海马神经元癫癎样放电模型中神经元凋亡的研究

目的通过检测体外海马神经元癫癎样放电后的细胞凋亡,旨在探讨颞叶癫癎病人海马神经元丢失的机制.方法首先制备Sombati神经元癫癎样放电模型,然后采用Tunel标记、荧光染色以及流式细胞技术对模型中的凋亡神经元作了定性和定量检祆测.结果发现神经元癫癎样放电后出现细胞凋亡,且随着放电时间的延长,凋亡细胞增加.结论反复癫癎样放电导致神经元凋亡,其发生可能与癫癎样放电的兴奋性毒性有关.     

海马神经元癫样放电模型中神经元凋亡的研究

目的通过检测体外海马神经元癫(?)样放电后的细胞凋亡,旨在探讨颞叶癫(?)病人海马神经元丢失的机制。方法 首先制备Sombati神经元癫(?)样放电模型,然后采用Tunel标记、荧光染色以及流式细胞技术对模型中的凋亡神经元作了定性和定量检测。结果 发现神经元癫(?)样放电后出现细胞凋亡,且随着放电时间的延长,凋亡细胞增加。结论 反复癫(?)样放电导致神经元凋亡,其发生可能与癫(?)样放电的兴奋性毒性有关。     

海马神经元激活物致疒间大鼠大脑皮质和海马γ-氨基丁酸受体的表达

目的 观察大鼠海马神经元在激活物作用下γ-氨基丁酸（GABA。）受体的表达,进一步探讨癫痫发病机制。方法 将大鼠海马神经尢被戊四氮（PTZ）作用后的激活物（实验组）及无血清培养基（对照组）注入大鼠侧脑室后观察其行为、脑电图（EEG）及脑组织GABA,受体表达的变化。结果 实验组大鼠注射后15～30min出现Ⅱ～Ⅲ级惊厥反应,EEG呈短程中高幅尖波、尖慢复合波;对照组的行为及EEG未见异常;各时点实验组大鼠脑组织GABA、免疫反应阳性细胞表达明显低于对照组（均P〈0．05）,对照组GABA,免疫反应阳性细胞广泛分布于大脑皮质、海马回、齿状回。结论 海马神经元激活物具有明显致痫作用,其致痫效应与GABAA受体含量下降有关。     

慢性癫癎模型海马神经元内钙稳态和钙动力学的长期变化

目的 探讨海马神经元内长期钙离子([Ca2+]i)和动力学变化在癫疴发生机制中的作用.方法 建立氯化锂-匹罗卡品慢性癫癎模型,于致痫后6 h和1、3、7、14、30 d不同时间点应用激光共聚焦显微镜观察离体海马神经元内[Ca2+]i的变化以及谷氨酸负荷后神经元内[Ca2+]i恢复速度的变化.结果 正常对照组大鼠急性分离海马神经元[Ca2+]i为(95.4±22.1)nmol/L,致癎后急剧升高至(867.6±35.2)nmol/L,第7天降低(292.8±18.3)mnol/L,此后持续在此水平,30 d后降至(220.8±17.6)nmol/L,仍高于对照组(t=12.55,P<0.01);正常对照组大鼠92%的海马神经元内[Ca2+]i处于正常范围内(25～150 nmol/L),致癎后6 h,所有神经元[Ca2+]i均有升高,并且85%的神经元高于500 nmol/L,致癎7、14、30 d后分别有75%、60%、52%的神经元[Ca2+]i高于正常值,但高于500 nmol/L者逐渐减少;经接触5 μmol/L谷氨酸人工脑脊液2 min后,对照组神经元可在(9.5±3.4)min内恢复至基线水平,而急性期、潜伏期、慢性期的癫癎神经元均存在明显延迟(t=5.08、4.56、4.21,P<0.01).结论 氯化锂-匹罗卡品致疴后可造成海马神经元内长期的[Ca2+]i和钙动力学改变,该种长期可塑性改变在慢性癫癎模型的诱发和维持中起着重要作用.     

c/000枸杞多糖诱导大鼠MSCs分化神经元样细胞的实验研究

背景：近年研究表明，枸杞多糖具有很强的抗氧化作用，可以清除超氧阴离子（O2-•）和羟自由基（•OH），具备诱导剂的基本条件，但将其用作诱导剂的报道甚少。 目的：以枸杞多糖作为诱导剂，探讨其体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2008-09/12在辽宁医学院解剖实验室完成。 材料：SD大鼠8只，由锦州医学院动物中心提供。枸杞多糖为宁夏杞瑞康有限公司产品。 方法：无菌条件下取出大鼠股骨，利用贴壁筛选法体外分离培养骨髓间充质干细胞。取生长状态良好的第2代细胞进行诱导实验，将1×107 L-1细胞悬液1 mL接种于预先放置盖玻片的24孔板内，每孔加入1 mL预诱导液(含枸杞多糖1 g/L、体积分数为15%胎牛血清的DMEM完全培养基)，置37 ℃、体积分数为5%的CO2孵箱内继续培养，24 h后更换诱导液(含1 g/L枸杞多糖的无血清DMEM培养基)，于上述CO2孵箱内诱导。并设立添加全反式维甲酸的阳性对照组，以及空白对照组。 主要观察指标：诱导过程中镜下动态观察细胞形态学变化。诱导第8，24 h采用免疫组织化学技术检测细胞内nestin，NF，GFAP的表达。 结果：骨髓间充质干细胞原代培养24 h大部分贴壁生长，第3天进入指数生长期，细胞增殖加速，7~9 d接近汇合。传代细胞较原代细胞生长加快，第3代细胞纯度较高且增殖活跃，传至12代细胞仍然存活。预诱导后骨髓间充质干细胞形态无明显变化，诱导4 h后细胞变凸，从胞体伸出突起；24 h后细胞突起明显，突起相互连接呈网状，表现出典型的神经细胞形态。免疫组织化学检测结果显示，诱导后细胞浆内nestin，NF均呈阳性表达，GFAP呈阴性。 结论：在体外枸杞多糖能够成功诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞。     

枸杞多糖对帕金森病小鼠的抗氧化作用和神经保护效应北大核心CSCD

目的研究枸杞多糖(Lycium barum polysaccharide,LBP)对帕金森病(Parkinson disease,PD)小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元的影响。方法采用MPTP制备PD小鼠模型,经左旋多巴(Levodopa,LDOPA)和LBP处理后,用爬杆实验评价各组小鼠的行为表现,通过酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色观察黑质致密部DA能神经元存活情况,并用生化技术对中脑组织超氧化物歧化酶(super oxidase dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活力及丙二醛(malonaldehyde, MDA)含量进行检测。结果 MPTP制备的PD模型小鼠爬杆实验得分远低于对照组(3.53±1.32 vs. 7.61±1.53,P<0.01),黑质致密部TH阳性神经元数量较对照组有大幅减少(340±31 vs. 1204±112,P<0.01),中脑组织SOD、GSH-Px和CAT酶活力也显著低于对照组,而MDA含量则显著高于对照组(P<0.01)。经过L-DOPA处理的小鼠爬杆实验得分较MPTP组有大幅改善(6.87±1.51 vs. 3.53±1.32,P<0.01),但TH阳性神经元数量仍较对照组有显著下降(295±63 vs. 1204±112,P<0.01),中脑SOD、GSH-Px和CAT酶活力甚至低于MPTP组小鼠,而MDA含量则高于MPTP组(P<0.05)。经过50 mg/kg和100 mg/kg LBP处理的小鼠爬杆实验得分均高于MPTP组(5.07±1.28 vs. 3.53±1.32;5.20±1.37 vs. 3.53±1.32,P<0.01),而低于对照组和L-DOPA组(P<0.05);TH阳性神经元数量也较MPTP组(655±78 vs. 340±31;704±38 vs. 340±31,P<0.01)或L-DOPA组(655±78 vs. 295±63;704±38 vs. 295±63,P<0.01)明显增多,但仍少于对照组(P<0.01);SOD、GSH-Px和CAT酶活力均较MPTP组或L-DOPA组有显著升高,MDA含量则较上述两组有显著下降(P<0.01)。结论 LBP能有效降低PD小鼠中脑氧化应激损伤,对黑质致密部DA能神经元起到保护作用。     

间充质干细胞外泌体对海马神经元氧化应激的调控作用

目的 探讨间充质干细胞外泌体(Mesenchymal stem cell derived-exosomes,MSC-Exo)对海马神经元氧化应激的作用。方法 首先体外培养原代小鼠海马神经元,用H₂O₂刺激建立氧化应激模型,细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8)筛选最佳H₂O₂水平并检测不同水平MSC-Exo对细胞活力的作用,试剂盒检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)的活性,酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测DNA氧化损伤分子8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)的表达水平,然后免疫荧光和免疫印迹检测应激和损伤分子一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、高迁移率族蛋白B1(High mobility group box 1,HMGB1)的表达水平。结果 CCK8细胞活力实验显示,10 μg/mL及以上水平的MSC-Exo对海马神经元氧化损伤具有明显的保护作用; 与对照组比较,H₂O₂组SOD的活性显著下降,而在MSC-Exo+H₂O₂组有所提高,趋于正常; 与对照组比较,H₂O₂作用后iNOS,HMGB1,8-OHdG等分子的表达水平显著上调(P<0.01),MSC-Exo作用于模型后与H₂O₂组比较,这些分子的表达水平显著下调(P<0.01)。结论 MSC-Exo作用于H₂O₂诱导的海马神经元氧化应激模型后能够增加SOD的活性,抑制海马神经元iNOS,HMGB1,8-OHdG等分子的表达,表明MSC-Exo对海马神经元氧化应激有一定的调控作用。     

颞叶癫癇海马神经元凋亡机制的研究进展

颞叶癫痫的海马病理变化分子机制一直是神经学科研究的重点。在发现海马致痫灶中存在天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspases-3）后，学者们推测凋亡机制可能对颞叶癫痫海马病理的形成具有一定作用。近年来，许多学者建立了相应的实验模型或活体标本，以凋亡基础理论为依据，从不同角度对颞叶癫痫中海马神经元损伤的凋亡机制进行研究，相继发现了凋亡级联效应途径中其他分子的显著表达，包括死亡受体、凋亡效应酶、凋亡调节蛋白等，甚至在基因水平找到了凋亡存在的证据，同时也引发了抗凋亡的治疗研究，为颞叶癫痫海马神经元损伤分子机制的进一步研究及颞叶癫痫的药物治疗研究提供了理论基础。本文对此进行综述。     

枸杞多糖对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其抗氧化应激的机制研究

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对缺血再灌脑损伤小鼠的保护作用及其可能的机制。方法通过颈总动脉栓线造成大脑中动脉缺血,缺血2 h后将栓线拔出以实现大脑中动脉血流再灌注,形成小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)模型,观察LBP(25 mg/kg,50 mg/kg和100 mg/kg)对小鼠脑梗死范围,脑含水量,神经症状的影响,采用Westernblot法检测缺血大脑皮质NOX4蛋白的表达,采用DHE染色法检测脑组织中ROS的生成,采用分光光度计检测缺血侧脑组织匀浆SOD活力,GSH-Px活力,及MDA含量。结果 LBP对缺血再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用,能明显降低脑梗死范围和脑含水量。Westernblot结果显示:小鼠缺血再灌后,缺血侧大脑皮质NOX4蛋白水平明显增高,LBP能显著降低NOX4蛋白水平。DHE染色显示,LBP能显著降低缺血再灌后ROS的生成。LBP能升高SOD和GSH-Px活力,降低MDA含量。结论 LBP对缺血再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用,该作用可能与其抑制脑缺血再灌注引起的氧化应激损伤有关。     

刺五加多糖对H2O2诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的研究刺五加多糖（ASPS）对H2O2诱导的海马神经元凋亡的影响及其机制。方法采用H2O2诱导大鼠海马神经元凋亡。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法检测细胞凋亡率、免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达、逆转录PCR法检测caspase-3 mRNA的表达。结果H2O2作用后,海马神经元凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达水平均显著增高（P〈0.05）;给予ASPS干预后,均显著下降（P〈0.05）;而且,随ASPS剂量增加,作用效果显著增强（P〈0.05）。结论ASPS具有抑制氧化应激损伤诱导神经细胞凋亡作用,其机制与下调caspase-3 mRNA的表达有关。     

红藻氨酸诱发大鼠复杂部分性癫癎发作的海马神经元和星形胶质细胞反应及相互关系

目的:观察大鼠癫发作后海马内神经元与星形胶质细胞反应变化的时空效应及相互关系。方法:以红藻氨酸诱发的大鼠复杂部分性癫发作为模型,利用免疫组织化学法,在原位显示癫发作后153、0、60、901、20、180 min 6个时间点海马神经元Fos蛋白及星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化、相互关系及分布规律。结果:致后15 min海马内GFAP表达开始增多,60 min达高峰。Fos阳性神经元在癫诱发后30 min开始出现,120 min达高峰。海马内GFAP阳性细胞与Fos阳性神经元分布规律基本一致。结论:在癫病理状态下,海马内星形胶质细胞的反应略早于神经元,两者之间分布呈平行关系,它们之间可能存在着复杂的信息通讯,以复合体的形式共同对各种病理生理刺激作出反应。     

神经生长因子对严重烫伤大鼠海马神经元的保护作用

观察大鼠严重烫伤时海马神经元的病理变化,探讨ＮＧＦ对烫伤大鼠海马神经元的保护作用及其可能机制。ＳＤ大鼠侧脑室埋管,分成假烫组、烫伤组、烫伤＋ ＮＧＦ小剂量组、烫伤＋ ＮＧＦ大剂量组;大鼠在麻醉下造成３０％ ＴＢＳＡⅢ度烫伤,伤后３ ｄ,测定脑组织含水量,海马乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和一氧化氮（ＮＯ）的含量;部分脑组织做病理切片,尼氏染色。烫伤后７２ ｈ,脑组织含水量增加,海马出现明显的病理变化,尼氏小体减少或消失,胞体肿胀;ＬＤＨ和ＮＯ的含量明显增加;给予ＮＧＦ后,能明显改善上述病理变化,并能降低脑组织含水量、海马ＬＤＨ 和ＮＯ的含量。烫伤可引起海马神经元损伤、海马组织ＮＯ含量升高;ＮＧＦ对烫伤后海马神经元的损伤有保护作用,并能降低ＮＯ含量。     

海马硬化型颞叶癫疒间海马组织中P-gp、p53和凋亡探讨

目的探讨海马硬化型颞叶癫疒间患者海马组织中P-gp、p53、凋亡的表达和意义。方法对17例海马硬化型颞叶癫疒间患者的手术标本分别进行免疫组化检查P-gp,p53;原位末端标记检测细胞凋亡;免疫印迹法检测P-gp,p53。结果对照组P-gp主要在血管内皮细胞表达,未见p53阳性细胞,仅有散在凋亡细胞;癫疒间组P-gp分布在血管内皮细胞和胶质细胞,14例有p53阳性细胞,均有凋亡细胞;免疫印迹法P-gp,p53表达较对照组明显增加。结论海马硬化型颞叶癫疒间患者海马组织中有P-gp、凋亡异常表达,p53可能发挥了调节作用。     

刺五加多糖对H2O2损伤的海马神经元表达Fas和Fasl的影响

目的探讨刺五加多糖（ASPS）对氧化应激损伤的海马神经元表达Fas和Fasl的影响,进一步研究ASPS抑制海马神经元凋亡的机制。方法从新生大鼠脑分离海马,其神经元经原代培养后分为阴性对照组、损伤模型组（1mmol/LH2O2）和ASPS干预组（该组按ASPS的干预剂量的不同又分为3个亚组,即终浓度为10、5、2.5μg/ml的3个亚组）。用H2O2建立海马神经元应激损伤模型（阴性对照组除外）。倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;免疫组化法检测其Fas和Fasl蛋白的表达,TUNEL法检测海马神经元凋亡,并计算各组的凋亡率。结果与阴性对照组比较,模型组细胞损伤严重,并高表达Fas和Fasl蛋白（P〈0.05）,神经元凋亡率明显升高（P〈0.01）。与损伤模型组相比,各药物干预组受损伤海马神经元Fas和Fasl蛋白的表达水平和凋亡率均明显降低（P〈0.05）,并表现一定的浓度依赖性。结论 ASPS能减少受损海马神经元细胞中Fas和Fasl蛋白的表达,抑制细胞的凋亡,对受损的海马神经元有明显的保护作用。     

米诺环素对戊四氮致疒间大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨米诺环素对神经元凋亡的保护作用及与剂量的关系。方法采用戊四氮(PTZ)建立的癫疒间大鼠模型,用灌胃法给不同剂量的米诺环素后麻醉大鼠,灌注取脑进行石蜡切片制备及免疫组化检测,采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统进行图像分析,观察大鼠海马区细胞凋亡变化。结果对照组与PTZ组比较,对照组凋亡数目少(P<0.05);MT1组与PTZ组比较,细胞凋亡无差异(P﹥0.05);MT2组与PTZ组比较,MT2组细胞凋亡数少(P<0.05);MT3组与PTZ组比较,MT3组细胞凋亡多(P<0.05)。各干预组之间比较,MT2组细胞凋亡较MT3组、MT1组都少(P<0.05)。结论米诺环素在适当的浓度范围内有神经元保护作用。     

辛醇预处理对红藻氨酸诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察缝隙连接阻断剂辛醇预处理对红藻氨酸(KA)诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 160只雄性SD大鼠随机分为KA组、辛醇组、生理盐水(NS)组和二甲基亚砜(DMSO)组,应用KA右侧杏仁核注射制作癫疒间大鼠模型;制模前30 min辛醇组腹腔注射辛醇溶液;制模后3 h、6 h、12 h、24 h和7 d应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化染色法分别检测各组大鼠海马CA3区TUNEL和GFAP阳性细胞数。结果 KA组制模后6 h海马CA3区有TUNEL阳性细胞表达,并逐渐增多,7 d达高峰;辛醇组制模后在6 h～7 d TUNEL阳性细胞数明显少于KA组(均P<0.01);KA组海马CA3区GFAP阳性细胞数随时间而逐渐增多,各时间点明显多于辛醇组(均P<0.01)。结论辛醇神经保护作用的机制可能与抑制细胞缝隙连接间通讯,切断凋亡信号传播,以减少神经元凋亡有关。     

戊四氮所致慢性癫癎大鼠海马神经元选择性凋亡的研究

目的 :探讨选择性凋亡在戊四氮所致慢性癫疒间形成中的作用。方法 :采用免疫组化及原位末端标记双标技术观察海马γ 氨基丁酸 (GABA)能神经元、谷氨酸 (Glu)能神经元各自凋亡情况。结果 :GABA能神经元凋亡数明显高于Glu能神经元凋亡数 ,两者比较有显著性差异。结论 :在癫形成期间脑内可能通过某种机制引发了细胞程序性死亡过程 ,选择性地引起GABA能神经元凋亡占优势 ,打破了兴奋与抑制性神经递质之间的平衡 ,从而促发癫     

PACAP对谷氨酸引起海马神经元损伤的保护作用

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰＡＣＡＰ）对谷氨酸引起的海马神经元损伤的保护作用及其受体机制。方法海马神经元体外培养７ｄ,给予谷氨酸。结果当谷氨酸是０．１～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ时,随着剂量的增加,神经元的存活率逐渐降低;１０－９ｍｏｌ／Ｌ～１０－１３ｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＣＡＰ,能减轻谷氨酸引起的海马神经元损伤;ＰＡＣＡＰⅠ型受体特异性拮抗剂ＰＡＣＡＰ６－３８能抑制ＰＡＣＡＰ减轻谷氨酸对海马神经元损伤作用。结论ＰＡＣＡＰ具有减轻谷氨酸引起的海马神经元损伤的作用,该作用是由ＰＡＣＡＰⅠ型受体介导的。     

17-β雌二醇对大鼠海马神经元保护作用的实验研究

目的研究17-β雌二醇对大鼠海马神经元树突生长的影响及血清饥饿情况下对神经元存活率的影响。方法体外培养3d的海马神经元通过加入浓度为1nmol/L和2nmol/L的17-雌二醇,统计比较神经元树突的数目和长度;体外培养1d的海马神经元,加入17-雌二醇,培养6～7d后血清饥饿48h后进行NSE染色及MTT检测,检测神经元形态及神经元存活率。结果 17-雌二醇可显著增加存活神经元树突的长度和数量;并能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞减少,增加其存活率。结论 17-β雌二醇对大鼠海马神经元的生长发育及存活具有保护性作用。     

氧化苦参碱对缺血再灌注损伤小鼠原代海马神经元的保护作用及机制研究

目的 探讨氧化苦参碱对缺血再灌注损伤海马神经元的保护作用及其机制。方法 将小鼠原代海马神经元分为正常对照组、缺血再灌注组和氧化苦参碱组。正常对照组海马神经元予以常规培养;缺血再灌注组海马神经元用氧葡萄糖剥夺/再恢复培养模拟缺血再灌注损伤;氧化苦参碱组海马神经元在氧葡萄糖剥夺后再恢复前,予以200μg/m L氧化苦参碱。采用流式细胞仪检测各组海马神经元内的游离钙离子浓度;用Western blot法检测各组海马神经元的Cav1. 2蛋白表达水平;用膜片钳技术检测各组海马神经元的L型钙通道(L-type calcium channel,LTCC)功能。结果 与缺血再灌注组相比,氧化苦参碱组海马神经元的游离钙离子浓度、Cav1. 2蛋白表达量及LTCC功能均明显降低(均P 0. 05);但仍未恢复到正常对照组水平(均P 0. 05)。结论 氧化苦参碱可能通过减少小鼠原代海马神经元的Cav1. 2表达和LTCC功能,降低细胞内游离钙离子的浓度,从而发挥对缺血再灌注损伤神经元的保护作用。