Gli1与FoxM1在子宫颈癌组织和细胞中的表达及意义

目的:了解宫颈癌组织和细胞中Gli1及FoxM1的表达及意义,并探究这二者的相关性,进而明确FoxM1是否为Gli1在Hh信号通路中的下游靶基因,从而为宫颈癌的分子靶向治疗提供依据。方法:通过免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测70例宫颈癌组织和10例正常宫颈组织中Gli1及FoxM1的表达;体外培养宫颈癌细胞系Hela、Siha,将两株细胞分别分为5组,分别下调和上调Gli1基因的表达后,应用逆转录(RT)-PCR法检测各组细胞中Gli1及FoxM1的mRNA表达量,并分析二者的相关性。结果:Gli1和FoxM1蛋白表达水平在宫颈癌组织中明显高于正常宫颈组织(P<0.05)。Gli1的表达在分化程度低的宫颈癌组织中较高(P=0.022),与宫颈癌的侵袭程度有关(P=0.005),在有淋巴结转移中更高(P=0.017);FoxM1的表达与宫颈癌的侵袭程度有关(P=0.011),与年龄相关(P=0.033)。Spearman秩相关检验提示,Gli1与FoxM1相关系数r=0.405(P<0.001),呈显著正相关;分别下调Hela细胞和Siha细胞中Gli1表达后,两细胞系中FoxM1mRNA表达量均明显降低,均呈现正显著相关(r=0.613,r=0.729,P<0.05);分别将Gli1过表达质粒导入Hela细胞和Siha细胞中,两细胞系中FoxM1mRNA表达量均明显增高,均呈现正显著相关(r=0.593,r=0.660,P<0.05)。结论:Gli1和FoxM1在宫颈癌组织中均高表达,且Gli1可调控宫颈癌细胞系Hela、Siha中FoxM1的表达,进而促进宫颈癌的发生发展。     

GANT61对Hela细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:研究Gli抑制剂GANT61作用于Hela细胞后Gli1、FoxM1及Cyclin D1的表达变化及细胞的增殖活力与侵袭迁移能力的影响,并分析其相关分子机制,以期为宫颈癌的治疗提供新的靶点。方法:采用CCK-8法检测不同浓度GANT61对Hela细胞增殖活力的影响;流式细胞仪检测Hela细胞的细胞周期的分布变化;RTPCR、Western Blot分别检测Gli1、FoxM1、Cyclin D1相应的mRNA水平及蛋白表达水平;Transwell小室模型及Matrigel基质胶实验分别检测Hela细胞的迁移与侵袭能力。结果:(1)GANT61可剂量依赖性的降低Hela细胞的增殖活力,其抑制Hela细胞的IC_(50)值约为36.337μmol/L,且细胞周期主要被阻滞在G2/M期(P<0.01);(2)随着GANT61浓度的增加,Gli1、Cyclin D1、FoxM1相应mRNA的表达水平逐渐降低(P<0.01),其相应蛋白的表达水平也降低;(3)Transwell实验显示,实验组Hela细胞穿膜数量明显低于对照组(P<0.01)。结论:(1)GANT61可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭及迁移能力,且该作用是通过抑制Gli1的表达,进而影响FoxM1的转录活性从而阻断细胞周期的进展来实现的;(2)FoxM1很可能是Gli1下游的直接作用靶点。     

调控Smo活性对成年大鼠神经干细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨Shh信号通路中G蛋白偶联受体Smoothened（Smo）对成年大鼠神经干细胞（ANSCs）增殖、迁移的影响并阐明其作用机制。方法 培养ANSCs,分别添加Smo的激动剂Purmorphamine及其抑制剂Cyclopamine,细胞增殖-毒性实验（CCK8）检测其对ANSCs增殖的影响;细胞划痕实验检测其对ANSCs迁移能力的影响;实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测Sonic Hedgehog（Shh）信号通路的细胞表面Patched蛋白（Ptch1）、G蛋白偶联受体Smo、转录因子（Gli1）以及神经导向因子（Slit1）和脑源性神经营养因子（BDNF）表达量的变化。结果 Smo激动剂PM对ANSCs的增殖有明显促进作用,48 h后PM组ANSCs的吸光度明显升高（P<0.01）;PM可以促进ANSCs的迁移,48 h后的PM组ANSCs划痕面积显著减小（P<0.01）;Smo抑制剂CPM对ANSCs的增殖和迁移均有显著的抑制作用;RT-PCR实验显示PM组细胞中的Ptch1、Smo、Gli1及Slit1、BDNF表达水平均明显增加（P<0.05）。结论 调控Smo的活性可以促进或抑制成年神经干细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与调节BDNF和Slit1的表达有关。     

前列腺癌患者Hedgehog信号通路相关蛋白的表达及其临床意义

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路相关蛋白(Shh、Ptch和Gli1)在前列腺癌患者中的表达及其与疾病预后的关系。 方法取90例手术治疗的前列腺癌患者肿瘤组织及对应的癌旁正常组织标本,采用免疫组化法测定Shh、Ptch和Gli1表达,分析其与临床病理特征的相关性,采用Cox回归模型研究前列腺癌患者术后复发转移的危险因素,并利用Kaplan-Meier生存曲线分析Shh、Ptch和Gli1与无进展生存期的关系。 结果前列腺癌组织中Shh、Ptch和Gli1蛋白表达水平显著高于癌旁正常组织(P＜0.05)。不同Shh、Ptch和Gli1蛋白表达的前列腺癌患者的临床分期、Gleason评分、合并骨转移的分布差异具有统计学意义(P＜0.05)。Cox回归分析显示,Hh信号通路相关蛋白表达阳性是术后复发转移的独立危险因素(P＜0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,Hh信号通路相关蛋白表达与前列腺癌患者无进展生存期呈负相关(P＜0.05)。 结论前列腺癌患者肿瘤组织中Hh信号通路相关蛋白表达与肿瘤分化程度密切相关,对前列腺癌患者预后评估具有一定价值。     

下调FoxM1基因表达对宫颈癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究靶向FoxM1基因的小分子干扰RNA(siRNA)下调宫颈癌Hela、C33A及Siha等细胞系FoxM1基因表达后细胞侵袭和迁移能力的改变,寻找新的宫颈癌治疗靶点。方法:设计靶向FoxM1基因小分子干扰RNA(siFoxM1)并分别转染宫颈癌细胞系Hela、C33A和Siha,实时定量RT-PCR和Western blot技术分别检测siFoxM1对细胞内源性FoxM1表达的影响;采用Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭能力改变。结果:1转染siFoxM1可特异高效地下调宫颈癌细胞FoxM1mRNA水平和蛋白表达水平,Hela、C33A和Siha细胞FoxMl mRNA分别下降92.29%,87.65%和95.82%;2细胞迁移试验显示3株细胞的平均OD值较对照组分别降低40.61%,49.65%和50.87%(P<0.05)。细胞侵袭试验显示3株细胞的平均穿膜细胞数较对照组分别降低86.67%,71.77%和72.48%(P<0.01)。结论:FoxM1基因表达下调可显著降低多株宫颈癌细胞侵袭和迁移能力,有可能成为有效的宫颈癌治疗靶点。     

干预Hedgehog信号对肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨Hedgehog(HH)信号通路的活化和抑制对肾小管上皮细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为对照组、活化组(10μg/L Shh)和干预组(10μg/L Shh加5μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,细胞免疫荧光染色检测HH信号关键分子Ptch1、Smo和Gli1,以及细胞增殖标志物PCNA的表达,real-time RT-PCR检测Ptch1和Smo m RNA的表达。结果:免疫荧光染色显示,对照组细胞维持一定的增殖状态,HH信号活性较低,PCNA表达水平较低;当外源性重组蛋白Shh活化NRK-52E细胞24 h后,Smo和Gli1 m RNA和蛋白表达显著升高,Ptch1的表达显著下调,这提示Shh可激活HH信号(P<0.05)。在此过程中,PCNA表达水平显著升高,NRK-52E细胞数量增加,同时伴随细胞形态的改变;在Shh的基础上加入环杷明干预后,HH信号被抑制(P<0.05),PCNA表达下降,NRK-52E细胞增殖被抑制,出现凋亡或坏死。结论:HH信号与肾小管上皮细胞的增殖密切相关。通过药物调控HH信号的活化,可影响PCNA的表达,进而影响细胞增殖效应。     

IPI-926对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响及其机制

目的 观察IPI-926对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,并探讨在人结肠癌HT-29细胞增殖过程中IPI-926对Hedgehog (刺猬,Hh)信号通路因子表达的影响。 方法 常规体外培养人结肠癌HT-29细胞,随机分为对照组(空白培养基)和不同浓度IPI-926(10 nM、20 nM、30 nM)的实验组,培养HT-29细胞72 h后倒置显微镜观察各组细胞形态变化;MTT法测定各组培养72 h后HT-29细胞抑制率;RT-PCR和Western blot分别检测各组培养72 h后HT-29细胞Shh、Ptch、Smo和Gli-1 mRNA及其相关蛋白的表达;采用独立样本t检验进行组间比较,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 对照组细胞生长状态良好;而用不同浓度IPI-926(10 nM、20 nM、30 nM)处理的HT-29细胞细胞凋亡增加,并随着IPI-926浓度的增加,凋亡率明显升高;10 nM、20 nM、30 nM浓度的IPI-926对人结肠癌细胞HT-29抑制率分别为(17.23±1.32)%、(38.34±1.82)%和(75.81±3.43)%,随着浓度的增加而升高,抑制率呈量效关系。空白对照组和IPI-926浓度为10 nM时Shh、Ptch、Smo和Gli-1的mRNA及其蛋白表达差异均无统计学意义,但在IPI-926浓度为20 nM和30 nM时,Shh、Ptch、Smo和Gli-1的mRNA及其蛋白表达均比空白对照组明显下调,并且IPI-926浓度为30 nM时的Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达明显高于20 nM时的mRNA表达。 结论 小剂量IPI-926不能有效抑制HT-29细胞的增殖,但当超过20 nM时则可以有效抑制HT-29细胞的增殖;其抑制的机制可能与Hh通路相关成员Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达有关。      

Sonic hedgehog信号通路在胃癌中的研究进展

Shh（Sonichedgehog）作为最重要的Hh同源基因产物,它的异常激活与胃癌的发生、发展关系密切成为近年研究热点。经典的Shh信号通路是由Shh配体、Ptch和Smo组成的受体复合物以及下游转录因子Gli蛋白（Glil、G1i2、Gli3）组成。研究发现相比正常组织,胃癌组织中Shh的表达都有不同程度的升高,且升高程度与胃癌的发展转移呈正相关,本文就Shh信号通路与胃癌的研究进展做一综述。     

槲皮黄酮调控Hedgehog通路抑制人卵巢癌细胞株A2780增殖、侵袭、迁移的体外实验

目的:通过体外实验研究分析槲皮黄酮通过调控Hedgehog通路对人卵巢癌细胞株A2780的增殖、侵袭和迁移的抑制作用。方法:将人卵巢癌细胞株A2780按照每孔1×10~5个接种到96孔板中,分别记作阴性对照组,阳性对照组,槲皮黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组设置5个重复孔。阳性对照组培养基中加入阿霉素使其终浓度为5μmol·L~(-1),槲皮黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组分别在培养基中加入槲皮黄酮使其终质量浓度为20、10、5μg·L~(-1),培养48 h。通过四唑盐比色法分别在24 h和48 h检测A2780细胞增殖抑制率;通过Transwell小室法检验A2780细胞侵袭能力;通过细胞划痕实验检测A2780细胞迁移能力;实时荧光定量聚合酶链式反应检验Sonic Hedgehog(Shh)、Ptched1(Ptch1)、Smoothened(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Gli1)mRNA表达水平;通过蛋白免疫印迹检测Shh、Ptch1、Smo、Gli1蛋白表达水平。结果:阴性对照组A2780细胞在药物干预24 h和48 h细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P0.05);其余4组48 h均高于24 h(P0.05);两组间在24 h和48 h细胞增殖抑制率比较:槲皮黄酮高剂量组阳性对照组/槲皮黄酮中剂量组槲皮黄酮低剂量组阴性对照组,阳性对照组和槲皮黄酮中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P0.05)。药物干预48 h后A2780细胞侵袭活性和迁移能力比较:每两组比较,阴性对照组槲皮黄酮低剂量组阳性对照组/槲皮黄酮中剂量组槲皮黄酮高剂量组,阳性对照组和槲皮黄酮中剂量组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。药物干预48 h后Shh、Ptch1、Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达水平检测比较:每两组间比较,阴性对照组槲皮黄酮低剂量组阳性对照组/槲皮黄酮中剂量组槲皮黄酮高剂量组,阳性对照组和槲皮黄酮中剂量组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:槲皮黄酮可抑制人卵巢癌细胞株A2780的增殖、侵袭和迁移,高剂量槲皮黄酮效果优于阿霉素,推测其作用机制可能与调控Hedgehog通路下调Shh、Ptch1、Smo、Gli1基因和蛋白表达水平有关。     

早期高分化浆液性囊腺卵巢癌中Ptch及Gli2表达情况

目的 研究hedgehog （Hh）信号通路中Ptch及Gli2蛋白在卵巢癌中的表达及其临床意义。方法 60例早期高分化浆液性囊腺卵巢癌组织标本为实验组,30例正常卵巢组织标本为对照组,应用免疫组化法检测Ptch及Gli2在实验组及对照组中的表达。结果 Ptch及Gli2在实验组的表达均高于对照组（P<0.05）。结论 Hh信号通路在卵巢癌组织中异常激活,且该信号通路可能参与卵巢癌的发生、发展过程,进而提示Hh是卵巢癌侵袭转移的一个重要信号通路,为进一步深化卵巢癌的机制研究和靶向治疗提供了一个新的思路。     

胰十二指肠切除术后住院时间影响因素分析-回顾性研究

Background. Postoperative hospital stay after pancreaticoduodenectomy (PD) was relatively longer than other gastrointestinal operations, The aim of current study was to investigate the risk factors of postoperative hospital stay after PD. Methods. Patients who were performed PD in Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (CHCAMS) between December 2008 and November 2012 were selected for the retrospective study. The clinical and pathological data was collected and analyzed. The primary outcome was postoperative hospital stay. Normal discharge or recovery was defined as postoperative hospital stay no more than 10 days, otherwise it was defined as delayed discharge or recovery (including hospital death). Results. Finally, 152 patients were enrolled in present study. Postoperative hospital stay was 19.7±7.7 (7-57 d). 67 of 152 patients were normal discharge, and 85 of 152 patients were delayed discharge. The overall morbidity of complications was 62.5% (95/152), and the mortality rate was 3.29% (5/152). Multiple factors analysis showed that complication morbidity (adjusted OR=10.40, 95%CI=3.58-30.22), age (adjusted OR=4.09, 95%CI=1.16-14.39), BMI (body mass index) (adjusted OR=4.40, 95%CI=1.19-16.23), surgical procedure (adjusted OR=26.14, 95%CI=4.94-153.19), blood transfusion (adjusted OR=7.68, 95%CI=2.09-28.27) and fluid input (adjusted OR=3.47, 95%CI=1.24-11.57) were significantly associated with delayed discharge. Conclusions. Postoperative complications affects the postoperative hospital discharge. Furthermore, age, BMI, transfused red blood, surgical procedure and input might prolong LOS (length of hospital stay). Studies with more patients were needed in future.     

原子吸收火焰法测定合力康粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量

目的：采用原子吸收火焰法测定合力康粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量。方法：用盐酸-硝酸-水(9：1．5：25)混酸湿法水浴加热消化处理样品，硝酸锶作镁离子释放剂，乙炔-空气火焰原子吸收法。结果：钾、钠、钙镁、锌、铁加样回收率与RSD(n=5)分剐为98．3％、0．8％；100．8％、3．2％；101．8％、1．3％；102．5％、2．1％；101．2％、2．8％；97．4％、2．4％。特征浓度分别为(产生0．0044吸收所需要的浓度，μg/m1)0．02、0．01、0．07、0．003、0．0l、0．06。结论：该方法简便、快速、结果准确，适用于合力康粉剂粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量测定。     

电针刺激耻骨上四穴治疗女性压力性尿失禁临床疗效观察

目的 观察电针耻骨上四穴对女性压力性尿失禁患者的影响。方法 选取2020年12月-2022年11月期间经金华市中医医院临床确诊为压力性尿失禁的女性患者40例,采用数字随机法分为治疗组和对照组,对照组选用盆底肌锻炼治疗,隔日治疗1次,共治疗15次;治疗组在盆底肌锻炼治疗的基础上,采用电针刺激耻骨上四穴(气冲、冲门、横骨、曲骨等四穴),隔日治疗1次,共治疗15次;。分别记录治疗前、治疗结束后3周ICIQ-SF评分、72h尿失禁次数并进行疗效评价,分别于治疗前、治疗后第3周进行经会阴超声测量BND、PUVA、URA。结果 经治疗后第3周,2组间总有效率比较,治疗组明显优于对照组(p<0.01),治疗组ICIQ-SF评分、72h尿失禁次数均低于对照组(均p<0.05),且经会阴超声测量的BND、PUVA、URA均低于对照组(均p<0.05)。结论 电针治疗女性压力性尿失禁可有效降低患者BND、PUVA、URA,改善盆底结构,从而减少患者尿失禁的次数及降低ICIQ-SF评分。     

矮身材儿童血铅镉锌钙铁铜镁水平分析

目的探讨血铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平对儿童生长发育的影响。方法通过采用钨舟原子吸收光谱仪测定我院儿保门诊53例矮身材儿童（矮身材组）及53例正常儿童（对照组）末梢静脉血中铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平,并对其与儿童生长发育关系进行分析。结果矮身材儿童血铅明显高于正常对照组,锌、钙、铁明显低于正常对照组（P〈0．05）。而血镉、铜、镁与对照组则无明显差异。矮身材组血铅男童明显高于女童（P〈0．05）。结论矮身材儿童的生长发育迟缓可能与高血铅,低血锌、钙、铁密切相关。儿童铅中毒防治和合理的膳食结构是降低儿童矮身材发生率的重要措施。