/体质量(HW/BW)及心脏质量/胫骨长度(HW/TL)比值,HE染色观察心肌细胞横截面积,Masson染色观察心肌组织纤维化程度,免疫组化染色观察Collag...     

miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法荧光定量PCR检测胰腺癌组织中miR-125a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒-8检测下调miR-125a-5p水平对胰腺癌细胞生长的影响,流式细胞术检测下调miR-125a-5p表达水平对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响,软琼脂集落形成实验评价miR-125a-5p在胰腺癌细胞恶性转化过程中的作用。结果 miR-125a-5p在胰腺癌组织的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。下调miR-125a-5p表达水平后,胰腺癌细胞系Panc-1和MIA Pa Ca-2的生长受到抑制(P<0.05),早期凋亡率分别增加13.6%和11.0%(P<0.05),细胞集落数目分别下降27.3%和27.8%(P<0.05),Panc-1细胞S期细胞百分比降低11.8%(P<0.05)。结论 miR-125a-5p在胰腺癌组织中高表达,下调miR-125a-5p表达水平使胰腺癌细胞生长受到抑制,集落形成能力下降,细胞周期受到阻滞,凋亡比例增加,提示miR-125a-5p在胰腺癌中发挥癌基因的作用。     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

miR-130a-3p靶向TRIM37蛋白缓解H2O2诱导的心肌损伤

目的 研究微小RNA-130a-3p(miR-130a-3p)在H2O2损伤的HL-1细胞中的作用及其机制.方法 建立H2O2诱导的HL-1心肌细胞氧化应激损伤模型,miR-130a-3p模拟物或TRIM37过表达载体被单独/共转染至H2O2诱导的HL-1细胞.荧光定量PCR检测miR-130a-3p水平,Wester...     

miR-20a-5p通过下调BMPR2促进人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡

目的 探讨微小RNA-20a-5p（miR-20a-5p）是否通过下调骨形成蛋白2型受体（BMPR2）基因调控人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡。 方法 在永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中分别转染miR-20a-5p mimics,BMPR2小干扰RNA(si-BMPR2)或过表达质粒（pcDNA-BMPR2）。实时定量PCR（qRT-PCR）测定miR-20a-5p表达,免疫印迹（Western Blot）检测BMPR2、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、活化的的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白水平,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶报告基因检测分析miR-20a-5p和BMPR2之间的关系。共转染miR-20a-5p mimics和pcDNA-BMPR2,利用上述方法评估其对细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT信号通路的影响。 结果 过表达miR-20a-5p明显增加hCMEC/D3的细胞活性,CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。低表达BMPR2明显提高hCMEC/D3的细胞活性、CyclinD1蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）,高表达BMPR2时具有相反的效果。miR-20a-5p靶向BMPR2,并调控BMPR2蛋白的表达。高表达BMPR2可以逆转miR-20a-5p促hCMEC/D3增殖、PI3K/AKT信号通路活性和抑凋亡的作用。 结论 miR-20a-5p通过靶向BMPR2激活PI3K/AKT信号通路,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,并抑制凋亡。     

术前血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平预测前列腺癌患者术后复发转移的价值

目的：探讨血清miR-148a-3p及miR-139-5p水平对前列腺癌（prostate cancer,PCa）患者术后复发转移的价值。方法：选取2015年1月1日至2017年12月31日海口市第三人民医院收治的PCa患者142例,根据其术后是否发生复发转移分为未复发转移组（n=84）和复发转移组（n=58）。检测两组术前miR-148a-3p、miR-139-5p及前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）表达水平,分析其与临床病理特征的关系。应用ROC曲线分析miR-148a-3p、miR-139-5p及PSA预测PCa术后复发转移的价值。Pearson相关分析miR-148a-3p、miR-139-5p与PSA相关性。结果：复发转移组血清miR-148a-3p、miR-139-5p及PSA水平分别为（4.80±0.75）、（7.64±2.38）和（63.75±14.92） ng/mL,均高于未复发转移组的（2.15±0.36）、（3.50±0.62）和（18.72±8.60） ng/mL,差异有统计学意义（t值分别为10.648、14.715和9.804,均P=0.000）。复发转移患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平与肿瘤分期（t=5.117,P=0.024;t=5.304,P=0.018）、Gleason评分（t=5.512,P=0.006;t=6.218,P=0.000）及PSA水平（t=10.208,P=0.000;t=13.620,P=0.000）有关联。ROC曲线分析显示,血清miR-148a-3p、miR-139-5p及PSA预测PCa术后复发转移的最佳截值分别为3.40、5.38和36.80 ng/mL,三项联合预测PCa术后复发转移的AUC（0.914,95%CI=0.858～0.972）最大,其敏感度和特异度为92.0%和83.6%。相关分析显示,复发转移患者血清miR-148a-3p、miR-139-5p水平与PSA均呈正相关（r=0.774,P＜0.001;r=0.806,P＜0.001）。结论：术前血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达上调与PCa术后复发转移有关,联合PSA检测对预测PCa术后复发转移具有较高的价值。     

miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建

目的：构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定,并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以C57BL/6J小鼠为背景,对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除,培育纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠。采用裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,进行PCR反应检测亲代纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠基因型,并选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠作为亲代种鼠进行配种繁殖。通过全自动蛋白表达分析系统检测小鼠脾脏组织Foxp3的蛋白表达。结果：成功构建miR-125a-5p基因敲除小鼠,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为240 bp或0 bp单条带的为纯合型基因敲除（KO）小鼠,鉴定获得668 bp或428 bp单条带的为野生型（WT）小鼠,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了miR-125a-5p基因敲除小鼠的基因型。选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠进行配种繁育,获得了一批miR-125a-5p敲除纯合子基因型小鼠。与WT小鼠相比,miR-125a-5p基因敲除小鼠的脾脏组织中Foxp3表达降低（...     

松香酸通过上调miR-30a-3p表达增强缺氧诱导的HUVECs血管生成

目的 探讨松香酸对急性心肌梗死（AMI）后内皮细胞血管生成及迁移的作用与机制。方法在体外构建人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）细胞缺氧模型;通过Matrigel小管形成实验检测HUVECs的血管生成情况;Transwell及伤口愈合实验检测HUVECs的细胞迁移;Western blot检测血管内皮生成因子A(VEGFA)的表达情况;qRT-PCR检测miR-30a-3p的转录水平。结果 成功构建细胞缺氧模型;Matrigel小管形成实验显示缺氧抑制HUVECs的血管生成及细胞迁移,而利用松香酸处理缺氧细胞后,可以促进其血管生成和细胞迁移;Western blot结果显示,松香酸能够促进VEGFA的表达;进一步利用qRT-PCR检测松香酸处理后细胞内miR-30a-3p水平,发现松香酸可明显提高miR-30a-3p水平,而在细胞内转染miR-30a-3p inhibitor后,松香酸促进HUVECs的血管生成和细胞迁移作用被抑制。结论 松香酸可能通过调节miR-30a-3p的表达,增强HUVECs的血管生成...     

上调miR-378a-3p对血管瘤内皮细胞生长和侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-378a-3p（miR-378a-3p）对血管瘤内皮细胞（HemECs）增殖、侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法 HemECs细胞随机分为对照组、miR-NC组及miR-378a-3p组;对照组为常规培养HemECs细胞,miR NC组和miR-378a-3p组HemECs细胞分别在脂质体（Lipofectamine RNAIMAX）的介导下转染阴性对照以及miR-378a-3p模拟物。荧光定量PCR（qPCR）检测miR-378a-3p的表达量,细胞计数（CCK 8）检测各组细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移;在线数据库TargetScan预测以及双荧光素酶报告基因验证miR-378a-3p与驱动蛋白超家族2A（KIF2A）的靶向关系。 〖HTH〗结果〓〖HTK〗与对照组相比,miR-378a-3p模拟物能明显上调HemECs细胞中miR-378a-3p的表达量（P＜0.05）;上调miR-378a-3p的表达量抑制HemECs细胞增殖,降低其侵袭、迁移的能力（P＜0.05）;KIF2A是miR-378a-3p下游靶基因之一。结论 miR-378a-3p可能通过靶向KIF2A抑制HemECs细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-219a-5p通过下调 KLF4减轻 H2O2 诱导的人心肌细胞氧化损伤

摘要:目的 探究 miR-219a-5p对人心肌细胞(HCM)氧化应激损伤的作用和机制。方法 利用 H2O2建立 HCM 氧 化应激模型,将 HCM 细胞随机分成4组:对照组、H2O2组(200μmol/L H2O2处理6h),H2O2+NCmimic组(H2O2处理 前转染对照 mimic)和 H2O2+miR-219a-5p组(H2O2处理前转染 miR-219a-5pmimic)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力, 流式细胞术 检 测 细 胞 凋 亡,Real-timePCR 检 测 miR-219a-5p 和 KLF4 mRNA 表 达,Westernblot检 测 Bax、Bcl-2 和 Krüppel样因子4(KLF4)蛋白表达,试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。另外,利 用荧光素酶报告基因实验确证 miR-219a-5p与 KLF4的相互作用关系。结果 与对照组相比,H2O2 组中 miR-219a-5p 表达、细胞活力和SOD水平降低,细胞凋亡、Bax/Bcl-2、ROS和 MDA 水平以及 KLF4表达升高(均P<0.05)。与 H2O2 组相比,H2O2+miR-219a-5p组中 miR-219a-5p表达、细胞活力和 SOD 水平升高,细胞凋亡、Bax/Bcl-2、ROS和 MDA 水 平以及 KLF4表达降低(均P<0.05)。H2O2+ NCmimic组与 H2O2组相比上述指标变化均不大,差异均无统计学意义 (均P>0.05)。荧光素酶实验结果显示,miR-219a-5p能够降低 KLF4-野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05)。结论 miR-219a-5p对 H2O2诱导的 HCM 细胞氧化应激损伤具有缓解作用,这种作用可能是通过下调 KLF4的表达发挥的。     

网络筛选乳腺癌相关miRNAs及miR-106a-5p对乳腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 网络筛选乳腺癌关键微小RNAs(microRNAs,miRNAs),并探讨miR-106a-5p对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力的影响.方法 通过TargetScan和miRanda等工具,构建miRNAs与靶基因以及显著靶向性功能(gene ontology,GO)的调控网络,筛选对乳腺癌有关键调控作用的miRNAs;利用miR-106a-5p agomir及miR-106a-5p antagomir转染MCF-7、T47D乳腺癌细胞株,建立乳腺癌细胞中miR-106a-5p的过表达及敲低体系,Transwell侵袭实验、Transwell迁移实验、划痕实验检测miR-106a-5p对乳腺癌细胞的侵袭、迁移能力的影响.结果 在miRNAs-gene-network和miRNAs-GO-network两个网络中调控维度最高的miRNAs基本一致,其中miR-106a-5p是调控维度最高的miRNAs之一;过表达miR-106a-5p显著抑制乳腺癌细胞的侵袭能力和迁移能力(P＜0.05),敲低miR-106a-5p则显著增加乳腺癌细胞的侵袭能力和迁移能力(P＜0.05).结论 miR-106a-5p是乳腺癌miRNAs调控网络中的关键miRNAs之一,具有抑制乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力的生物学功能.     

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI...     

miR-193a-5p/HOXA7轴对急性髓细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的 探究miR-193a-5p/HOXA7轴在急性髓细胞白血病(AML)细胞增殖与凋亡过程中的作用.方法 收集初治AML患者及健康志愿者的骨髓样本,检测骨髓样本中miR-193a-5p与HOXA7表达水平的变化,分析miR-193a-5p与HOXA7的调控作用.体外培养AML细胞系THP-1,分别给予转染空载体、mi...     

miR-135a-5p通过调控Bcl-2/Bax通路对青光眼视网膜神经节细胞凋亡的作用机制

目的 探讨miR-135 a-5 p与Bcl-2/Bax间的关系及其对青光眼视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的作用和机制.方法 建立BALB/C小鼠青光眼模型,检测眼压和视网膜RGCs数量及miR-135 a-5 p表达.实验用RGCs细胞分为miR-135 a-5 p组、空白组、miR-135 a-5 p抑制组,mi...