PDGF在缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及其机理初探

目的：研究缺氧性肺动脉高压肺血管结构改建中肺血管平滑肌细胞增殖的机理。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和核酸分杂交技术观察了缺氧对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）增殖及血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ链，－Ｂ链，α，β亚基受体基因表达的影响，结果：低氧６ｈ使ＰＡＳＭ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入减少（Ｐ〈０．０５），无氧６ｈＰＡＳＭ的＾３Ｈ－ＴｄＲ参入均较常氧对照组明显增多Ｐ〈０．００１，而缺氧１２ｈ则促进参入，至     

红景天甙对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制

０引言目前，认为缺氧性肺动脉高压形成的主要因素有缺氧性肺动脉血管收缩和缺氧性肺动脉壁构型重建．而在这两者中，肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移起着重要作用．植物红景天被认为具有抗缺氧、提高机体在高原劳动能力等作用［１］，在我国西北、西南高原缺氧地区被用于防治高原适应不全症，并取得满意效果，但对其作用机理尚缺乏研究．本试验应用四唑盐比色试验、３Ｈ—ＴｄＲ参入试验技术研究红景天甙对培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）增殖和ＤＮＡ合成的影响，探讨其在防治肺动脉高压中的可能作用机制。１方法１．１实验动物纯种１…     

一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的：研究一氧化氮（NO）对肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖和凋亡的作用。方法：通过非核素标记细胞增殖检测试剂盒、^H-TdR掺入、形态学、流式细胞术等方法研究NO与PASMC增殖和凋亡的关系。结果：25－500μmol/L的NO供体S－亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）呈剂量依赖性地减少PASMC的细胞和DNA合成，500μmol/L的SNAP显著减少S期和G2／M期的细胞比例，增加G0／G1期的细胞比例。100－500μmol/L的SNAP呈剂量依赖性地增加PASMC的凋亡率。结论：NO可抑制PASMC增殖并促进其凋亡。早期给予NO对肺动脉高压血管重建可能有一定的预防作用。     

高肺血流量对大鼠动脉压及肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的：建立左向右分流所致肺动脉高压的大鼠模型，探讨高肺血流量对肺血流动力学及肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用腹主动脉－下腔静脉分流术建立左向右分流的大鼠模型，观察术后6周和11周肺血流动力学，右心室肥厚和肺动脉舒张反应的改变。采用免疫组织化学和原位缺口末端标记方法对11周组大鼠肺血管平滑肌细胞进行增殖和凋亡状态的研究。结果：术后6周与11周大鼠肺动脉了收缩压，肺动脉平均压，右心室（RV）与左心室加室间隔（LV＋S）的比值较同龄对照组明显增加，而且11周分流组肺动脉收缩压较6周分流组进一步增高，在11周分流组大鼠中，乙酰胆碱（ACh)产生的肺动脉环舒张反应较对照组明显减弱，而硝普钠（SNP）产生的肺动脉环舒张百分比无明显变化，11周分流组大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖指数（PI），凋亡指数（AI），PI／AI比值明显高于11周对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞。结论：腹主动脉－下腔静脉分流术可导致肺动脉高压形成，高肺血流量引起的内皮依赖性肺血管舒张功能失调对肺动脉高压的形成有重要的影响，肺动脉平滑肌细胞的增殖的增加和凋亡的相对减少在肺动脉高压的发生中起到重要作用。该模型简单，可靠，重复性好。     

RNAi沉默MACC1基因表达抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移

目的探讨RNAi沉默MACC1基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移的影响及相关的分子机制。方法化学合成针对MACC1基因的荧光标记的siRNA-FAM,利用siRNA转染试剂将MACC1特异性siRNA-FAM转染至乳腺癌MCF-7细胞;采用RT-PCR检测siRNA对MACC1 mRNA表达的影响,Western blot检测siRNA对MACC1蛋白合成的影响;MTT实验检测沉默MACC1基因后对MCF-7细胞增殖活性的影响;Transwell迁移实验检测沉默MACC1基因后对MCF-7细胞迁移能力的影响;Western blot检测干扰MACC1对S100A4及vimentin蛋白合成的影响。结果 MACC1基因在乳腺癌MCF-7细胞高表达;针对MACC1基因的siRNA转染MCF-7细胞48 h后,siRNA组与空白对照组比较,能够显著抑制MACC1基因表达和蛋白合成,抑制效率分别为81%和75%;MACC1特异性siRNA转染MCF-7细胞24、48、72 h后,MMT结果显示与空白对照组比较,siRNA组能够抑制细胞生长,并随着时间延长抑制明显(P<0.05);转染MCF-7细胞48 h后,Transwell迁移实验结果显示siRNA组与空白对照组比较,穿过小室细胞数明显降低,其能有效抑制MCF-7细胞迁移(P<0.05);siRNA组与空白对照组相比,S100A4和vimentin表达降低(P<0.05)。以上实验阴性对照组和空白对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论利用特异性siRNA干扰MACC1基因表达,可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力,且这一过程可能与S100A4和Vimentin的表达下调有关。     

新生乳猪缺氧性肺动脉高压中平滑肌细胞增殖和凋亡

目的：研究平滑肌细胞增殖和凋亡在新生乳猪生后正常发育及缺氧性肺动脉高压肺血管重构中的作用。方法：42只新生乳猪分成正常发育组和缺氧性肺动脉高压组，其中20只新生乳猪置于低气压仓（50．8kPa)中3或11d形成不同程度的缺氧性肺动脉高压模型。采用免疫组化方法和TUNEL方法检测和观察肺小阻力动脉中层平滑肌细胞（SMC）的增殖和凋亡变化。结果：平滑肌细胞复制率在出生时即较高，出生后早期进一步升高。短期缺氧对平滑肌细胞复制率有一定程度的抑制。较长期缺氧（11d)引起肺血管重构显著变化同时，平滑肌细胞复制率显著增加；新生期无论在正常状态，缺氧或缺氧恢复阶段，在肺血管壁上均未见细胞凋亡阳性信号。结论：新生乳猪出生后肺血管重构与平滑肌细胞增殖有关。平滑肌细胞增殖在严重缺氧性肺动脉高压形成中起重要作用。细胞凋亡在出生早期肺血管重构中作用尚待研究。     

去甲肾上腺素促进兔肺动脉平滑肌细胞增殖的受体亚型研究

目的：观察肾上腺素能受体亚型β１、α１、α２在去甲肾上腺素（ＮＥ）促进肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）增殖中的作用，并观察钙通道阻滞剂的影响。方法：离体培养新西兰兔ＰＡＳＭＣ，采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）和＾３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＰＡＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成量的变化。结果：ＮＥ（１×１０＾－５￣１×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成有显著的促进作用。β１受体阻断剂Ｐｒｏｐｒａｎｏｌ     

辛伐他汀抑制PDGF-BB诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖及对细胞表型转换的影响

目的 探讨辛伐他汀对血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导增殖的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)抑制细胞表型转换及其可能的信号调节机制.方法 以体外培养SD大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB进行诱导,辛伐他汀及RhoA/Rho激酶抑制剂Y-27632进行干预,流式细胞术检测PASMC的增殖,荧光定量RT-PCR 检测各组PASMC α-SM-actin mRNA的表达及Western blot 检测各组PASMC α-SM-actin、SM22α和RhoA蛋白的表达.结果 辛伐他汀及Y-2763在抑制PDGF-BB诱导的PASMC增殖的同时,促进了主要收缩表型蛋白α-SM-actin mRNA 的表达,促进α-SM-actin 、SM22α这两种收缩表型蛋白表达,同步地相应抑制了RhoA蛋白表达.结论 辛伐他汀在抑制PDGF-BB介导的PASMC增殖的同时,也抑制了PASMC细胞表型的转换,而且该作用可能通过抑制RhoA/Rho激酶信号通路实现.     

METTL3-m6A途径抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 探索甲基转移样酶3(METTL3)依赖的6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰在体外调控肺动脉平滑肌细胞增殖中的功能.方法 培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),采用siRNA敲低METTL1的表达.根据转染siRNA的不同分为siNC组(对照siRNA转染组)与siMETTL1组(METTL3 siRNA转染组)...     

内源性阿片肽对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：观察内源性阿片肽Ｌ－Ｅｎｋ、吗啡对兔肺动脉平滑肌细胞增殖作用的影响并分析其作用机制．方法：离体培养新西兰兔肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ），采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）和３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＰＡＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成量的变化．结果：Ｌ－Ｅｎｋ对ＰＡＳＭＣ增殖及ＤＮＡ合成有抑制作用且呈剂量依赖效应．Ｌ－Ｅｎｋ（１×１０－３～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成有显著的抑制作用，该作用可被阿片受体阻断剂纳络酮阻断．吗啡对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成无显著影响．结论：内源性阿片肽可能主要是通过δ亚型阿片受体对ＰＡＳＭＣ的生长、增殖起抑制作用的，而与μ亚型阿片受体无明显关系．阿片肽类递质抑制ＰＡＳＭＣ增殖作用的可能机制是通过抑制原癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ的表达从而抑制细胞从Ｇ１进入Ｓ期．     

血府逐瘀汤对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨血府逐瘀汤防治肺心病的作用机理。方法：观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响；用血府逐瘀汤进行药物干预对PASMC增殖的影响。结果：缺氧能够促进PASMC增殖（P＜0．05）；血瘀逐瘀汤能显著抑制缺氧条件下PASMC增殖，高、中、低剂量组与空白对照组比较分别为P＜0．05－0．01。结论：血府逐瘀汤能抑制缺氧条件下PASMC增殖，可能是血府逐瘀汤防治肺心病的作用机理。     

RNA干扰沉默STIM1表达对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 应用RNA干扰抑制肺动脉平滑肌细胞(pulmonary aretery smooth muscle cells,PASMCs)基质交感分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)基因表达,探讨STIM1表达抑制后对PASMCs缺氧增殖反应的影响.方法 采用离体培养大鼠肺动脉平...     

舒马曲坦诱发大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖作用及机制

目的:研究舒马曲坦诱发大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及其细胞内信号转导通路机制。方法:应用细胞培养、基因转染等方法,通过MTT及流式细胞仪等检测舒马曲坦及ERK1/2的反义寡核苷酸对肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。结果:舒马曲坦明显促进肺动脉平滑肌细胞的增殖。脂质体成功介导了寡核苷酸在肺动脉平滑肌细胞的转染。反义寡核苷酸明显抑制舒马曲坦诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖,增殖率由(164.67±6.67)%降至(76.67±10.17)%,SPF指数由(11.67±0.33)%降至(3.33±0.33)%,增殖指数由(27.33±0.33)%降至(22.00±0.58)%(P均<0.01),正义和随机寡核苷酸对舒马曲坦诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖则无抑制作用。结论:舒马曲坦通过5-HT1B受体促进大鼠肺动脉平滑肌细胞的有丝分裂,其细胞内信号转导途径为ERK1/2 MAPK通路。     

细胞外信号调节激酶1／2在慢性低氧肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究进展

肺动脉高压是一种高发病率和病死率的疾病,其病因复杂,可由多种心、肺或肺血管疾病等引起,共同表现为肺血管阻力增加、右心负荷增大,最终导致右心衰竭,严重影响人体健康。肺动脉平滑肌细胞的肥大和增生导致的肺动脉壁增厚是肺动脉高压的病理特征。许多研究表明,低氧引起平滑肌细胞增殖与细胞外信号调节激酶1／2（EPK1／2）激活有关。该文主要就（EPK1／2）在慢性低氧肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究进展予以综述。     

核酶对大鼠肺动脉平滑肌NHE-1活性及细胞增殖的作用

目的 探讨锤头状核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na^ /H^ ’交换器-1表达和活性、pHi的影响,及其与细胞增殖的关系.方法 构建含锤头状核酶序列的pLXSN反转录病毒重组载体,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,G418筛选后获取含有重组载体的细胞克隆。检测细胞NHE-1mRNA表达、PHi、pHi恢复速率、^22Na摄取量和^3H—TdR掺入量变化.结果 与转染pLXSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较,转染了重组载体的肺动脉平滑肌细胞中NHE—1 mRNA表达、^22Na摄取量减少,同时伴有pHi降低、pHi恢复速率下降和^3H—TdR掺入量减少。结论 所设计的锤头状核酶可对NHE—1mRNA进行特异性切割,减少其表达,使其活性下降,从而诱导细胞酸化,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖。     

五羟色胺诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的作用与机制研究

目的 主要研究五羟色胺(5-HT)诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的作用与机制.方法 组织块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMC),细胞增殖试验检测5-HT对PASMC的作用,流式细胞仪检测细胞周期,免疫组化试验检测PCNA表达.结果 5-HT诱导大鼠PASMC增殖试验证实在5-HT 10-9～10-5mol/L的剂量范围内,大鼠PASMC的促增殖作用对其具有剂量依赖性.流式细胞仪结果证实PASMC可由G1期向S期转化,免疫组化法证实5-HT可促进PASMC中PCNA的表达.结论 5-HT可促进PCNA的表达,进而加速PASMC由G1期向S期转化,达到促PASMC增殖的作用.