钙调蛋白抑制剂对小鼠精子获能影响的研究

目的:探讨钙调蛋白是否参与小鼠精子获能过程。方法:用50、100、200μmol/L浓度的钙调蛋白抑制剂W7和10、20、30μmol/L浓度的钙调蛋白抑制剂卡米达佐(CZ)分别与小鼠精子孵育2h,通过金霉素染色法计算出B型精子百分率。并用100μmol/L钙调蛋白抑制剂W7和10μmol/LCZ分别与小鼠精子孵育2h后,再加入5μmol/L孕酮诱发顶体反应,计算精子顶体反应百分率。结果:不同浓度的W7和CZ作用小鼠精子,B型精子百分率呈浓度依赖性方式下降,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。顶体反应率与对照组相比均有极显著差异(P<0.01)。结论:钙调蛋白参与小鼠精子获能,是精子获能过程中的关键蛋白。     

壬基酚和镉离子在体外对小鼠精子顶体反应的影响

目的:研究壬基酚和镉离子在体外对小鼠精子顶体反应(AR)的影响。方法:从小鼠的输精管获得精子,体外培养使精子获能,加30μmol/L的A23187诱导精子顶体反应,然后使用不同浓度的壬基酚(10、20、30、60、100μmol/L),或者镉离子(500、2500、5000μmol/L)处理,对照组使用相应的载体溶剂处理。用FITC-PSA荧光染色法分析精子顶体反应。结果:当壬基酚浓度<30μmol/L时,小鼠精子顶体反应率与对照组比较没有显著差异(P>0.05),而当壬基酚浓度>60μmol/L时能够显著地抑制小鼠精子顶体反应发生率(P<0.01),并且观察到精子存活率随着壬基酚浓度增加而降低。与壬基酚作用不同,用镉离子对小鼠精子进行处理,在所选浓度内(500~5 000μmol/L)均对精子顶体反应无显著影响(P>0.05),且精子存活率与镉离子浓度变化无关。结论:壬基酚与镉离子对小鼠精子发生的作用是通过不同的途径来实现的,前者可以直接抑制顶体反应,而后者则与精子顶体反应无关。     

线粒体氧化磷酸化抑制剂FCCP体外对人精子动力学和线粒体功能的影响

目的通过线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)特异性抑制剂FCCP对人精子活动力及其线粒体功能影响的研究,探讨氧化磷酸化在精子能量代谢中的作用。方法选择来自捐精志愿者的正常精液8份,优选后制备精子悬液,将每份精子悬液分为4组,分别与终浓度为0μmol/L(对照组)、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的FCCP共孵育1h、3h、5h,以精子动力学参数、线粒体膜电位、精子细胞内ATP含量、精子质膜完整性作为评价指标,分析比较各组间的差异。结果 (1)各组精子活动率和其他各项运动参数随着FCCP浓度增高呈下降趋势:孵育1h后,与对照组相比,仅10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率和精子头侧摆幅度(ALH)显著下降(P0.05),其余指标无显著性变化,而其余浓度处理组的各指标变化均无统计学意义(P0.05);孵育3h后,10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率、平均路径速率(VAP)、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、ALH和鞭打频率(BCF)均显著降低(P0.05),5μmol/L组的ALH和BCF指标显著下降(P0.05);孵育5h后,与对照组相比,10μmol/L组的前述指标继续显著性下降(P0.05),5μmol/L组的精子活动率和前向运动百分率也出现显著降低(P0.05),而2.5μmol/L组各指标差异均无统计学意义(P0.05)。(2)精子线粒体膜电位(MMP)和ATP含量随FCCP浓度增加逐渐降低,10μmol/L组的MMP和ATP含量显著低于对照组(P0.05)。(3)质膜完整性比较中,10μmol/L组比对照组显著降低(73.94%vs.84.53%)(P0.05)。(4)随着FCCP孵育时间延长,各组精子活动率和前向运动百分率呈下降趋势。结论不同浓度的FCCP体外处理精子后,精子活动率和其他各项运动参数,以及反映线粒体活性的线粒体膜电位和ATP含量呈浓度依赖性下降,FCCP所抑制的线粒体氧化磷酸化是精子能量代谢的重要途径。     

体外获能过程中精子凋亡及其对体外受精影响的研究

目的 探讨精子体外获能进程与细胞凋亡之间的联系，以及获能过程中精子凋亡对体外受精的影响。方法 猪精子经钙离子载体A23187(IA)诱导处理后，在TALP以及添加10％胎牛血清(TALP FCS组)、25μmol／L，核酶抑制剂(ATA)、TALP ATA组3种培养液中孵育，以考马斯亮蓝和TUNEL检测顶体反应(AR)率和凋亡率；同时行体外受精，检查卵母细胞穿透率和卵裂率。结果 鲜精液的精子凋亡率为5．7％，经洗涤、上游处理后凋亡率下降为3％；获能培养过程中，尽管IA浓度影响精子寿命，胎牛血清推迟获能进程，但凋亡仅与AR直接相关。获能完成后4小时左右出现明显的凋亡增长峰，ATA可阻止获能后的凋亡效应；3种获能处理的精子体外受精后，TALP和TALP FCS组有超过30％以上的受精卵不发生卵裂，而TALP ATA组仅为20％，与阴性对照组相当。结论 精子在顶体反应发生的同时可能启动和(或)激活凋亡机制，4小时后出现凋亡效应；精子DNA的异常断裂影响受精卵的发育能力。     

重组人睾丸精子结合蛋白对人精子运动参数的影响

目的:探讨重组人睾丸精子结合蛋白(TSBP)对体外培养人精子运动参数的影响。方法:将22例生育男性的精液经Percoll密度梯度离心后,分别与0.01mg/ml及0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外共同孵育1h或3h,同时设立对照组,Western印迹检测重组His6-TSBP与精子膜的结合情况,计算机辅助精液分析(CASA)系统测定重组His6-TSBP对精子运动参数的影响。将12例弱精子症患者的精液按同样方法处理,检测重组His6-TSBP对弱精子症患者精子运动参数的影响。结果:0.1mg/ml重组His6-TSBP与生育男性精子作用1h可以提高体外培养精子的前向运动百分率(a+b级精子百分率),培养3h后前向运动百分率和活率均有所提高,差异具有显著性(P<0.05);0.01mg/ml重组His6-TSBP对检测各指标均无显著性影响。0.1mg/ml重组His6-TSBP与弱精子症患者精子作用3h可以提高精子前向运动百分率(P<0.05),但对活率无显著影响。结论:0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外可以提高生育男性精子的前向运动百分率和活率及弱精子症患者精子的前向运动百分率。     

卡托普利体外对人精子运动参数的影响

目的:探讨卡托普利体外对人精子运动参数的影响。方法:将卡托普利注射液配制成1×10-5、1×10-6及1×10-7mol/L 3组浓度,分别在体外作用于取自正常生育男性并经Percoll梯度离心处理的精子。分别将3组卡托普利溶液各20μl与180μl精子悬液混匀,均于作用5 m in后采用计算机辅助精液分析系统检测精子运动参数。结果:3组不同浓度卡托普利溶液与精子作用5 m in后,精子活率和前向运动精子百分率明显降低(P<0.05);其他运动参数无明显变化。结论:卡托普利能显著降低精子活率和前向运动精子百分率,对其他运动参数无显著影响。     

睾酮体外对人精子运动参数的影响

目的通过研究睾酮体外对人精子运动参数的影响,探讨睾酮在男性不育症治疗中的作用。方法10例健康生育男性手淫获得精液,经上游优化处理后的精子与不同浓度的睾酮孵育10、30、60min,10例弱精子症患者手淫取精并与睾酮孵育10、60、120min后,采用计算机辅助的精液分析系统(CASA)检测精子的运动参数。结果50ng/dl(1.73nmol/L)睾酮在体外能显著增强正常人精子的直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)和平均速度(VAP),而对活率、前向运动百分率无明显影响,而100ng/dl(3.47nmol/L)睾酮使精子活率和前向性运动百分率均有明显下降(P<0.01);1.04nmol/L～1.73nmol/L浓度睾酮能显著增强弱精子症患者精子的活率、前向运动百分率及VSL,并随着浓度的增加,睾酮作用显著增强,而对VCL和VAP无明显影响。结论低浓度(1.04nmol/L～1.73nmol/L)睾酮在体外显著增高弱精症患者精子的运动参数。     

ZK 93426对小鼠和人精子获能的影响研究

目的探究小分子化合物ZK 93426对小鼠和人精子获能的影响及作用机制。方法采用蛋白质印迹技术(Western Blot)检测ZK 93426对小鼠精子和人精子获能相关的酪氨酸磷酸化的影响;运用Western Blot检测ZK 93426在正常以及缺少HCO3-,BSA,Ca~(2+)的获能缓冲液(modified Krebs-Ringer bicarbonate medium,HMB)中对获能的作用;选取精子特异钙离子通道CatSper抑制剂NNC 55-0396及PKA通路抑制剂H89进一步探索ZK 93426对于精子获能的机制。结果 ZK 93426对小鼠精子和人精子获能相关蛋白酪氨酸磷酸化均有促进作用,且在缺少Ca~(2+)的获能缓冲液中具有更明显的促进蛋白酪氨酸磷酸化作用。NNC 55-0396不会抑制ZK 93426对于获能相关的酪氨酸磷酸化的促进作用,而PKA抑制剂H89可抑制其作用。结论 ZK 93426对精子获能相关的蛋白酪氨酸磷酸化的促进作用不依赖CatSper通道,可能通过作用于PKA通路的上游发挥相应的作用。     

白藜芦醇对人精子冷冻损伤的保护作用

目的:通过在人精子冷冻保护液中添加白藜芦醇,研究其对冻融后精子质量和功能的影响。方法:选择正常精液与少弱精子症样本各50例,液化后的精液样本分别与甘油-卵黄-柠檬酸盐(GEYC)冷冻保护液或含有30μmol/L白藜芦醇的GEYC冷冻保护液混匀。冷冻复苏前后,进行精子活力、存活率及顶体反应分析。采用丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)检测试剂盒评估精子脂质过氧化程度及ROS水平。通过罗丹明123(Rh123)染色法及TUNEL试验检测精子线粒体膜电位及DNA损伤。结果:在正常精液和少弱精子症样本组中,与各组冷冻前新鲜精液相比,冻融后前向运动精子百分率、总活力、存活率、线粒体膜电位及顶体反应率均显著下降(P0.05),而精子ROS、MDA水平和DNA碎片指数(DFI)均显著升高(P0.05)。冷冻保护液中添加30μmol/L白藜芦醇后,正常精液组前向运动精子百分率[(43.1±6.3)%]、总活力[(56.9±7.4)%]、存活率[(67.5±5.6)%]、线粒体膜电位[(63.4±7.5)%]及顶体反应百分率[(26.3±4.7)%]较冷冻对照(未加白藜芦醇)的前向运动精子百分率[(32.7±4.8)%]、总活力[(44.8±6.9)%]、存活率[(52.3±6.1)%]、线粒体膜电位[(56.5±7.0)%]及顶体反应百分率[(16.6±3.8)%]均显著提高(P0.05),而精子ROS、MDA水平和DFI较冷冻对照均显著降低(P0.05)。在少弱精子症组中,添加白藜芦醇也均显著地提高了冷冻后精子前向运动百分率、总活力百分率、存活率、线粒体膜电位及顶体反应百分率,尤其是DFI[28.5±4.8)%]较冷冻对照[(36.3±5.7)%]显著降低(P0.01)。结论:在精液冷冻保护液中添加白藜芦醇可以通过降低精子内ROS水平减少精子冷冻损伤,从而改善解冻后精子质量和功能。     

IVOS Ⅱ与SCA精子质量分析仪对精液检测结果的比较研究

目的:比较Hamilton-Thorn IVOSⅡ全自动精子质量分析仪(IVOSⅡ)及西班牙SCA全自动精子质量分析仪(SCA)的计算机辅助精液分析(CASA)系统对精液参数检验结果的差异性。方法:收集2018年9～10月99例就诊患者的精液标本,根据精子浓度分为3组:A组(15×10~6/ml)、B组[(15～50)×10~6/ml]和C组(50×10~6/ml)。采用IVOSⅡ、SCA及显微镜人工方法对同一精液标本同时检测,比较IVOSⅡ和SCA对精子浓度、前向运动精子百分率及活率检测的一致性以及重复性。结果:IVOSⅡ与SCA对A组精子浓度的检测结果显著高于显微镜人工方法[(10.24±4.60)×10~6/ml、(10.20±5.11)×10~6/ml vs(8.45±4.15)×10~6/ml,P0.05],但是IVOSⅡ与SCA对B组[(30.95±11.84)×10~6/ml、(31.81±12.90)×10~6/ml vs(29.14±10.65)×10~6/ml]以及C组[(102.14±45.97)×10~6/ml、(109.48±46.32)×10~6/ml vs(104.74±41.87)×10~6/ml]精子浓度的检测结果与显微镜人工方法相比无统计学差异(P0.05)。IVOSⅡ与SCA分别对B组的前向运动精子百分率[(24.21±14.62)%vs(23.92±15.42)%]与活率[(37.48±19.34)%vs(37.69±16.61)%]以及C组的前向运动精子百分率[(30.80±12.06)%vs(32.98±16.10)%)]与活率[(44.50±15.62)%vs(47.26±17.46)%)]的检测结果差异无统计学意义(P0.05),然而IVOSⅡ对A组的前向运动精子百分率[(18.54±12.96)%vs(22.90±12.88)%]与活率[(26.97±14.05)%vs(34.90±15.18)%]的检测结果显著低于SCA(P0.05)。SCA及IVOSⅡ对精子浓度、前向运动精子百分率、活率检测结果均具有良好的重复性(CV值均15%)。结论:IVOSⅡ与SCA精子质量分析仪对精子浓度、前向运动精子百分率和活率的检测结果均有较好的一致性,但对于低浓度精液的精子浓度、前向运动精子百分率和活率的检测结果可比性较差。     

镉离子对公牛精子功能损伤的机制

目的:重金属比如镉(Cd)作为工业污染物广泛分布在环境中,研究人员已经鉴定了这些污染物能影响男性生殖系统。本文研究的目的是测试Cd在10~1000μmol/L的浓度范围在体外对荷斯坦(Holstein)公牛精子膜和DNA完整性、活动率和精子顶体胞吐能力的影响。方法:用PBS处理公牛精液样本后进行精液分析。脂质过氧化试验评估精子膜完整性。明胶消化试验测定公牛精子顶体胞吐作用的能力。单细胞凝胶电泳(SCGE)检测单个细胞内DNA断裂和不耐碱的破坏。结果:脂质过氧化(LPO)显著增加,表明了Cd对精子膜完整性的破坏作用。这种影响在Cd浓度为1000μmol/L时特别明显。LPO与活动精子百分率之间呈负相关(r=-0.94,P<0.001)。明胶消化试验表明Cd引起公牛精子顶体胞吐作用的百分率下降。发现在LPO率和消化环百分率之间呈负相关(r=-0.97,P<0.001)。彗星试验获得的数据表明Cd能诱导精子核中的DNA断裂。接近93%的DNA损伤为双股断裂。LPO氧化率与DNA断裂百分率之间的相关性为0.95(P<0.001)。结论:总体上,Cd诱导公牛精子膜损伤、活动率降低、DNA断裂、以及顶体反应率降低而导致精子功能损伤。进入雄性性腺和精浆的Cd可能对动物精子产生了破坏作用。     

禁欲时间对精子DNA损伤、形态及精液常规分析参数的影响

目的 探讨不同禁欲时间对精子DNA损伤、形态及精液常规分析参数的影响。方法 收集从2018年9月至2021年2月到东南大学附属中大医院生殖医学中心就诊的男性患者精液样本1 128例。采用CFT-9201型计算机辅助精子分析系统进行精液常规分析，包括精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率(PR)等主要参数；采用Diff-Quik染色法进行精子形态分析；采用精子染色质结构分析法(SCSA)检测精子DNA碎片指数(DFI)。结果 1 128例患者的禁欲时间为0～30天，中位数为3.0[3.0, 5.0];仅精子活动率呈正态分布(P=0.117),其余参数均呈非正态分布(P<0.01)。患者禁欲时间与精液量(r=0.21,P<0.01)、精子浓度(r=0.098,P<0.01)和精子DFI(r=0.068,P<0.05)均呈显著正相关，而与PR、精子活动率和正常形态精子百分率均呈负相关，但均无显著相关性(P>0.05)。精子DFI与精子浓度没有显著相关性(P>0.05),但与PR、精子活动率和正常形态精子百分率均呈显著负相关(P<0.01)。结论 随...     

精子DNA碎片指数与精液参数的相关性分析

目的:探讨精子DNA碎片指数(DFI)与精液参数的关系,并评价其在男性精子质量评估中的应用价值。方法:收集9 694例男性精液标本,采用流式细胞仪辅助的精子染色质结构分析法(SCSA)进行精子DFI和高DNA着色性(HDS)检测,根据WHO《人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)精液参数参考值标准分为正常组和异常组,异常组再依据精子浓度、精子总活率和前向运动精子百分率异常程度分为A组:精子浓度(11.3～14.0)×10~6/ml,精子总活率30%～39%,前向运动精子百分率24%～31%;B组:精子浓度(7.5～11.2)×10~6/ml,精子总活率20%～29%,前向运动精子百分率16%～23%;C组:精子浓度(3.8～7.4)×10~6/ml,精子总活率10%～19%,前向运动精子百分率8%～15%;D组:精子浓度(0～3.7)×10~6/ml,精子总活率0～9%,前向运动精子百分率0～7%;按照不同DFI值分为15%、15%～30%和30%3组。分析DFI与精液参数的关系。结果:正常组DFI均显著低于异常组及其亚组(P均0.01);各异常亚组(A、B、C、D组)随着精子指标的降低DFI逐渐升高(P0.01)。根据DFI分组,发现DFI与年龄、禁欲时间、精液体积、精液pH、精子浓度、精子总活率、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率以及HDS的差异均有统计学意义(P均0.01);相关性分析表明DFI与年龄、禁欲时间、精液体积和HDS存在正相关(r分别为0.15、0.10、0.05、0.15,P均0.01),而与精液pH、精子浓度、精子总活率、前向运动精子百分率和正常形态精子百分率存在负相关(r分别为-0.06、-0.27、-0.53、-0.52、-0.16,P均0.01)。多重线性回归分析表明精子总活率、精子浓度、年龄、禁欲时间和精液pH是与DFI相关的5个重要相关变量,标准化回归系数分别为-0.47、-0.19、0.12、0.07、-0.04,P均0.01。结论:DFI与精液参数存在中等相关性,二者可协同评估男性精子质量。     

男性不育患者精子DNA完整性与精浆氧化应激水平的关系及其对体外受精的影响

目的:探讨男性不育患者精子DNA完整性与精液常规参数、精浆氧化应激水平的关系,以及对体外受精(IVF)结局的影响。方法:采用精子染色质扩散法(SCD)检测433个IVF周期中精子DNA损伤性,根据精子DNA碎片指数(DFI)的不同,分为低DFI组(DFI30%)、高DFI组(DFI≥30%),比较2组精子浓度、前向运动精子百分率、快速前向运动精子百分率、精浆丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAC)水平及受精率、卵裂率、优胚率的差异。结果:高DFI组与低DFI组比较,前向运动精子百分率及快速前向运动精子百分率显著降低[(29.2±16.8)%vs(48.6±16.7)%、(9.4±6.6)%vs(19.0±9.1)%,P0.01],高DFI组精子浓度与低DFI组相比差异无显著性[(52.3±32.4)×106/ml vs(51.4±30.9)×106/ml,P0.05];高DFI组精浆中的MDA含量明显高于低DFI组[(2.28±0.26)nmol/L vs(0.95±0.18)nmol/L,P0.01],高DFI组精浆中的TAC含量明显低于低DFI组[(10.2±3.5)U/L vs(33.2±7.9)U/L,P0.01];高DFI组IVF受精率明显低于低DFI组[(58.9±30.0)%vs(77.2±25.0)%,P0.01],两组间卵裂率[(70.7±35.6)%vs(80.4±15.6]、优胚率[(40.4±31.3)%vs(41.7±29.4)]比较差异均无显著性(P均0.05)。结论:精子DNA损伤与氧化应激有关,同时精子DNA损伤可降低IVF受精率,影响IVF结局。     

哺乳动物精子膜获能和顶体反应相关结构及配体的研究进展

本文综述了哺乳动物精子获能和顶体反应过程中精子膜主要相关配体和受体。白蛋白从精子细胞膜脂质中除去胆固醇使得膜脂质结构和流动性发生了变化 ,从而使镶嵌在脂质中功能蛋白质的拓朴结构、膜通透性、膜电位发生了改变。孕酮与相应受体的结合通过开启配体依赖性钙离子通道 ,使精子细胞内钙离子浓度升高 ,在其它因素的综合作用下 ,使精子获能。ZP(卵子透明带 )通过与精子膜相应受体结合使得电压依赖性钙离子通道开放促进细胞外钙离子内流 ,并通过G蛋白介导 ,活化磷脂酶分解肌醇二磷酸产生IP3(肌醇三磷酸 ) ,IP3作用于顶体门控钙离子通道引起精子细胞内钙离子动员 ,使细胞内钙离子浓度急剧升高。位于鞭毛的环核甘酸门控钙离子通道在环核甘酸的作用下调节着鞭毛运动。环境获能相关因子与精子膜相关结构的作用使细胞内第二信使增加 ,PKA(蛋白激酶A)、PKC(蛋白激酶C)、酪氨酸激酶等激酶系统活化通过酶促链锁反应使顶体酶系激活 ,引起了顶体反应和精卵融合。蛋白质酪氨酸磷酸化是孕酮、ZP3等生理因子和配体结合后引发的蛋白质主要活化形式。自由基在精子获能和顶体反应过程中起着重要的分子信号作用     

不同浓度的蔗糖溶液快速冻存人类精子的实验研究

目的:探讨使用非渗透性冷冻保护剂蔗糖快速冻存人类精子的可行性。方法:收集正常精液标本40份,经上游法处理后,收集上游精子悬液,分成6份,1份作为对照,其余5份分别用常规精子冷冻法,0.15、0.20、0.25、0.30 mol/L蔗糖溶液冷冻精子,复苏后比较6组精子活动率、前向运动精子活动率及精子质膜完整性。结果:所有冷冻组复苏后精子活动率、前向运动精子活动率及膜完整率与冷冻前上游组(96.2±1.8)%,(93.8±2.8)%,(99.0±0.8)%比较均显著下降,差异有显著性(P<0.05)。精子活动率结果:蔗糖冷冻组之间比较,0.20 mol/L组解冻后精子活动率高于0.15、0.25、0.30 mol/L组,分别为(55.5±6.3)%、(45.9±6.6)%、(50.4±9.4)%、(45.5±11.2)%,差异有显著性(P<0.05)。0.20、0.25 mol/L蔗糖冷冻组与常规慢速冷冻组(53.6±5.0)%比较,差异均无显著性(P>0.05);0.15、0.30 mol/L蔗糖组均低于常规慢速冷冻组(P<0.05)。前向运动精子活动率结果:0.20 mol/L蔗糖冷冻组与常规冷冻组比较差异无显著性[(44.4±7.4)%vs(42.3±8.1)%,P>0.05];以上两组均高于0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组,分别为(37.1±8.3)%、(33.1±9.2)%、(22.0±9.1)%,差异有显著性(P<0.05)。精子膜完整率结果:0.20 mol/L蔗糖冷冻组(70.1±6.9)%高于常规冷冻组、0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组,分别为(63.1±6.8)%、(57.7±8.3)%、(63.5±10.7)%、(57.8±12.9)%,差异有显著性(P<0.05);常规冷冻组与0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:终浓度为0.20 mol/L的蔗糖溶液作为人类精子冷冻保护剂是可行的,快速冷冻方法简便、快速、经济、安全有效。     

钙通道拮抗剂体外对人精子运动参数的影响

目的　探讨钙通道拮抗剂在体外对人精子运动参数的影响。方法　将不同类型的钙通道拮抗剂在体外与生育男性经上游优化处理的精子分别共同孵育 10、2 0、3 0、60min ,与正常组进行对照研究。采用计算机辅助精子分析系统检测人精子运动参数 (精子活率、精子前向运动百分率、畸形率、平均路径速度、精子侧摆幅度和摆动幅度 )。结果　硝苯地平 (10 μmol/L)在体外对精子活率 (P <0 .0 1)、精子前向运动百分率 (P <0 .0 1)、精子平均路径速度 (P <0 .0 0 1)、精子侧摆幅度 (P <0 .0 1)和摆动幅度 (P <0 .0 1)等指标的差异有非常显著性。结论　人精子细胞中存在L 型电压依赖性钙通道 ,且L 型钙通道拮抗剂可导致男性不育。     

人卵泡液诱导的顶体反应、精子形态与体外受精率的关系

目的:探讨人卵泡液诱导的顶体反应、精子形态及体外受精率3者之间的相互关系。方法:应用Spearm an法对79对不育患者的人卵泡液诱导的顶体反应、精子形态(采用结晶紫染色及精子形态严格分类标准)及体外受精率等指标进行等级相关分析。结果:人卵泡液诱导的顶体反应率与正常形态精子百分率之间存在极显著正相关(n=49,r=0.376 3,P<0.01),但人卵泡液诱导的顶体反应率与体外受精率以及正常形态精子百分率与体外受精率之间均未见显著相关性(n分别为21和50,r分别为0.266 6和0.001 8,P均>0.05)。结论:人卵泡液诱导的顶体反应率与正常形态精子百分率之间存在极显著正相关,但两者与体外受精率之间均未见显著相关性。     

硝普钠对人精子获能及顶体反应的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对人精子获能及顶体反应(AR)的影响。方法:在48例健康生育男性的精子悬液中加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP),于37℃孵育1h获能,用孕酮诱导AR15、30、45、60min,采用磷酸苯二钠法分别检测精子获能前后及AR各时间点的精子悬液上清中酸性磷酸酶(ACP),同时用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子运动参数,观察NO对精子获能及AR的作用。结果:NO浓度在50、100nmol/L时精子悬液中ACP活性增高,精子运动参数明显增强,150、200nmol/L时ACP活性及精子运动参数变化不大,250、300nmol/L时精子悬液中ACP活性和精子运动参数明显降低。结论:NO对精子获能和AR具有双重性,在低浓度下有促进精子获能、AR和精子运动参数增强的作用,而在高浓度下对精子获能、AR和精子运动参数有抑制作用。精子ACP检测对精子群体获能和AR状态的评价是种较为客观、可靠的方法。     

孕酮对正常生育和不明原因不育男性精子细胞内游离Ca~(2+)浓度的影响

目的:比较正常生育男性和不明原因不育男性患者精子细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)对孕酮(P)的反应性。方法:选择10例不明原因不育男性患者和9例正常生育男性,用上游法分离活力良好的精子并于体外获能2 h,将获能后精子与8.85μmol/L钙荧光探针Fluo-3/AM避光孵育40 min负载,将负载后的精子悬液与等量20%明胶混匀以制动精子,然后在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察单个精子头部的[Ca2+]i基础水平以及10μmol/L P刺激对[Ca2+]i的影响。结果:不育组获能2 h后精子的[Ca2+]i基础水平显著低于生育组(P<0.01)。生育组精子经10μmol/L P刺激后,产生快速而短暂的[Ca2+]i升高,[Ca2+]i峰值水平显著高于其基础水平(P<0.05);而不育组精子经P刺激后,[Ca2+]i仅有微弱增加,其峰值水平与基础水平相比无统计学差异(P>0.05)。生育组由P激发的精子[Ca2+]i峰值水平以及[Ca2+]i升高幅度(峰值水平与基础水平之差)均显著高于不育组(P<0.01)。结论:不明原因不育男性患者精子[Ca2+]i对P的反应性降低,提示这些患者精子膜上负责Ca2+内流的非基因型孕激素受体可能存在功能障碍。