人精子表面整合素亚基α5、β1参与受精过程的研究

目的：研究人精子表面整合素亚基α5、β1在受精过程中的作用。方法：以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精试验（SPA）作为检测人精子受精力的手段；分别用抗整合素亚基α5、β1抗体衣整合素特异的配体RGD肽作用于精子后，观察其受精力的改变。结果：用抗整合素亚基α5、β1抗体及RGD肽作用于精子后，受精率、受精指数及粘附指数均下降。结论：人精子表面整合素亚基α5、β1参与受精过程。     

整合素亚基α6、α4、αv、β1、β3在小鼠心脏发育过程中的作用

目的：观察小鼠胚胎发育过程中整合素亚基α6、α4、αv、β1、β3在心脏中的表达，探讨整合素亚基(α6、α4、αv、β1、β3在小鼠心脏发育过程中的作用。方法：取孕9—16天的ICR小鼠胚心脏，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，用免疫组化的方法观察整合素亚基α6、α4、αv、β1、β3的蛋白表达情况，     

整合素与细胞凋亡

正常细胞——基质或细胞-细胞间粘附的破坏通常会激活细胞自杀性程序,导致细胞凋亡。由于整合素介导细胞细胞外基质以及细胞间的粘附,负责细胞内、外信号的传递,因此整合素在细胞凋亡过程中的作用受到日益广泛的关注。     

人整合素β3亚基真核表达载体的构建及αIIbα3在细胞表面的表达

目的：构建人整合素β3亚基真核表达载体，并探讨如何使人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面有效表达，为进一步研究整合素β3亚基作为汉坦病毒(hantavirus，HV)受体的特异性奠定基础。方法：构建编码人整合素β3真核表达载体pcDNA3．1—β3。将其与编码人整合素αIIb亚基真核表达载体，分别及共转染至中国仓鼠卵巢(China hamster ovary，CHO)细胞中进行表达。采用间接免疫荧光法(IFA)检测外源基因的表达。结果：共转染组目的蛋白呈高效的细胞膜表达。pcDNA3．1—β3单独转染组β3亚基在细胞膜的表达较共转染组弱；而pBJ1—αIIb单独转染组则未见有效的细胞膜表达。结论：人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面的有效表达需要两个亚基共同参与。     

整合素α_5、β_1抗体对睾丸生精细胞凋亡的影响

目的观察整合素α_5、β_1抗体体内干预试验对Wistar大鼠睾丸生精细胞凋亡的作用。方法腹腔内注射α_5、β_1抗体,采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记技术,分析Wistar大鼠生精细胞凋亡情况。结果α_5、β_1试验组大鼠睾丸生精细胞明显减少(P0.001)。结论α_5、β_1抗体具有阻止Wistar大鼠生精细胞凋亡的作用。     

人整合素分子α4亚基片段的克隆和表达

目的克隆并表达人整合素分子α4亚基1.2kbcDNA片段。方法从HL-60细胞系中提取总RNA,以RT-PCR法扩增人整合素分子α4亚基片段1.2kbcDNA(1753～2934bp),并将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,用IPTG诱导表达。结果克隆了α4亚基1.2kbcDNA片段。序列分析表明,其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变(Arg→Gln),经分析该突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,经IPTG诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论获得了α4亚基1.2kbcDNA片段及其原核表达产物,对研究α4整合素的功能具有重要的意义。     

人整合素β3亚基真核表达载体的构建及αIIbβ3在细胞表面的表达

目的 :构建人整合素 β3亚基真核表达载体 ,并探讨如何使人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面有效表达 ,为进一步研究整合素β3亚基作为汉坦病毒 (hantavirus,HV)受体的特异性奠定基础。方法 :构建编码人整合素 β3真核表达载体 pcDNA3.1 β3。将其与编码人整合素αIIb亚基真核表达载体 ,分别及共转染至中国仓鼠卵巢 (Chinahamsterovary ,CHO)细胞中进行表达。采用间接免疫荧光法 (IFA)检测外源基因的表达。结果 :共转染组目的蛋白呈高效的细胞膜表达。pcDNA3.1 β3单独转染组 β3亚基在细胞膜的表达较共转染组弱 ;而pBJ1 αIIb单独转染组则未见有效的细胞膜表达。结论 :人整合素αIIbβ3在CHO细胞表面的有效表达需要两个亚基共同参与。     

人整合素分α４亚基片段的克隆和表达

目的 克隆并表达人整合素分子α４亚基１.2kbcD-NA片段。方法 从ＨＬ－６０细胞系中提取总ＲＮＡ,以ＲＴ－ＰＣＲ法扩增人整合素分子α４亚基片段１.2kbcDNA(1753-2934bp),并将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,用ＩＰＴＧ诱导表达。结果 克隆了α４亚基１.2kbcDNA片段。序列分析表明。其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变（Ａrg→Ｇln),经分析突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论 获得了α４亚基１.2kbcDNA片段及其原核表达产物。对研究α４整合素的功能具有重要意义。     

整合素在成年中枢神经系统中的分布和作用

整合素在成年ＣＮＳ中,主要分布在血管结构,神经纤维网,海马等部位,α４β１等在介导外周白细胞穿过血脑屏障中的作用β１等增强星形胶质瘤细胞与ＥＣＭ分子的粘附,αｖβ３等促进恶性胶质瘤细胞入侵正常脑组织。此外,整合素还与阿耳茨海默氏病的发生,脑的衰老和ＣＮＳ生理可塑性可形成等过程密切相关,本文尚提及其配体ＥＣＭ分子,如生腱蛋白,层粘连蛋白等的表达水平与ＣＮＳ损伤呈正相关。     

人整合素αvβ3在CHO细胞表达的研究

目的 使人整合素αvβ3在CHO细胞表面有效表达，为从分子水平了解汉坦病毒(hantavirus，HV)的感染及致病机制。方法 构建含人整合素β3 ORF区基因的真核表达载体pcDNA3．1．β3；将其与含人整合素αv全长cDNA的质粒pcDNA3-αv分别及共转染至CHO细胞中进行表达；采用间接免疫荧光法、流式细胞仪、免疫沉淀及免疫印迹实验对外源基因的表达进行定性、定位及定量检测，并确证表达产物的免疫反应性。结果 人整合素αv、β3基因在共转染组细胞中有高效表达，目的蛋白主要定位于细胞膜上；β3基因在pcDNA3．1-β3单独转染组细胞中的表达明显弱于共转染组；而pcDNA3.1-β3单独转染组则未见有效的表达。结论 人整合素αvβ3在CHO细胞表面的有效表达需要2个亚基共同参与.     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

整合素在成年中枢神经系统中的分布和作用

整合素在成年ＣＮＳ中，主要分布在血管结构、神经纤维网、海马等部位，α４β１ 等在介导外周白细胞穿过血脑屏障中起作用，β１ 等增强星形胶质瘤细胞与ＥＣＭ分子的粘附，αＶβ３ 等促进恶性胶质瘤细胞入侵正常脑组织。此外，整合素还与阿耳茨海默氏病的发生、脑的衰老和ＣＮＳ生理可塑性形成等过程密切相关。本文尚提及其配体ＥＣＭ分子，如生腱蛋白、层粘连蛋白等的表达水平与ＣＮＳ损伤呈正相关。     

体外研究整合素αv、α4、β1、β3在小鼠胚泡着床中的作用

整合素(Integrin)是一类存在于细胞表面的跨膜糖蛋白，属于细胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMS)的一大家族，是细胞外基质(ECM)的受体，以受体一配体相对应的形式调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质的相互作用，介导细胞的增殖、分化、粘附、迁移等过程。胚泡着床是个复杂的生理过程，包括胚泡孵出、胚泡与子宫内膜的识别、粘附及滋养层细胞向子宫内膜侵入等，     

整合素αv、α4在小鼠胚泡植入中的作用

目的：探讨整合素αv、α4在小鼠胚泡植入中的作用。方法：在体外培养的人蜕膜细胞中分别加入整合素αv、α4抗体，与小鼠胚泡共培养，观察整合素αv、α4抗体对小鼠胚泡在体外培养的人蜕膜细胞上的粘附和铺展的影响。结果：整合素αv抗体组，胚泡的粘附受到暂时抑制，48h时大部分胚泡才粘附并开始铺展；整合素α4抗体组，胚泡的粘附率不受影响，但铺展率及滋养层细胞的扩展面积以剂量依赖的方式受到抑制。结论：整合素αv、α4能够调节胚泡在人蜕膜细胞上的植入，其中整合素αv可能与胚泡的粘附有关，而整合素α4可能与胚泡侵入和滋养层细胞的进一步生长相关。     

9-顺-维甲酸对人肺腺癌细胞株细胞分化和凋亡的影响

维甲酸类化合物 (Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ)在调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动中起重要作用[1 ] 。其在体内的生理活性代谢产物包括全反式维甲酸 (ＡＴＲＡ)、1 3 顺维甲酸 (1 3 ｃｉｓ ＲＡ)和 9 顺维甲酸 (9 ｃｉｓ ＲＡ) ,它们可通过核维甲酸受体 (ＲＡＲ)结合于ＤＮＡ应答元     

整合素α5β1蛋白及mRNA在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervix squamous cell carcinoma,CSCC)中整合素α5β1蛋白和mRNA的表达,并分析其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化SP法、RT-PCR技术检测60例CSCC及40例子宫颈正常组织中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达.结果 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA表达均高于子宫颈正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);整合素α5β1蛋白及mRNA的表达均与CSCC分化程度、pTNM分期、淋巴结转移、浸润深度有相关性(P＜0.05),与患者年龄无相关性(P＞0.05).结论 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达与其生长、侵袭与转移密切相关.采用免疫组化SP法与RT-PCR技术联合检测CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA,有望成为评估CSCC恶性程度、侵袭、转移和临床预后的指标.     

人绒毛膜促性腺激素β亚基在大肠杆菌中的表达

目的：以该室克隆的ＰＣＲⅡ／ｈＣＧβ载体为模板,亚克隆到表达载体ＰＧ５中使ｈＣＧβ基因在大肠杆菌中进行高铲表达。方法：改变部分ｈＣＧβ序列,得到重组ＰＧ５＝ｈＣＧβ载体为经序列分析证明,再转化到表达菌ＢＬ２１中表达,所得包涵体经过柱纯化,复性,免疫发光分析和动物试验其活性。结果：经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳在１８ｋＤ左右有一条明显的新增蛋白带,与预期的分子量相符,并用Ｗｅｓｔｅｍ印迹证实,ｒｈＣＧβ约占     

实验性肺纤维化大鼠组织整合素α5β1和转化生长因子—β的表达

目的 研究纤维连接蛋白受体整合蛋白受体整合素α５β１在大鼠肺纤维化中的作用。方法 用免疫组化方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白及其受体整合素α５β１和转化生长因子－β表达的动态变化：用Ｎｏｒｔｈｅｍ印迹杂交和免疫细胞化学方法观察ＴＧＦ－β对体外培养的大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ和 白表达的影响。结果 （１）实验组１￣３天,病灶内上皮细胞和骨皮细胞整合素α５β１表达明显增强,炎细胞及     

Axin抑制肺腺癌SPC-A-1细胞系侵袭的作用和可能机制

目的 Wnt通路的异常激活与恶性肿瘤的发生和进展关系密切,我们在前期研究中发现肺癌中也有Wnt通路异常激活的现象,而体轴抑制因子Axin是Wnt通路的抑制因子,本研究的目的是探讨Axin对肺癌细胞侵袭力的影响及其机制。方法构建野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变),转染人肺腺癌SPC-A-1(SPC)细胞,应用GSK-3βsiRNA阻断β-catenin的降解,Western bolt检测各处理组细胞中β-catenin和MMP-7的变化,Transwell检测各处理组细胞侵袭能力的变化。结果转染野生型Axin明显的下调β-catenin和MMP-7的蛋白表达以及SPC细胞的侵袭力(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能,转染突变型Axin不能有效的下调β-catenin和SPC细胞的侵袭能力。结论 Axin抑制SPC细胞的侵袭力,可能与其下调β-catenin,负向调控Wnt通路有关,Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点。     

硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞HIF-1α和整合素β1表达及其相关性

目的培养人胃癌细胞株BGC-823,探讨硫酸右旋糖苷(dextran sulphate,DS)对人胃癌细胞整合素β1(Integrinβ1)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)的表达及其相关性。方法培养BGC-823细胞,分别在培养液中加入DS和磷酸缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),低氧培养不同时间,应用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HIF-1α、Integrinβ1的表达,并分析二者的相关性。结果实验组HIF-1α、Integrinβ1的表达水平明显低于对照组,且HIF-1α和Integrinβ1表达呈正相关。结论 DS可以抑制人胃癌细胞的黏附过程,减弱HIF-1α、Integrinβ1的表达。DS可能通过抑制HIF-1α降低Integrinβ1的表达,有利于抑制人胃癌细胞的腹腔种植转移。