盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1表达的影响

目的观察瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(TRPV1)在子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠中异位灶及脊髓背根神经节(DRG)中的表达以及盆痛灵方对其的影响。方法采用自体内膜移植法建立大鼠EMs模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵低、中、高剂量组,每组9只;另设假手术组9只(仅切除单侧结扎段子宫)。消炎痛组大鼠给予每天3μg/g消炎痛混悬液,盆痛灵低、中、高剂量组大鼠分别给予每天10.2、20.4、40.8 g/kg盆痛灵方水煎液,各组均采用直肠给药方式,每日1次,连续4周;模型组和假手术组给予等体积生理盐水。末次给药后,取各组大鼠的子宫内膜组织及脊髓DRG。采用免疫组化法定位并检测EMs模型大鼠异位灶TRPV1蛋白表达,并用Western Blot、RT-PCR检测异位灶及脊髓DRG中TRPV1蛋白及mRNA相对表达量。结果与假手术组比较,EMs模型大鼠的异位灶和脊髓DRG中TRPV1蛋白及mRNA表达均升高(P0.05);与模型组比较,盆痛灵方可降低EMs模型大鼠异位灶和DRG中TRPV1蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论盆痛灵方可能通过降低TRPV1表达起到镇痛作用。     

加味盆痛灵对子宫内膜异位症疼痛大鼠背根神经节神经元动作电位的影响

目的 观察加味盆痛灵对子宫内膜异位症（EMs）模型大鼠背根神经节（DRG）神经元动作电位的影响，以探讨其抗EMs疼痛的作用机制。方法 采用自体内膜移植法构建SD大鼠EMs模型，将造模成功的大鼠随机分为模型、加味盆痛灵组，每组8只。另设假手术组8只。加味盆痛灵组大鼠每天给予加味盆痛灵（7.77g/kg）直肠给药，连续4周。模型组和假手术组直肠给予等体积生理盐水。分别于不同时间点测定大鼠50%缩足阈值（PWT）；运用全细胞电流钳技术记录加味盆痛灵对EMs疼痛大鼠DRG神经元兴奋性的影响。结果 与假手术组比较，模型组痛阈值降低，动作电位爆发阈值下降，动作电位半峰时程（APD50）延长，300pA去极化电流诱发的动作电位发放频率增加（P<0.01）。与模型组比较，加味盆痛灵组痛阈值上调，动作电位爆发阈值升高，APD50缩短，300pA去极化电流诱发的动作电位发放频率减少（P<0.01）。3组间静息电位水平和动作电位峰值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 加味盆痛灵抗EMs疼痛的机制可能与抑制DRG神经元的兴奋性相关。     

补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症TRPV1及其致敏因子NGF的影响

目的研究补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)简称内异症,瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(transientreceptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)及致敏因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的影响,以探讨补肾温阳化瘀方治疗EMT疼痛的作用机制。方法将近交系BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、孕三烯酮组,每组15只。观察各组扭体反应,并采用酶联免疫法(ELISA)检测血清NGF的含量,采用免疫组化SP法及Western blot法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白的表达,采用Real-time PCR方法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1 mRNA的表达。结果模型组血清NGF含量显著高于假手术组(P0.01),且与小鼠扭体次数呈正相关(r=0.574,P0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组血清NGF含量显著下降(P0.05);模型组子宫NGF、TRPV1蛋白及NGF、TRPV1 mRNA表达均高于假手术组(P0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白表达均显著降低(P0.01),NGF、TRPV1 mRNA以中药高剂量组下降最为明显(P0.01)。子宫及异位灶NGF与TRPV1蛋白及mRNA表达均呈正相关(P0.01)。结论 TRPV1及致敏因子NGF共同参与了EMT疼痛的发生;补肾温阳化瘀方可通过降低NGF对TRPV1的上调作用从而发挥抑制EMT疼痛的作用。     

加味盆痛灵对子宫内膜异位症模型大鼠血清及腹腔液IL-1β、NGF的影响

目的探讨加味盆痛灵方抑制子宫内膜异位症（EMs）疼痛的机制。方法SD大鼠自体内膜移植建立EMs模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、盆痛灵组、加味盆痛灵组、孕三烯酮组、消炎痛组,每组12只,另设正常组12只。各组给予相应的干预措施。采用ELISA法检测大鼠血清及腹腔液中白细胞介素-1β（IL-1β）、神经生长因子（NGF）的含量。结果与正常组比较,模型组血清及腹腔液中的IL-1β、NGF水平升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。与模型组比较,各治疗组血清及腹腔液中NGF水平均降低（P〈0．05）,盆痛灵组、加味盆痛灵组血清中IL-1β水平下降,孕三烯酮组和消炎痛组治疗后血清及腹腔液中IL-1β水平下降（P〈0．05）。结论血清及腹腔液中IL-1β、NGF水平的改变与子宫内膜异位症疼痛的发生有关,加味盆痛灵可能通过降低IL-1β、NGF的水平,达到治疗子宫内膜异位症疼痛的目的。     

盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠镇痛作用机制的研究

目的?基于神经生长因子（NGF）调控p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路探讨盆痛灵方对子宫内膜异位症（EMs）模型大鼠的镇痛机制。方法?采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs疼痛模型，将模型大鼠按随机数字表法分为鞘内注射4组[对照组、NGF诱导剂组（NGF组）、NGF抑制剂组（鞘K组）、p38MAPK抑制剂组（鞘S组）]，每组15只；直肠给药5组（模型组、盆痛灵方低、中、高剂量组、西药组），每组15只；另设假手术组15只。采用机械刺痛法观察鞘内注射组的痛阈值变化，免疫组化染色法检测鞘内干预后模型大鼠内异灶NGF、磷酸化p38（p-p38）、瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ（TRPV1）蛋白表达，并用蛋白免疫印迹（Western Blot）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测鞘内干预后内异灶及背根神经节（DRG）中NGF、p-p38、TRPV1蛋白及基因表达水平的变化以及盆痛灵方灌肠干预后p-p38蛋白及基因表达。结果?鞘内注射干预后，与对照组比较，NGF组痛阈值下降，鞘K、鞘S组痛阈值上升（P<0.01）；内异灶及DRG内NGF诱导剂组NGF、p38、TRPV1mRNA及蛋白表达均升高，内异灶内鞘K、鞘S组NGFmRNA及蛋白表达均下降（P<0.01），p-p38、TRPV1蛋白表达下降（P<0.01）；DRG内鞘K组NGF、p38mRNA及蛋白表达下降，鞘S组p38、TRPV1mRNA及蛋白表达下降（P<0.05）；及NGF、p-p38蛋白表达下降（P<0.01）。直肠给药干预后，与假手术组比较，模型组中p38 mRNA及蛋白表达增加；与模型组比较，西药组及盆痛灵高剂量组p38 mRNA及蛋白表达均降低（P<0.01），盆痛灵低、中剂量组p-p38蛋白表达下降（P<0.01）。结论?NGF-p38MAPK信号通路的激活降调TRPV1基因和蛋白的表达参与EMs疼痛的发生，盆痛灵方通过调控NGF-p38MAPK-TRPV1信号通路逆转EMs疼痛。     

盆痛灵灌肠对子宫内膜异位症模型大鼠疼痛行为的影响及其机理探讨

目的:观察盆痛灵直肠给药对子宫内膜异位症模型大鼠疼痛行为的影响作用及其作用机理探讨。方法:采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵高、中、低剂量组。另设假手术组(仅切除单侧结扎段子宫)。采用VonFrey2390电子测痛仪测量大鼠机械压力痛阈,观察给药前后不同时间点大鼠痛阈值的变化以及内异灶体积的变化,ELISA检测EMs大鼠血清及腹腔液中NGF、IL-1β和TNF-α的浓度,评价盆痛灵方的镇痛作用及其机理。结果:模型组大鼠内异灶体积随着时间变化而增大,而大鼠的机械痛阈值则降低。盆痛灵方直肠给药后,盆痛灵各组内异灶体积均有所缩小,同时盆痛灵各组大鼠机械痛阈值上升。ELISA结果显示,与假手术组比较,模型组血清和腹腔液中的NGF、IL-1β和TNF-α浓度均升高。与模型组比较,西药和盆痛灵高、中剂量组血清及腹腔液中IL-1β、NGF和TNF-α水平均降低,盆痛灵低剂量组血清中IL-1β降低。结论:内异症SD大鼠体内自体移植的内异灶体积与大鼠机械疼痛阈值成负相关,盆痛灵直肠给药可缩小大鼠内异灶体积,提高SD大鼠的机械痛阈值,且盆痛灵剂量浓度...     

盆痛灵直肠给药治疗子宫内膜异位症盆腔痛的临床观察

目的观察“盆痛灵”方治疗子宫内膜异位症(简称EM)盆腔痛的临床疗效及其对血栓烷B(2TXB2)、6-酮-前列腺素F1(α6-Keto-PGF1α)的影响。方法采用盆痛灵方水煎剂直肠给药治疗EM盆腔痛患者30例,观察用药前后临床症状的改善情况,并在治疗前后采用放免法测定血浆TXB2、6-Keto-PGF1α的浓度。结果近期治愈3例,显效16例,有效9例,无效2例,总有效率为90%,且治疗前经期血浆TXB2、6-Keto-PGF1α水平均增高,中药盆痛灵可显著降低两者水平。结论盆痛灵有明显的镇痛作用,其作用机理可能与改善TXB2、6-Keto-PGF1α水平,协调子宫肌层的活动有关。     

加味九分散对痛风性关节炎大鼠TRPV1表达的影响

目的 通过观察加味九分散对痛风性关节炎大鼠瞬时电位感受器香草酸受体1(TRPV1)表达的影响,探讨加味九分散的止痛机制.方法 将SD雄性大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、扶他林乳胶剂组、加味九分散外敷组.模型组、扶他林乳胶剂组和加味九分散外敷组造痛风性关节炎模型.扶他林乳胶剂组合加味九分散组给药48 h后取大鼠关节...     

基于PGE2/PKC/TRPV1信号通路研究热敏灸对膝骨性关节炎兔镇痛效应机制

目的 观察热敏灸对膝骨性关节炎(KOA)兔血清PGE2、背根神经节PKC、穴区皮肤TRPV1的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法 36只雄性普通级新西兰兔随机分为空白组(6只)、假手术组(6只)、造模组(24只)。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15d,假手术组关节腔内注射等量的0.9%NaCl溶液。造模成功后,造模组随机分成模型组(6只),艾灸组(18只),艾灸组艾灸“犊鼻”穴,每日1次,每次40 min,共7 d,根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组(10只)和非热敏灸组(7只),空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,肉眼、光镜下观察膝关节滑膜形态学变化;ELISA法检测血清PGE2表达;Real-time PCR法检测各组兔背根神经节PKC mRNA、穴区皮肤TRPV1 mRNA的含量。结果 (1)干预后模型组兔膝关节腔内有大量积液,滑膜增生肥厚,伴有血管增生及大量炎症细胞成团聚集;热敏灸及非热敏灸组关节腔内积液减少,滑膜异常增生改善。(2)与空白组比较,模型组血清PGE2含量明显上升(P<0.01);与模型组比较,热敏灸组、非热敏灸组血清PGE2含量下...     

连夏宁心方对室性心律失常模型大鼠心肌组织CaM、CaMKⅡ、RyR2蛋白表达的影响

目的 探讨连夏宁心方防治室性心律失常(VA)的可能作用机制.方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、稳心颗粒组及连夏宁心方低、中、高剂量组,每组8只.稳心颗粒组给予稳心颗粒1.75 g/(kg· d)灌胃,连夏宁心方低、中、高剂量组分别给予连夏宁心方0.68、1.35、2.71 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组...     

基于TRPV1/AMPK通路探讨石榴皮总多酚对亚油酸诱导的人皮脂腺细胞脂质合成的影响

目的 探讨石榴皮总多酚（pomegranate peel polyphenols,PPPs）对亚油酸（linoleic acid,LA）诱导的永生化人皮脂腺SZ95细胞脂质合成的影响及其作用机制。方法 体外培养SZ95细胞,运用LA诱导构建脂质过度合成模型,采用CCK-8法检测不同质量浓度PPPs对SZ95细胞活力的影响;尼罗红染色检测细胞脂质合成情况;qRT-PCR检测瞬时受体电位香草酸亚型1（transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）mRNA表达;Western blotting检测TRPV1、AMPK、磷酸化AMPK（phosphorylated AMPK,p-AMPK）蛋白表达。采用siRNA进行细胞转染,观察沉默TRPV1后PPPs对LA诱导的SZ95细胞脂质合成及TRPV1/AMPK通路的影响。结果 1.25、2.5、5μg/mL的PPPs对SZ95细胞活性无明显影响,且均可显著抑制LA诱导的脂质过度合成（P<0.01）,其中5 μg/mL PPPs的抑制效应最为明显。与对照组比较,模型组细胞脂质合成明显增加（P<0.01）,TRPV1、AMPK mRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）;PPPs对无LA诱导的SZ95细胞基础脂质合成无明显影响,TRPV1、AMPK mRNA表达水平升高（P<0.01）,但TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平差异无统计学意义。与模型组比较,PPPs明显减少LA诱导下的SZ95细胞脂质合成（P<0.01）,明显提高TRPV1、AMPK mRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。沉默TRPV1显著增加了LA诱导下的SZ95细胞脂质合成（P<0.01）,并显著减弱了PPPs对SZ95细胞脂质过度合成的抑制（P<0.01）,显著降低其TRPV1、AMPK的mRNA及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。结论 PPPs可有效抑制LA诱导的SZ95细胞脂质合成,其作用机制可能与TRPV1/AMPK通路有关。     

肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca2+变化及TRPA1和TRPM8 mRNA表达的影响

目的:观察肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca~(2+)浓度变化,并探讨其对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和M8(TRPM8)mRNA表达的影响。方法:取大鼠原代背根节神经细胞置于0℃冷应激状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同时长冷应激状态下细胞的活性;加入肉桂醛,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内外Ca~(2+)分布的变化;另以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测其TRPA1,TRPM8 mRNA的表达。结果:不同时长的冷应激状态下,细胞存活度无明显差异;冷应激可降低背根神经节(DRG)神经细胞胞浆内Ca~(2+)浓度(P0.05),一定量的肉桂醛则能使Ca~(2+)浓度显著升高(P0.01)。Real-time PCR检测显示,长时间冷应激TRPA1 mRNA表达上调(P0.05);长时间冷应激TRPM8 mRNA表达明显要高于短时冷应激(P0.05);适当浓度的肉桂醛使冷应激大鼠DRG神经细胞TRPA1 mRNA表达升高(P0.05,P0.01),对TRPM8 mRNA的影响尚不明显。结论:冷应激能影响TRPA1,TRPM8 mRNA的表达,降低胞浆内Ca~(2+)浓度,作用机制可能为肉桂醛通过活化TRPA1通道,升高细胞浆内Ca~(2+)浓度。     

肠吉泰对IBS内脏高敏感大鼠背根神经节5-HT2AR、5-HT7R和TRPV1表达的影响

目的研究肠吉泰对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)内脏敏感大鼠脊髓背根神经节5-羟色胺2A受体(5-HT_(2A) receptor,5-HT_(2A)R)、5-羟色胺7受体(5-HT_7receptor,5-HT_7R)和瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid type-1,TRPV1)表达的影响。方法 60只新生SD大鼠随机分成空白对照组、模型对照组、阳性药对照组、肠吉泰低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。采用Al-chaer直肠醋酸刺激法建立内脏高敏感性大鼠模型。造模期间阳性药对照组大鼠醋酸刺激前半小时给予capsazepine(TRPV1阻断剂)腹腔注射(2μg/g),其余各组(除空白对照组外)均给予相同体积的溶剂腹腔注射。造模结束4周后,肠吉泰各治疗组每日分别给予低剂量(2.5 g/kg)、中剂量(5 g/kg)和高剂量(10 g/kg)中药灌胃,空白对照组、模型对照组和阳性药对照组每日分别给予等量去离子水灌胃。治疗4周后,采用结直肠气囊扩张法记录大鼠的腹部回缩反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)计分来评估各组大鼠的内脏敏感性。并用免疫组化法检测IBS内脏敏感大鼠脊髓背根神经节5-HT_(2A)R、5-HT_7R和TRPV1的表达。结果当气囊压力在40、60、80 mm Hg时,模型对照组AWR评分显著高于空白对照组(P0.01)。当气囊压力在40、60 mm Hg时,肠吉泰各剂量治疗组AWR评分较模型对照组明显降低(P0.05,P0.01);模型对照组大鼠脊髓背根神经节5-HT_(2A)R、5-HT_7R和TRPV1表达较空白对照组明显增高(P0.01);与模型对照组比较,肠吉泰各剂量组背根神经节的5-HT_(2A)R、5-HT_7R和TRPV1表达明显下降(P0.01);肠吉泰高剂量组脊髓背根神经节的5-HT_(2A)R、5-HT_7R和TRPV1表达,与空白对照组无明显差异(P0.05)。结论肠吉泰能降低IBS内脏敏感性,其机制可能与降低脊髓背根神经节5-HT_(2A)R、5-HT_7R和TRPV1表达有关。     

电针预处理对急性心肌缺血大鼠心肌瞬时受体电位亚型1/降钙素基因相关肽信号及核因子-κB亚型p65蛋白表达的影响

目的:观察电针预处理对急性心肌缺血(AMI)损伤大鼠心肌组织瞬时受体电位亚型1(TRPV1)/降钙素基因相关肽(CGRP)信号及核因子-κB亚型p65(NF-κB p65)蛋白表达的影响,探讨电针预处理抗A M I损伤的可能机制.方法:SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和电针组,每组15只.模型组和电针组采用冠状...