IDH1-R132H突变体通过miR-191-5p/p53轴调控U87MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及凋亡

目的 探索IDH1-R132H突变抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法 (1)以U87 MG细胞为研究对象,采用慢病毒转染构建IDH 1-R132H突变型及野生型细胞株,并诱导为胶质母细胞瘤干细胞,观察细胞球形成情况;流式细胞术检测肿瘤干细胞标志物CD133表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况和PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡情况;qRCP和Western blot法分别检测IDH1、miR-191-5p及p53表达水平。(2)以NOD/SCID荷瘤小鼠作为研究对象,在体内水平考察miR-191-5p、p53表达及肿瘤生长情况。结果IDH1-R132H突变能够在体内外抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖(P<0.01)及分化(P<0.05),诱导其凋亡(P<0.01),下调miR-191-5p表达(体内P<0.05,体外P<0.001),上调p53(P<0.001)及其编码基因TP53(体内P<0.01,体外P<0.000 1)表达。结论 IDH1-R132H突变引起的U87 MG胶质...     

miR-127-3p通过下调靶基因MAPK4抑制神经胶质瘤增殖的机制研究

目的 探讨miR-127-3p在神经胶质瘤中的表达水平差异及生物学作用。方法 用RT-PCR法检测神经胶质瘤患者及健康人群脑脊液中miR-127-3p相对表达水平; 用RT-PCR法检测人神经胶质瘤细胞株和人正常神经胶质细胞中的miR-127-3p相对表达水平; 用瞬时转染法上调神经胶质瘤细胞U251中的miR-127-3p相对表达水平,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2、Mcl-1和bax表达水平; Targetscan等在线靶基因预测软件预测miR-127-3p的靶基因,并采用双荧光素酶报告试验和Western blot验证miR-127-3p与靶基因之间的直接作用关系。结果 神经胶质瘤患者(1.33±0.12)脑脊液中的miR-127-3p相对表达水平低于健康人群(3.62±0.26)(t=5.867,P=0.004); U251(0.59±0.05)、U373(0.96±0.08)、U87(0.77±0.03)、SHG44(1.28±0.05)中miR-127-3p相对表达水平均低于人脑正常胶质细胞株HEB(3.64±0.26)(P<0.01); 转染后24、48、72 h 150组、100组和50组细胞吸光度值均低于对照组(P<0.05),并且随着miR-127-3p mimics转染水平增高,U251细胞吸光度值越低; miR-127-3p mimics转染组(39.3±4.6%)细胞早期凋亡率高于对照组(7.2±0.6%)(P<0.05); miR-127-3p mimics转染组(9.3±2.3%)细胞晚期凋亡率高于对照组(2.4±0.5%)(P<0.05); mimic转染组(0.119±0.008)U251细胞bcl-2蛋白表达水平低于对照组(0.556±0.039),mimic转染组(0.168±0.015)U251细胞bax蛋白表达水平高于对照组(0.086±0.006),mimic转染组(0.144±0.009)U251细胞Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(0.426±0.028)(P均<0.05); 双荧光素酶报告基因实验显示,只有当MAPK4-WT-3' UTR与miR-127-3p mimic共同转染时荧光素酶活性被抑制,这提示miR-127-3p能与MAPK4直接结合,miR-127-3p mimic转染组(0.121±0.003)U251细胞MAPK4蛋白表达水平低于对照组(0.467±0.028)(P<0.05)。结论 miR-127-3p在神经胶质瘤患者脑脊液中呈低表达,上调miR-127-3p能抑制神经胶质瘤U251细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl凋亡相关基因及抑制靶基因MAPK4有关。     

七氟烷促进成年大鼠海马神经干细胞增殖

目的 观察七氟烷对体外培养的成年大鼠海马神经干细胞(NSCs)是否具有增殖作用及可能的分子机制. 方法 常规培养成年NSCs并应用免疫荧光染色巢蛋白进行鉴定.将培养2h的NSCs分别放入含不同浓度(1.3%、1.9%、2.7%、3.3%)七氟烷的密闭容器中,作用2 h后按常规方法 继续培养24h.应用DAPI染色检测NSCs数目的 变化.用Western blot法检测细胞环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(pCREB)水平的变化. 结果与空白对照组比较,1.9%、2.7%、3.3%七氟烷组细胞数升高,而且浓度越大,作用越明显,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot检测发现空白对照组和1.3%、1.9%七氟烷组细胞均表达CREB和pCREB,但1.9%七氟烷组细胞pCREB/CREB水平较高,与空白对照组和1.3%七氟烷组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 七氟烷可促进NSCs的增殖能力,其机制可能与提高了细胞中CREB的磷酸化水平有关.     

NEDD4-1 shRNA对U251胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨NEDD4-1 shRNA对U251胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法构建NEDD4-1 shRNA表达载体。以不同比例质粒和脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜观察细胞存活情况,优化转染效率。转染48 h后采用Western blot、RT-PCR分别检测NEDD4-1蛋白及mRNA的表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT法检测细胞增殖,DAPI荧光染色检测细胞凋亡。结果 NEDD4-1 shRNA表达载体构建成功。脂质体与质粒的最佳转染效率比例为2.5μl∶1μg,48 h转染效率在60%～70%。与对照组比较,转染NEDD4-1 shRNA后,U251胶质瘤细胞NEDD4-1的蛋白及mRNA表达水平均下降(均P<0.05),细胞大多停滞在G0-G1期(均P<0.05),增殖率明显降低(均P<0.05),凋亡率显著增加(均P<0.05)。结论 NEDD4-1作为PTEN泛素连接酶,为胶质瘤基因治疗提供靶点。     

大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响

目的 探讨大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响。方法 将40只成年SD大鼠随机分为假手术组,TBI模型组,乱序miRNA组,miR-122-5p模拟物组。采用Feeney法制备TBI大鼠模型;乱序miRNA组造模24 h后,立体定向注射乱序miRNA 5 μl（20 μmol/L）;miR-122-5p模拟物组造模24 h后,立体定向注射miR-122-5p模拟物组5 μl（20 μmol/L）。qRT-PCR法检测大鼠脑组织miR-122-5p的表达变化;免疫印迹法法检测p53蛋白表达水平;水迷宫法检测学习记忆功能;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况;流式细胞术检测脑细胞线粒体膜电位的变化。结果 与假手术组大鼠比较,模型组和乱序miRNA组大鼠脑组织miR-122-5p表达明显减少,p53蛋白显著上调,脑组织细胞凋亡数明显增多,线粒体膜电位下降显著,水迷宫测试大鼠寻找隐形平台时间显著延长;与模型组大鼠比较,miR-122-5p模拟物组大鼠miR-122-5p表达明显增加,并伴随p53蛋白低表达,细胞凋亡水平下降,神经功能障碍得到明显逆转。结论 颅脑损伤后miR-122-5p的表达下调可能导致p53蛋白的表达升高,促进神经细胞凋亡。     

miR-497-5p靶向叉头蛋白4基因对星形胶质细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-497-5p靶向叉头蛋白4（FOXP4）基因对星形胶质细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blotting检测星形胶质瘤细胞（U87、U251和BT325）和正常星形胶质细胞HA1800中miR-497-5p和FOXP4的表达。采用MTT法和Transwell实验分析过表达miR-497-5p或沉默FOXP4对U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting分析miR-497-5p和FOXP4靶向调控的关系。结果 3种星形胶质细胞瘤细胞中miR-497-5p的表达水平较HA1800细胞降低（P<0.05）,FOXP4的表达水平较HA1800细胞升高（P<0.05）。过表达miR-497-5p后U251细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）能力降低。沉默FOXP4后U251细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）能力降低。miR-497-5p靶向负性调控FOXP4表达。过表达FOXP4可部分逆转miR-497-5p对U251细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-497-5p靶向下调FOXP4表达抑制星形胶质细胞瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

circRNA ZNF609靶向miR-512-5p调控胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子机制研究

目的 探讨circRNA ZNF609影响胶质瘤细胞恶性生物学行为的可能机制。方法 (1)收集35例胶质瘤患者手术切除的肿瘤标本(胶质瘤组)及7例颅脑外伤患者的脑组织标本(对照组),RT-qPCR法检测组织中环状RNA(circRNA)ZNF609与微小RNA(miR)-512-5p表达量;(2)正常胶质细胞(HEB)为对照,RT-qPCR法检测胶质瘤细胞系(LN18、SW1088和Hs683)中circRNA ZNF609与miR-512-5p表达量;(3)胶质瘤LN18细胞,分别转染circRNA ZNF609小干扰RNA(siRNA)、miR-512-5p模拟物、或共转染circRNA ZNF609小干扰siRNA与anti-miRNA-512-5p后,用MTT法、流式细胞术、Transwell法分别检测LN18细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭;Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved-caspase-3蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circRNA ZNF609与miR-512-5p的调控关系。结果 与对照组比较,胶质瘤组circ...     

MiR-615-5p缓解Aβ25-35诱导的APOE4+/-型海马细胞的凋亡和变性

目的探讨miR-615-5p对人海马细胞的凋亡和变性的影响及潜在机制。方法运用实时定量PCR检测正常、家族性AD和散发性AD老年人血液中miR-615-5p的表达水平,以及APOE4+/-型人胚海马细胞和Aβ诱导的APOE4+/-海马细胞中miR-615-5p的表达水平;在Aβ预处理的APOE4+/-型海马细胞中分别转染miR-615-5p mimic和inhibitor后检测细胞凋亡、氧化应激标志物含量和突触生长标志蛋白的表达水平;运用生物学信息分析和荧光素酶报告基因技术预测并验证mir-615-5p对APOE基因的靶定调控关系。结果散发性AD患者和细胞模型中miR-615-5p的表达水平显著下调;过表达miR-615-5p显著抑制海马细胞的凋亡和细胞内氧化应激,并促进细胞内突触生长蛋白的表达,而沉默miR-615-5p则作用相反;mir-615-5p可靶定结合APOE mRNA,并下调APOE4+/-海马细胞中APOE4蛋白的表达。结论 mir-615-5p通过靶向调节APOE,缓解Aβ25-35诱导的APOE4+/-型海马细胞的凋亡和变性。     

miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法分析中国脑胶质瘤基因组计划(CGGA)数据库中miR-1224-5p在不同级别的胶质瘤组织中的表达数据,并采用原位杂交技术进行组织验证,运用CGGA数据分析miR-1224-5p的表达水平与胶质母细胞瘤患者临床预后的相关性。采用miR-1229-5p寡聚核苷酸转染胶质瘤U251及U87细胞,通过CCK8实验观察上调miR-1224-5p表达后对胶质瘤细胞增殖的影响。结果 miR-1224-5p在人脑胶质瘤组织中的表达随着病理分级的升高而降低。胶质母细胞瘤患者中低表达miR-1224-5p提示预后不良。上调miR-1224-5p表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖。结论 miR-1224-5p与胶质瘤的级别和临床预后相关,miR-1224-5p可以抑制胶质瘤细胞的增殖能力。     

过达miR-188-5p对丙泊酚麻醉导致的大鼠认知功能障碍的影响

目的 探讨过表达miR-188-5p对丙泊酚麻醉导致的大鼠认知功能障碍的影响.方法 将14d龄SPF级新生SD大鼠随机分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miRNA,阴性对照(agomir NC)组、丙泊酚+miR-188-5p agomir组(miR-188-5p agomir组).对照组:腹腔注射生理盐水.丙泊酚组:腹腔注射丙泊酚(100mg·kg-1).agomir NC组:在注射丙泊酚前30 min,在大鼠侧脑室注射agomir NC.miR-188-5p agomir组:在注射丙泊酚前30 min,在大鼠侧面脑室注射miR-188-5p agomir,对照组和丙泊酚组在注射前30 min,分别在侧面脑室注射生理盐水.水迷宫实验检测大鼠学习以及记忆能力.苏木精-伊红染色法观察大鼠海马组织病理学改变.RT-qPCR检测各组大鼠海马组织miR-188-5p表达水平.TUNEL法检测四组大鼠海马神经元凋亡情况.Western blot检测各组大鼠海马组织Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白水平.结果 与对照组比,丙泊酚组、agomir NC组大鼠5d逃避潜伏期显著延长,平台跨越次数下降,游泳路程延长,平台停留时间缩短,miR-188-5p显著降低,海马神经元凋亡率显著增加,凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著增加,Bcl-2表达水平显著下降(均P＜0.05).与丙泊酚组和agomir NC组比,miR-188-5p agomir组5d逃避潜伏期显著缩短,平台跨越次数增加,游泳路程减少,平台停留时间延长,细胞凋亡率显著下降,Bax和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2表达水平显著增加(均P＜ 0.05).结论 过表达miR-188-5p能够改善丙泊酚麻醉导致的大鼠记忆下降,抑制海马神经元细胞凋亡.     

miR-655-3p调控TRIM59对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的 探究微小RNA(miR)-655-3p调控三结构域蛋白59(TRIM59)对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响.方法 分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测神经胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-655-3p水平和过表达miR-655-3p,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测U251细胞增殖情...     

血清miR-423-5p对生长激素腺瘤增殖的影响

目的 探讨生长激素腺瘤血清Micr0-RNA(miRNA)的表达情况,及miR-423-5p对生长激素腺瘤增殖的影响.方法 各检测6例生长激素腺瘤病人和正常人血清外泌体miRNA的表达情况,对比两者之间的差异.结果 外泌体miRNA表达谱显示:生长激素腺瘤病人和正常人血清之间有169个差异表达miRNA(P<0.05,...     

miR-143-3p对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Nrg-1/ErbB4信号通路的影响

目的 探讨微小核糖核酸(miR)-143-3p对神经调节蛋白(Nrg)-1/erb-b2受体酪氨酸激酶(ErbB)4信号通路的调节作用,及对脑梗死大鼠神经细胞凋亡的影响.方法 将2018年3月-2019年3月在南充精神卫生中心医院神经内科就诊的30例脑梗死患者,分为脑梗死轻度组(脑梗死体积＜5cm3)、中度组(脑梗死体...     

miR-155-5p靶向调控SOCS5调节JAK2/STAT3信号通路促进大鼠脑缺血-再灌注损伤

目的 探讨miR-155-5p靶向细胞因子信号传导抑制蛋白5(SOCS5)对大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用及机制.方法 采用改良版线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型.将120只SD大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、抑制对照组(antagomir NC组)、miR-155-5p抑制组(miR-155-5p ant...     

木香烃内酯通过调控LncRNA LINC01116/miR-9-5p的表达来减轻过氧化氢诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤

目的 探讨木香烃内酯(Cos)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的大鼠脑微血管内皮细胞的氧化应激、凋亡的影响及其对长链非编码RNA LINC01116(LncRNA LINC01116)/微小RNA-9-5p(miR-9-5p)的调控作用。方法 原代分离培养大鼠脑微血管内皮细胞,并随机分成Con组、H₂O₂组、Cos-L组、Cos-M组、Cos-H组、Cos-H+pcDNA组、Cos-H+pcDNA-LINC01116组; 采用化学比色法检测丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的水平及超氧化物歧化酶(SOD)的活性; 流式细胞术检测细胞凋亡率; 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC01116、miR-9-5p的表达水平; 双荧光素酶报告实验验证LINC01116与miR-9-5p的靶向关系; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达水平。结果 H₂O₂处理后MDA的水平显著升高(P<0.05),GSH水平与SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),LINC01116的表达水平显著升高(P<0.05),miR-9-5p的表达水平显著降低(P<0.05); Cos处理后MDA的水平显著降低(P<0.05),GSH水平与SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),LINC01116的表达水平显著降低(P<0.05),miR-9-5p的表达水平显著升高(P<0.05),且Cos-L组、Cos-M组、Cos-H组上述指标的水平比较均有明显差异(P<0.05); 双荧光素酶报告实验证实LINC01116可靶向结合miR-9-5p; LINC01116过表达可减弱木香烃内酯对H₂O₂诱导的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论 木香烃内酯可能通过抑制LINC01116的表达及促进miR-9-5p的表达来抑制H₂O₂诱导的大鼠脑微血管内皮细胞的氧化应激及细胞凋亡,从而减轻细胞损伤。     

circ-HECTD1通过调控miR-98-5p/EPHA4表达参与OGD诱导的神经元损伤

目的探讨环状RNA HECTD1(circ-HECTD1)是否通过调控miR-98-5p/酪氨酸蛋白激酶A4(EPHA4)的表达参与氧糖剥夺(OGD)诱导的神经元损伤。方法体外分离培养小鼠原代皮层神经元, 采用双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测神经元中circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4之间的靶向关系, 并将神经元随机分为对照组(正常条件下培养24 h)与OGD 6 h、12 h、24 h组(予OGD处理6 h、12 h、24 h)以及OGD+Vector组与OGD+circ-HECTD1组、OGD+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组与OGD+siRNA circ-HECTD1(si-circ-HECTD1)组、OGD+微小RNA(miRNA)模拟物阴性对照(miR-NC)组与OGD+miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)组、OGD+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组与OGD+miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)组、OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组与OGD...     

小剂量3-NPA对KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸（3-NPA）预处理对红藻氨酸（KA）致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达的影响.方法大鼠腹腔注射20 mg/kg 3-NPA（4 mg/mL）或生理盐水后24 h制作大鼠癫痫模型及对照模型,7 d后分别用原位末端标记（TUNEL）法、免疫组织化学方法观察小剂量3-NPA预处理对KA致痫大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和P53蛋白表达的影响. 结果3-NPA预处理组较对照组CA1区神经细胞凋亡减少,p53蛋白表达减弱. 结论小剂量3-NPA预处理可以对KA致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p53蛋白表达有抑制作用,3-NPA预处理可能对KA致痫大鼠海马细胞凋亡具有一定保护作用.     

血肿周围脑组织miR-340-5p、PDCD4表达水平与高血压性脑出血病人预后的关系系

目的 探讨高血压脑出血血肿周围脑组织miR-340-5p、程序性细胞死亡蛋白4（PDCD4）表达的相关性及临床意义。方法 收集2016年9月至2020年9月手术切除的高血压性脑出血血肿周围脑组织217例,选择同期病理科尸检获取的正常脑组织标本50例作为对照。PCR检测脑组织miR-340-5p、PDCD4 mRNA水平。发病90 d用改良Rankin量表评分评估预后,0~2分为预后良好,3~5分为预后不良。结果 217例中,预后良好148例,预后不良69例。血肿周围脑组织miR-340-5p水平明显低于对照组（P<0.05）,而PDCD4 mRNA水平明显高于对照组（P<0.05）。血肿周围脑组织miR-340-5p水平与PDCD4 mRNA水平呈明显负相关（r=-0.683,P<0.05）。预后不良组血肿周围脑组织miR-340-5p水平明显低于预后良好组（P<0.05）,而PDCD4 mRNA水平明显高于预后良好组（P<0.05）。多因素logistic回归分析显示,血肿周围脑组织miR-340-5p水平降低、PDCD4 mRNA水平增高是高血压性脑出血预后不良的独立危险因素（P<0.05）。ROC曲线分析显示,血肿周围脑组织miR-340-5p水平预测预后不良的最佳截断值为0.665,曲线下面积为0.808（95%置信区间0.733~0.882）,灵敏度、特异度分别为70.97%、71.05%;PDCD4 mRNA的最佳截断值为1.425,曲线下面积为0.834（95%置信区间0.775~0.894）,灵敏度、特异度分别为71.08%、68.35%。结论 高血压性脑出血后,血肿周围脑组织miR-340-5p表达减少,可能通过负向调控PDCD4参与脑损伤病理过程。血肿周围脑组织miR-340-5p、PDCD4 mRNA表达水平对发病90 d预后评估具有一定临床价值。