Drp1介导的线粒体动力学平衡在脓毒症心肌细胞损伤的机制研究

目的分析抑制动态相关蛋白1(dynamin related protein 1, Drp1)介导的线粒体过度分裂对脓毒症心肌细胞和线粒体功能的影响, 探讨维持线粒体动力学平衡在脓毒症心肌病(sepsis induced cardiomyopathy, SIC)发病过程中的保护作用。方法培养大鼠H9C2心肌细胞, 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激细胞建立SIC细胞模型, LPS刺激30 min前予线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor 1, Mdivi-1)干预, 分为对照组(Control)、LPS刺激组(LPS)、Mdivi-1对照组(Mdivi-1)和LPS+Mdivi-1干预组(LPS+Mdivi-1)。CCK-8检测细胞存活率, 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)检测细胞损伤情况, MitoTracker探针染色激光共聚焦观察线粒体形态, JC-1探针染色检测线粒体膜电位水平, DCFH-DA探针检测细胞总活性氧(ROS)水平, Annexin V-FITC/PI探针流式细胞...     

肺上皮细胞线粒体功能障碍在机械通气肺损伤中的作用机制

目的 探讨肺上皮细胞线粒体功能障碍在机械通气肺损伤中的作用机制。方法 以RLE-6TN细胞和呼吸机所致肺损伤(VILI)模型大鼠为实验对象。体外培养RLE-6TN细胞至传代稳定,建立大鼠VILI模型,机械通气4 h后取出肺组织,采用ELISA法检测上清液中炎症因子浓度,采用透射电镜观察线粒体形态,采用Western blot法检测肺组织线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、细胞质中Drp1和线粒体融合蛋白(Mfn2)的蛋白含量,采用琥珀酸脱氢酶(SDH)试剂盒检测SDH活力,采用荧光显微镜观察活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)水平。建立大鼠VILI模型,机械通气4 h后,取出肺组织,采用HE染色法观察肺组织病理学变化,测定肺组织湿干质量比值(W/D),其余方法和体外实验相同。结果 体外实验中,与对照组比较,机械牵张引起RLE-6TN细胞炎症因子表达、线粒体ROS水平升高,MMP下降,线粒体形态异常、线粒体嵴模糊,Drp1表达增加和Mfn2表达减少。体内实验中,与对照组比较,机械通气引起大鼠肺组织病理结构改变显著,肺损伤评分、W/D比值、炎症因子表达、线粒体ROS水平均显著增加,M...     

脓毒症对肝脏线粒体膜损伤机制的实验研究

目的 探讨脓毒症对实验动物肝脏线粒体功能及结构的损伤机制.方法 36只新西兰兔随机分成对照组、脓毒症组和脓毒症休克组,分别予生理盐水、脂多糖(LPS)1 mg/kg、LPS 2mg/kg静脉注射,制备脓毒症和脓毒症休克实验动物模型后提取肝脏线粒体,检测丙二醛(MDA)含量、ATP酶活性、线粒体肿胀程度和线粒体膜电位变化,同时观察肝脏线粒体超微结构变化.结果 脓毒症组较对照组肝脏组织水肿加重,电镜见线粒体肿胀和膜增厚、MDA含量增高、ATP酶活性降低、线粒体膜流动性减低、膜电位差减小,且脓毒症休克组这些变化更加明显.结论 脓毒症实验动物肝细胞线粒体膜脂质过氧化、抑制线粒体膜ATP酶活性、降低跨膜电位,使线粒体结构和功能受损,导致肝功能障碍.     

硫氢化钠对脓毒症小鼠心肌细胞PGC-1α和Nrf2水平的影响北大核心CSCD

脓毒症是一种由于外界病原微生物感染所造成的严重全身性炎症反应综合征,可快速发展为严重脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfimction syndrome,MODS）,是导致全世界感染患者致死致残的重要因素。     

氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究

目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型,分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡：CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;确定最佳诱导浓度600μmol／L后,分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达;确定最佳诱导时间后,用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol／LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果：在600～1200μmo1／L浓度范围内,CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol／LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡．诱导12～48h范围内．12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高：100～1200μmoI／LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h．其中600μmol／LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论：CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol／L．此时最佳时间为12h。     

脓毒症患者膈肌功能障碍的床旁超声评估的应用价值研究北大核心CSCD

目的探讨脓毒症及感染性休克患者膈肌功能障碍的危险因素及床旁超声评估的应用价值。方法前瞻性收集2020年1月至2021年5月入住宁夏医科大学总医院重症医学科(ICU)脓毒症及感染性休克患者作为研究对象,选择普通术后患者及健康志愿者作为术后对照组与正常对照组。收集一般临床资料,动态观察脓毒症及感染性休克患者超敏C反应蛋白(high sensitive c-reactive protein,hs-CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血清白蛋白、转铁蛋白、前白蛋白水平、血乳酸、动静脉二氧化碳分压差、中心静脉血氧饱和度等指标。并用间接测热法测量静息能量水平计算能量缺失值,床旁超声评估膈肌移动度(diaphragm excursion,DE)、吸气末膈肌厚度及呼气末膈肌厚度,计算相关参数。DE<10 mm或膈肌增厚分数(diaphragmatic thickness fraction,DTF)<20%诊断为膈肌功能障碍。结果⑴感染性休克组、脓毒症组及术后对照组三组患者入ICU第1天,DE均低于正常对照组[10.3(9.0,13.6)mm、12.3(9.1,15.0)mm、12.9(10.5,15.7)mm vs.22.0(16.0,24.6)mm,均P<0.05];DTF<20%发生率均高于正常对照组(32.7%、41.9%、33.3%vs.0%,均P<0.05);且感染性休克组和脓毒症组DE<10 mm发生率均高于术后对照组和正常对照组(分别为36.7%、35.5%vs.10.0%、0%,均P<0.05)。入ICU第7天,感染性休克组DE较脓毒症组减低[10.5(6.8,13.5)mm vs.14.4(10.6,18.6)mm,P<0.05]。⑵各指标相关性分析:脓毒症和感染性休克患者入ICU第1、3、7天的DE均与当天的hs-CRP呈负相关(r值分别为-0.253、-0.436、-0.455,均P<0.05);入ICU第3天,DE还与IL-6呈负相关(r=-0.338,P=0.009),且DTF与hs-CRP呈负相关(r=-0.375,P=0.004)。入ICU第1天,脓毒症和感染性休克患者DTF与转铁蛋白呈正相关(r=0.221,P=0.049)。入ICU第3、7天,其DE与前白蛋白呈正相关(r值分别为0.318、0.408,均P<0.05)。结论脓毒症和感染性休克患者入住ICU首日已出现膈肌功能障碍,主要表现为膈肌移动度及膈肌增厚分数减低,且与炎症反应和蛋白质高分解代谢程度相关。     

Uqcrc1的 RNA 干扰片段筛选及其对 H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧损伤的影响

目的：筛选泛醇-细胞色素c还原酶核心蛋白（Ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1, Uqcrc1）高效的 RNA 干扰片段,探讨 Uqcrc1基因沉默对大鼠 H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的影响。方法制备三种针对Uqcrc1的RNA干扰片段,采用RT-PCR和Western blot检测Uqcrc1 RNA干扰片段转染后Uqcrc1基因和蛋白的表达,从中筛选出最有效的RNA干扰片段及转染浓度,采用MTT法和LDH试剂盒分别检测H/R损伤后H9C2心肌细胞的存活率和LDH漏出率。结果靶序列为CCGUUGCUGUAGCUAACAAdTdT的siUqcrc1片段对Uqcrc1 mRNA的抑制作用最明显,在转染浓度为200 nmol/L时对Uqcrc1蛋白表达抑制最明显。靶向Uqcrc1的RNA干扰片段转染降低了H9C2心肌细胞耐受H/R损伤的能力。与阴性对照组相比,Uqcrc1基因沉默组H9C2心肌细胞H/R损伤后的存活率显著降低,LDH漏出率升高（P＜0.01）。结论 Uqcrc1在心肌细胞耐受H/R损伤中起了重要作用,它可能是心肌保护的又一个关键靶点。     

Caspase-1介导的细胞焦亡在脓毒症小鼠急性肺损伤的作用北大核心CSCD

脓毒症为人类健康的重大威胁之一,全球每年有上百万脓毒症患者,其中约1/4脓毒症患者因此丧生。脓毒症是由宿主对感染反应失控导致危及生命的器官功能障碍,其中脓毒症相关性肺损伤被认为是常见的严重并发症。急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征是脓毒症患者脏器功能障碍和死亡的独立危险因素。细胞焦亡(pyroptosis)是近年新发现的一种伴随炎症反应的细胞程序性死亡方式,可引起强烈的炎症反应,可能是脓毒症相关性肺损伤发生时的早期事件。本研究旨在初步探索Caspase-1介导的细胞焦亡在脓毒症相关性肺损伤发病过程中的作用及部分机制,以对该疾病的发生发展作进一步的认识,为防治该疾病提供新的干预靶点和理论依据。     

丹红注射液对脓毒症致急性肾损伤小鼠肾组织线粒体损伤和HMGB1表达水平的影响

目的探讨丹红注射液对脓毒症致急性肾损伤(AKI)小鼠肾组织线粒体损伤和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平的影响。方法将50只小鼠随机分为假手术组、模型组和丹红高、中、低剂量组各10只。假手术组仅打开腹腔,暴露盲肠,不进行结扎。模型组和丹红组采用盲肠结扎穿孔手术法制作小鼠脓毒症模型。术后即刻,丹红高、中、低剂量组分别腹腔注射剂量为10 ml/kg、5 ml/kg和2 ml/kg的丹红注射液,模型组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水。术后24 h,生化分析仪测定血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,HE染色观察肾组织的病理变化和肾组织损伤评分,测定肾组织线粒体中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、Ca~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶活性,检测肾组织三磷酸腺苷(ATP)水平; Western blot检测肾组织HMGB1、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠的肾组织损伤评分、BUN、Scr和MDA水平均明显升高(P 0. 05),ATP含量、Ca~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶、SOD活性和GSH-Px活性均明显下降(P0. 05),HMGB1和Bax的表达明显升高(P 0. 05),Bcl-2的表达明显下降(P 0. 05);与模型组相比,丹红低、中、高剂量组小鼠的肾组织损伤评分、BUN、Scr和MDA水平均明显下降(P 0. 05),ATP含量、Ca~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶、SOD活性和GSH-Px活性均明显升高(P 0. 05),HMGB1和Bax的表达明显下降(P 0. 05),Bcl-2的表达明显升高(P 0. 05),且随着剂量增加,其作用逐渐增强(P 0. 05)。结论丹红注射液可呈剂量依赖性抑制HMGB1的表达,保护线粒体结构和功能障碍,减轻脓毒症致AKI肾组织损伤。     

血清可溶性ST2对脓毒症预后的判断价值研究北大核心CSCD

目的通过测定血清可溶性ST2（soluble ST2,sST2）浓度,探讨其对脓毒症患者预后的判断价值。方法收集北京医院急诊科脓毒症患者63例,并选择30例健康体健人员作为对照组,采用ELISA法分别测定其血清sST2浓度,根据是否伴有休克分为普通脓毒症组（44例）及脓毒性休克组（19例）,根据脓毒症确诊28d后结局分为死亡组（18例）与存活组（45例）,记录入组时患者每分钟呼吸频率、氧合指数、白细胞计数、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、血肌酐、血清总胆红素等资料。统计处理采用SPSS23．0软件。计量资料采取成组t检验,计数资料采取矿检验,对生存状况进行Logistic二元回归分析及ROC曲线分析。结果脓毒症组患者血清sST2水平（1382．12±384．07）pg／mL明显高于对照组（569．28±163．46）pg／mL（P〈0．05）,脓毒性休克组sST2水平（1675．49±457．59）pg／mL较普通脓毒症组（1255．44±265．70）pg／mL高（P〈0．05）;脓毒性休克组28d病死率（63．16％）明显高于普通脓毒症组（13．64％）（P〈0．05）。28d结局死亡组病例的PCT（16．37±16．36）ng／mL及血清sST2（1794．47±335．18）pg／mL均比之存活组升高（P〈0．05oROC曲线分析示sST2的AUC（0．917）大于PCT（0．884）,敏感度（88．9％）高于PCT（72．2％）,特异度（82．2％）低于PCT（93．3％）,二者联合其AUC为0．944。结论血清sST2对脓毒症有一定的辅助诊断价值,并且可用来判断脓毒症患者预后。PCT和血清sST2对评估患者不良结局有一定的意义,与PCT相比,sST2对脓毒症预后的判定敏感度更高,特异度不足,二者联合判断可能更有意义。     

N-乙酰半胱氨酸上调Sirtuin 3蛋白表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)调控沉默信息调节因子3(Sirt3)对脓毒症致小鼠急性肾损伤(AKI)的保护作用及其机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机(随机数字法)分为假手术组(Sham)、盲肠结扎和穿孔术组(CLP)CLP+NAC(50 mg/kg)和CLP+NAC(100mg/kg)组,每组10只;CLP造模后24h处死小鼠,留取血液和肾组织样本;采用HE染色法评估各组小鼠肾组织病理损伤;ELISA法检测血清中肌酐(Scr)尿素氮(BUN)、肾损伤分子1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)水平;采用免疫组织化学检测肾组织Sirt3蛋白表达;RT-qPCR法测定Sirt3 mRNA水平;透射电镜下观察肾小管上皮细胞线粒体损伤情况,并计算线粒体密度,同时检测肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平。结果与Sham组相比,CLP导致肾组织病理损伤明显加重(P<0.001),肾功能指标Scr、BUN、KIM-1和NGAL水平均明显升高(均P<0.001),肾组织Sirt3蛋白和mRNA表达均显著降低(均P<0.001),肾小管上皮细胞线粒体结构破坏增加,线粒体密度的明显减低(P<0.001),肾皮质中抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT水平均显著降低(均P<0.001),同时脂质过氧化物MDA显著升高(P<0.001)。与CLP组相比,虽然50 mg/kg NAC预处理组肾损伤评分、肾功能指标Scr、BUN、KIM-1和NGAL水平均有所降低,肾组织中SOD,GSH-Px和CAT的水平均有所升高,但差异无统计学意义。然而,给予100 mg/kg NAC预处理可显著降低CLP引起的肾组织病理损伤(P<0.001),并且均明显降低Scr、BUN、KIM-1和NGAL水平(均P<0.001),显著升高肾组织Sirt3蛋白[(50.20±2.79)vs.(20.00±0.75),P<0.001]和mRNA[(0.57±0.07)vs.(0.41±0.07),P<0.001]表达水平,肾小管上皮细胞线粒体结构更加稳定,线粒体密度明显增加[(0.60±0.05)vs.(0.43±0.06),P<0.001],均显著升高SOD(U/mg)[(67.37±3.79)vs.(21.09±0.89),P<0.001]、GSH-Px(U/mg)[(265.61±9.61)vs.(180.00±3.31),P<0.001]和CAT(U/mg)[(8.58±0.65)vs.(5.19±0.58),P<0.001]水平,同时明显降低MDA(U/mg)表达水平[(40.36±1.79)vs.(83.81±1.70),P<0.001]。结论NAC可通过上调Sirt3蛋白表达显著降低脓毒症小鼠肾组织病理损伤、改善肾功能、维持线粒体结构稳定和降低氧化应激水平,对CLP诱发AKI具有显著的保护作用。     

蛋白C-1641A/-1654C单倍型与脓毒症凝血功能的相关性研究北大核心CSCD

目的探讨蛋白C -1641A/-1654C单倍型与中国汉族脓毒症患者凝血功能紊乱的相关性。方法采用直接测序法检测脓毒症患者蛋白C -1641A>G (rs1799809)和-1654C>T(rs1799808)位点的基因型, 分析其单倍型并根据单倍型分为两组, -1641A/-1654C(简称AC)单倍型携带者和非AC单倍型携带者。同时, 采用非配对t检验或Mann-WhitneyU检验进行分析, 比较两组间凝血/纤溶参数, 包括部分活化凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶原时间国际标准化比值、凝血酶时间、纤维蛋白原和D -二聚体等, 以及APC水平的差异。结果本研究共纳入174例脓毒症患者, 其中60例为AC单倍型携带者, 114例为非AC单倍型携带者。与非AC单倍型携带者相比, AC单倍型携带者的血小板计数明显减少, 部分活化凝血活酶时间明显延长, 蛋白C活化显著降低, 而其他凝血/纤溶参数包括凝血酶原时间、凝血酶原时间国际标准化比值、凝血酶时间、纤维蛋白原和D -二聚体差异无统计学意义。结论本研究发现蛋白C -1641A/-1654C单倍型导致脓毒症患者循环中的活化蛋白C水平降低、血小板计数减少, 部分活化凝血活酶时间延长。该结果表明, 脓毒症患者蛋白C -1641A/-1654C单倍型可能直接影响活化蛋白C水平, 进而导致脓毒症凝血功能紊乱。     

腺苷A1受体基因敲除小鼠致痫后海马神经细胞线粒体功能损伤的研究

目的:观察腺苷A1受体基因敲除小鼠戊四氮致痫后海马神经细胞线粒体功能的损伤。方法:腺苷A1受体基因敲除小鼠和野生型小鼠各30只,各随机分为对照组、致痫后6h、24h、7d、30d组,每组6只;戊四氮点燃制作癫痫模型;于各时间点取小鼠海马,流式细胞仪测线粒体膜电位,免疫荧光测细胞色素C(cyt C)的表达。结果:基因敲除小鼠和野生型小鼠致痫后6h、24h、7d及30d组的线粒体膜电位均低于对照组(P<0.05),cyt C释放量均高于对照组(P<0.05);除对照组外,基因敲除小鼠致痫后6h、24h、7d及30d组的线粒体膜电位均低于野生型小鼠(P<0.05),cyt C释放量均高于野生型小鼠(P<0.05)。结论:癫痫早期即可出现海马线粒体功能损伤,腺苷A1受体有助于减轻癫痫小鼠海马线粒体损伤。     

人参总皂苷经HIF-1α/HO-1信号通路减轻脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究

目的观察人参总皂苷(TG)对脓毒症心肌损伤(SMI)大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的调控作用,探究其治疗SMI的作用机制。方法SD雄性大鼠给予内毒素+脂多糖诱导建立大鼠SMI模型,随机分为模型组(SMI组),TG低(20mg/kg)、中(40 mg/kg)、高(60 mg/kg)剂量组和乌司他丁阳性对照组(阳性组,10 000 U/kg)组,每组10只。另取10只,给予生理盐水设置为正常对照组(Normal组)。观察各组大鼠毛发、活动、精神状态等一般行为后,麻醉处死,取血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠心功能指标心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平及血清炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素-8(IL-8)含量;取心脏组织,用苏木精-伊红试剂(HE)染色观察心脏组织病理损伤形态;用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测心脏组织HIF-1αmRNA、HO-1mRNA相对表达水平;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心脏组织HIF-1α、HO-1、IL-8及TNF-α蛋白相对表达水平。结果与Normal组比较,SMI组大鼠出现精神萎靡、毛发松乱、活动减少、眼睑部出现黏稠分泌物等脓毒症表现,心肌细胞水肿、坏死、炎性浸润等病理损伤现象明显,血清TNF-α、IL-8、cTnI、CK-MB含量和心肌组织HIF-1αmRNA及蛋白、HO-1 mRNA及蛋白、IL-8及TNF-α蛋白表达升高(P <0.05)。与SMI组比较,TG低、中、高剂量组及阳性组大鼠心肌组织HIF-1αmRNA及蛋白、HO-1 mRNA及蛋白表达升高(P <0.05),脓毒症表现改善,病理损伤现象减弱,血清cTnI、CK-MB含量以及血清及组织中IL-8和TNF-α表达降低(P <0.05),且TG各剂量组上述指标改善呈剂量依赖性。与TG高剂量组比较,阳性组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TG可激活HIF-1α、HO-1基因及蛋白表达,抑制炎症反应,改善SMI大鼠心肌损伤。     

LncRNA JHDM1D-AS1 对MPP+ 诱导的帕金森细胞模型线粒体功能的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA, LncRNA) JHDM1D 反义RNA 1( JHDM1D antisense RNA1,JHDM1D-AS1) 对帕金森细胞模型线粒体功能的影响及分子机制。方法 采用1- 甲基-4- 苯基吡啶离子（MPP+）处理 SH-SY5Y 细胞构建帕金森细胞模型,记为MPP+ 组,正常细胞作为对照组（control 组）。将JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA 分别转染至MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞中,利用RT-PCR 检测JHDM1D-AS1 表达。流式细胞技术分析JHDM1D-AS1 表达对SH-SY5Y 细胞凋亡、线粒体膜电位及活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量的影响。Western blot 实验分析JHDM1D-AS1 表达对沉默调节蛋白1（SIRT1）表达的影响,并利用双荧光素酶报告验证两者的靶向关系。使用SIRT1 激活剂 Resveratrol 对转染JHDM1D-AS1 mimic 的细胞进一步处理,证实JHDM1D-AS1 调控SIRT1 对帕金森细胞线粒体的影响。结果 control 组JHDM1D-AS1 相对表达为0.85±0.21,MPP+ 模型组JHDM1DAS1相对表达为1.25±0.33,较control 组增加,差异有统计学意义（t=62.017,P ＜ 0.05）。转染JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA 序列后,JHDM1D-AS1 相对表达分别为1.63±0.38 和0.72±0.17,与MPP+ 组比较差异有统计学意义（F=112.035,P ＜ 0.05）。MPP+ 组细胞凋亡率为17.64%,JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA 组细胞凋亡率分别为25.92% 和10.74%,差异有统计学意义（F=49.052,P ＜ 0.05）。MPP+ 组绿色荧光强度为22.20%,JHDM1D-AS1-mimic 和JHDM1D-AS1siRNA 组绿色荧光强度分别为43.97% 和10.65%,差异有统计学意义（F=57.390,P ＜ 0.05）。流式结果显示,MPP+ 组相对荧光强度为27.58%±4.25%,JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA组相对荧光强度分别为45.10%±6.05% 和14.82%±3.70%,差异有统计学意义（F=25.794,P ＜ 0.05）。Control 组SIRTI 蛋白表达为1.00±0.23,MPP+ 模型组SIRT1 表达下调为0.70±0.27,差异有统计学意义（t=35.740,P ＜ 0.05）。转染JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA 后,SIRT1 表达分别为0.44±0.16 和1.34±0.22,与MPP+ 组比较差异有统计学意义（F=29.508,P ＜ 0.05）。Target Scan 软件预测,JHDM1D-AS1 与SIRT1 序列存在结合位点,双荧光素酶实验显示,JHDM1D-AS1 过表达可降低WT- SIRT1 荧光素酶活性。JHDM1D-AS1 过表达时线粒体膜电位降低,SIRT1 激活过表达时线粒体膜电位升高,转染 JHDM1D-AS1 mimic 并激活 SIRT1 后线粒体膜电位水平回升。结论 沉默JHDM1D-AS1 表达可抑制MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡,其作用机制可能与JHDM1D-AS1 靶向调控SIRT1,进而影响帕金森细胞模型线粒体功能有关。     

电针百会、神庭调控BNIP3L介导的线粒体自噬和减轻脑缺血再灌注损伤的机制研究CSCD

目的:探讨电针百会、神庭调节线粒体自噬减轻脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:采用随机数字表法将60只SD大鼠随机分为假手术组15只和手术组45只。假手术组只分离、暴露血管,不结扎,不插入尼龙线。手术组大鼠采用大脑中动脉线栓阻塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注(I/R)模型,术后2 h采用Zea Longa法进行神经功能评分,最终纳入30只手术组大鼠。进一步将纳入的手术组大鼠随机分为模型组、电针组和电针+3-MA组,每组10只。造模分组成功后,各组给予电针等相应方式干预7 d,采用Zea Longa法于第1天、第3天、第5天、第7天再次进行神经功能评估。干预7 d后获取各组大鼠左侧大脑皮层组织,苏木精-伊红(HE)染色后观察脑组织病理学变化,Western blot法检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平,组织免疫荧光技术检测线粒体自噬相关蛋白表达共定位情况(BNIP3L和SQSTM1标记),TUNEL法检测各组大鼠神经细胞凋亡水平。结果:(1)造模2 h后手术组大鼠神经功能评分均显著升高,假手术组大鼠未表现出神经功能缺损症状,评分均为0分。干预后第7天模型组及电针+3-MA组大鼠神经功能评分仍显著升高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。而电针组大鼠在电针干预后神经功能评分显著降低,与模型组及电针+3-MA组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色结果可见,假手术组神经元胞体较大,多角形(多个突起),核着色浅,胞质可见特征性结构尼氏体;模型组神经元皱缩,胞质结构不清,胞浆嗜依红染色增强,尼氏体边聚或消失,核固缩,有的胞体变形缩小,呈三角形,细胞周围间隙增宽;电针组可以在一定程度上减轻缺血再灌注所致的病理损伤。(3)Western blot结果表明,MCAO后第7天模型组自噬水平(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)下降,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);电针组可以激活自噬水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)模型组中皮质梗死区域线粒体自噬水平缺失,表现为红色荧光和绿色荧光强度减弱,而电针干预可以激活梗死区域神经细胞的线粒体自噬,表现为红色荧光和绿色荧光的表达增高及共定位增强(橘黄色)。(5)TUNEL检测结果表明,模型组大鼠凋亡率升高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);电针组的凋亡率降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。电针+3-MA组结果表明,自噬抑制剂3-MA可以逆转电针对MCAO模型大鼠的神经保护作用。结论:电针百会、神庭可以减轻脑缺血再灌注模型大鼠神经功能损伤,其具体机制和调控BNIP3L介导的线粒体自噬、减轻脑缺血再灌注损伤和细胞凋亡有关。     

华法林药物遗传学基因CYP2C9和VKORC1单核苷酸多态性在广东汉族人群的分布研究

目的探讨细胞色素P450(cytochrome P450, CYP450)家族中CYP2C9的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP)位点rs1057910和rs1799853以及维生素K环氧化物还原酶复合物亚基1(vitamin K epoxide reductase complex subunit 1, VKORC1)的rs9923231 SNP位点在广东汉族的分布,为华法林(warfarin)个体化用药(personalized medicine)提供循证医学依据.方法利用Sequenom MassArray? iPLEX GOLD系统对215例广东地区人群的rs1057910,rs1799853和rs9923231三个位点进行基因分型,并分析各基因型分布频率.结果 rs1799853和rs9923231在广东汉族中无多态性分布,分别只有CC基因型和CT基因型.rs1057910在广东汉族中有两种基因型AA和AC,分布频率分别为0.921和0.079;等位基因A的频率为0.9605,C的频率为0.0395.结论在本研究中由于rs1799853和rs9923231在广东汉族中无多态性分布,基于本研究数据建议广东汉族华法林药物的检测位点应以rs1057910为主.     

高迁移率族蛋白B1在脂多糖诱导的Caco-2细胞上皮屏障损伤中的作用

目的:探讨高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的Caco-2细胞肠上皮屏障损伤中的作用及机制。方法:用Transwell小室培养Caco-2细胞,检测跨上皮电阻值（TEER值）,当TEER值达到500 Ω·cm ...     

Netrin-1、Slit2在夹脊电针结合神经松动术调节兔坐骨神经损伤后Rho GTPases失衡的作用北大核心CSCD

目的 观察夹脊电针结合神经松动术疗法对兔坐骨神经损伤后神经传导速度及Netrin-1、Slit2、Rho GTPases表达的影响。方法 将216只新西兰家兔随机分为正常对照组、病毒空载组、夹脊电针结合神经松动术组、Netrin-1组、Slit2组、Netrin-1+Slit2腺病毒结合组,按术后1、2、4周三个时间点分为3个亚组,每个亚组12只。钳夹法造兔左侧坐骨神经SunderlandⅢ度损伤模型。正常对照组无干预;各病毒组在模型制备时完成目的基因转染病毒注射;夹脊电针结合神经松动术组术后3 d即进行夹脊电针及神经松动术治疗。肌电图测量兔坐骨神经传导速度,取损伤坐骨神经和L4-6脊髓,荧光实时定量聚合酶链反应检测Netrin-1 mRNA、Slit2mRNA表达,Western blotting检测Rac1、Cdc42、RhoA蛋白表达。结果 术后1、2、4周,夹脊电针结合神经松动术组、Netrin-1+Slit2腺病毒结合组坐骨神经神经传导速度高于Netrin-1组和Slit2组(P <0.05);电针结合神经松动术组、 Netrin-1+Slit2腺病毒结合组Netrin-1和Slit2mRNA表达高于正常对照组、病毒空载组(P <0.05);电针结合神经松动术组和Netrin-1+Slit2腺病毒结合组Rac1、Cdc42蛋白表达高于Netrin-1组、Slit2组和病毒空载组(P <0.05),而RhoA蛋白表达低于Netrin-1组、Slit2组和病毒空载组(P <0.05)。结论 夹脊电针结合神经松动术促进轴突再生可能是通过调节Netrin-1、Slit2的表达,恢复Rho GTPases酶系统失衡状态,重组细胞骨架,促进周围神经损伤后的再生。