谷氨酰胺对重症急性胰腺炎大鼠肠道损伤影响的实验研究

目的通过建立实验性重症急性胰腺炎大鼠模型，谷氨酰胺灌胃，以期寻求谷氨酰胺在重症急性胰腺炎时的肠道保护作用及其分子机制。方法雄性SD大鼠90只，随机分为三组：假手术组、SAP组、谷氨酰胺治疗组。检测血浆D-乳酸OD值；免疫组化技术分析小肠组织ICAM-1的表达和肠黏膜细胞凋亡（TUNEL法）情况。结果SAP组在术后24h、48h和72h各点血浆D-乳酸OD值均明显高于OP组，同时也高于谷氨酰胺治疗组。造模后24h、48h和72h，SAP组肠组织血管内皮细胞ICAM-1表达光密度值与OP组相比明显增高。与谷氨酰胺治疗组相比，SAP组的ICAM-1的表达则有所下降。肠黏膜组织在SAP组发生细胞凋亡的数目与OP组相比明显增加。而谷氨酰胺治疗组与SAP组比较，细胞凋亡数目则有所降低。结论重症急性胰腺炎时肠黏膜屏障功能的损伤受多种因素的调节，而谷氨酰胺作为肠道的能源物质，对重症急性胰腺炎时肠黏膜屏障功能的破坏具有明显的保护作用。     

能全素对5-FU化疗后大鼠肠屏障功能的影响

目的 研究评价肠内营养对5-FU化疗后大鼠肠屏障功能的影响.方法 30只SD大鼠被随机分为3组:EN组:单纯能全素肠内营养;STD组:5-FU化疗+能全素肠内营养;CHOW组:腹腔注射5-FU化疗+自由进食.化疗前后观察各组大鼠体重、尿乳果糖/甘露醇的变化,并在第8 d时测定门静脉血内毒素水平、门静脉血和淋巴结培养以及取结肠、回肠标本进行组织学病理切片,测定绒毛高度和肠壁厚度.结果 和EN组相比,STD组大鼠体重明显下降、尿乳果糖/甘露醇比值增加,黏膜高度和肠壁厚度也明显降低;EN组大鼠体重、尿乳果糖/甘露醇等各项观察指标略差于CHOW组.结论 5-Fu可引起大鼠肠屏障损害;单纯能全素肠内营养对化疗后大鼠肠屏障的保护作用不如自由进食.     

胃泌素和胆囊收缩素对胆管癌细胞凋亡阈值的影响

目的　探讨胃泌素和胆囊收缩素 (CCK)对胆管癌细胞凋亡阈值的调节作用。方法　以白僵菌素 (40 μmol/L× 1 2h)为凋亡诱导剂 ,末端标记 (TUNEL)技术检测胃泌素 (Gastrin) 1 7或CCK 8S(1 0 - 8mol/L× 48h)预处理后QBC939胆管癌细胞诱发性凋亡指数 (AI)的变化及反义bcl 2寡核苷酸转染 (1 .32mg/L)的影响。结果　Gastrin 1 7或CCK 8S预处理使AI显著降低 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ,同时加入Gastrin/CCK B受体拮抗剂L365 ,2 60或转染反义bcl 2寡核苷酸可逆转 ,与相应Gastrin 1 7或CCK 8S组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 )。结论　胃泌素和CCK具有提高凋亡阈值、抑制胆管癌细胞凋亡的作用 ,其机制与上调bcl 2基因表达有关     

清胰II号对重症急性胰腺炎大鼠肠道免疫损伤的影响

目的:探讨清胰Ⅱ号对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道免疫损伤的影响。方法:将80只SD大鼠随机分成假手术组、SAP模型组(SAP组)、SAP模型+清胰Ⅱ号治疗组(清胰Ⅱ号组)、SAP模型+阳性药物对照组(谷氨酰胺组),其中假手术组8只,其余组各24只;采用胰胆管逆行注射5%的牛磺胆酸钠建立SAP模型;清胰Ⅱ号组与谷氨酰胺组术后分别用清胰Ⅱ号(10mL/kg,1次/6h)和谷氨酰胺灌胃(0.15g/100g,1次/6h)灌胃,另两组以相同的方式给予等体积的生理盐水;除假手术组大鼠在术后6h采集标本外,其余各组均分别在术后6、12、24h各取8只大鼠采集标本,观察胰腺与回肠组织的病理变化;ELISA法检测血清IL-1、IL-10浓度;RT-PCR检测回肠组织HMGB1 mRNA的表达;流式细胞仪检测回肠Peyer结中CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群的凋亡。结果:除假手术组外,其余各组胰腺与回肠组织均出现明显的病理学改变,且逐渐加重,但两个治疗组术后各时间点胰腺与回肠组织损伤程度均轻于SAP组。与对照组比较,其余各组术后血清IL-1、IL-10水平、回肠HMGB1m RNA表达量均明显逐渐升高(均P0.05),但两个治疗组IL-1、IL-10的升高幅度均低于SAP组(均P0.05);其余各组术后回肠组织CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞凋亡率均明显升高(均P0.05),其中在SAP组呈逐渐升高趋势,而在两个治疗组呈逐渐降低趋势,且两个治疗组各时间点的各T细胞的凋亡率均小于SAP组(均P0.05)。两个治疗组间同时间点上述各指标的差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:清胰Ⅱ号可减轻SAP时肠道免疫功能的损伤,其机制可能与下调回肠HMGB1表达,减少T淋巴细胞的凋亡有关。     

受体低氧预适应后肠黏膜改变对大鼠移植肝的影响

目的:研究低氧预适应对肠道黏膜屏障的作用以及对移植肝再灌注损伤的影响.方法:88只SD大鼠分为原位肝移植组(A组)、受体低氧预适应组(B组)和假手术组(C组)、A、B组均行原位肝移植.术后2 h检测大鼠血清肝功能和内毒素水平、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,观察肝、肠组织细胞形态学改变以及3d和1周存活率.结果:B组肝功能损害与A组相比明显降低(P<0.01),MDA含量、血清内毒素明显低于A组(P<0.01),SOD活性明显高于A组(P<0.01);B组肝细胞结构改变较小,肠黏膜上皮损伤较轻;术后1周存活率B组较A组高(P<0.01).结论:受体低氧预适应能够保护肠黏膜屏障,减轻移植肝再灌注损伤.     

大肠癌胃泌素、生长抑素表达与细胞增殖和凋亡的关系

我们用免疫组织化学方法和DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)对 60例大肠癌手术切除的癌组织标本进行胃泌素 (GAS)、生长抑素(SS)、增殖细胞核抗原 (PCNA )、Ki 67表达状况和细胞凋亡情况的检测。以探讨大肠癌组织GAS、SS的表达与细胞增殖和凋亡状态的关系。一、材料与方法1.标本来源 :收集我院 1999年 8月～ 2 0 0 1年 10月手术切除的大肠癌标本60例 ,其中直肠癌 41例 ,结肠癌 19例 ;男 3 9例 ,女 2 1例 ,年龄 (5 0 .9± 7.8)岁。2 .标本处理及检测指标 :取手术切除的癌组织用 10 %中性福马林固定 ,石蜡包埋 ,厚 4μm连…     

谷氨酰胺对短肠综合征大鼠结肠黏膜细胞凋亡的影响

目的 探讨谷氨酰胺联合肠内营养对动物模型结肠黏膜凋亡的影响。方法 将大鼠随机分为3组，即正常组，模型组、谷氨酰胺组2l天两个时间点进行观察。结果 谷氨酰胺组BCl-2的平均灰度值及表达阳性的面积明显大于其他组，Bax基因蛋白平均灰度值及表达阳性的面积明显小于其他组（P〈0．05）。结论 谷氨酰胺能抑制结肠黏膜细胞的凋亡，促进结肠的代偿。     

胃泌素调节胆管癌细胞凋亡的初步研究

目的探讨胃泌素 (gastrin)对胆管癌细胞凋亡的调节及机理。方法用TUNEL技术和定量RT PCR分别检测胃泌素 17(G 17)对QBC939人胆管癌细胞系白僵菌素诱发性凋亡指数 (AI)和bcl 2 /baxmRNA表达的影响 ,用反义寡核苷酸技术研究bcl 2基因在胃泌素调节细胞凋亡中的作用。结果与对照组比较 ,G 17组AI降低、bcl 2mRNA表达增强 (P <0 0 1) ,baxmRNA无变化 ;胃泌素受体拮抗剂L36 5 ,2 6 0 (L6 0 )可拮抗G 17对AI和bcl 2mRNA表达的影响 (P <0 0 1) ;反义bcl 2寡核苷酸转染可逆转G 17对AI的抑制 (P <0 0 1) ,正义和随机片段无作用。结论胃泌素能提高凋亡阈值、抑制胆管癌细胞凋亡 ,其机理与上调bcl 2表达有关     

谷氨酰胺对饥饿大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用

目的探讨谷氨酰胺对饥饿大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用。方法90只健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(C组,n=10)、全饥饿组(S组,n=40)和谷氨酰胺组(G组,n=40),S、G组随机分为为饥饿3、5、7、9d亚组(n=10)。实验期间无饲料供应,自由摄水。G组给予谷氨酰胺1．0 g·kg-1·d-1水溶液灌胃,每天一次。取小肠组织,光镜下观察肠黏膜的形态改变,并观察细胞凋亡情况,测定小肠组织匀浆中一氧化化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果饥饿可以导致小肠黏膜损伤,凋亡细胞增加,小肠NO、MDA含量增加,SOD活性降低,谷氨酰胺可减弱饥饿诱导的上述改变(P<0．05或0．01)。结论谷氨酰胺对饥饿大鼠肠黏膜屏障功能有保护作用。     

糖皮质激素对大鼠肠屏障功能的损害

目的探讨器官移植术后早期应用大剂量糖皮质激素对肠屏障功能的影响。方法将56只Wistar大鼠随机分为免疫抑制组和阴性对照组。免疫抑制组大鼠每日腹腔注射甲泼尼龙100mg/kg,1次/d,阴性对照组每日腹腔注射生理盐水1ml。用药后,每组在全麻下按4个时间点(0、3、5、7d)无菌操作获取血液、肠系膜淋巴结、肠内容及回肠组织,分别用于检测血浆D乳酸、血浆二胺氧化酶(DAO)、肠道菌群微生态、肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡指数及某些脏器细菌培养等。结果免疫抑制组与阴性对照组比较,从用药后第3d开始,各时间点血浆D乳酸以及DAO均显著升高(P<0.01或P<0.05),肠道菌群却无明显改变(P>0.05),肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);第7d时脏器细菌培养阳性率较阴性对照组明显升高(P<0.05)。结论甲泼尼龙能够造成大鼠肠屏障功能的损害,使肠屏障通透性升高。     

大肠癌病人肿瘤、癌旁粘膜中胃泌素、生长抑素及其分泌细胞的变化

通过观察大肠癌病人肿瘤和癌旁粘膜中胃泌素、生长抑素(SS)及其分泌细胞的变化,探讨病人体内胃泌素、SS变化的原因和意义。方法:采用放射免疫法(RIA)测定26例大肠癌病人肿瘤和癌旁粘膜中胃泌素、SS水平,并对其分泌细胞行免疫细胞化学观察。结果:肿瘤和癌旁粘膜中胃泌素含量极低且无胃泌素细胞存在。癌远旁粘膜(CDM,距肿瘤约5cm)SS水平低于癌近旁粘膜(CAM,距肿瘤0～2cm),高于肿瘤,两两相比相差均非常显著(P<0.01)。肿瘤中未见SS细胞;癌旁粘膜中SS细胞的形态、位置近于正常。CAM中SS水平与SS细胞数间呈非常显著之正相关(P<0.01)。结论:大肠癌与胃泌素、SS间存在着肯定的联系;CAM中SS上升的主要原因是粘膜中SS细胞数量增多并分泌大量的SS。这可能有助于延缓肿瘤的发生、发展,是机体对病灶的一种局部防御反应。     

胃泌素及其受体与胃癌关系的研究进展

胃泌素主要由胃窦及小肠上段黏膜的G细胞分泌,其受体分布在多种器官组织中.胃泌素及其受体具有调节细胞生长、分化,抑制细胞凋亡,促进细胞增生、侵袭、转移的功能.研究表明,胃泌素及其受体参与包括胃癌在内的多种肿瘤的发生、发展.胃泌素及其受体还可作为胃癌早期诊断的一个重要指标,同时也可能是胃癌治疗的潜在靶点.本文就胃泌素及其受体与胃癌的发生、发展关系作一综述.     

大肠癌细胞内胃泌素分泌颗粒的超微结构观察及其临床意义

目的　观察大肠癌细胞内胃泌素分泌颗粒的超微结构 ,并探讨其临床意义。方法　大肠癌组 10例 ,正常对照组 5例。两组术前抽取空腹血 2ml用放射免疫分析法测定其血清胃泌素水平 ;取大肠癌组织和对照组胃窦粘膜及大肠粘膜分别采用免疫组化ABC法检测其胃泌素的表达 ;对表达阳性者采用免疫电镜观察其超微结构。结果　大肠癌组血清胃泌素水平为 (13 0 .75± 2 1.3 4) pg/ml ,明显高于对照组的 (95 .63± 12 .2 6) pg/ml ,P<0 .0 5。 10例大肠癌组织中胃泌素表达呈强阳性 5例 ,阳性 4例 ,弱阳性 1例。对照组胃窦粘膜胃泌素表达均呈强阳性 ,大肠粘膜胃泌素表达均为阴性。免疫电镜超微结构观察 :10例大肠癌细胞中均可见胃泌素颗粒 ,分布于癌细胞内不同电子密度的分泌颗粒中及微绒毛膜表面。正常胃窦G细胞胞浆中可见低电子密度、呈空泡状、大小不等的胃泌素分泌颗粒。结论　大肠癌细胞形成胃泌素分泌颗粒并释放胃泌素 ,解释了部分大肠癌患者血清胃泌素水平增高的可能机理 ,并为采用胃泌素受体拮抗剂治疗大肠癌提供又一理论根据。     

胃泌素在胃炎与胃癌中表达的差异及意义

目的探讨胃炎与胃癌中,胃体、胃窦组织内胃泌素表达的水平的差异与意义。方法收集我院2009～2010年胃癌手术患者21例,选取同期行胃镜检查的慢性浅表性胃炎患者20例作为对照,免疫组化法检测组织内胃泌素的表达,IPP软件测定胃泌素累积光密度。结果不同性别及不同年龄胃泌素累积光密度的对数差异无显著性（P值分别为0.151和0.482）。胃炎组胃泌素累积光密度对数的中位数在胃体为2.58（1.60～4.24）,胃窦为4.55（3.27～5.23）（Z=4.166,P=0.000）;癌组织与癌旁组织比较,胃体处癌为1.46（0.00～4.61）,癌旁为3.51（0.00～5.30）（Z=3.089,P=0.002）,胃窦处癌为0.00（0.00～4.23）,癌旁为4.89（4.26～5.55）（Z=4.916,P=0.000）;癌旁组织与胃炎组相应部位比较,胃体处癌旁为3.51（0.00～5.30）,胃炎组为2.58（1.60～4.24）（Z=2.397,P=0.017）,胃窦处癌旁为4.89（4.26～5.55）,胃炎组为4.55（3.27～5.23）（Z=2.193,P=0.028）;癌与胃炎组比较,胃体处癌为1.46（0.00～4.61）,胃炎组为2.58（1.60～4.24）（Z=2.578,P=0.010）,胃窦处癌为0.00（0.00～4.23）,胃炎组为4.55（3.27～5.23）（Z=4.828,P=0.000）。结论不同性别及不同年龄胃泌素表达差异无显著性。胃泌素在胃窦处表达高于胃体。无论胃体胃窦,癌旁、胃炎、癌组织中胃泌素表达呈递减趋势。胃泌素表达水平的变化可能为胃癌发生前的一种状态。     

胃泌素促进胃癌细胞增殖和血管生成拟态形成

目的 探讨胃泌素对胃癌细胞血管生成拟态(VM)的作用及其分子机制.方法 应用免疫细胞化学检测SGC-7901、AGS细胞中胃泌素受体(CCK-BR);用终质量浓度为10、100 nmol/L胃泌素处理SGC-7901和AGS 72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达、酶联免疫吸附实验检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)的分泌水平;三维培养SGC-7901和AGS,用10、100 nmol/L胃泌素处理,显微镜下观察24、48、72 h VM形成,计数72 h VM形成数;软琼脂克隆形成实验检测细胞培养3周的克隆形成率.结果 SGC-7901和AGS细胞表达CCK-BR;经10、100 nmol/L的胃泌素处理后,SGC-7901和AGS的细胞增殖率和克隆形成率高于对照组,细胞的环形、半环形VM形成数也高于对照组(P＜0.01);细胞中HIF-1α的表达量比对照组上调了5.39、11.00(SGC-7901)、4.12和6.06倍(AGS);分泌性VEGF的浓度也比对照组增高[298、339 μg/mg蛋白(SGC-7901)及168和281 μg/mg蛋白(AGS),p＜0.01].结论 通过胃泌素-CCK-BR-HIF-1 α-VEGF构成的信号传递链,胃泌素促进胃癌细胞的体外增殖及VM的形成.     

高选迷切加胃窦粘膜切除术后幽门螺杆菌、胃酸、胃泌素的变化及相互关系

通过测定３８例十二指肠溃疡患者行高选迷切加胃窦粘膜切除术（ＨＳＶ＋ＭＡ）前后胃窦粘膜幽门螺杆菌（ＨＰ）、胃酸、血清胃泌素值的变化，以了解ＨＳＶ＋ＭＡ对其影响及ＨＰ与胃酸、胃泌素的关系。结果显示：①ＨＳＶ＋ＭＡ后３～６月及３～７年胃窦粘膜ＨＰ感染率明显低于术前；②ＨＳＶ＋ＭＡ后３～６月及３～７年血清胃泌素水平空腹及蛋白餐后１５，３０，４５，６０分钟均低于术前，术后３～７年较３～６月有所升高，但不显著；③胃粘膜ＨＰ阳性组胃酸分泌明显高于阴性组；血清胃泌素水平空腹及蛋白餐后１５分钟较阴性组升高，但不显著；餐后３０，４５，６０分钟明显高于阴性组，相差显著。提示幽门螺杆菌与十二指肠溃疡的发生和复发有密切关系。结果表明，高选迷切加胃窦粘膜切除术能明显地降低幽门螺杆菌感染率、降低胃酸、术后不发生高胃泌素血症，从而能治疗溃疡和减少溃疡复发     

原发性肝癌合并糖尿病手术前后胃泌素和胃动素水平的变化

目的探讨糖尿病对原发性肝癌(HCC)手术治疗前、后胃肠激素水平变化的影响。方法选取2007年4月至2010年2月期间我院收治的择期手术治疗的HCC患者143例,其中合并糖尿病者43例(DM组),不合并糖尿病者100例(NDM组),测定术前3d及术后1、2及7d血胃泌素(GAS)和胃动素(MTL)水平。结果①2组患者术后1、2及7d血浆MTL水平较术前明显下降(P<0.05),血浆GAS水平较术前明显升高(P<0.05)。②与NDM组相比,DM组术前血浆MTL和GAS水平均高于NDM组(P<0.05),术后1、2及7d血浆MTL水平降低更明显(P<0.05),GAS水平升高也更明显(P<0.05)。③NDM组术后首次肛门排气时间明显早于DM组(P<0.05)。④DM组病史≥10年、空腹血糖≥10mmol/L者首次肛门排气时间较病史<10年、空腹血糖<10mmol/L者明显延长(P<0.05)。结论糖尿病影响HCC切除术后的血GAS、MTL水平变化,糖尿病病程长及血糖控制不佳加重术后GAS、MTL水平的变化,使术后胃肠功能恢复延迟。     

保留幽门的胃窦黏膜切除加高选择性迷走神经切断术后临床疗效观察

目的观察保留幽门的胃窦黏膜切除加高选择性迷走神经切断术(高选迷切术)治疗十二指肠溃疡的疗效。方法对实施该术式的48例患者术后3～6个月及8～12年临床随访结果进行分析总结。结果全组无死亡病例。术后3～6个月及8～12年VisickⅠ～Ⅱ级分别为93.8％和95.3％。术后胃酸及胃窦黏膜幽门螺杆菌感染率与术前比较明显降低(P＜0.05),术后胃液胆酸及血清胃泌素无明显改变,X线钡餐及胃镜检查未发现溃疡复发。结论保留幽门的胃窦黏膜切除加高选迷切术不仅能保留胃窦、幽门功能,使胃内环境保护相对稳定,而且能有效、持久地降低胃酸分泌,减少溃疡复发和术后并发症的发生,是治疗十二指肠溃疡较理想的术式。     

Gastrin、CCK对胆管癌细胞bcl-2、baX基因表达的调控

目的探讨Gastrin、CCK对胆管癌细胞bcl-2和bax基因表达的调控作用.方法用免疫组织化学、原位杂交、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,研究了Gastrin17肽(G-17)和CCK-8S肽(CCK-8 Sulfated)及CCK-A受体拮抗剂L364,718(L18)和Gastrin/CCK-B受体拮抗剂L365,260(L60)对QBC939胆管癌细胞bcl-2和bax mRNA、蛋白含量的影响.结果在正常情况下胆管癌细胞bcl-2和bax mRNA表达均为阳性,bax mRNA强于bcl-2 mRNA;G-17(1×10-10 mol/L、48 h)、CCK-8S(1×10-10mol/L)明显增强bcl-2 mRNA表达,而对bax mRNA表达无影响;同时加入L18和/或L60(1×10-10 mol/L)可明显抑制G-17和CCK-8S对bcl-2mRNA的促表达作用.经G-17或CCK-8S(1×10-8 mol/L)作用48 h,胆管癌细胞bcl-2蛋白表达明显增加,而bax蛋白表达无显著变化;L60或L18(1×10-8 mol/L)能明显抑制G-17和CCK-8S对bcl-2蛋白表达的促进作用.结论 Gastrin和CCK对bcl-2基因表达有上调作用,提示Gastrin和CCK对胆管癌细胞凋亡过程有抑制作用.