内异停对子宫内膜异位症大鼠PD-1/PD-L1途径及Th17/Treg表达的影响

目的:探讨内异停通过PD-1/PD-L1途径干预子宫内膜异位症大鼠Th17/Treg表达失衡的免疫机制.方法:45只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、PD-1抗体组、内异停组、内异停低剂量组,每组9只.空白对照组不给予任何处理,其余各组大鼠均进行子宫内膜自体移植,术后28d,每组随机取1只大鼠开腹观察异位内膜生长...     

消瘰丸治疗淋巴瘤基于PD-1/PD-L1信号通路的机制研究

[目的]初步探究古方消瘰丸治疗淋巴瘤基于程序性死亡因子(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L)信号通路上的免疫调控机制。[方法]从健康人、淋巴瘤患者的外周血中分离外周血单个核细胞,体外培养刺激后,应用流式细胞仪、CFSE等技术,以PD-1/PD-L1信号通路为靶通路,通过是否阻断PD-1/PD-L1信号通路与消瘰丸药物干预,观察消瘰丸对T细胞不同亚细胞的活性作用。[结果]淋巴瘤患者T淋巴瘤细胞在消瘰丸干预下,CD4~+T细胞PD-1(+)和CD69表达降低,而CD8~+T细胞PD-1(+)和CD69表达增加;PD-L1阻断剂和消瘰丸联合使用对淋巴瘤T细胞中的CD4~+细胞CD69抑制作用比PD-L1阻断剂组和消瘰丸组都明显;与PD-L1阻断剂组相比,消瘰丸组CD8~+T细胞活性增加更明显,而同时加入两者,与消瘰丸组相比,增加并不明显。[结论]消瘰丸对大量异常增殖的CD4~+T细胞可以抑制PD-1(+)的高表达,消瘰丸与PD-L1阻断剂二者对于CD4~+PD-1(+)和CD69表达有协同降低的作用;消瘰丸对于有细胞毒作用的CD8~+T细胞活性有增强作用,可以促进PD-1(+)的表达。     

解毒通络生津方对干燥综合征NOD小鼠PD-1/PD-L1信号通路的影响＊

目的 观察解毒通络生津方对干燥综合征（SS）模型NOD小鼠PD-1/PD-L1通路的影响，探讨其作用机制。方法 将24只8周龄雌性NOD小鼠随机分为3组，即模型组（Model）、解毒通络生津方组（TCM）、解毒通络生津方加抗PD-L1单抗阻断组（TCM＋α-PD-L1），每组8只。另选8只8周龄雌性ICR小鼠作为正常对照组（Ctrl）。12周龄时开始中药干预，TCM组按照每天24.4 g·kg^-1解毒通络生津方灌胃，TCM＋α-PD-L1组在每天给予24.4 g·kg^-1解毒通络生津方灌胃的基础上，腹腔注射抗PD-L1抗体，1周2次，每次100 μg，Ctrl组和Model组给予同等剂量的生理盐水灌胃，实验期间记录各组小鼠第9、12、16、20周龄时的日均饮水量，干预8周后，小鼠统一麻醉下摘取颌下腺。HE染色观察各组小鼠颌下腺中炎症细胞浸润情况；流式细胞仪检测小鼠颌下腺CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg细胞的表达；Western Blot检测小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达。结果 随着小鼠周龄的增长，Ctrl组小鼠日均饮水量基本不变，Model组小鼠的日均饮水量有明显上升趋势，TCM组小鼠日均饮水量下降，TCM＋α-PD-L1组小鼠日均饮水量上升；与Model组比较，TCM组炎症细胞浸润灶明显减少（P<0.001）；与TCM组比较，TCM＋α-PD-L1组炎症细胞浸润增多（P<0.001）；与Ctrl组比较，Model组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg的表达降低（P<0.001），与Model组比较，TCM组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg表达升高（P<0.01）；与TCM组比较，TCM＋α-PD-L1组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺PD-1⁺Treg的表达降低（P<0.01）；与Ctrl组比较，Model组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达降低（P<0.01）；与Model组比较，TCM组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达升高（P<0.01）；与TCM组比较，TCM＋α-PD-L1组小鼠颌下腺中PD-1、PD-L1和Foxp3蛋白的表达降低（P<0.001）。结论 解毒通络生津方可能通过PD-1/PD-L1信号通路促进SS模型小鼠Treg细胞活化，上调Foxp3的表达，增强Treg细胞抑制免疫炎症的作用，PD-1/PD-L1可能是解毒通络生津方治疗SS的一个作用靶点。     

养阴扶正方调控PD-1/PD-L1通路逆转T细胞耗竭的机制研究

目的:探讨养阴扶正方调控PD-1/PD-L1通路逆转T细胞耗竭的机制.方法:免疫磁珠分选PD-L1+ Lewis肺癌细胞,建立PD-L1+ Lewis肺癌、Lewis肺癌C57BL/6鼠移植瘤模型,建模成功后,随机分为8组,分别予以养阴扶正方、阿特珠单抗、阿特珠单抗+养阴扶正方干预;绘制肿瘤生长曲线,流式细胞术检测荷瘤...     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

目的：研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法：60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^-1),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^-1),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-...     

针刺对溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡的调节作用

从文献学的角度阐释溃疡性结肠炎的病理基础及针刺对Th17、Treg细胞因子的影响,以期为针灸治疗的效应机制提供科学依据,同时为针刺对溃疡性结肠炎的菌群-宿主代谢免疫交互机制的影响研究提供文献依据。     

PD-1/PD-L1抑制剂的中药性能探讨

运用中医药理论探讨PD-1/PD-L1抑制剂的中药性能,推测该药四气属温,五味属甘、辛,归肺、脾、肾经,具有升浮之性,对临床辨证使用PD-1/PD-L1抑制剂,进一步拓展肿瘤治疗应用前景具有一定的现实指导意义。     

半夏泻心汤对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠道微生态及Th17/Treg细胞平衡的影响＊

目的 观察半夏泻心汤对饮用葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导建立的溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠Th17/Treg细胞平衡及肠道微生态的影响，从免疫失衡及菌群紊乱角度分析半夏泻心汤治疗UC的作用机制。方法 将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药（美沙拉嗪）组及半夏泻心汤组，除空白组外的各小鼠采用2.5% DSS水溶液自由饮用7天诱导建立UC小鼠模型。自实验第8日起，分别采用灭菌水、美沙拉嗪水溶液、半夏泻心汤水溶液给上述各组别小鼠灌胃。采用HE染色观察结肠组织病理学变化，ELISA方法检测组织炎症因子含量，流式细胞术检测Th17及Treg细胞的相对数量，16S rRNA测序技术进一步检测模型小鼠粪便中菌群的变化。结果 与空白组比较，模型组小鼠结肠损伤严重，血清炎症因子含量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，中药干预组小鼠结肠损伤减轻，血清TNF-α、IFN-γ含量显著下降（P<0.05）。较空白组小鼠相比，模型组小鼠Th17细胞百分比显著升高（P<0.01），而Treg细胞百分比显著降低（P<0.01）。经半夏泻心汤干预后，其小鼠Th17细胞数量均显著降低（P<0.05），Treg细胞数量则显著升高（P<0.05）。同时，半夏泻心汤可升高门水平上Firmicutes、属水平上Lachnospiraceae_NK4A136_group、unclassified_f_Lachnospiraceae、Prevotellaceae_UCG-001、Alistipes；降低门水平上Actinobacteriota，科水平上Bifidobacteriaceae、Atopobiaceae、Clostridiaceae，属水平上Clostridium_sensu_stricto_1、Coriobacteriaceae_UCG-002、Bifidobacterium的相对丰度。结论 半夏泻心汤可使Treg细胞相对数量升高、Th17细胞相对数量降低，以维持Th17/Treg细胞动态平衡；同时可降低有害菌Clostridium_sensu_stricto_1、Coriobacteriaceae_UCG-002的相对丰度，升高产短链脂肪酸类菌Lachnospiraceae_NK4A136_group、Prevotellaceae_UCG-001、unclassified_f_Lachnospiraceae等菌属的相对丰度，调控肠道微生物结构及动态平衡，从而发挥治疗UC的作用。     

脏连丸联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎疗效观察

目的：观察脏连丸联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎的临床疗效。方法：符合纳入标准的溃疡性结肠炎患者36例,随机分为治疗组和对照组各18例,治疗组给予脏连丸及美沙拉嗪片口服,对照组给予美沙拉嗪片口服,疗程12周。结果：治疗12周后,治疗组患者完全缓解11例,有效6例,总有效率为94％,完全缓解率61％;对照组患者完全缓解7例,有效9例,总有效率为89％,完全缓解率39％,两组临床疗效比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：脏连丸联合美沙拉嗪能明显减轻溃疡性结肠炎患者的临床症状,促进溃疡愈合,改善生活质量。     

人参皂苷Rg1 对DSS 诱导的溃疡性结肠炎小鼠Treg/Th9 细胞平衡的调控作用

目的探讨人参皂苷Rg1 对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎小鼠调节性T 细胞（Treg）/辅助性 T 细胞9（Th9）细胞平衡的调控作用。方法将40 只BALB/C 雄性小鼠随机分为正常组、模型组、人参皂苷 Rg1 组（200 mg·kg-1）及美沙拉嗪组（300 mg·kg-1）,每组10 只。除正常组外,其余各组小鼠采用3% DSS 自由 饮水7 d 建立溃疡性结肠炎模型;给药组同时按照上述剂量灌胃给药,每日1 次,连续10 d。观察记录小鼠一 般情况及体质量;测量结肠长度及其质量,计算结肠质量指数;采用HE 染色法进行结肠组织病理学观察,并 进行病理损伤评分;采用ELISA 法检测结肠组织中IL-1β、IL-4、IL-15、IL-17A 表达水平;采用流式细胞术 检测小鼠外周血中CD4+ CD44+ Foxp3+、CD4+ CD44+ IL-9+、CD4+ CD44+ IL-10+、CD4+ CD25+ Foxp3+、CD4+ CD25+ PD-1+ 及CD4+ CD25+ PD-L1+ T 细胞水平。结果与正常组比较,模型组小鼠结肠黏膜充血、水肿,杯 状细胞减少,大量炎症细胞浸润,部分区域溃疡形成;小鼠体质量明显下降、结肠质量明显增加、结肠长度 明显缩短、结肠质量指数及病理评分明显升高（P＜0.01）;小鼠结肠组织中IL-1β、IL-15、IL-17A 表达水平显 著升高（P＜0.01）,IL-4 表达水平显著降低（P＜0.01）;小鼠外周血的CD4+ CD44+ Foxp3+、CD4+ CD25+ Foxp3+、CD4+ CD44+ IL-10+ T 细胞水平均显著降低（P＜0.01）,而CD4+ CD44+ IL-9+、CD4+ CD25+ PD-1+、 CD4+ CD25+ PD-L1+ T 细胞水平显著升高（P＜0.01）。与模型组比较,人参皂苷Rg1 组小鼠结肠黏膜充血、水肿 明显减轻,糜烂修复,炎症细胞浸润明显减少;体质量明显增加、结肠质量明显降低、结肠长度明显延长、 结肠质量指数及病理评分明显降低（P＜0.05）;小鼠结肠组织中IL-1β、IL-15、IL-17A 表达水平明显下降 （P＜0.01）,IL-4 表达水平明显升高（P＜0.05）;小鼠外周血的CD4+ CD44+ Foxp3+、CD4+ CD25+ Foxp3+、CD4+ CD44+ IL-10+ T 细胞水平均显著升高（P＜0.01）,同时CD4+ CD44+ IL-9+、CD4+ CD25+ PD-1+、CD4+ CD25+ PDL1+ T 细胞水平均显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。结论人参皂苷Rg1 可能通过调控Treg/Th9 细胞平衡治疗 DSS 诱导的小鼠溃疡性结肠炎。     

补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响

目的:观察补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响.方法:将SPF级雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组和美沙拉嗪组,每组各8只.采用5％葡聚糖硫酸钠溶液制备UC大鼠模型.造模结束后,补中益气汤组分别予低、中、高剂量补中益气汤灌胃,空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃,美沙拉嗪组给予...     

雷公藤甲素通过PD-1/PD-L1信号通路缓解肾移植急性排斥反应的作用

目的探讨雷公藤甲素通过PD-1/PD-L1信号通路缓解肾移植急性排斥反应的作用及机制。方法大鼠随机分为空白对照组、急性排斥组、雷公藤甲素组、anti-PD-L1组、雷公藤甲素+anti-PD-L1组,每组8只。记录大鼠存活时间、体质量,检测血清肌酐水平,肾组织形态学观察,实时荧光定量PCR、Western blot法检测PD-L1的表达,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群比率及调节性T细胞比率。结果与急性排斥组比较,雷公藤甲素组生存时间明显延长、体质量明显增加、血肌酐水平降低(P0.05),PD-L1 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05),CD_3~+T、CD_4~+T细胞比率、CD_4~+/CD_8~+明显降低(P0.05),CD_8~+T、CD_4~+CD_(25)~+细胞比率明显升高(P0.05),改善肾组织病理状态;anti-PD-L1组进一步加剧肾移植急性排斥作用。而雷公藤甲素+anti-PD-L1组则能显著逆转anti-PD-L1组对肾移植急性排斥作用(P0.05)。结论雷公藤甲素上调PD-L1表达,增加调节性T细胞,调节T淋巴细胞亚群,抑制肾脏排异反应,延长移植肾存活时间。PD1/PD-L1可能在雷公藤甲素抗排斥反应信号通路中发挥一定作用。     

清热消积方通过PD-1/PD-L1途径调控荷Lewis肺癌移植瘤小鼠免疫功能的实验研究

清热消积方基于肿瘤患者"正气虚损、阴阳失衡、脏腑功能失调,痰、瘀、热、毒互结"的病机而组方.已有研究证实该复方具有较好的抗肿瘤效果,但其是否通过调控免疫功能进而发挥抗肿瘤作用尚不清楚.本研究采用荷瘤Lewis肺癌小鼠移植瘤作为研究对象,观察其对肿瘤组织PD-1/PD-L1蛋白及相关细胞因子的影响,对其抗肿瘤机理进一步探...     

红萸饮对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/Caspase-1/ASC细胞焦亡通路的影响

目的：探析红萸饮对溃疡性结肠炎（UC）小鼠细胞焦亡通路的调控机制。方法：将40只C57/BL6小鼠随机分为正常组、模型组、红萸饮组（1.5g/kg）和美沙拉秦组（0.50g/kg）,采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液1周的方法造模。造模后正常组和模型组予蒸馏水,红萸饮组和美沙拉秦组予相应药物灌胃7d,期间观察小鼠体质量、粪便等一般情况及疾病活动指数评分（DAI）;HE染色观察结肠黏膜变化;微板法测定结肠组织中乳酸脱氢酶（LDH）水平;ELISA法检测血清中IL-18和IL-1β的含量;TUNEL荧光法检测结肠组织细胞凋亡水平;免疫组化法检测通路蛋白（ASC、Caspase-1、NLRP3）变化;Western blot法检测焦亡关键蛋白（IL-1β、IL-18、GSDMD）的表达。结果：与正常组比较,造模后动物体质量降低,DAI评分上升,结肠黏膜损伤严重,结肠组织蛋白上清中LDH含量显著升高（P<0.01）,血清炎症因子（IL-1β、IL-18）含量均显著增加（P<0.01）,TUNEL染色阳性明显,结肠组织焦亡通路蛋白（ASC、Caspase-1、NLRP3）表达量均显著增...     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠外周血Treg/Th17平衡的干预作用

目的从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎(UC)的深层次作用机理及作用靶点。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)(25 g·L-1TNBS+50%的乙醇)诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶(SASP)组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4+T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低(P0.01),溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高(P0.05,P0.01)。结论溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4+Foxp3+Treg细胞比例和降低CD4+IL-17A+Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

电针对溃疡性结肠炎小鼠脾脏淋巴细胞Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:观察电针对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的治疗效应,并从调节性T细胞(Treg)与辅助性T细胞Th 17免疫平衡的角度探讨针灸治疗UC的机制。方法:健康雄性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、电针组,每组8只。采用3%葡聚糖硫酸钠法复制UC模型。电针组选取"关元""足三里"连续治疗5d,每天10min。观察各组小鼠体质量、大便黏稠度及出血情况,计算疾病活动指数;结肠组织HE染色,观察远端结肠组织病理形态学变化;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞Treg、Th 17细胞水平。结果:电针对UC小鼠具有治疗效应,其疾病活动指数明显降低(P0.05),结肠组织病理改变得到改善。与空白组相比,模型组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平下调,CD3+CD8+IL-17+Th 17细胞水平上调,差异具有统计学意义(P0.05);电针治疗后,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平上调,CD3+CD8+IL-17+Th 17细胞水平下降,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:电针可能通过对UC小鼠Treg/Th 17免疫平衡的影响起到治疗UC的作用。     

红景天对支气管哮喘小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子的影响

目的:观察红景天对支气管哮喘小鼠Th17/Treg T细胞及其细胞因子白介素IL-17、IL-23、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达影响,探讨其可能作用机制。方法:选择8周龄健康雌性BALB/C小鼠,随机分为3组:对照组、支气管哮喘模型组、红景天组,每组10只;支气管哮喘模型采用卵清蛋白致敏方法构建,小鼠支气管灌洗液细胞(BALF)计数,ELISA法测定肺组织中IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1水平,流式细胞术测定外周血CD_4~+IL-17~+与FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+的比例,HE染色观察肺组织病理形态学变化。结果:与对照组比较,模型组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及肺匀浆IL-17、IL-23、CD_4~+IL-17~+占CD_4~+比例明显升高(P<0.05),肺匀浆IL-10、TGF-β1及FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+比例明显降低(P<0.05),肺组织炎症反应增加;与模型组比较,红景天组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及IL-17、IL-23、CD_4~+IL-17~+占CD_4~+比例明显降低(P<0.05),IL-10、TGF-β1及FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+比例明显升高(P<0.05),肺组织炎症反应减轻。结论:红景天可有效抑制哮喘小鼠气道炎症反应,其作用可能与调控哮喘小鼠Th17/Treg T细胞及其细胞因子IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1表达有关。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/caspase-1细胞焦亡通路的影响

探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠细胞焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor thermoprotein domain 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)通路阐释其可能的作用机制.建立3％葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为6组:正常组,模...     

基于PD-1/PD-L1及miR-200c/ZEB通路研究健脾消癌方治疗结肠癌肝转移的作用机制

目的：观察健脾消癌方对结肠癌肝转移荷瘤裸鼠肝组织中程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)及微小RNA200c(miRNA-200c)/转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响。方法：在50只裸鼠中随机抽取10只作为假移植组,另取40只建立结肠癌肝转移模型。造模成功后再将其分为4组：模型组,健脾消癌方低、中、高剂量组(简称为低、中、高剂量组),每组各10只。假移植组和模型组灌胃等量0.9%氯化钠注射液,低、中、高剂量组灌胃健脾消癌方(5.4、10.8、21.6 g/kg),每天1次,连续3周。观察各组裸鼠肝转移瘤的情况,检测PD-1、PD-L1、miRNA-200c、ZEB1 mRNA的表达及PD-1、PD-L1、ZEB1蛋白的表达情况。结果：除假移植组外,其余各组均可在裸鼠的肝脏表面发现肝转移结节。各组肝转移结节数量、质量高剂量组与低、中剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝脏组织病理学结果显示,与模型组比较,低、中、高剂量组癌细胞增长速度较慢。与假移植组比较,模型组miRNA-200c表达降低,PD-1、PD-L1、ZEB1 mRN...