基于Keap1/Nrf2/ARE通路探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用机制

目的 探讨益气养阴活血方通过调控Kelch样ECH关联蛋白1(recombinant Kelch like ECH associated protein 1, Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2, Nrf2)/抗氧化反应原件(antioxidant response element, ARE)信号通路对糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠的肾脏保护作用机制。方法 清洁级雄性SD大鼠50只，适应性喂养1周后，随机分为5组：空白组、模型组、缬沙坦(代文)组、益气养阴活血方等剂量(等剂量)组及高剂量(高剂量)组，每组10只。除空白组外各组均应用高脂高糖喂养，联合单次注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)建立DN大鼠模型。除去造模失败5只，死亡5只，每组剩余8只。造模成功后空白组和模型组灌服生理盐水，中药两组均灌服益气养阴活血方颗粒剂，代文组按8.33mg·kg^-1·d^-1灌胃，6周后留取大鼠24小时尿液、血液和肾脏...     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5～200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2...     

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠Nrf2/ARE通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠Nrf2/ARE通路相关蛋白的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为空白对照组和链脲佐菌素(STZ)组,STZ组大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ,造模1周后,将空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L的大鼠稳定1个月后,随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,并给予相应药物12周。麻醉取大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学方法检测大鼠坐骨神经Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、及谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱,脱髓鞘严重,坐骨神经中Keap1、Nrf2、HO-1和γ-GCS的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,糖络宁低、高剂量组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱和脱髓鞘现象得到改善,其中糖络宁低剂量组Keap1、Nrf2表达增加,糖络宁高剂量组HO-1、γ-GCS表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论糖络宁能够改善DPN大鼠坐骨神经的病理状态,上调Nrf2/ARE信号通路中Keap1、Nrf2、HO-1及γ-GCS的表达,增强机体抗氧化应激的能力。     

熊胆粉通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路产生对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用＊

目的 观察研究熊胆粉（Pulvis Fellis Ursi， PFU）对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用及其可能的机理。方法 取昆明种小鼠50只，随机分为正常组、模型组、PFU低、中、高剂量组（剂量分别为150、300、600 mg·kg^-1，溶于生理盐水），每组10只。正常组和模型组小鼠每天灌胃生理盐水（10 mL·kg^-1），PFU组每天灌胃相应剂量溶液，连续8天。末次给药结束后，模型组以灌胃的方法给予50%乙醇溶液（10 mL·kg^-1），每12 h一次，共6次，末次给予50%乙醇溶液4 h后，处死小鼠并收集血清及肝脏组织。分别用生化试剂盒检测血清中ALT、AST、TG、TC和肝脏组织中GSH、T-SOD和MDA水平；用酶联免疫法检测肝脏组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平；用HE染色法观察肝脏组织显微结构变化情况；用免疫印迹法检测肝组织总Keap1的表达和肝组织核内Nrf2的表达，用免疫印迹和免疫组化法分别检测肝组织总HO-1和GCLC蛋白的表达。结果 PFU能显著下调乙醇所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TG和TC的异常升高，并改善乙醇诱导的肝脏显微结构变化。与肝损伤模型组比较，PFU组小鼠肝组织内MDA水平明显降低，GSH和T-SOD水平则明显增加。进一步研究表明，乙醇能诱导小鼠肝脏内炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的上调，PFU可以剂量依赖性地缓解了上述病变。并且PFU预处理组下调了Nrf2的抑制因子Keap1的表达，从而促进了Nrf2蛋白的入核并上调了乙醇抑制的下游蛋白HO-1和GCLC的表达，从而发挥肝保护的作用。结论 熊胆粉对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预保护作用，其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路，恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关。     

基于Keap1/Nrf2信号通路探讨中药干预肾纤维化研究进展

<正>慢性肾脏病(CKD)是慢性进行性且严重危害人类生命健康的常见病,据统计全球CKD患病率约为13.4%^[1],根据横断面调查中国患者CKD患病率为10.8%^[2],且有日益增高趋势。肾纤维化是进展至终末期肾脏病主要的病理过程,其发病机制错综复杂,临床治疗上大多用RAAS系统抑制剂以改善症状和延缓 CKD发展,治疗方案仍具有局限性。中药具有相对安全性高、多途径、多靶点的优势特点,单味中药及中药复方有效成分在防治肾纤维化方面具有独特优势,     

雷公藤多苷片对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨雷公藤多苷片对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的保护作用。方法 将42只大鼠随机分为正常组、模型组、缬沙坦(代文组)、雷公藤多苷片组，其中正常组普通喂养，模型组、代文组和雷公藤多苷片组予高脂高糖饮食+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立DN大鼠模型。代文组灌胃给予代文胶囊，雷公藤多苷片组灌胃给予雷公藤多苷片，正常组和模型组灌胃给予生理盐水。6周后收集大鼠尿液，腹主动脉取血后处死取材，检测尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白水平及24 h尿蛋白总量，HE染色观察肾脏病理形态，ELISA法检测血清NF-κB、COX-2水平，Western blot法检测肾组织NF-κB、COX-2蛋白表达，RT-qPCR法检测肾组织NF-κB、COX-2 mRNA表达。结果 与模型组比较，雷公藤多苷片组大鼠24 h尿蛋白定量和血清尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、NF-κB、COX-2水平降低(P<0.01),高密度脂蛋白水平升高(P<0.01);肾小球形态基本正常、系膜细胞增生及炎症细胞浸润减轻；肾组织NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01)。结论 雷公藤...     

杜仲黄酮对糖尿病肾病小鼠Nrf2/HO-1氧化应激信号通路的影响

目的探讨杜仲黄酮对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏氧化应激及其Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法 昆明种小鼠经静脉注射链脲佐菌素诱导糖尿病肾病模型,成功诱导的DN小鼠随机分组为模型对照组、缬沙坦对照组、杜仲黄酮低、高剂量组[80、160 mg/(kg·d)],并以健康昆明小鼠为正常对照。各组小鼠灌胃给药连续60 d,末次给药后收集小鼠血清和肾组织标本用于检测空腹血糖、肾功能指标、氧化应激相关指标和核转录因子E_2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)信号通路蛋白表达。结果与模型组比较,杜仲黄酮给药组空腹血糖有不同程度下降,肾功能指标也明显改善。此外,杜仲黄酮组肾脏组织中超氧化物歧化酶活性升高,而丙二醛下降,Nrf2和HO-1蛋白表达升高(P0.05)。结论杜仲黄酮对糖尿病肾病小鼠具有降低空腹血糖和改善肾功能作用,其作用机制可能与其能通过调节Nrf2/HO-1信号通路,进而改善肾脏组织氧化应激状态有关。     

基于Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路探讨泰山磐石散对流产大鼠子宫蜕膜的影响

目的 探讨泰山磐石散对流产大鼠子宫蜕膜组织Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将18只SPF级受孕后的SD大鼠分成空白对照组、模型组和治疗组，每组各6只。模型组和治疗组于妊娠第6～8天予皮下注射溴隐亭溶液建立流产模型；妊娠第1～11天，治疗组予泰山磐石散药液灌胃，空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。于妊娠第12天取子宫。观察3组大鼠死胎个数及胚胎总数，并计算出胚胎吸收率；HE染色法观察大鼠母胎界面蜕膜组织形态学变化，RT-PCR和免疫组化法分别检测各组大鼠母胎界面蜕膜组织中Keap1、Nrf2和HO-1基因水平和蛋白表达。结果 与空白对照组比较，模型组大鼠胚胎吸收率明显提高（P<0.01），蜕膜组织中Keap1基因水平及蛋白表达明显提高（P<0.05,P<0.01）,Nrf2和HO-1基因水平及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠蜕膜组织中Keap1基因水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1基因水平明显提高（P<0.01）,HO-1蛋白表达明显提高（P<...     

芪精益肾汤对糖尿病肾病大鼠Nrf2/HO-1信号通路的作用及机制研究

目的?探讨芪精益肾汤（QJYSD）是否通过调节核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路减轻糖尿病肾病（DN）大鼠氧化应激损伤，从而发挥保护肾功能、延缓肾纤维化进程的作用。方法?采用高脂饮食联合小剂量一次性注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、模型组、QJYSD低、中、高剂量组[5.76、11.52、23.04 g/（kg·d）]和缬沙坦组[30 mg/（kg·d）]，每组8只。灌胃12周后，记录各组大鼠一般情况，测空腹血糖（FBG），并收集尿液、血液以及肾组织进行24h尿总蛋白（24h UPro）、糖化血清蛋白（GSP）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、组织病理学（HE染色、Masson染色）、氧化应激损伤指标[超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量]的检测；采用Western Blot法检测肾组织Nrf2、HO-1、FN等蛋白表达水平，免疫组化法检测FN蛋白沉积。结果?与正常对照组比较，模型组大鼠体重减轻，饮食量以及饮水量增多（P<0.01）；肾脏指数（RI）、24 h UPro、FBG、GSP、SCr、BUN水平升高（P<0.01）；肾组织中肾小球体积增大、系膜区增生，肾间质炎性细胞浸润，胶原容积比升高（P<0.01）；血清MDA含量显著升高，SOD活性显著降低（P<0.01）；肾组织中总Nrf2、HO-1、细胞核Nrf2、FN蛋白表达水平升高，且FN蛋白沉积显著增加（P<0.01）。与模型组比较，QJYSD各剂量组与缬沙坦组大鼠饮食量以及饮水量减少（P<0.05，P<0.01）；RI、24h UPro、FBG、GSP、SCr、BUN水平一定程度下降（P<0.05，P<0.01）；肾组织中系膜区增生程度以及炎性细胞浸润减少，胶原容积比下降（P<0.05，P<0.01）；血清MDA含量减少、SOD活性增加（P<0.05，P<0.01）；肾组织中总Nrf2、HO-1、细胞核Nrf2、FN蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01），且FN蛋白沉积减少（P<0.05，P<0.01）。与缬沙坦组比较，QJYSD高剂量组DN大鼠FBG、GSP水平降低（P<0.05），对肾组织HO-1、细胞核Nrf2水平降低，FN水平上升（P<0.05）。结论?QJYSD可以通过促进DN大鼠肾组织Nrf2/HO-1信号通路活化，增强机体抗氧化应激能力，从而减轻肾损伤，改善肾组织结构及功能，延缓肾纤维化进程。     

基于Nrf2/HMOX-1铁死亡信号通路探讨番泻叶苷A治疗糖尿病肾病的机制

目的:探究番泻叶苷A对糖尿病肾病铁死亡的作用机制.方法:6周龄雄性C57BL/6J小鼠分为正常对照组和造模组.造模成功小鼠分为番泻叶苷A(SA)组和模型组,各10只.Western Blot法检测Nrf2、HMOX-1、GPX4的蛋白变化情况;GSH和MDA试剂盒检测氧化应激水平;DAB染色法检测PTGS2阳性细胞表达...     

雷公藤多苷通过NLRP3/caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路对糖尿病肾病大鼠肾损伤的影响

探讨雷公藤多苷(multi-glycosides of Tripterygium wilfordii,GTW)通过Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)/消皮素D(GSDMD)细胞焦亡通路改善糖尿病肾病(diabetic kidney di-sease, DKD)大鼠肾损伤的作用和机制。将42只雄性SD大鼠随机分为正常组8只、造模组34只。造模组予以高糖高脂饮食及一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ),诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦(代文)组、雷公藤多苷(GTW)组。正常组及模型组灌服生理盐水，治疗组分别予以代文和GTW连续灌胃6周后，生化检测各组大鼠血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, Scr)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、血清白蛋白(albumin, ALB)及24 h尿蛋白定量(24 hours urinary ...     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路的天然产物在神经保护方面的研究进展

阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化等神经退行性疾病的病理表现为异常蛋白质的聚集和积累、小胶质细胞激活和线粒体功能障碍等,最终导致神经元结构或功能逐渐丧失,并随着时间的推移而恶化,这些病理过程与活性氧（ROS）的产生有关,ROS会引起氧化应激并破坏蛋白质、脂质和DNA,引发细胞和组织损伤。Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件（ARE）信号通路是维持机体氧化还原平衡、防御氧化应激损伤的主要机制,Nrf2通过与细胞质中Keap1的解离和核转移,激活ARE相关的一系列抗氧化基因的表达,以保护机体免受氧化损伤,因此Keap1/Nrf2/ARE信号通路激活剂的发现与研究对神经退行性疾病的防治具有重要意义。天然产物因有显著的生物活性、不良反应小等特点,是新药研发的宝库。研究表明,多种天然产物能够激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路,发挥神经保护作用。根据天然产物的结构特点,可分为黄酮类、萜类及挥发油类、多酚类和苯丙素类等。该文概述了Keap1/Nrf2/ARE信号通路调节疾病的内在机制,并总结了基于该信号通路的天然产物在神经保护方面的研究进...     

雷公藤内酯三醇通过Nrf2/Keap1信号通路抑制氧化应激和炎症减轻雷公藤甲素诱导的肝损伤

目的 基于Nrf2/Keap1信号通路探讨雷公藤内酯三醇对雷公藤甲素诱导小鼠肝损伤模型的肝脏氧化应激和炎症的影响。方法 将SPF级Balb/c雄性小鼠随机分空白对照组、雷公藤甲素组及雷公藤甲素+雷公藤内酯三醇组。雷公藤内酯三醇(28 mg·kg^-1)灌胃预处理7 d，最后1次灌胃后，单次腹腔注射雷公藤甲素(1 mg·kg^-1)复制小鼠肝损伤模型。检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平并使用苏木素-伊红(HE)综合评估小鼠的肝损伤程度；试剂盒检测小鼠肝脏中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量，观察肝脏氧化应激状态；采用ELISA试剂盒检测小鼠肝脏中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的水平，评估炎症反应；Western Blot法检测肝脏组织中细胞核因子-红细胞相关因子2(Nrf2)、KELCH样ECH关联蛋白1(KELCH-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素氧合酶(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)的蛋白表达...     

天香丹对冠状动脉微循环障碍模型大鼠心肌组织Nrf2/ARE信号通路的影响

目的 探讨天香丹对冠状动脉微循环障碍的影响及可能作用机制.方法 63只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、尼可地尔组和天香丹低、中、高剂量组,每组9只.除空白对照组外,其余各组大鼠开胸后左心室内注射月桂酸钠建立冠状动脉微循环障碍大鼠模型,假手术组注射生理盐水.造模后天香丹低、中、高剂量组大鼠分别给予天香丹颗粒...     

人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路发挥抗氧化应激作用的研究进展

人参皂苷作为一种从人参属药材中提炼的物质,被视为是人参中的活性成分,因而成为热门的研究目标。而Nrf2/ARE信号通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路,其调控的下游抗氧化基因在抗氧化应激中发挥了重要的作用。就人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路下游多种保护性基因的表达发挥其抗氧化应激的作用进行综述,为今后人参皂苷用于氧化应激的治疗提供科学依据。     

缬沙坦联合雷公藤多苷对2型糖尿病肾病微量蛋白尿的影响

目的 探讨缬沙坦联合雷公藤多苷对2型糖尿病肾病微量蛋白尿的影响.方法 依据300 mg/d＞微量白蛋白排泄率(UAER)≥30mg/d,选择68例早期2型糖尿病肾病患者,并随机分为2组:观察组和对照组各34例,在常规降糖等治疗的基础上,对照组单用雷公藤多苷,观察组给予缬沙坦联合雷公藤多苷治疗.结果 观察组经治疗后UAER明显下降,与对照组相比存在显著性差异(P＜0.05),两组患者血清肌酐(Crea)和尿素氮(BUN)变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缬沙坦联合雷公藤多苷可有效减少早期2型糖尿病肾病患者的蛋白尿水平.     

中药基于Nrf2信号通路干预糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病发展至一定阶段引起的肾脏微血管病变,最终可导致终末期肾病。氧化应激和炎症反应是其重要发病机制,但目前尚缺乏较为有效的干预手段。核因子 E2 相关因子 2（nuclear factorerythroid 2-related factor 2,Nrf2）作为一种调节氧化应激的关键转录因子,在DKD发病过程中发挥重要作用。中药复方如冠心丹参方、糖肾安、黄芪汤等及中药提取物如姜黄素、白藜芦醇、白皮杉醇、丹皮酚、丹酚酸B、黄芩苷、五味子醇提液、木犀草素等可调控Nrf2及其下游因子表达,通过抗氧化应激以及抑制炎症反应,减轻肾脏纤维化等损害,改善DKD。本文对近年来中医药基于Nrf2信号通路干预DKD的研究进展进行综述,以期为中医药通过调控Nrf2信号治疗DKD的进一步研究提供理论依据和思路。     

雷公藤多苷对糖尿病肾病模型肾小球损伤的影响

目的:观察雷公藤多苷(multi-glycoside of Tripterygium wilfordii,GTW)对糖尿病肾病模型肾小球损伤的改善效果.方法:运用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病肾病模型,以GTW干预,并设立正常、安慰剂以及贝那普利对照组.比较体重、尿微量白蛋白(urine albumin,UAlb)、血糖(blood glucose,BG)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)以及肾小球形态(细胞总数、细胞外基质)的变化,并检测肾小球中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),Ⅰ型胶原的表达水平.结果:GTW和贝那普利都可以减少模型鼠UAlb;对于模型鼠肾小球硬化性损伤,如系膜细胞增生,α-SMA和Ⅰ型胶原异常表达等,GTW的作用强于贝那普利,肾小球总细胞数GTW组(54.44±2.41),贝那普利组(67.83±4.41),P＜0.05;α-平滑肌肌动蛋白积分GTW组(1.98±0.52),贝那普利组(2.27±0.46),P＜0.05;Ⅰ型胶原积分GTW组(2.11±0.37),贝那普利组(2.88±0.58),P＜0.05.结论:GTW改善DN肾小球损伤的效果包括减少蛋白尿和改善肾小球硬化.