烧伤大鼠早期切痂对内皮细胞间粘附分子-1及E-选择素 mRNA表达影响

目的　研究烧伤血清对体外培养的内皮细胞的细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）及Ｅ选择素（Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ）ｍＲＮＡ表达的影响,探讨实施休克期切痂上述指标的变化。　方法　Ｗｉｓｔａｒ 大鼠１７６ 只,３０％ Ⅲ度烫伤,收集不同时间点血清,采用逆转录ＰＣＲ 方法分别观察伤后不同时相点血清刺激内皮细胞ＩＣＡＭ１、Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ表达的规律。　结果　烫伤后血清可刺激内皮细胞ＩＣＡＭ１ 、ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ表达上调,而且表达量与伤后时间呈正相关。伤后８ 及２４ 小时切痂动物血清不引起内皮细胞的上述变化,９６ 小时切痂（１－６０±０－１７）、（１－２０ ±０－０９） 效果不及休克期切痂组（０－９３ ±０－１４） 、（０－９３ ±０－２２）。　结论　及早切痂去除了坏死组织,避免了内皮细胞大量合成ＩＣＡＭ１、Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ 等粘附分子,减轻了由粘附分子介导的中性粒细胞对内皮细胞的进一步损害。     

烧伤大鼠早期切痂对内皮细胞间粘附分子—1及E—选择素mRNA表？…

目的 研究烧伤血清对体外培养的内皮细胞的细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）及Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）ｍＲＮＡ表达的影响,探讨实施休克期切痂上述指标的变化。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠１７６只,３０％Ⅲ度烫伤,收集不同时间点血清,采用逆转录ＰＣＲ方法分别观察伤后不同时相点血清刺激内皮细胞ＩＣＡＭ－Ⅰ、Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ的表达的规律。结果 烫伤后血清可刺激内皮细胞ＩＣＡＭ－１、Ｓ－ｓｅ     

脓毒症小鼠肝损伤时的粘附分子基因表达

目的 探讨脓毒症小鼠肝损伤时肝窦内皮细胞粘附分子基因表达变化。方法 用盲肠结扎穿孔（ＰＬＰ）法制造小鼠脓毒症模型,假手术组（ｓｈａｍ）接受同样的手术操作但不行ＣＬＰ。分别在致伤后３、１２ｈ分离肝窦内皮细胞,用ＲＴ－ＰＣＲ的方法定量检测Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ、ＩＣＡＭ－１的基因表达,同时还测定了肝组织中ＭＰＯ活性及微血管通透性的改变。结果 ＣＬＰ后３ｈ肝窦内皮细胞Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ基因的表达明显增高     

急性胆管炎时肝微循环的变化及其细胞间粘附分子-1和E-选择素的作用

为探讨细胞间粘附分子１ （ Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１） 和 Ｅ选择素 （ Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ） 在急性胆管炎肝微循环变化中的作用, 对急性胆管炎时肝脏组织学、肝脏血流量及肝组织伊文思蓝 （ Ｅ Ｂ） 含量的变化, 以及 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 和 Ｅ选择素单抗预处理对以上变化的影响进行了观察。结果： 急性胆管炎时肝窦内皮细胞及肝细胞出现变性和结构破坏, 肝窦及肝细胞周围多形核粒细胞 （ Ｐ Ｍ Ｎ） 数量显著增多, 肝微血管血流量明显减少, 肝组织 Ｅ Ｂ含量显著增高, 肝窦通透性增高; 而抗 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 及 Ｅ选择素单抗预处理使以上损害均明显减轻。由此表明, Ｉ Ｃ Ａ Ｍ １ 及 Ｅ选择素在肝脏微循环障碍的发生发展中起重要作用。     

血小板活化因子及其受体对颈髓损伤后血脊髓屏障损害的分子机制研究

目的：探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）及其受体对颈髓损伤后血脊髓屏障损害的分子机制。方法：采用蛛网膜下腔注射ＰＡＦ及静脉注射ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１，应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针原位杂交技术检测颈髓损伤后颈髓血管内皮细胞细胞间粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ）和内皮细胞白细胞粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ）表达。观察ＰＡＦ及其受体拮抗剂对颈髓损伤后血脊髓屏障、ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达的影响。结果：伤后颈髓血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达、伊文思蓝含量、水含量呈不同程度的增加；ＰＡＦ可使伤后血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达、伊文思蓝含量、水含量增加更为显著，ＰＡＦ受体拮抗剂可抑制ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达，降低颈髓组织伊文思蓝含量及水含量。结论：ＰＡＦ通过增加伤后颈髓血管内皮细胞粘附分子的表达是导致血脊髓屏障损害的重要分子基础。ＰＡＦ受体对伤后血管内皮细胞细胞粘附分子的表达具有调控作用。     

大鼠肾脏缺血及保存再灌注后E-selectin的表达情况

目的了解大鼠肾脏缺血及保存再灌注后Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ的表达情况。方法以ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｃＤＮＡ为探针,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法分别测定缺血１５、３０分钟及保存２４、４８小时以及缺血、保存再灌注后８、１６小时大鼠肾脏组织ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ的表达情况。结果实验显示缺血及保存的肾脏未见ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ表达,而缺血及保存再灌注后肾脏均见ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ表达,且保存肾脏在再灌注后早期ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ表达受到暂时性抑制。结论缺血及保存后再灌注是肾脏组织ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ表达的原因,保存再灌注后表达的暂时性抑制可能与低温有关。     

胃肠道肿瘤患者血清可溶性细胞间粘附分子1和可溶性内皮细胞-白细胞粘附分子1含量的临床意义

目的探讨可溶性细胞间粘附分子１（ｓＩＣＡＭ１）和可溶性内皮细胞白细胞粘附分子１（ｓＥＬＡＭ１）含量与胃肠道肿瘤患者预后的关系。方法用双抗体夹心法测定６４例临床患者血清中ｓＩＣＡＭ１和ｓＥＬＡＭ１的含量。结果胃肠道良性病变患者血中ｓＩＣＡＭ１和ｓＥＬＡＭ１的含量均不升高（Ｐ＞０．０５）;而它们在胃肠道癌患者中的含量明显升高（Ｐ＜０．０１）;伴有肝转移的胃肠道肿瘤患者血中ｓＩＣＡＭ１的含量比无肝转移的癌患者有非常显著的升高（Ｐ＜０．０１）,而ｓＥＬＡＭ１的含量相差无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ｓＩＣＡＭ１的含量与胃肠道癌预后有关。     

严重烧伤早期粘附分子的表达对中性粒细胞在肝脏中聚集的影响

研究严重烧伤后早期中性粒细胞在肝脏中的聚集机制及相关粘附分子表达变化。结论严重烧伤后早期粘附分子Ｐ－选择素和ＩＣＡＭ－１在肝窦内皮细胞和肝细胞表面的增加是中性粒细胞在肝脏中聚集的关键，介导了中性料细胞对脏功能的损害。     

肠缺血—再灌流大鼠小肠血管内皮细胞ICAM—1表达的变化及？…

目的 探讨肠缺血－再灌流过程中肠局部血管内皮细胞的细胞间粘附分子－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１，ＩＣＡＭ－１）ｍＲＮＡ和蛋白表达的变化与中性粒细胞聚集的关系及其在肠损伤中的作用。方法 采用肠系膜上动脉夹闭的方法制作大鼠肠缺血－再灌流模型，应用逆转录－聚合酶链反应及免疫组织化学的方法观察小肠ＩＣＡＭ－１表达的变化，同时检测组织髓过氧化物酶活性及反映肠功能的指标Ｄ     

胃肠道肿瘤患者血清可溶性细胞间粘附分子1和可溶性内皮细？…

目的 探讨可溶性细胞间粘附分子１和可溶性内皮细胞－白细胞粘附分子１含量与胃肠道肿瘤患者预后的关系。方法 用双抗体夹心法测定６４例临床患者血清中ｓＩＣＡＭ－１和ｓＥＬＡＭ－１的含量。结果 胃肠道良性病变患者血中ｓＩＣＡＭ－１和ｓＥＬＡＭ－１的含量均不升高;而它们在胃肠道癌患者中的含量明显升高;伴有肝转移的胃肠道肿瘤患者血中ｓＩＣＡＭ－１的含量比无肝转移的癌患者有非常显著的升高。     

中性粒细胞及ICAM-1,E-selectin在急性胆管炎肝损害中的作用

目的　探讨中性粒细胞 (PMN)及粘附分子ICAM 1,E selectin在急性胆管炎肝损害中的作用。方法　观察急性胆管炎大鼠肝组织PMN聚集情况及其对肝功能的影响 ;并用抗ICAM 1单抗及抗E selectin单抗预处理急性胆管炎大鼠 ,观察其对肝功能损害的影响。结果急性胆管炎大鼠肝组织PMN数量进行性增多 ,PMN开始主要聚集在肝窦 ,12h后在肝细胞周围聚集逐渐增多 ;血浆LDH及ALT水平明显升高 ,肝组织ATP含量、血酮体比值 (KBR)显著降低。抗ICAM 1及E selectin单抗预处理可使急性胆管炎大鼠血浆LDH ,ALT水平明显降低 ,KBR及肝组织ATP含量升高。结论　肝脏PMN的浸润在胆道感染肝损害中发挥重要作用 ,ICAM 1和E selectin与急性胆管炎时肝功能损害及肝能量代谢障碍密切相关。     

急性胆管炎多形核白细胞聚集及其肝损害作用的研究

为探讨多形核白细胞浸润在急性胆管炎肝损害中的作用,作者观察了急性胆管炎时肝脏ＰＭＮ聚集与肝损害的关系。结果显示：急性胆管炎时大鼠肝组织ＰＭＮ数量进行性增多,开始主要聚集在肝窦,１２小时后穿越肝窦内皮细胞在肝细胞周围聚集并逐渐增多,肝细胞变坏性死,动物２４小时存活率仅为４０％。     

粘附分子表达在脓毒症小鼠肺损伤中的作用

目的 探讨肺微血管内皮细胞粘附分子表达在脓毒症小鼠肺损伤中的作用。方法 盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）制造小鼠脓毒症模型,分别在致伤后３、１２ｈ分离肺微血管内皮细胞,用逆转录－聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法定量检测Ｅ－选择素、细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ）－１和血管细胞粘附分子（ＶＣＡＭ）－１的基因表达,同时测定肺组织中髓过氧化物酶（ＭＰＯ）活性的改变。结果 ＣＬＰ后３ｈ肺微血管内皮细胞Ｅ－选择素、ＩＣＡＭ－１     

两种不同肝脏灌注方法对大鼠肝脏保护作用的比较

目的探讨两种不同的肝脏灌注方法对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的差异,为后期离体大鼠肝脏保存实验提供简单而有效的方法。方法制备两种不同的单纯冷保存的离体大鼠肝脏灌注模型,分为实验组（经门静脉和腹主动脉灌注法,10只）;对照组（经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,10只）,灌注后取出肝脏置于4℃威斯康星大学保存液保存,12h后切取肝组织。行苏木素-伊红（HE）染色,观察肝组织病理损伤情况,并且用免疫组织化学染色法检测核因子（NF）-κB（SABC法）的表达情况。结果经12h冷保存后,两组大鼠肝脏组织病理示：肝脏小叶结构紊乱,肝细胞变性、肿胀及空泡形成,肝血窦和中央静脉有不同程度的淤血,部分肝窦内皮细胞坏死并脱落,但两组之间无明显差别。两组之间NF-κB阳性表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论经门静脉和腹主动脉灌注法与经门静脉、腹主动脉及肝动脉灌注法,对离体大鼠肝脏的保护作用无差异,但前者操作相对简单,更容易在今后研究大鼠离体肝脏的实验中应用。     

ICAM-1mRNA在大鼠缺血/再灌注肝脏组织中的表达

目的探讨肝脏缺血/再灌注损伤过程中,肝脏组织中ICAM-1mRNA的表达规律及其意义。方法应用RT-PCR技术,观察缺血时间分别为15min、30min及45min的三组大鼠肝脏于再灌注60min时ICAM-1mRNA的表达情况。结果三组肝脏缺血前及缺血末组织内仅有少量ICAM-1mRNA表达于肝细胞,但于再灌注60min时,ICAM-1mRNA表达程度则显著增强,且缺血时间越长的肝脏,其表达强度越高。结论肝脏的缺血能明显诱导再灌注期间肝细胞表达ICAM-1mRNA,增强肝窦内皮细胞的粘附力,进而引发一系列病理生理改变。     

Reduction of hepatic ischemia/reperfusion injury by a soluble P-selectin glycoprotein ligand-1.

OBJECTIVE: The authors' goal was to determine the effects of specific binding and blockade of P- and E-selectins by a soluble P-selectin glycoprotein ligand-1 (PSGL-1) in rat models of hepatic in vivo warm ischemia and ex vivo cold ischemia. The authors also sought to determine the effect of selectin blockade on isograft survival in a syngeneic rat orthotopic liver transplant model. SUMMARY BACKGROUND DATA: Ischemia/reperfusion (I/R) injury is a major factor in poor graft function after liver transplantation, which may profoundly influence early graft function and late changes. It is hypothesized that I/R injury leads to the upregulation of P-selectin, which is then rapidly translocated to endothelial cell surfaces within 5 minutes of reperfusion of the liver, initiating steps leading to tethering of polymorphonuclear neutrophil leukocytes to the vascular intima. Local production by leukocytes of interleukin-1, tumor necrosis factor-alpha, or both induces P-selectin expression on the endothelium and continues the cascade of events, which increases cell adherence and infiltration of the organ. METHODS: To examine directly the effects of selectins in a warm hepatic I/R injury model, 100 microg of PSGL-1 or saline was given through the portal vein at the time of total hepatic inflow occlusion. The effects of PSGL-1 in cold ischemia were assessed using an isolated perfused rat liver after 6 hours of 4 degrees C storage in University of Wisconsin (UW) solution, with or without the instillation of PSGL-1 before the storage. To evaluate the effect of selectin blockade on liver transplant survival, syngeneic orthotopic liver transplants were performed between inbred male Sprague-Dawley rats after 24 hours of cold ischemic storage in UW solution. A separate group of animals received two doses of 100 microg of PSGL-1 through the portal vein before storage and before reperfusion of the transplanted liver. Recipient survival was assessed at 7 days, and the Kaplan-Meier product limit estimate method was used for univariate calculations of time-dependent recipient survival events. RESULTS: In an in vivo warm rat liver ischemia model, perfusion with PSGL-1 afforded considerable protection from I/R injury, as demonstrated by decreased transaminase release, reduced histologic hepatocyte damage, and suppressed neutrophil infiltration, versus controls (p < 0.05). When cold stored livers were reperfused, PSGL-1 reduced the degree of hepatocyte transaminase release, reduced neutrophil infiltration, and decreased histologic hepatocyte damage (p < 0.05 vs. UW-only controls). On reperfusion, livers treated with PSGL-1 demonstrated increased portal vein blood flow and bile production (p < 0.05 vs. UW-only controls). In addition, 90% of the rats receiving liver isografts stored in UW solution supplemented with PSGL-1 survived 7 days versus 50% of those whose transplanted syngeneic livers had been stored in UW alone (p < 0.05). CONCLUSIONS: Selectins play an important role in I/R injury of the liver. Early modulation of the interaction between P-selectin and its ligand decreases hepatocyte injury, neutrophil adhesion, and subsequent migration in both warm and cold rat liver ischemia models. In addition, the use of PSGL-1 before ischemic storage and before transplantation prevents hepatic injury, as documented by a significant increase in liver isograft survival. These findings have important clinical ramifications: early inhibition of alloantigen-independent mechanisms during the I/R damage may influence both short- and long-term survival of liver allografts.     

Role of NF-kappaB as effector of IPC in donor livers before liver transplantation in rats

The objective of this study was to investigate the effect of ischemic preconditioning (IPC) on NF-kappaB activity during reperfusion early after liver transplantation in rats. METHODS: Male Sprague-Dawley (SD) rats were used as donors and recipients of orthotopic liver transplantations. The donor liver was stored 2 hours in Ringer's solution at 4 degrees C preimplantation. IPC was performed by clamping of the portal vein and hepatic artery of the donor for 10 minutes followed by reperfusion for 10 minutes before harvesting. At 1, 2, 4, and 6 hours after portal vein reperfusion, graft samples were obtained to determine hepatic levels of NF-kappaB activity, tumor necrosis factor (TNF)-alpha and intercellular adhesion molecule (ICAM)-1. Blood samples were obtained to measure serum alanine aminotransferase (ALT) and lactate dehydrogenase (LDH). RESULTS: After liver transplantation without IPC, serum levels of ALT and LDH increased significantly compared with the sham-operated group. Among the IPC group, serum ALT and LDH decreased significantly. NF-kappaB activity in the graft increased within 6 hours after transplantation. Among the IPC group, NF-kappaB activity was significantly attenuated. Hepatic levels of TNF-alpha and ICAM-1 were significantly elevated in the non-IP group but both were reduced in the IPC group. CONCLUSION: IPC downregulated TNF-alpha and ICAM-1 expression in the graft, most likely through decreased NF-kappaB activation, and attenuated neutrophil infiltration after reperfusion.     

猪胆汁性肝纤维化的形成机制研究

目的：研究猪胆汁性肝纤维化时尿激酶型纤维蛋白酶原激活物（uPA）和基质金属蛋白酶－2（MMP－2）的表达，分析其在肝纤维化形成初始阶段的作用。方法：20只普通猪行胆总管结扎制作胆汁性肝纤维化模型，术前和术3后取其肝组织作样本自身对照，用原位杂交法研究uPA和MMP－2和mRNA表达改变。结果：术后4周肝细胞呈灶状坏死，胆管扩张，淤胆，部分胆管充满脓性胆汁；正常纤维塌陷，纤维组织增生，连接成片，胆管周围纤维增多，原位杂交显示肝星状细胞（HSC）细胞增多，增生，向肝细胞坏死区聚，uPA和MMP－2表达胞浆呈强阳性。经图像分析术前和术后两者平均吸光度差异有非常显著性（P＜0．01），结论：MMP－2和uPA在肝纤维化的早期参与ECM的重塑和肝小叶的改建。     

血管内皮生长因子改善大鼠肝移植术后肝功能

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)对大鼠部分肝移植术后肝功能的影响.方法 建立大鼠30%肝移植模型.分实验组、对照组,每组60只,分别于术后注射鼠重组VEGF、生理盐水.在术后0、12、24、72、168h监测血清ALT、AST、透明质酸(hyaluronic acid, HA)变化.光镜下观察肝窦结构破坏及炎性细胞浸润程度.结果 在72h,实验组血清ALT、AST、HA较对照组明显降低(t=4.681,4.252,2.853,P<0.05).实验组肝窦内皮细胞结构破坏及炎性细胞浸润程度均较对照组明显减轻.结论 VEGF能明显改善大鼠部分肝移植术后肝功能.这可能与其减轻肝窦内皮细胞损害和炎性细胞浸润程度有关.