L-NAME调控EMT抑制卵巢癌细胞迁移

目的探讨一氧化氮合酶泛抑制剂左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖、迁移以及对上皮间充质转化(EMT)标志物的影响。方法利用L-NAME抑制卵巢癌SKOV3中一氧化氮合酶(NOS)功能,以L-NAME处理组为实验组,二甲基亚砜(DMSO)组为对照组,采用CCK8增殖实验、平板克隆形成试验、划痕试验和Transwell小室迁移实验检测L-NAME对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移功能的影响;并利用荧光定量PCR和Western blot检测卵巢癌细胞上皮细胞标志物E-cadherin和间充质细胞标志物N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达,观察L-NAME对卵巢癌SKOV3细胞EMT标志物的调控作用。结果 CCK8增殖实验和平板克隆形成实验显示L-NAME抑制SKOV3细胞增殖功能(P0.05);划痕实验和Transwell小室实验显示L-NAME抑制SKOV3细胞迁移功能(P0.05);荧光定量PCR和Western blot结果显示L-NAME上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达(P0.05)。结论 L-NAME抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移功能,调节EMT标志物变化。     

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p 调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过W...     

γδT 细胞对卵巢癌 SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的：探讨γδT细胞对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用,阐明γδT细胞诱导卵巢癌细胞凋亡的可能作用机制。方法：将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞设为对照组,将体外分离培养且与γδT细胞共培养72h的卵巢癌SKOV3细胞设为γδT细胞处理组,于激光共聚焦显微镜下观察2组中SKOV3细胞核形态学变化,采用MTT法检测2组SKOV3细胞增殖抑制率,利用Transwell小室检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：激光共聚焦显微镜下,γδT细胞处理组SKOV3细胞出现核皱缩等细胞凋亡的形态学改变较对照组明显;MTT法检测,γδT细胞处理组SKOV3细胞增殖抑制率高于对照组（P<0.05）;Transwell小室检测,γδT细胞处理组SKOV3细胞穿膜细胞数少于对照组,细胞的迁移率低于对照组（P<0.05）;流式细胞术检测,γδT细胞处理组SKOV3细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）。结论：γδT细胞能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖及迁移能力,促进细胞凋亡。     

RNAi沉默N-cadherin通过MEK ERK信号通路抑制-卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化过程

目的 探讨沉默神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移与上皮-间质转化的影响及分子机制。方法 收集2021年3月~2021年12月我院卵巢癌患者手术切除的卵巢癌组织与邻近癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色检测N-cadherin蛋白表达。通过RNAi 技术沉默卵巢癌细胞SKOV3细胞中 N-cadherin的表达后分为空白对照组、空载体组、siRNA-N-cadherin组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性、克隆形成能力以及细胞周期分布,Transwell实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞中N-cadherin、上皮性钙粘附分子（E-cadherin）mRNA表达,免疫细胞化学染色检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）蛋白表达,Western blot检测各组细胞中MEK、ERK蛋白表达。结果 与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中N-cadherin呈高表达（P＜0.05）。与空白对照组和空载体组比较,沉默N-cadherin能够抑制SKOV3细胞增殖活性（P＜0.05）,细胞克隆形成数目下降（P＜0.01）,并使细胞发生S期阻滞（P＜0.01）,细胞侵袭数目和迁移数目均减少（P＜0.01）;此外,沉默N-cadherin后SKOV3细胞中N-cadherin mRNA相对表达量下降,E-cadherin mRNA相对表达量升高（P＜0.05）,细胞内N-cadherin、MMP2和MMP9蛋白阳性染色减弱,E-cadherin蛋白阳性染色增强,细胞中MEK、ERK的蛋白表达水平均下降（P＜0.05）。结论 沉默N-cadherin可抑制卵巢癌细胞活性、细胞克隆形成、侵袭、迁移与上皮-间质转化的能力,使细胞阻滞于S期,其机制可能与阻碍MEK、ERK信号通路有关。     

晶状体蛋白αB对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的 研究晶状体蛋白αB(αB-crystallin)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖及迁移侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学法检测人正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中αB-crystallin表达;针对蛋白αB-crystallin的基因(CRYAB基因)设计合成靶向小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)重组慢病毒,并感染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3;流式细胞仪、平板克隆、MTT检测细胞凋亡和增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 αB-crystallin在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,在Ⅱ型卵巢癌组织中呈明显高表达(P＜0.01),稳转CRYAB siRNA慢病毒后SKOV3细胞内αB-crystallin蛋白表达降低64％,其凋亡和增殖无明显改变,但SKOV3细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.01),同时蛋白MMP-2和MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 αB-crystallin能够影响卵巢癌SKOV3细胞浸润转移,其在Ⅱ型卵巢癌组织中的高表达可能与其高侵袭潜能相关.     

HYAL2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：利用RNA干扰（RNAi）技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法：将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测SKOV3细胞增殖,FCM检测细胞周期变化,构建Transwell小室体外侵袭模型观察其对细胞侵袭能力的影响.结果：转染siRNA-HYAL248 h后HYAL2基因mRNA表达水平明显降低,细胞存活率下降（P〈0.05）,S期细胞百分比降低、G0/G1期细胞百分比升高（P〈0.05）;转染24 h后平均穿膜细胞数减少（P〈0.05）.结论：siRNA-HYAL2能特异性抑制HYAL2的mRNA表达水平,HYAL2基因沉默后,卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力降低,HYAL基因可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点.     

抑制IGFBP2、IGFBP3在卵巢肿瘤中的表达对卵巢癌的迁移、侵袭的影响

目的研究抑制IGFBP2、IGFBP3在卵巢肿瘤中的表达对卵巢癌的迁移侵袭的影响。方法采用siRNA干扰IGFBP2、IGFBP3在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达,CCK-8试剂盒检测SKOV3的增殖情况,流式细胞术检测SKOV3的凋亡情况,transwell实验、细胞划痕愈合实验检测SKOV3的迁移与侵袭;CCK-8法检测不同浓度顺铂(5、10、20μg/m L)对SKOV3细胞生长的影响。结果采用siRAN干扰IGFBP2、IGFBP3在卵巢癌SKOV3中表达后,与对照组相比SKOV3细胞增殖能力下降,凋亡增加,迁移与侵袭功能下降。结论抑制IGFBP2、IGFBP3在卵巢肿瘤中的表达对卵巢癌的迁移与侵袭起一定的抑制作用。     

miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的 研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法 采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM52 3’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果 卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多...     

肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究

目的 研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较.在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力.结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P＜0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P＜0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P＜0.05).结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力.     

miR-603对宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的 探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法 采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9, CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papilloma virus 16, HPV16)E6、E7后采用real-time PCR检测miR-603的表达。将宫颈癌细胞SiHa分为4组：mimic NC组、mimic 603组、inhibitor NC组和inhibitor 603组,将mimic NC、mimic 603、inhibitor NC及inhibitor 603分别转染SiHa细胞,通过real-time PCR检测miR-603的表达水平,CCK-8法检测SiHa细胞增殖能力,Transwell小室法检测SiHa细胞迁移能力。双荧光素酶报告试验检测miR-603是否与IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating p...     

靶向沉默CCDC132表达对卵巢癌细胞SKOV3生长、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的研究shRNA靶向沉默CCDC132基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计CCDC132-siRNA及空转序列,转染卵巢癌SKOV3细胞,分别为shCCDC132组及对照组,利用qRT-PCR检测各组细胞CCDC132相对表达量,CCK8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western Blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达情况。结果转染后,sh-CCDC132组细胞中CCDC132表达水平较对照组显著降低(P0.01);sh-CCDC132组细胞增殖率较对照组显著降低(P0.01),迁移率下降(P0.01)、侵袭细胞数显著降低(P0.01),caspase-3、Bax蛋白表达显著上调(P0.01),而β-catenin(P0.01)、Cyclin D1(P0.01)和c-myc(P0.05)蛋白表达水平显著降低。结论沉默CCDC132可抑制SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力,其具体机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

氯喹对卵巢癌细胞增殖、迁移和自噬的影响

目的：探讨氯喹对卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞增殖、迁移和自噬的影响。方法：采用CCK8法检测不同浓度氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞后的增殖能力;克隆形成实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞克隆形成的影响;划痕实验和Transwell实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞的迁移能力的影响;红绿双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬双标质粒转染A2780细胞和SKOV3细胞,荧光显微镜观察氯喹处理48 h后自噬小体的形成和自噬流的变化;Western Blot检测氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞48 h后自噬标志蛋白LC3的表达及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结果：氯喹显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖能力和迁移能力,另外,氯喹处理能显著抑制卵巢癌细胞的自噬水平。A2780细胞和SKOV3细胞经氯喹处理后LC3Ⅱ、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白表达水平显著增高,而AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著降低。结论：氯喹能显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖和迁移能力,并可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞自噬。     

卵巢癌组织内源性肽P1DA促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的：探讨卵巢组织中来源于AHNK2蛋白的多肽（peptide 1 derived from AHNK2 protein,P1DA）对卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法：P1DA处理对数生长期的SKOV3和OVCAR3细胞后,CCK?8法检测细胞活性变化,以探索P1DA对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖的影响;Transwell实验检测P1DA处理后细胞迁移、侵袭能力变化;流式细胞术检测P1DA处理后细胞凋亡率变化,分析P1DA对两种卵巢癌细胞凋亡率的影响。结果：P1DA处理后,卵巢癌细胞SKOV3及OVCAR3的细胞活性明显增加,迁移、侵袭能力明显增加,细胞凋亡率则无明显变化。结论：卵巢组织内源性肽P1DA可促进卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,对其凋亡无显著影响。     

组蛋白去乙酰化酶1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响.方法：体外合成针对HDAC1的小干扰RNA （siRNA）,利用脂质体转染入人卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot方法检测细胞内HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的表达,利用荧光定量PCR方法检测HDAC1、尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）和尿激酶型纤溶酶原激活因子受体（uPAR）基因的mRNA表达;通过划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果：经转染HDAC1基因siRNA后,卵巢癌SKOV3细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达水平均下调,细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加;SKOV3细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少;SKOV3细胞内uPA和uPAR基因mRNA表达也降低.结论：HDAC1基因沉默能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,机制可能与增加组蛋白乙酰化水平、抑制uPA和uPAR基因表达有关.     

吉马酮调控JAK2/STAT3信号通路对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭的影响

背景 卵巢癌死亡率居于女性生殖系统恶性肿瘤的首位,仍需不断探索新的药物来改善其预后,近年来许多研究报道了吉马酮有抗肿瘤细胞作用.目的 探讨吉马酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制.方法 培养人卵巢癌SKOV3细胞,分别用0 μmol/L、70 μmol/L、140 μmol/L、210 μmol/L、280 μmol/L、350 μmol/L吉马酮作用于卵巢癌SKOV3细胞24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测吉马酮对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验及Transwell实验观察吉马酮对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的影响;Western blot法检测各组细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白及肿瘤侵袭转移相关蛋白MMP2、MMP9的表达.结果 CCK-8实验结果提示吉马酮可以抑制人卵巢SKOV3细胞的增殖,并存在时间及浓度依赖性;细胞划痕实验显示0 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L吉马酮组划痕愈合率分别为69.00％ ± 6.76％、40.33％ ± 5.21％、13.79％ ± 9.23％ (P<0.05);Transwell迁移实验显示0 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L吉马酮组穿过小室细胞个数分别为466.5 ± 47.7、319.4 ± 41.2、149.7 ± 26.3(P<0.05);Transwell侵袭实验显示0 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L吉马酮组穿过小室细胞个数分别为278.6 ± 71.8、161.0 ± 35.4、70.1 ± 24.9.与对照组相比,药物组对细胞迁移及侵袭有明显的抑制作用(P<0.05),并具有浓度依赖性;Western blot结果提示吉马酮可浓度依赖性下调p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3,还可浓度依赖性下调MMP2、MMP9蛋白表达(P<0.05).结论 吉马酮可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭能力,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路活性、下调MMP2、MMP9蛋白表达有关.     

Rac1蛋白在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3增殖及迁移的作用

目的 研究Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3恶性增殖和迁移的影响.方法 Western blot检测人卵巢浆液性腺癌组织、卵巢良性浆液性囊腺瘤组织及卵巢正常组织中Rac1蛋白的表达水平;构建Rac1表达缺失的细胞株SKOV3-Rac1i;分别用细胞划痕实验、MTT及平板克隆实验检测SKOV3-Rac1i细胞迁移能力、细胞增殖及克隆形成能力.结果 卵巢浆液性腺癌组织中Rac1蛋白表达水平显著高于卵巢良性浆液性囊腺瘤组织[(0.89 ±0.17)vs(0.69 ±0.24),P＜0.05]和卵巢正常组织[(0.89±0.17) vs (0.72±0.12),P＜0.05];与亲代细胞相比,SKOV3-Rac1i细胞表现出迁移能力减弱(P＜0.05)和增殖能力明显受限(P＜0.05).结论 Rac1在人卵巢浆液性腺癌组织中呈高表达,其可能是通过影响细胞迁移能力及细胞的增殖而促进卵巢癌细胞的恶性生物行为.     

卵巢癌中抑癌因子SUFU的表达变化及意义

目的：探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU（suppressor of Fused）表达变化及其意义。方法：通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量，并在数据库大样本和细胞水平上进行验证。同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后，运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition，EMT）、迁移与侵袭的情况，并随后用Western blot和实时定量PCR（quantitative real?time PCR，qPCR）检测Sonic Hedgehog（SHH）信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和mRNA水平。结果：在3例卵巢癌组织样本中，相比于癌旁组织，癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调，而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证；此外在细胞水平上，人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和mRNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3。进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭，促进凋亡；相反，在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力。同时，相比正常卵巢上皮细胞，卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升；当在卵巢癌细胞中上调SUFU时，SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调。结论：SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展，其作用机制与SHH信号通路相关。     

干扰内皮素-1 可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨干扰内皮素-1（ET-1）基因对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响以及相应的分子机制。方法构建ET-1 shRNA慢病毒干扰载体,成功包装慢病毒后感染鼻咽癌5-8F细胞。Western blotting检测ET-1干扰效率。利用MTT、细胞周期 检测、平板克隆形成实验、Transwell 小室、Boyden 小室以及裸鼠皮下成瘤实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力的改变。 Western blotting 检测上皮间质转化（EMT）相应基因表达改变。结果与对照组细胞相比,鼻咽癌细胞5-8F 感染慢病毒 shRNA-ET-1后ET-1的表达水平显著降低。MTT实验结果显示,在抑制ET-1表达后细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测 细胞周期显示干扰ET-1表达,G1细胞数明显增多。平板克隆形成实验结果显示干扰ET-1表达,癌细胞克隆形成能力显著下 降。皮下裸鼠成瘤实验结果同样显示,ET-1表达抑制后癌细胞成瘤能力显著下降。Transwell和Boyden小室结果表明,ET-1表 达沉默后可显著降低细胞的迁移和侵袭能力。通过检测ET-1 沉默后EMT 相关分子的表达改变,结果显示上皮标志物 E-cadherin和CK18表达增高,而间质标志物Vimentin和N-cadherin表达降低。结论ET-1在鼻咽癌中可通过调控上皮间质转 化相关基因促进细胞增殖、迁移和侵袭能力。