敲低性别决定区Y-box蛋白5对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

摘 要：［目的］ 探讨敲低性别决定区Y-box蛋白5（Sox-5）的表达水平及对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。［方法］ 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞和正常人胃黏膜上皮细胞中Sox-5 mRNA的相对表达水平；sh-NC和sh-Sox-5质粒转染BGC823细胞，蛋白免疫印迹实验检测Sox-5蛋白表达水平；MTT实验、划痕实验和Transwell实验分别检测BGC823细胞增殖活性、迁移能力和侵袭能力；蛋白免疫印迹实验检测扭曲蛋白（Twist）、波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。［结果］ 胃癌细胞中Sox-5 mRNA的相对表达水平高于正常人胃黏膜上皮细胞（P<0.01）；与转染sh-NC组相比，转染sh-Sox5质粒组中Sox-5蛋白的相对表达水平降低（1.120±0.142 vs 0.124±0.010，t=9.032，P<0.001）；与转染sh-NC组相比，转染sh-Sox-5组细胞增殖活性显著降低（1.32±0.10 vs 0.74±0.06，t=3.514，P=0.005），迁移率能力减弱（46.2%±4.7% vs 17.6%±2.5%，t=9.625，P<0.001），侵袭能力减弱（93.7±9.1 vs 113.7±6.5，t=3.103，P=0.036）；敲低Sox-5蛋白表达后Twist和Vimentin蛋白表达减弱，E-cadherin蛋白表达增强（P均<0.001）。［结论］ 敲低胃癌细胞中Sox-5的表达，可抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT。     

circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

ROR1-AS1调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体 1 反义 RNA 1（tyrosine protein kinase transmembrane receptor 1 antisense RNA 1，ROR1-AS1）调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化。乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC（转染shRNA 对照）、sh-ROR1-AS1（转染ROR1-AS1 shRNA）、sh-ROR1-AS1+Jagged1组（转染ROR1-AS1 shRNA，Notch1通路激活剂Jagged1处理）。CCK-8实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9，C-Caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3，C-Caspase-3）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、Notch1、Hes1蛋白表达。 ［结果］ 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞中ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞（P<0.05）。与对照组、sh-NC组比较，sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00%±9.82%，99.74%±12.05%，58.91%±6.33%)，细胞凋亡率升高(4.81%±0.26%，4.93%±0.34%，20.58%±2.11%），细胞迁移数目( 225.36±12.84个，224.89±19.56个，140.89±13.64个）和侵袭数目(180.47±16.32个，177.54±16.92个，110.44±10.87个)减少，细胞中C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与sh-ROR1-AS1组比较，sh-ROR1-AS1+Jagged1组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00%±11.58% vs 147.36%±12.05%），细胞凋亡率降低(19.54%±1.74% vs 8.36%±0.75%)，细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目（107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个）均升高，C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高（P<0.05）。［结论］ 下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力，激活细胞凋亡。     

磷酸酶PHLPP2抑制GPX4活性增强非小细胞肺癌铁死亡诱导剂RSL3敏感性的作用分析

摘 要：［目的］ 探讨磷酸酶PHLPP2在铁死亡诱导剂RSL3诱导非小细胞肺癌细胞铁死亡发生中的作用及机制。［方法］ 体外培养人肺癌细胞株，GPX4抑制剂RSL3处理后MTT法检测RSL3抑制非小细胞肺癌细胞增殖作用，实时荧光定量PCR检测mRNA水平，Western blot法检测蛋白表达。流式细胞术检测脂质ROS水平，分别采用逆转录病毒/腺病毒感染上调/下调PHLPP2表达，两组间比较采用独立样本t检验。［结果］ RSL3有效抑制非小细胞肺癌细胞的活力，RSL3处理后HCC827、H1975、H1650、A549和H1299细胞的增殖率分别为15.22%±2.35%、 25.05%±5.92%、 4.40%±1.61%、41.48%±10.01%和13.17%±2.54%。 PHLPP2表达水平最高的H1650细胞对RSL3抑制增殖作用最显著，RSL3抑制增殖作用与 PHLPP2表达水平呈正比。上调PHLPP2表达可以增加RSL3对A549细胞增殖抑制作用，并增加铁死亡关键标志脂质ROS的累积，A549-vector和A549-PHLPP2组的脂质ROS水平分别为 4.34%±0.39%和15.36%±0.80%（P<0.001）；相反，下调PHLPP2表达H1650细胞中，RSL3对H1650细胞增殖抑制作用减弱，减少了其诱导的脂质ROS的累积，H1650-shControl和H1650-shPHLPP2脂质ROS水平分别为14.76%±1.22%和4.89%±1.81%（P=0.0 015）。公共数据库挖掘分析PHLPP2与铁死亡关键蛋白GPX4、SLC7A11和ASCL4的相关性，发现PHLPP2与GPX4表达呈负相关（r=-0.336，P<0.001）。Western blot进一步验证了上调PHLPP2表达可增强RSL3对GPX4蛋白的抑制作用。［结论］ PHLPP2促进GPX4抑制剂RLS3诱导铁死亡发生，其机制主要通过协同抑制GPX4活性。     

慢病毒介导 EGFL7 沉默对肺癌A549细胞体外生物学行为的影响

目的：通过慢病毒介导沉默表皮生长因子样结构域7基因 (epidermal growth factor-like domain 7, EGFL7 )在肺癌A549细胞的表达,探讨 EGFL7对A549细胞的增殖、凋亡、侵袭和血管生成的影响。 方法： 利用慢病毒介导靶向 EGFL7的shRNA 转染A549细胞,实验分三组： LV-RNAi组（转染LV-RNAi）,LV-NC组（转染空病毒）和对照组（A549细胞）。Real-time PCR和Western blotting分别检测LV-RNAi感染对A549细胞 EGFL7 mRNA和蛋白水平表达的影响,MTT法和流式细胞术分别检测沉默〖STBX〗EGFL7〖STBZ〗对A549细胞增殖和凋亡的影响,Transwell侵袭实验和鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane,CAM）实验分别检测沉默 EGFL7 对A549细胞侵袭和血管生成能力的影响。 结果： 慢病毒稳定高效地转染A549细胞,LV-RNAi组细胞内 EGFL7 mRNA\[（0.18±0.03） vs （0.98±0.05）、（1.03±0.09）,P<0.05\]和蛋白表达较LV-NC组和对照组显著降低。与LV-NC组及对照组相比,沉默EGFL7 对LV-RNAi组A549细胞的增殖活力\[感染120 h 时：（073±0.22） vs （0.79±0.08） vs （0.81±0.11）,P>0.05\]与和凋亡率\[感染120 h 时：（1.92%±0.06） vs （2.11%±0.07） vs （1.85%±0.13）, P>0.05\]均无显著影响;同时,LV-RNAi组A549细胞侵袭入下室细胞数\[（61.7±14.5） vs （272.8±215）、（286.6±40.0）/mm2,P<0.05\]与血管生成指数\[（31.7±4.1） vs （96.3±4.4）、（103.3±6.5）,P<0.05\]均显著减少。 结论： 沉默 EGFL 基因能够抑制A549细胞侵袭和血管生成能力,但不影响其增殖与凋亡。     

CircXPO1/miR-5195-3p/RTKN轴调控结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨环状RNA（circRNA）circXPO1通过miR-5195-3p/RTKN轴调控结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的机制。［方法］ 应用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot测定circXPO1、miR-5195-3p、RTKN mRNA和RTKN蛋白的表达。SW620细胞分为si-NC组、si-circXPO1组、miR-NC组、miR-5195-3p组、si-circXPO1+anti-miR-5195-3p组、si-circXPO1+pcDNA-RTKN组,依次转染siRNA-NC（si-NC）、siRNA-circXPO1（si-circXPO1）、mimic NC（miR-NC）、miR-5195-3p mimic、si-circXPO1、miR-5195-3p inhibitor（anti-miR-5195-3p）、si-circXPO1和pcDNA-RTKN。运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、流式细胞术检测SW620细胞增殖、凋亡。生物信息学分析与双荧光素酶报告实验测定circXPO1与miR-5195-3p、miR-5195-3p与RTKN的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织比较,结直肠癌组织中circXPO1（4.55±0.30 vs 4.55±0.30）、RTKN mRNA（3.27±0.29 vs 1.00±0.04）和RTKN蛋白（0.51±0.06 vs 0.21±0.03）表达水平升高,miR-5195-3p（0.34±0.03 vs 1.00±0.06）表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Si-circXPO1组结直肠癌SW620细胞中circXPO1表达水平、细胞活性（0.37±0.03 vs 0.72±0.05）均比si-NC组低,凋亡率（25.91%±2.51% vs 6.73%±0.65%）比si-NC组高,差异有统计学意义（P<0.05）。CircXPO1靶向调控miR-5195-3p的表达,miR-5195-3p靶向调控RTKN的表达。MiR-5195-3p组结直肠癌SW620细胞中RTKN蛋白、细胞活性（0.43±0.04 vs 0.74±0.05）比miR-NC组减少,凋亡率（21.01%±2.11% vs 7.17%±0.54%）比miR-NC组增加,差异有统计学意义（P<0.05）;si-circXPO1+anti-miR-5195-3p组和si-circXPO1+pcDNA-RTKN组RTKN蛋白表达水平、细胞活性（0.34±0.03、 0.38±0.04、0.17±0.02）均高于si-circXPO1组,凋亡率（13.83%±1.21%、10.19%±0.82%、27.53%±2.65%）均低于si-circXPO1组,差异有统计学意义（P<0.05）。 ［结论］ CircXPO1通过miR-5195-3p/RTKN轴促进结直肠癌SW620细胞增殖,和抑制其凋亡。     

非小细胞肺癌患者外周血Treg和Th17水平及意义

摘 要：［目的］ 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中Treg和Th17细胞的变化及其意义。［方法］ 收集40例NSCLC患者和20名健康对照的外周血样本,采用流式细胞术检测外周血中Treg和Th17细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附实验法检测TGF-β和IL-17水平。［结果］ 肺癌患者外周血中Treg细胞和Th17细胞比例均显著性高于健康对照组(分别为6.65%±3.70% vs 4.06%±1.23%和1.20%±1.19% vs 0.44%±0.13%,P<0.05)。外周血Treg和Th17细胞表达与NSCLC患者分期等无相关性(P>0．05)。肺癌患者外周血TGF-β和IL-17水平明显高于对照组(分别为25.05±3.19 vs 15.96±3.65 和4.36±2.79 vs 2.01±1.83,P<0.05)。［结论］ NSCLC患者外周血中Treg和Th17细胞以及相关细胞因子均高表达,Treg细胞以及Th17细胞参与了肺癌的发生和发展。     

三结构域家族蛋白22在宫颈癌中的表达及其对高危型人乳头瘤病毒阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨三结构域家族蛋白22（tripartite motif protein 22,TRIM22）在宫颈癌中的表达及其与临床病理学特征的关系,并分析TRIM22对高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。［方法］ 收集2017年8月至2018年9月41例手术切除或活检的宫颈癌组织和18例正常子宫颈组织,分别提取总RNA和总蛋白。实时定量PCR分析TRIM22 mRNA表达,Western blot分析TRIM22蛋白水平,并分析TRIM22 mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。以HPV16阳性宫颈癌细胞系CaSki和HPV18阳性宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,用TRIM22表达质粒（pUNO1-hTRIM22a）和对照表达质粒（pUNO1）稳定转染CaSki细胞和HeLa细胞,以未转染细胞为对照组。实时定量PCR和Western blot检测转染后细胞中TRIM22 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测抗磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）和磷酸化AKT（phosphorylated AKT,p-AKT）蛋白表达。［结果］ TRIM22在宫颈癌组织中mRNA表达（0.99±0.16 vs 4.39±1.41,t=15.40,P<0.001）和蛋白水平（0.30±0.12 vs 1.32±0.27,t=19.97,P<0.001）均明显低于正常子宫颈组织,TRIM22在高危型HPV阳性宫颈癌组织中mRNA表达（0.94±0.14 vs 1.17±0.12,t=4.21,P<0.001）和蛋白水平（0.27±0.08 vs 0.43±0.18,t=3.86,P<0.001）均明显低于高危型HPV阴性宫颈癌组织。TRIM22 mRNA表达与淋巴结转移明显相关（1.04±0.16 vs 0.89±0.13,t=3.15,P=0.003）,与肿瘤大小、临床分期无明显相关（P>0.05）。pUNO1转染CaSki细胞和HeLa细胞与未转染细胞在TRIM22 mRNA和蛋白水平、细胞增殖、侵袭数、细胞周期、凋亡率、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量的差异均无统计学意义（P>0.05）,pUNO1-hTRIM22a转染后CaSki细胞和HeLa细胞中TRIM22 mRNA和蛋白水平显著性高于pUNO1组和对照组（P<0.001）,细胞增殖、侵袭数量（CaSki细胞：31.00±5.30 vs 135.30±17.24 vs 120.40±22.95,F=56.01,P<0.001;HeLa细胞：27.20±9.04 vs 112.80±12.03 vs 117.00±18.56,F=67.45,P<0.001）、处于G2~M期的细胞比例（CaSki细胞：2.04%±0.36% vs 12.72%±1.98% vs 12.40%±1.62%,F=57.82,P<0.001;HeLa细胞：3.07%±1.08% vs 8.26%±2.98% vs 10.92%±3.56%,F=22.82,P<0.001）、PI3K、p-AKT蛋白表达量均显著性低于pUNO1转染细胞和未转染细胞,而凋亡率显著性高于pUNO1组和对照组（CaSki细胞：11.90%±2.78% vs 5.27% ±1.78% vs 6.64%±1.19%,F=16.78,P<0.001;HeLa细胞：18.79%±4.64% vs 6.78%±1.03% vs 5.23%±1.09%,F=27.91,P<0.001）。［结论］ TRIM22在宫颈癌中的表达明显减低,其表达水平与高危型HPV感染、转移恶化密切相关。上调TRIM22表达可明显减弱高危型HPV阳性宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,促进宫颈癌细胞凋亡。     

AHR活化介导的ROS诱导NSCLC细胞吉非替尼耐药的作用机制

目的:探讨芳香烃受体（AHR）介导的活性氧簇（ROS）诱导非小细胞肺癌（NSCLC）吉非替尼耐药的作用机制。方法:以正常支气管肺泡上皮细胞BEAS-2B为对照,Western blot检测非小细胞肺癌A549、PC-9、H1299和H1975细胞AHR的蛋白表达。AHR激动剂FICZ、吉非替尼、N-乙酰半胱氨酸（NAC）分别处理A549和PC-9细胞,MTT、激光共聚焦显微镜、流式细胞术及Western blot分别检测吉非替尼敏感性、细胞内ROS及表皮生长因子受体（EGFR）信号。结果:MTT检测显示FICZ通过上调半数最大抑制浓度（IC50）诱导PC-9及A549细胞对吉非替尼耐药,Western blot显示FICZ可导致PC-9及A549细胞EGFR、AKT磷酸化,而NAC可遏制A549细胞中的EGFR磷酸化并逆转吉非替尼耐药。共聚焦显微镜和流式细胞仪显示,FICZ诱导的AHR活化导致PC-9及A549细胞内ROS产生增加,并且可被NAC抑制。结论:活化的AHR可通过促进NSCLC细胞中的ROS产生和EGFR信号转导介导吉非替尼耐药,此过程可被NAC抑制。     

马钱子碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长并增强顺铂敏感性

摘 要：［目的］ 评估马钱子碱对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其增强化疗敏感性。［方法］ 采用NSCLC细胞系A549为研究对象,分别采用CCK-8法、集落形成实验和细胞侵袭、迁移实验检测马钱子碱对A549细胞活力、侵袭和迁移的影响;应用Western blot检测马钱子碱对PTEN、Akt和p-Akt蛋白表达影响。［结果］ 马钱子碱或顺铂单独有效抑制细胞生长、细胞集落的发育以及细胞的侵袭和迁移（P<0.05）,并且马钱子碱和DDP联合处理对细胞的抑制作用强于单独的化合物（P<0.05）。Western blot分析结果显示,在A549细胞中,马钱子碱（20μg/ml）处理增加PTEN蛋白的表达（P<0.05）减少了p-Akt蛋白表达（P<0.05）,并且hsa-miR-21 minic可部分抑制马钱子碱对PTEN蛋白表达的促进作用。［结论］ 马钱子碱可抑制肺癌的进展,增强抗癌药物顺铂对肺癌细胞的作用。