CIK对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP杀伤效应及耐药逆转作用

目的探讨CIK细胞对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP体外杀伤效应及逆转作用。方法用MTT法分别检测顺铂、CIK细胞、CIK联合顺铂对人肺腺癌细胞A549及人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的杀伤活性,计算耐药倍数,逆转倍数。结果①顺铂对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP的50%杀伤浓度(IC50)分别为1.823g/mL、6.392 g/mL,差异有统计学意义(P<0.05),人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂的耐药倍数(IR)为3.506。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,其IC50分别7.657×105个细胞/mL、7.955×105个细胞/mL,差异无统计学意义(P>0.05)。③不同浓度的CIK细胞(1×105,2×105and3×105个/mL)与人肺腺癌细胞共培养后,再加顺铂,其IC50值分别降至1.743g/mL、1.336g/mL、0.883g/mL,差异有统计学意义(P<0.05);计算逆转倍数(FR)分别为(2.369、3.091、4.677)。结论①人肺腺癌细胞A549/DDP较A549对顺铂有明显的耐药性。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,杀伤效果在两种细胞中无明显差异。③无毒剂量CIK联合顺铂作用于人肺腺癌细胞A549/DDP,可以增加顺铂对耐药细胞的杀伤活性。逆转倍数随着CIK密度的增加而增大,说明CIK细胞能部分逆转耐药细胞A549/DDP对顺铂的耐药性。     

CTR1和ATP7B在人肺腺癌细胞A549的表达及其与顺铂耐药的关系

目的  探讨人肺腺癌细胞株A549和肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP对顺铂的耐药机制。方法  利用噻唑蓝法检测顺铂对A549/DDP及其亲代细胞株的细胞毒作用和生长曲线的影响,探讨A549/DDP细胞株凋亡敏感性的变化规律。采用Western blot检测该细胞株铜离子转运蛋白1（CTR1）、铜离子转运磷酸化ATP酶（ATP7B）及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）剪切蛋白表达,分析A549细胞对顺铂耐药与CTR1、ATP7B及PARP剪切蛋白表达量的相关性。结果  A549/DDP较其亲代细胞株对顺铂引起的细胞毒性和凋亡敏感性下降;较其亲代细胞株A549/DDP中ATP7B表达增加,CTR1表达降低。结论  人肺腺癌细胞株A549对顺铂耐药的产生与细胞凋亡敏感性降低有关,且细胞内ATP7B表达增加,CTR1表达降低,或可作为细胞对顺铂的增敏靶点。

     

β-Catenin信号转导通路在肺癌A549细胞顺铂耐药中的作用

目的建立肺癌A549顺铂多药耐药细胞株,研究肺癌耐药的机制。方法使用顺铂逐步增加剂量和间歇大剂量冲击相结合的方法诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;绘制A549和A549/DDP细胞生长曲线,观察二者的增殖速度变化;Western blotting实验显示A549和A549/DDP细胞之间Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β和β-Catenin蛋白的表达改变。结果经过30周的诱导我们建立了肺癌A549细胞的顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为(1.37±0.09)和(11.63±0.74)μmol/L,与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂耐药8.47倍,生长曲线结果显示A549/DDP细胞的增殖速度与A549细胞没有显著性差异;Western blotting的结果显示A549/DDP细胞的Akt磷酸化水平升高,抑制了下游GSK-3β的活性,导致了细胞内β-Catenin蛋白的上调。结论建立了肺癌A549顺铂多药耐药细胞系A549/DDP,A549/DDP细胞中β-Catenin通路的激活与其耐药性的形成有一定的相关性。     

抑制miR-21对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能机制探讨

目的:探讨抑制miR-21表达对非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能的机制?方法:应用Real-time PCR技术分别检测人非小细胞肺癌细胞株A549及其耐药株A549/DDP中miR-21的表达;将miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor) ASO-21转染至A549/DDP中,下调其miR-21的表达,在不同时间点使用MTT检测细胞的增殖,流式细胞仪Annexin-FITC检测细胞凋亡;使用生物信息学和miR的预测软件预测miR-21在非小细胞肺癌中的可能靶点?结果:①miR-21在A549/DDP细胞株的表达均为A549的3倍;②A549/DDP细胞株中转染ASO-21孵育,加入顺铂后,与对照组相比,其凋亡增加,增殖能力明显降低;③生物信息学软件分析后发现miR-21在非小细胞肺癌A549有多个调节靶点,一些蛋白分子可以调节miR-21的表达,组成肿瘤细胞的调节网络而影响肺癌细胞对顺铂的敏感性?结论:抑制miR-21可以促进顺铂耐药细胞A549/DDP的凋亡增加及抑制其增殖,miR-21可能成为逆转肺癌对顺铂耐药的新靶点?     

小分子 NEK2 干扰 RNA 对肺癌细胞耐药的研 究简

目的 探讨小分子NEK2干扰RNA （siRNA-NEK2）逆转人肺癌耐药细胞（A549/DDP）耐药性的研究.方法 应用Real-time PCR法及Western blot法验证NEK2基因在人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）细胞系呈现高表达;并采用脂质体为转染介质,将NEK2小片段RNA导入A549/DDP细胞沉默NEK2基因;应用MTT法观察顺铂、阿霉素对沉默NEK2基因后的A549/DDP细胞的细胞毒活性变化.结果 NEK2-mRNA、NEK2蛋白在A549/DDP细胞系表达水平均显著高于A549细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）;顺铂、阿霉素对A549/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别是（53.08±0.56）、（8.09±0.31） μg/mL,对siRNA-control A549/DDP细胞的IC50分别是（53.09±0.78）、（8.10±0.98） μg/mL,而对siRNA-NEK2 A549/DDP细胞的1C50有显著下降,其值分别是（18.59±0.10）、（2.30±0.14） μg/mL,两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 小分子NEK2干扰RNA沉默NEK2可以提高耐药的肺癌细胞对化疗药物的敏感性.NEK2可能成为逆转肺癌耐药的一个新的靶点.     

去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549／DDP细胞逆转的分子机制

目的探讨去甲斑蝥酸钠（SNCTD）对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549／DDP的逆转作用及可能分子机制。方法（1）采用CCK法筛选出SNCTD对A549／DDP的无毒浓度（即对细胞抑制率〈10％的药物浓度）,并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的半数抑制浓度（IC50）;（2）采用流式细胞仪分别检测1、2倍无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况;（3）采用逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdr1mRNA、MRP1mRNA、GST—PimRNA表达,并检测药物处理72h后GST—PimRNA的表达。结果（1）SNCTD对A549／DDP的无毒浓度为5μg／ml,无毒浓度SNCTD与顺铂联合应用可使A549／DDP细胞对顺铂的IC50值下降为4．32μg／ml,逆转倍数为1．97倍;（2）无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强（P〈0．05）;（3）5、10μg／ml SNCTD处理耐药细胞株48h后mdr1 mRNA、MRP1 mRNA表达均明显减弱（P〈0．05）,而且10μg／ml SNCTD处理组减弱强度亦明显大干5μg／mlSNCTD处理组（P〈0.05）,呈现浓度依赖性;而GST—PimRNA表达并无明显变化（P〉0．05）,72h后GST—PimRNA表达也未出现下降（P〉0．05）。结论SNCTD可以逆转A549／DDP细胞的耐药作用。其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1、MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

CIK逆转耐顺铂人肺腺癌细胞对顺铂耐药与ERCC1的相关性

目的观察脐血来源的CIK细胞对A549/DDP细胞的耐药逆转作用。并探讨CIK逆转耐药机制是否与核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complementation group 1,ERCC1）的表达存在相关性。方法采集脐血单个核细胞经细胞因子体外诱导获得CIK细胞（cytokine induced killer cells,CIK）,MTT法检测顺铂（cisplatin,DDP）对A549细胞和A549/DDP细胞的体外杀伤作用,以及CIK细胞与A549/DDP细胞共培养前后对DDP敏感性的变化。Real-time RT-PCR法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA的表达情况。Western blot法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1蛋白的表达情况。结果 A549/DDP细胞对DDP耐药,耐药指数为2.391。CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,逆转倍数为3.967。Real-time RT-PCR、Western blot测得A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量比A549细胞高（P〈0.05）,CIK细胞共培养前后A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量无明显变化。结论 CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,其逆转耐药的机制与ERCC1的表达无明显相关性。     

曲古菌素A逆转人肺癌细胞顺铂耐药性的研究

目的探讨曲古菌素A(Trichostation A,TSA)对人肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的逆转作用。方法 MTT法分析TSA单用以及联合顺铂对A549/DDP细胞增殖的影响,流式细胞术检测TSA和顺铂联合诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响。结果 TSA对A549/DDP细胞的增殖有明显的抑制作用,其IC50为193 nmol/L。无细胞毒作用的低剂量TSA可显著增强A549/DDP对顺铂的敏感性。细胞周期结果显示,TSA联合顺铂可引起G2/M期细胞明显增加,细胞周期受阻。结论 TSA能抑制人肺癌耐顺铂细胞的增殖,且能明显提高A549/DDP对顺铂的敏感性,其作用机制与阻滞细胞周期有关。     

共抑制RAD18和REV1基因显著增加顺铂对肺癌细胞的毒性

目的: 探讨采用基因敲减技术抑制跨损伤合成（translesion synthesis,TLS）通路和范可尼贫血（Fanconi anemia,FA)通路上游的RAD18基因与TLS通路的REV1基因后增加顺铂对人肺腺癌耐药细胞株（A549/DDP）细胞毒性的可行性及其机制。方法: 蛋白质印迹法测定顺铂诱导的A549和A549/DDP细胞RAD18和REV1蛋白表达;应用脂质体转染试剂转染针对RAD18基因的siRNAs (RAD18 siRNA),检测A549/DDP细胞转染前后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白单泛素化水平;CCK 8法检测分别转染RAD18 siRNA、REV1 siRNA以及两者共转染前后经顺铂处理的A549/DDP细胞的增殖率;流式细胞术检测转染前后A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期。结果： A549/DDP细胞转染RAD18 siRNA和REV1 siRNA后,RAD18和REV1蛋白表达明显降低,表明转染有效,基因敲减成功。转染RAD18 siRNA后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白的单泛素化水平明显下降,提示FA通路和TLS通路的激活受到抑制。分别转染RAD18 siRNA或REV1 siRNA均可增强顺铂对A549/DDP的细胞毒性,增加顺铂诱导的细胞凋亡率,并增强细胞周期S/G2期的阻滞效应。共转染RAD18 siRNA和REV1 siRNA后,顺铂对A549/DDP细胞的毒性增强作用较单转染更为显著,顺铂诱导的细胞凋亡进一步增加。 结论： 敲减A549/DDP细胞的RAD18和REV1基因可通过抑制FA通路和TLS通路的DNA损伤修复功能,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;RAD18和REV1基因共敲减对顺铂的这一增敏作用更加明显,显示出A549/DDP细胞对顺铂耐药的逆转效应。     

参芪扶正注射液对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的增敏作用

目的:观察参芪扶正注射液(参芪液)对人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐药性的逆转作用及其可能机制。方法:1~120 g/L参芪液干预A549/DDP细胞48 h,倒置显微镜观察细胞的形态变化;MTT法检测参芪液对A549/DDP细胞株增殖的作用以及对顺铂(DDP)敏感性的影响;低浓度参芪液(8 g/L)、中浓度参芪液(16 g/L)、高浓度参芪液(32 g/L)联合DDP(40μg/ml)分别作用于A549/DDP细胞24 h,流式PI单染法检测细胞凋亡率,Western blot检测Cleaved-caspase-3蛋白表达。结果:与对照组比较,2~120 g/L参芪液对A549/DDP细胞有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性(P0.05);2 g/L参芪扶正注射液作用A549/DDP细胞后,顺铂敏感性提高,逆转倍数(RF)为2.66倍;与DDP组比较,低、中、高浓度参芪液联合DDP组,均能显著诱导A549/DDP细胞凋亡(P0.05),Cleaved-caspase-3蛋白表达上调。结论:参芪扶正注射液能够逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能是通过启动凋亡调控基因介导的Caspase级联反应,活化Caspase-3,从而导致细胞凋亡。     

microRNA-149在顺铂耐药非小细胞肺癌细胞中的表达变化及相关机制研究

目的探讨microRNA-149(miR-149)在顺铂耐药A549细胞(A549/DDP)中的表达规律及作用机制。方法生物信息学方法分析顺铂耐药A549细胞中的microRNA表达变化。体外培养A549细胞并诱导对顺铂耐药的A549/DDP细胞系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-149在两种细胞系中的表达差异。CCK-8试验及流式细胞术检测单纯miR-149过表达以及miR-149和ABCC1同时过表达对细胞顺铂敏感性的影响。qRT-PCR及Western blot检测A549及A549/DDP细胞中ABCC1的表达差异,双荧光素酶报告试验检测miR-149以ABCC1之间的靶向关系,并利用qRT-PCR及Western blot加以证实。结果 A549/DDP细胞中的miR-149表达较低,与A549细胞相比,差异具有统计学意义(t=-4.65,P0.05)。miR-149过表达可以降低顺铂处理后A549/DDP细胞的活力但增加其凋亡率,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(P均0.05)。与A549细胞相比ABCC1在A549/DDP细胞中存在mRNA及蛋白水平的高表达,差异具有统计学意义(t=8.44、5.14,P均0.05)。过表达miR-149可以降低A549/DDP细胞中ABCC1的mRNA及蛋白水平,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(t=-3.14、-4.54,P0.05)。双荧光报告酶分析显示miR-149可直接与ABCC1 mRNA的3’UTR结合。miR-149与ABCC1同时过表达的A549/DDP细胞与单纯miR-149过表达的细胞相比,顺铂处理后细胞活力增加,凋亡减少,差异具有统计学意义(P均0.05)。结论 miR-149表达不足可能引起A549细胞对顺铂的耐药,该机制与miR-149对ABCC1的抑制作用有关。     

补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究

目的从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择最佳含药血清的浓度。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5%和10%的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出最佳含药血清浓度,计算出最佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数。结果补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系。5%高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5%中剂量组和5%低剂量组,并与5%空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。10%各剂量组对A549/DDP的抑制率与10%空白血清组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。经筛选,10%中剂量含药血清作用48 h为最佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降（P〈0.05）,对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46。结论 10%中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用。     

三氧化二砷逆转肺癌细胞株耐药的实验研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）与肺腺癌细胞株HTB-56、相应耐药细胞株HTB-56／DDP共孵育有无诱导细胞凋亡以及逆转耐药作用。方法：采用人肺腺癌细胞株HTB-56、HTB-56／DDP作为实验细胞，以As2O3和顺铂（DDP）作干预，用MTT法检测As2O3单独和与DDP共孵育后细胞的生长抑制率得半数抑制浓度得出抗药倍数；以电镜观察干预后细胞凋亡情况。结果：不同浓度As2O3作用相同时间或相同浓度作用不同时间对HTB-56、HTB-56／DDP的细胞抑制率有明显差异（P〈0．05）；HTB-56／DDP细胞株与HTB-56细胞株相比，对顺铂的抗性倍数为14．65倍；而与As2O3共孵育对DDP的抗药倍数则为6．35，逆转倍数约为3．5，As2O3对其有增敏及逆转耐药作用和诱导细胞凋亡。结论：As2O3有明显抗肿瘤作用，能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性，对逆转耐药有一定的作用。     

线粒体铁蛋白调控上皮-间质转化对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药的影响

目的 研究线粒体铁蛋白(FtMt)对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药株A549/DDP和非小细胞肺癌细胞株A549上皮-间质转化(EMT)的影响,探讨其改善顺铂耐药的分子机制。方法 流式细胞术检测A549和A549/DDP的凋亡率和细胞周期情况,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和FtMt蛋白表达水平,RT-qPCR法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、snail、slug、twist、波形蛋白(vimentin)、铁转运蛋白(ferroportin, FPn)、二价金属离子转运蛋白1(divalent metal transporter 1,DMT1)、铁调素和转铁蛋白受体1(transferrin receptor1,TfR1)基因表达水平。细胞划痕实验检测细胞迁移情况。结果 随着顺铂使用剂量增加,A549/DDP和A549细胞凋亡率逐渐升高,且A549细胞凋亡率显著高于A549/DDP细胞。顺铂处理后,与0μg/mL顺铂组比较,顺铂各剂量组A549细胞G0/G1期和G2/M期逐渐降低,A549/DDP细...     

MT1X siRNA对肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨金属硫蛋白1X（MT1X）在肺癌耐药细胞株（A549／DDP）顺铂耐药中的作用。方法通过化学合成针对MT1X的siRNA段抑制其在A549／DDP中的表达,实时定量聚合酶链反应（PCR）及WB检测干扰效果,M1Tr及平板克隆形成实验检测干扰前后细胞对顺铂的药物敏感性变化;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果针对MT1X的siRNA片段能在RNA及蛋白水平有效抑制其在A549／DDP中的表达;与对照组相比,MT1X表达被抑制后,肿瘤细胞对顺铂的敏感性明显升高;增殖被抑制,平板克隆形成率明显降低（P〈O．05）,细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论针对MT1X的siRNA片段可部分逆转肺癌细胞（A549／DDP）对顺铂的耐受,为提高肺癌的化疗效率提供了一种新方法。     

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。     

99mTc-MIBI检测肺癌耐药性的作用研究

目的拟探讨99mTc-MIBI能否检测肺腺癌A549DDP细胞的耐药性及人参单体Rh2作用后A549DDP细胞对顺铂耐药性的变化.方法用MTT法检测顺铂对敏感A549细胞和耐药A549DDP细胞的IC50、对A549DDP细胞的低效浓度(≤IC20),Rh2对A549DDP细胞的无毒浓度(≤IC5).以无毒浓度Rh2和低效浓度的顺铂联合作用于A549DDP细胞,检测Rh2对顺铂抑制A549DDP细胞的影响.以无毒浓度的Rh2单独作用于A549DDP细胞作为Rh2组,以低效浓度的顺铂单独作用于A549DDP细胞作为DDP组,以无毒浓度的Rh2和低效浓度的顺铂联合作用于A549DDP细胞作为Rh2+DDP组,以不加药物干预作为对照组,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰.γ计数器检测以上4组细胞及A549细胞的放射性活性.将以上细胞注入裸鼠皮下建模后,用99mTc-MIBI进行SPECT显像.结果順铂对A549细胞、A549DDP细胞的IC50分别为24、325 μmol/L,耐药指数为13.54.Rh2≤10 μmol/L时,对A549DDP细胞无明显毒性作用;100 μmol/L顺铂对A549DDP细胞的抑制率为12%.10 μmol/L Rh2与100 μmol/L顺铂联合作用,顺铂对A549DDP细胞的IC50降为94 μmol/L,与100 μmol/L顺铂单独作用于A549DDP细胞的IC50比,逆转3.5倍.荧光显微镜下,Rh2组和DDP组的大部分细胞核和对照组的一样,荧光分布均匀;Rh2+DDP组的荧光成团块分布,有凋亡小体形成.对照组、Rh2组和DDP组的细胞无明显凋亡峰,而Rh2+DDP组则出现了显著的凋亡峰.各组A549DDP细胞和A549细胞均能摄取99mTc-MIBI,Rh2组和DDP组与对照组之间细胞的放射性活性差异无统计学意义,而Rh2+DDP组则较对照组细胞的放射性活性显著性降低,P<0.05.A549细胞的放射性活性显著性高于A549DDP细胞的对照组,P<0.01.99mTc-MIBI 显像,A549组裸鼠可见瘤块的放射性浓聚影.A549DDP对照组和DDP组裸鼠亦可见瘤块的放射性浓聚影,其放射性浓度较A549组淡,这两组间的R或R′差异无统计学意义,但与A549组比较,P<0.05.DDP+Rh2组裸鼠无肿瘤生长,局部未见明显放射性浓聚影.结论 99mTc-MIBI能检测肺腺癌耐药的A549DDP细胞的耐药性;无毒浓度的Rh2能有效逆转A549DDP细胞对顺铂的耐药性,这种耐药性的变化亦能被99mTc-MIBI有效检测.     

银杏酚C171与顺铂联用逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

探讨银杏酚C171对顺铂耐药人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药及凋亡的影响。方法: 体外培养A549及A549/DDP细胞,MTT法检测A549/DDP细胞的耐药倍数,确定顺铂作用浓度;此浓度顺铂与不同浓度银杏酚C171(0, 10,20,40 mg/L)联合应用,分别通过Transwell法、免疫印记及流式细胞术检测A549/DDP细胞迁移、侵袭,Nrf2/Keap1信号通路相关蛋白的表达及细胞凋亡情况。结果： MTT结果显示,与A549细胞相比,A549/DDP细胞具有5.8倍耐药性,确定顺铂作用浓度为4 mg/L;与对照组相比,Transwell实验显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能明显抑制A549/DDP细胞的迁移和侵袭(P<0.05);免疫印迹结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能抑制A549/DDP细胞Nrf2、Mrp1及抗凋亡蛋白Bcl2的表达(P<0.05),且促进凋亡蛋白Bax及Keap1蛋白的表达(P<0.01);流式细胞术结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能致A549/DDP细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。 结论： 银杏酚C171与顺铂联用可逆转体外A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,并促进细胞凋亡。