供者脾细胞和环磷酰胺联合预处理对移植心脏存活的作用

目的　诱导同种异体心脏移植的免疫耐受 ,为心脏移植的抗排斥反应治疗提供依据。　方法　采用供者脾细胞和环磷酰胺联合预处理受者 ,诱导受者对移植心脏的免疫耐受 ,然后行大鼠颈部心脏移植术。将实验动物分成 5组。对照组 :受者不作任何预处理 ;组 1:预处理第 2天用环磷酰胺 5 0～ 80 mg/ kg预处理受者 ;组 2 :预处理当天用供者 5～ 10× 10 7个脾细胞预处理受者 ;组 3:受者不作任何预处理 ,手术当天开始用环孢菌素 A10 mg/ kg,每 2天 1次 ,共 8～ 10次 ,腹腔内注入 ;组 4:预处理当天用供者脾细胞 5～ 10× 10 7个和第 2天环磷酰胺 5 0～ 80 mg/ kg联合预处理受者。　结果　各组移植心脏的存活时间明显不同 ,5组移植心脏的存活时间差异有显著性 (P<0 .0 1)。供者脾细胞和环磷酰胺预处理受者的移植心脏存活时间明显延长。　结论　供者脾细胞和环磷酰胺联合预处理 ,可诱导受者对移植心脏的免疫耐受。     

嵌合体在同种心脏移植免疫耐受中的作用

目的探讨嵌合体在同种心脏移植免疫耐受中的作用.方法采用大鼠腹部心脏移植模型,将30只Lewis大鼠随机分成正常对照组(Ⅰ组)、排斥反应组(Ⅱ组)、免疫耐受组(Ⅲ组),每组10只.观察移植心存活时间,供心病理学改变,供、受者间的混合淋巴细胞反应(MLR)和脾、胸腺嵌合体.结果Ⅲ组供心平均存活时间(85.28±7.48天)较Ⅱ组(7.33±1.03天)显著长(P＜0.01);Ⅱ组供心见大量炎性细胞浸润,Ⅲ组供心仅见少量炎性细胞浸润;Ⅲ组供、受者间MLR较Ⅰ组显著低(P＜0.01);Ⅲ组受者的脾、胸腺形成了稳定的供者细胞嵌合体.结论移植免疫耐受的受者形成了稳定的中枢和外周嵌合体,嵌合体的形成对移植耐受起重要的作用.     

联体共生诱导大鼠心脏移植免疫耐受的实验研究

目的　通过联体共生模型 ,建立供、受者嵌合体 ,探讨嵌合体与免疫耐受的关系。方法　纯系雄性DA(RT1a)大鼠为供者 ,Lewis(RT11)大鼠为受者 ,随机分成 3组 ,每组供、受者各 15只。Ⅰ组 (未处理组 ) :仅行DA到Lewis大鼠的腹部心脏移植 ,手术前后不作任何处理。Ⅱ组 (环磷酰胺组 ) :DA到Lewis大鼠的心脏移植前后分别经腹腔注射环磷酰胺 80mg/kg。Ⅲ组 (联体组 ) :0d :供、受者大鼠腹腔注射环磷酰胺 80mg/kg ;第6d :供、受者联体 ;第 16d :联体大鼠腹腔注射环磷酰胺80mg/kg ;第2 1d :分开联体 ,行DA到Lewis大鼠的心脏移植。观察各组移植心存活时间 ,供心病理学改变 ,供、受者间的混合淋巴细胞反应 (MLR)。结果　Ⅲ组形成了稳定的供、受者嵌合体 ,供心平均存活时间为 :(76 .33± 10 .71)d ,较Ⅰ组 (7.17± 1.17)d、Ⅱ组 (8.5 0± 1.87)d显著延长 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;Ⅲ组的供心仅见少量炎性细胞浸润 ;供、受者间MLR较正常对照组显著降低 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　联体共生可形成稳定的外周和中枢嵌合体 ,嵌合体在同种心脏移植的免疫耐受中起重要作用。     

阻断B7诱导大鼠心脏移植免疫耐受的实验研究

目的　研究阻断B7方法诱导大鼠心脏异位移植的免疫耐受。　方法　采用Ono法建立大鼠异位心脏移植模型 ,实验组腹腔注射B7阻断剂CTLA 4Ig,观察大鼠移植的心脏存活天数 ,病理改变和术后IL 2 ,IgG以及IgM含量的变化。　结果　实验组移植的心脏存活时间为 :(31 6 0± 1 82 )d ,对照组 (7 2 5± 0 71)d ,差异有显著性意义 (P <0 0 1)。组织学改变 :实验组见局灶性血管周围或间质内淋巴细胞浸润和局灶性心肌损伤 ,病理分级Ⅰ～Ⅱ级。对照组可见大量淋巴细胞浸润 ,心肌细胞损伤和坏死 ,间质内出血水肿 ,病理分级Ⅳ级。术后IL 2含量实验组比对照组明显下降 ,有显著性差异 ,P <0 0 1。IgG和IgM含量差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。　结论　阻断B7能诱导大鼠心脏移植免疫耐受 ,为移植排斥反应提供了新的治疗方法     

联合应用抗淋巴细胞血清和供体脾细胞延长大鼠移植心存活的作用

本实验主要观察术前短期用抗淋巴细胞血清（ＡＬＳ）；联合术前或术后输注供体脾细胞（ＤＳＣ），对移植心存活的作用。现报告如下。材料和方法一、实验动物健康雄性Ｗｉｓｔａｒ和ＳＤ大鼠（２００ｇ～３００ｇ）分别为供、受体，第三品系为Ｆ３１１大鼠。新西兰大白兔２．５ｋｇ～３．０ｋｇ。二、脾细胞悬液制备按本实验方法制成细胞浓度为１×１０８／ｍｌ，活力大于９４％。三、淋巴细胞悬液制备无菌取ＳＤ大鼠肠系膜淋巴结制成细胞悬液，采用Ｆｉｃｏｌｌ分离法制成淋巴细胞悬波（１×１０９／ｍｌ）。四、ＡＬＳ的制备及检测．用ＳＤ…     

胸腺注射供体脾细胞诱导移植心脏免疫耐受的实验研究

目的探讨诱导心脏移植免疫耐受的方法及其产生的可能机制. 方法采用大鼠腹部心脏移植模型,随机分成未处理(Ⅰ)组,胸腺注射供体脾细胞(Ⅱ)组,腹腔注射兔抗鼠淋巴细胞血清(Ⅲ)组,胸腺注射供体脾细胞联合应用兔抗鼠淋巴细胞血清(Ⅳ)组,每组6只大鼠.Ⅱ、Ⅳ组在移植前2 1 d将供体脾细胞2.5×107个注射到受体胸腺,Ⅲ、Ⅳ组受体腹腔注射兔抗鼠淋巴细胞血清(ALS)1 ml,然后行异位心脏移植.观察移植心脏存活时间,供心病理学改变及供、受体间的混合淋巴细胞反应(MLR). 结果Ⅳ组供心平均存活时间(MST)为(81.8±7.6)d,较Ⅰ组(7.3±1.0)d、Ⅱ组( 7.8±1.0)d、Ⅲ组(8.2±1.2)d显著延长,差异有显著性意义(P＜ 0.01 );供心仅见少量炎性细胞浸润;供、受体间MLR较正常对照组显著降低,差异有显著性意义(P＜0.01). 结论胸腺注射供体脾细胞联合应用ALS能成功诱导心脏移植的免疫耐受;胸腺内特异性T细胞克隆消除可能与免疫耐受的形成有关.     

术中输注供体脾细胞联合术后延迟使用小剂量他克莫司诱导同种异基因大鼠心脏移植免疫耐受

目的观察移植术中经受体门静脉输注供体特异性脾细胞联合术后延迟使用小剂量他克莫司（FK506）对诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受的作用。方法将Wistar大鼠和SD大鼠分为7组,A组至F组分别采用Wistar大鼠和SD大鼠作为供、受体,G组为SD→SD大鼠同基因移植对照。其中A组无任何处理,B组输注供体特异性脾细胞,C组与D组分别早期应用和延迟应用FK506[0.5 mg/（kg.d）],E组与F组既术中经门静脉输注供体脾细胞,又分别早期或延迟应用FK506。采用改良大鼠腹腔异位心脏移植。观察期为术后100 d,观察移植心存活时间及其病理变化。结果 G组移植心均长期存活（100 d）。A~F组存活时间分别为（7.4±0.9）d、（22.1±3.6）d、（8.0±0.8）d、（7.9±1.3）d、（24.4±4.5）d、（95.5±6.0）d。F组7/8移植心长期存活。C组、D组的移植心存活时间与A组比较差异无统计学意义（均为P〉0.05）。与A组比较,B组、E组与F组的移植心存活时间明显延长（P〈0.05~P〈0.01）。而F组移植心存活时间又明显长于B组与E组。病理检查G组移植心心肌未见排斥反应。A组移植心术后9 d表现为3~4级排斥反应,F组存活时间达100 d的大鼠移植心未见排斥反应。结论术中经受体门静脉输注供体脾细胞联合延迟使用小剂量FK506使同种异基因大鼠在移植后早期免疫系统激活后再被抑制,有利于诱导同种移植免疫耐受。     

胸腺内注射异基因脾细胞对移植心存活的影响

我们进行胸腺内注射脾细胞抗原诱导移植耐受的实验研究，将ＳＤ大鼠预注射脾细胞４０７天后，行异位同种以及移植，术后１周每日腹腔注射环孢素Ａ１０ｍｇ／ｋｇ。胸腺内脾细胞注射联合短期使用ＣｓＡ组的移植心平均存活勘胶对照组显著延长，且抗原量为２．５×１０＾７脾细胞来诱导耐受的效果为好。     

维生素D衍生物联合供者骨髓细胞输注诱导异基因大鼠心脏移植免疫耐受

目的 探讨同种异基因心脏移植后免疫耐受的诱导。方法 建立大鼠颈部异位心脏移植模型，按分组分别给予门静脉输注供者骨髓细胞(DBMC)(B组)、骨化三醇灌胃(C组)、输注DBMC及骨化三醇灌胃(D组)以及环孢素A(CsA)灌胃(E组)。观察移植心脏的存活时间及心肌组织病理改变，测定心肌组织中肿瘤坏死因子及细胞间粘附分子-1 mRNA的表达以及血清钙、磷浓度，进行受者与供者及无关第三品系大鼠脾细胞混合淋巴细胞培养(MLR)。结果 D组移植心脏的存活时间较其它各组显著延长(P＜0．05)；术后7d，C组、D组、E组受者脾细胞均能显著抑制供者及第三方无关供者脾细胞作为刺激细胞引起的MLR；D组手术前后血磷、血钙浓度的差异无显著性(P＞0．05)；各组急性排斥反应的程度，D组最轻；D组肿瘤坏死因子及细胞间粘附分子-1 mRNA的表达受到显著抑制，与对照组(A组)、B、C组比较，差异有显著性(P＜0．05)。结论 骨化三醇灌胃联合DBMC输注可显著延长移植心脏的存活时间，二者具有协同作用。     

多次输注供体脾细胞诱导心脏移植免疫耐受的实验研究

目的　探讨供体脾细胞诱导心脏移植免疫耐受的作用。方法　将 5 0只行腹部心脏移植的纯系雄性Lewis大鼠 ,随机分为未处理组、一次脾细胞组、环磷酰胺组、一次脾细胞 环磷酰胺组、多次脾细胞 环磷酰胺组 ,每组 10只大鼠 ,以 5 0只纯系雄性DA大鼠为供体。观察移植心脏平均存活时间 (MST) ,移植后第 6天观察供体心脏病理学改变 ,供受体间的混合淋巴细胞反应 (MLR)、外源性白细胞介素 2 (IL 2 )对MLR的影响及体外过继转移实验。结果　多次脾细胞 环磷酰胺组供体心脏MST为 (85 3± 7 5 )d ,较未处理组 (7 3± 1 0 )d、一次脾细胞组 (7 9± 0 9)d、环磷酰胺组(8 1± 1 2 )d、一次脾细胞 环磷酰胺组 (2 5 8± 3 5 )d显著延长 (t=0 ,P <0 0 1) ;供体心脏仅见少量炎性细胞浸润 ;供受体间MLR较DA Lewis对照组显著降低 ,差异有显著意义 (P <0 0 1) ;外源性IL 2可以部分逆转DA Lewis耐受组MLR的低反应性 ;其免疫耐受状态可过继转移给正常的同系大鼠。结论　多次输注供体脾细胞联合应用环磷酰胺 ,可成功诱导同种大鼠心脏移植的免疫耐受。     

T淋巴细胞疫苗诱导大鼠移植心存活时间延长的机制探讨

目的 探讨Ｔ淋巴细胞疫苗（ＴＣＶ）对大鼠移植心脏存活时间的影响及其机理。方法 取经供者抗原致敏的受者脾细胞（１／３脾切除）制备ＴＣＶ,然后将其回注于自身腹腔,观察大鼠异位移植心脏的存活时间。结果 接种ＴＣＶ可明显延长大鼠同种移植心的存活时间;注射ＴＣＶ后,Ｔ淋巴细胞增殖反应增强,Ｂ淋巴细胞增殖反应未受影响;混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）降低;脾细胞及ＴＣＶ表型分析显示ＣＤ８＾＋细胞增多;抗体介导的补体     

新生大鼠胸腺内脾细胞注射对同种移植心存活的影响

目的探讨诱导新生大鼠免疫耐受的方法.方法分别给新生SD大鼠胸腺或腹腔内注射2.5×107个Wistar大鼠脾淋巴细胞,8～10周龄时行Wistar及第三品系大鼠供心移植.结果胸腺或腹腔注射Wistar大鼠脾淋巴细胞者移植Wistar大鼠心脏后移植物的存活时间显著延长,胸腺注射者平均存活时间超过60.4*!d(P＜0.001),腹腔注射者平均存活时间为15.8*!d(P＜0.02),而第三品系大鼠的心脏移植后平均存活9.2*!d(P＞0.05).结论单一胸腺或腹腔内注射同种脾细胞可以诱导新生大鼠的特异性免疫耐受.     

急性排斥反应时Fractalkine及其受体在移植心脏中的表达

目的　探讨急性排斥反应过程中Fractalkine(FKN)及其受体CX3CR1在移植心脏局部表达的意义及环孢素A(CsA)对它们的影响。　方法　施行大鼠异位心脏移植术 ,移植大鼠分为 3组 ,每组 45只 ,对照组 5只。SD大鼠间的移植为同系移植组 (A组 ) ,Wistar至SD大鼠的移植分为未用CsA干预组 (B组 )及CsA干预组 (C组 ) ,健康SD大鼠为对照组。采用RT PCR方法检测排斥反应中移植心脏局部FKNmRNA的表达水平 ,免疫组化方法检测FKN和CX3CR1的蛋白表达水平。　结果FKNmRNA与蛋白在A组各时间点和对照组均呈低水平表达 ;在B组的表达变化与急性排斥反应的进程相关 ,术后第 7天FKNmRNA表达上调至峰值 (0 8± 0 2 6) ;C组应用CsA后 ,FKNmRNA表达峰值显著低于B组 (t=2 3 90 ,P <0 0 5 )。FKN和CX3CR1蛋白分别定位于移植心脏血管内皮细胞及间质浸润的单个核细胞中。　结论　急性排斥反应过程中 ,FKN及其受体CX3CR1表达上调 ,与移植物间质单个核细胞浸润密切相关 ;抑制FKN CX3CR1通路的活化可能是CsA发挥作用的又一分子免疫学机制     

新型HLA衍生肽延长异基因大鼠移植肾存活时间

目的观察一种新型的人类白细胞抗原衍生肽(RDP1258)对大鼠肾移植后的免疫抑制作用。方法采用标准Fmoc法人工合成RDP1258。建立异基因大鼠原位肾移植模型。将已建立肾移植模型的大鼠随机分为4组,每组8只。A组:使用RDP1258 环孢素A(CsA);B组:单独使用RDP1258;C组:单独使用CsA;D组:不用任何药物。观察各组大鼠的存活时间,监测血清肌酐浓度,并进行移植肾彩色多普勒超声和常规病理检查。采用体外混合淋巴细胞反应(MLR)法检测长期存活大鼠的供者特异性免疫耐受状态。结果A、B、C和D组平均存活时间分别为(63.4±30.6)d、(18.3±7.3)d、(16.9±6.4)d和(9.4±2.6)d。A组与其他3组比较,差异有统计学意义。另外,混合淋巴细胞培养结果提示,长期存活的受者脾细胞对供者脾细胞的刺激不表现出明显细胞增殖反应,而对无关大鼠脾细胞仍能产生较明显的增殖反应。结论肾移植术后应用RDP1258结合小剂量CsA,能显著延长异基因大鼠移植肾存活时间,其机制可能与RDP1258诱导了受者对供者的特异性移植免疫耐受有关。     

他克莫司和来氟米特合用抑制大鼠心脏移植排斥反应及T淋巴细胞增殖

目的　评价他克莫司 (FK5 0 6 )和来氟米特联合应用对大鼠心脏移植排斥反应的抑制作用。方法　将实验动物随机分为对照组、FK5 0 6组、来氟米特组以及FK5 0 6与来氟米特合用组 ,观察移植心存活时间 ,于术后 7d切取部分移植心做病理检查 ,并测定各组受者外周血T淋巴细胞亚群及肝、肾功能。结果　不用免疫抑制剂的对照组移植心存活时间为 ( 7.14± 1.0 7)d ,单用FK5 0 6的组为( 11.14± 1.73)d ,单用来氟米特的组为 ( 11.2 9± 1.80 )d ,两药合用组为 ( 14 .0 0± 2 .4 9)d ,合用组的病理切片提示排斥反应明显轻于两药单用组。术后 7d ,合用组外周血T淋巴细胞亚群中 ,CD4 +细胞明显低于两药单用组 (P <0 .0 5 ) ,而CD8+细胞各组间的差异无显著性 ;各组间肝、肾功能的差异也无显著性。结论　FK5 0 6和来氟米特联合应用对大鼠心脏移植的免疫抑制作用优于相同剂量的单一用药     

大段异体骨关节移植后长期转归的观察

目的观察大段人异体骨关节移植后的转归。方法取植入４～６５个月的大段异体骨关节标本,采用组织学及ＢＭＰ分子原位杂交及免疫组化方法,结合随访Ｘ线片及骨核素扫描进行研究。结果外骨痂由宿主骨皮质向异体骨皮质侧生长连接愈合,皮质骨爬行替代相当缓慢,５年时仍大量死骨与活骨共存。异体骨骨松质内可见新骨、骨髓及新生血管,但骨小梁有吸收。非主要负重区的关节软骨细胞部分存活。４个月时异体骨皮质浅层及骨痂ＢＭＰ免疫组化染色及分子原位杂交阳性。植入１２个月至６５个月骨皮质浅、深层及活骨ＢＭＰ表达均呈阴性。结论（１）骨痂由自体骨向异体骨侧生长连接以达到骨性愈合。异体骨关节血运可重建。（２）非负重区关节软骨可部分存活。关节塌陷与骨小梁吸收有关。（３）异体骨内ＢＭＰ在移植后早期的新骨替代及愈合中起作用,１２个月后则主要是靠骨传导而不是骨诱导。（４）坏死骨单位的排除不完全,是异体骨皮质新骨替代慢的原因。