脱氧核糖核酸条形码在蛤蚧真伪品鉴定中的前景

蛤蚧作为重要的动物药材,在咳嗽、哮喘、胆结石及性功能障碍上有治疗功效.由于药材蛤蚧原动物大壁虎(Gekko gecko)物种数量逐年减少,不能满足中药市场的需求而出现了众多伪品.文章概述了近二十年来蛤蚧及其伪品的鉴别研究情况,介绍了传统性状、显微、理化和现代分子生物学技术等鉴定方法,并比较总结了各种方法在蛤蚧真伪品鉴定中的特点.在此基础上,引入物种识别学科前沿-DNA条形码(DNA Barcoding)技术,并阐述了其在蛤蚧真伪品鉴定中的优势和应用前景.     

蛤蚧的真伪鉴别

蚧为壁虎科动物蛤蚧Gekko gecko(Linnaeus)除去内脏的干燥全体。主产于广西、广东、云南等地,其具有补肾温肺、壮阳益精血、止喘咳之功效。常用于治疗虚劳喘咳、气喘、咯血、消渴、肺结核、神经衰弱、老人脚冷膝软、阳痿早泄、小便频繁、心脏性气喘、肾虚喘促等症。近年来,广西     

蛤蚧及其伪品的微量元素测定和鉴定意义

本文对蛤蚧及其伪品的微量元素进行了测定,建立了TE(微量元素)特征图谱,找出了正品蛤蚧与伪品蛤蚧TE特征图谱的差异,分析了微量元素与临床疗效的内在联系性以及伪品蛤蚧不能替代正品.     

广西蛤蚧、泰国蛤蚧及其混伪品海蛤蚧(红瘰疣螈)的生药鉴定

对中药商品蛤蚧（广西蛤蚧，泰国蛤蚧ＣｅｋｋｏｇｅｃｋｏＬ）及其混伪品海蛤蚧（红瘰疣螈ＴｙｌｏｔｒｉｒｏｎｖｅｒｕｃｏｓｕｓＡｎｄｅｒｓｏｎ）进行了药材性状、药材鳞片显微特征、化学定性反应、紫外光谱、ＨＰＬＣ高效液相色谱的鉴别研究。实验结果，海蛤蚧与广西蛤蚧、泰国蛤蚧比较有明显区别，不应混用；广西蛤蚧与泰国蛤蚧的比较差异较小；为蛤蚧的准确鉴定和质量评价提供了鉴别依据。     

蛤蚧及其伪品的粘度鉴别

本文用蛋白粘度法对蛤蚧及其伪品壁虎、多疣壁虎、红瘰疣螈、西藏沙蜥进行了鉴别研究。结果表明,蛤蚧及其伪品的蛋白粘度均值有极显著性差异(P<0.01),为蛤蚧的真伪鉴别增加了一项理化质控指标。     

基于COI 条形码序列的蛤蚧及其混伪品的DNA 分子鉴定

目的：利用COI 序列对蛤蚧药材及其常见混伪品进行DNA 条形码鉴定,为蛤蚧药材鉴定提供新的方法。方法：以COI 作为条形码序列,对蛤蚧实验样品进行DNA 提取,PCR 扩增和双向测序,用MEGA6.0 对所有11 个物种的103 份样品进行序列比对和邻接（NJ）树构建。结果：所有实验样品均可以获得COI 序列,蛤蚧COI 序列种内平均K2P 距离为0.005,种内最大K2P 距离为0.013,基于COI 序列构建的NJ 树中蛤蚧单独聚在一支,与其混伪品可以相互区分。结论：运用COI 条形码序列能够准确鉴定蛤蚧及其混伪品,为保障蛤蚧药材临床用药安全和市场监管提供新的方法。     

黑点蛤蚧与红点蛤蚧的本草考证

黑点蛤蚧自古以来为我国蛤蚧正品,并被国家药典收载.红点蛤蚧自清代中后期零星进入我国,20世纪80年代后,由于黑点蛤蚧日趋濒危,红点蛤蚧迅速成为蛤蚧市场主角,但业内对其贬褒各半,也一直没有被药典收载.红点蛤蚧是否能真正替代黑点蛤蚧在临床上的应用,亟需从化学成分和药理予以对比分析.     

蛤蚧体与蛤蚧尾化学成分的比较

利用原子吸收光谱和氨基酸自动分析仪,测出蛤蚧尾和蛤蚧体中主要微量元素和游离氨基酸及总氨基酸的种类和含量,以此比较蛤蚧尾和蛤蚧体在部分化学成分方面的差异。     

基于亲缘关系的红蛤蚧与黑蛤蚧药效再评估

目的 基于药用亲缘学原理,对红、黑蛤蚧药效情况进行再评估.方法 通过Mega软件,采用MP法构建系统发育树,基于系统发育树判断红、黑蛤蚧之间的亲缘关系,并依此探讨红、黑蛤蚧及药效之间的关系.结果 红、黑蛤蚧在系统树上相互嵌合在一起,不能各自形成独立分支(单系),来自不同产地的红、黑蛤蚧分别构成了4个独立支系,这与红、黑蛤蚧截然可分的概念相悖.结论 红蛤蚧可能具有和黑蛤蚧相似的药效,不同地区的红、黑蛤蚧药效可能存在差异.该研究旨在为红、黑蛤蚧的药效及化学成分研究提供前瞻性的建议,即开展相关研究应基于亲缘关系,分别对不同产地红、黑蛤蚧样品进行分析.     

冬虫夏草PCR快速检测试剂盒的研制与效果评价

冬虫夏草为我国传统名贵中药材。资源短缺、价格昂贵和巨大的市场需求导致市售冬虫夏草掺伪掺假现象严重,亟需建立快速有效的鉴别方法。该研究基于实验前期已建立的冬虫夏草快速鉴定SS-PCR方法,按照体外诊断试剂评价标准开发试剂盒,并对试剂盒的特异性、检测限、重复性及保存期4项性能进行了评价。结果显示冬虫夏草质量占混合物质量的1/200(质量分数0.5%以上)以上时可被成功检测。试剂盒对冬虫夏草及其伪品的检测结果显示,仅有冬虫夏草可被成功扩增,并在紫外下显示绿色荧光。该试剂盒37℃温育7 d仍有效,说明4℃保存其在1年内稳定有效。同一批次试剂盒在不同条件下,不同批次试剂盒在相同条件下,其检测结果均一致且准确,表明试剂盒具有良好的批内及批间重复性。将该试剂盒用于市售冬虫夏草及其混伪品的检测,操作简单快速,结果准确可靠,为下一步中药快检试剂盒的商品化奠定了基础。     

桃仁及苦杏仁DNA检测试剂盒的研制与评价

目的 本研究旨在研制一种快速检测试剂盒,鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,并对其进行性能评价。方法 建立DNA提取方法,确保有效提取桃仁及苦杏仁基因组DNA,紫外分光光度法测其浓度及纯度。美国国立生物技术信息中心(NCBI)查询并比对桃仁及苦杏仁的ITS序列,针对特异性位点,NCBI Primer-Blast设计种属特异性引物。建立并优化聚合酶链式反应(PCR)检测体系,DH5α感受态细胞克隆特异性片段,测序验证体系准确性,制备阳性对照。组装DNA检测试剂盒,对其特异性、稳定性及重复性进行评价,并对市售桃仁和苦杏仁样品进行检测。结果 所建立DNA提取方法,提取效率高,DNA质量浓度高于100 ng·μL^-1,A_260/280处于1.80～2.10之间。该试剂盒可准确鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,检测灵敏度高,特异性强,最低检测限为1 ng·μL^-1。反复冻融20次后仍可有效检测,可于-20 ℃保存1年。20个市售样品中检出1个桃仁伪品及2个苦杏仁伪品,其余均为正品。结论 桃仁及苦杏仁DNA检测试剂盒特异性强、灵敏性高、稳定性好,具有良好重复性,可快速鉴定桃仁及苦杏仁,为桃仁中药材市场质量安全管理提供有力支持。     

施今墨与蛤蚧

施今墨(1881-1969),浙江萧山人,原名毓黔,字奖生.是我国近代著名的中医临床家,北京四大名医之一. 施今墨在重庆行医时,一次应病人之邀乘滑竿出诊,见轿夫口含蛤蚧尾,爬山越岭并不气促,深受启发.于是将蛤蚧用于治疗气喘诸病,收效良好.     

蛤蚧不同部位的药理作用

本文对蛤蚧不同部位的药理作用进行了研究,结果表明,蛤蚧头、足有明显的药理作用,且无任何毒副作用。这为提高蛤蚧的临床利用率、扩大药用部位,提供了可靠依据。     

蛤蚧炮制的文献探讨

通过查阅历代医药文献，阐明了蛤蚧药用“效在尾”，“毒在眼”“去头足鳞片”炮制方法的历史渊源。综合历代文献的论述和现代化学成分及药理研究结果，阐明了蛤蚧“效在尾”，“毒在眼”的科学依据。认为蛤蚧炮制“去头”只是为了除眼；“去头足鳞片”没有科学道理，又浪费药材。建议临床药用蛤蚧不必去头足鳞片。     

施今墨与蛤蚧

施今墨（1881--1969），浙江萧山人，原名毓黔，字奖生，是我国近代著名的中医临床家，北京四大名医之一。 施今墨在重庆行医时，一次应病人之邀乘滑竿出诊，见轿夫口含蛤蚧尾，爬山越岭并不气促，深受启发。于是将蛤蚧用于治疗气喘诸病，收效良好。     

快速PCR技术鉴别中药材蛤蚧的方法研究

目的:建立简单快速鉴别蛤蚧的特异性PCR方法。方法:对比蛤蚧及其伪品细胞色素C氧化酶I亚基基因(CO I)序列,设计蛤蚧特异性PCR鉴别引物,优化特异性PCR条件,对蛤蚧及其7种常见混淆品进行扩增及荧光检测。结果:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和荧光检测,所有蛤蚧药材均能扩增出约400 bp的特异性条带,加入SYBR Green I染料后,在365 nm下出现强烈绿色荧光,混伪品不具特异条带和绿色荧光,鉴别操作可在30 min内完成。结论:快速PCR结合荧光染料检测可快速鉴别蛤蚧及其常见伪品,为蛤蚧的快速鉴定提供了新的思路和方法。     

蛤蚧生态与生物学特性的研究

笔者通过对蛤蚧的野外调查和人工养殖观察，基本掌握了蛤蚧的地理分布、栖息环境，活动规律以及蛤蚧的繁殖习性和食性，为人工养殖提供了科学依据。     

蛤蚧的研究进展

本文对近二十年来蛤蚧的生药学、化学成分和药理作用研究进行了综述,为其进一步开发应用提供参考。     

提高蛤蚧产卵率与孵化率的研究

野生蛤蚧产卵率低，人工饲养后，通过调整饲料配方，加强管理，按雌雄４：１配比饲养，使产卵率和孵化率分别提高２６．９％～３８．６％和６．５％～１０．５％。     

蛤蚧的本草考证

蛤蚧是我国名贵中药材,也是我国医学历史上治疗疾病的常用药。为了明晰蛤蚧在史料及现代文献中的记载,本文将古代文献中关于蛤蚧产地分布、采集加工、性味归经、功效主治等方面介绍进行梳理考证;对在考证过程中发现的蛤蚧毒性方面存在的分歧提出合理解释,为蛤蚧的临床应用和科学研究提供本草学依据。