四羟基二苯乙烯增强肝癌细胞对顺铂的敏感性

目的:探讨四羟基二苯乙烯(THS)是否能增强肝癌细胞对顺铂的敏感性。方法:⑴MTT法检测不同浓度顺铂和THS对肝癌细胞SMMC-7721与Bel-7402细胞活力的影响;⑵TUNEL法检测THS加强顺铂的促凋亡作用;⑶荧光定量PCR和Western blot法检测细胞在THS作用下X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:THS和顺铂可剂量依赖性地降低两种细胞的细胞活力;THS加强顺铂对SMMC-7221的促凋亡作用;THS可明显提高肝癌细胞系XIAP的mRNA和蛋白表达。结论:THS可诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,增强肝癌细胞对顺铂的敏感性。     

人肝癌细胞株中FOXM1及NF-κB的表达及意义

目的 探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1（Forkhead Box M1）及核转录因子NF-κB（Nuclear factor kappa B）的表达强度及意义.方法采用Western blot、RT-PCR法,检测不同肝癌细胞株（QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721）中FOXM1及NF-κB在蛋白及mRNA水平的表达情况.结果 在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平差异均有统计学意义,细胞株（QGY-7703、BEL-7402）中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721.结论 肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致,提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关.     

SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株的表达

目的研究SATB1在不同侵袭潜能的人肝癌细胞株表达状况。方法分别用荧光定量PCR,RT-PCR,Western blotting及免
疫荧光方法,检测人永生化肝细胞株HL-7702及肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3 中SATB1
的表达。结果相对于HL-7702,SATB1 mRNA在其余5 种肝癌细胞株中都有较高程度的表达,其中高侵袭性HCCLM3、
MHCC97H 表达最高,MHCC97L 次之,SMMC-7721、HepG2 最低（P<0.001）;Western blotting 分析HepG2、SMMC-7721、
MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3肝癌细胞株的蛋白相对表达量分别为0.271±0.002;0.351±0.023;0.621±0.026;0.878±0.026;
1.236±0.006,高侵袭性HCCLM3相当于HepG2的4.6倍（P<0.001）;免疫荧光显示SATB1在5种肝癌细胞株的胞浆和胞核内均
有分布,高侵袭性细胞株HCCLM3、MHCC97H表现强阳性染色。结论SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株中的表达有差异,
与肝癌转移密切相关。     

抗坏血酸与三氧化二砷联合应用诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨抗坏血酸(ascorbic acid,AA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用增强肝癌细胞凋亡的作用。方法肝癌细胞株BEL-7402及SMMC-7721细胞分别用As2O3(1 μmol/L)、AA(62.5 μmol/L)、As2O3(1 μmol/L) AA(62.5 μmol/L)处理24～96 h,流式细胞仪上检测细胞凋亡百分率;用试剂盒法测定细胞内谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量。结果1 μmol/As2O3作用24～96 h有诱导BEL-7400及SMMC-7721细胞凋亡的作用,从(62.5 μmol/L) As2O3(1 μmol/L)作用72 h BEL-7402细胞凋亡百分率为(61.7±0.8)%,SMMC-7721细胞为(26.8±0.9)%,较单独应用As2O3(1 μmol/L)的凋亡百分率[(40.2±0.8)%;(11.4±0.5)%]明显增高。As2O3(1 μmol/L)单独作用对SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响。从(62.5 μmol/L)单独作用对BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响,但可明显降低SMMC-7721细胞内GSH的含量(P<0.05)。AA(62.5 μmol/L)与As2O3(1 μmol/L)联合作用可明显降低SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量(P<0.05),SMMC-7721细胞内GSH的含量降低更显著(P<0.01)。结论AA及As2O3联合应用能增强肝癌细胞株BEL-7402及SMMC- 7721细胞凋亡作用,尤其是对As2O3不敏感细胞株SMMC-7721细胞作用更显著。     

柿叶黄酮对人肝癌SMMC-7721细胞形态学影响的初步研究

目的 观察柿叶黄酮(persimmon leaf flavonid,PLF)对人肝癌SMMC-7721细胞形态学的影响作用,初步探讨柿叶黄酮对人肝癌细胞的抑制机理.方法 采用浓度0.32mg/ml、0.64mg/ml的柿叶黄酮相同时间处理人肝癌SMMC-7721细胞;采用倒置显微镜观察SMMC-7721细胞的形态学变化及生长情况.结果 倒置显微镜下可见,正常组细胞贴壁生长,形态较规则,生长迅速,胞浆丰富.柿叶黄酮处理组的贴壁细胞的数量减少,体积变小,部分细胞崩解,而悬浮细胞量增多.结论 柿叶黄酮对人肝癌SMMC-7721细胞的形态有一定的诱变作用及一定的抑制增殖作用.     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

趋化因子受体CXCR7在人肝癌细胞株中的表达及意义

目的探讨趋化因子受体(Chemokine receptor,CXCR7)在不同肝癌细胞株中的相对表达强度及意义。方法采用RT-PCR、Western blot法,检测8株不同转移潜能肝癌细胞中趋化因子受体CXCR7在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果 CXCR7在8株肝癌细胞中的表达水平差异存在统计学意义,无论是mRNA水平还是蛋白水平,高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-L、MHCC97-H、HCCLM3)CXCR7的表达明显高于普通转移潜能肝癌细胞株(HepG2、PLC/PRF/5、SMMC-7721、BEL-7402、Hep3B),P<0.01。结论 CXCR7与肝癌的发生、发展及预后有一定的相关性。     

一氧化氮供体型齐墩果烷衍生物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

对一氧化氮（NO）供体型齐墩果烷衍生物（SO-10）对肝癌的抑制作用进行了研究。检测了NO在其诱导肝癌细胞凋亡中的作用。MTT法检测显示SO-10能显著抑制肝癌细胞株（HepG2、BEL-7402和SMMC-7721）的增殖,SO-10作用48 h 后的IC₅₀分别为HepG2（1.19±0.12 μmol/L）、BEL-7402 (1.98±0.85 μmol/L) 和SMMC-7721 (5.92±0.58 μmol/L);流式细胞仪检测显示0.5-2 μmol/L的SO-10均诱导肝癌细胞株HepG2凋亡,细胞凋亡率随浓度增加而上升;Griess法显示SO-10作用后HepG2内的NO水平随着药物作用时间的延长而增加,用NO清除剂预处理后,随着NO浓度的降低,SO-10对HepG2细胞增殖的抑制作用也相应降低。提示SO-10对肝癌细胞有抗增殖作用和诱导凋亡作用,可能与SO-10在肝癌细胞中释放NO有关。     

肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选

目的 筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株,为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础.方法 选择4种人肝癌细胞株(BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703)及1种成人正常肝细胞株(HL-7702),培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后,采用免疫细胞染色技术和Western blot的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株.结果 免疫细胞染色显示,GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达.GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703的表达要强于正常肝细胞HL-7702,其中以BEL-7404的表达量最高.通过Western blot检测,BEL-7404的GCF2相对表达量为0.875±0.134,较其他细胞株高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BEL-7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高,可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料.     

miR-143-5p靶向AGR2在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨miR-143-5p在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 qRT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H和Hep3B)中的miR-143-5p表达。选取肝癌细胞BEL-7402和HepG2,将每株肝癌细胞分别分为：mimics-NC组(转染阴性对照mimics-NC)和miR-143-5p mimics组(转染miR-143-5p mimics)。采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot分别检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡率和凋亡相关基因(Bax、Caspase-3和Bcl-2)的表达。通过靶基因预测网站RNA22预测miR-143-5p的靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-143-5p和靶基因前梯度蛋白2(AGR2)关系。qRT-PCR和Western blot检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组肝癌细胞BEL-7402和HepG2中AGR2的表达水平。再将肝癌细胞BEL-7402和...     

５ 氮杂 ２′ 脱氧胞苷诱导肝癌细胞株ＳＬＩＴ２基因去甲基化的实验研究

目的：观察肝细胞癌（HCC）细胞株SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B及epG2中SLIT2基因在5-Aza-CdR作用后,其启动子区甲基化状态及表达的变化,探讨HCC细胞株中SLIT2基因调控规律及甲基化调节抑制剂5-Aza-CdR对SLIT2基因转录的影响。方法对上述 HCC 细胞株体外培养,MSP法检测 HCC 细胞株中 SLIT2启动子相关区域的甲基化状况。应用10 mmol／L浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的5种HCC细胞后,MSP法检测用药前后细胞中SLIT2基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中SLIT2 mRNA的变化。结果 SLIT2基因在各细胞株中启动子区呈异常高甲基化状态,mRNA低表达。经过5-Aza-CdR处理后,SLIT2基因启动子区呈显著去甲基化状态,其mRNA表达增强。结论启动子区异常甲基化是HCC细胞SLIT2基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转SLIT2基因甲基化状态,从而调控SLIT2基因表达。     

人肝癌细胞株VEGF/VEGFR的检测及意义探讨

目的：筛选血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）高表达肝癌细胞株，为进一步研究VEGF在肝癌治疗中的作用提供理论依据。并探讨VEGF受体在肝癌细胞株的表达及意义。方法：ELISA法及Western blot法分别检测人肝癌细胞株培养上清及细胞内VEGF蛋白的表达。免疫细胞化学方法检测VEGFR在人肝癌细胞中的表达。结果：5株肝癌细胞株均见VEGF蛋白表达，其中SMMC-7721的VEGF表达量最高，VEGF特异性受体Fit-1在HepG2、HHCC、SMMC-7721、Bcl-7402见阳性表达，KDR在HepG2、HHCC、Bel-7402、QGY-7701见阳性表达。结论：肝癌细胞株中VEGF表达量不尽一致，VEGF在肝癌发生发展中可能存在自分泌作用方式。     

肝癌细胞系中SLIT2、DAPK、RIZ1、CHFR、EDNRB、3-OST-2基因甲基化状态

目的 了解SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B和HepG2 5种肝癌细胞系中SLIT2、DAPK、RIZ1、CHFR、EDNRB和3-OST-2 6种基因启动子区域甲基化状态.方法 体外培养以上5种肝癌细胞系,应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测5种肝癌细胞系SLIT2、DAPK、RIZ...     

肝癌组织及肝癌细胞株中TRAIL受体的检测

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体在原发性肝癌(PHC,简称肝癌)组织及肝癌细胞株HepG2及SMMC7721中的表达,以期选出与肝癌组织中TRAIL受体表达相近的细胞株。方法:收集原发性肝癌组织30例,以常规方法培养人肝癌细胞株HepG2及SMMC7721,以半定量RT-PCR法,对TRAIL受体的表达作半定量检测。结果:30例肝癌组织及HepG2细胞中均有TRAIL受体DR4(deathrecptor4)、DR5、DcR1(decoy receptor1)、DcR2的表达,而SMMC7721细胞中不表达DcR1;半定量结果显示肝癌组织及HepG2中DR4及DR5的表达量明显高于DcR1及DcR2;肝癌组织中4对受体间的表达量存在相关性,HepG2细胞中DR4的表达与DcR1及DcR2间存在相关性。结论:HepG2中TRAIL受体的表达类似于肝癌组织。     

Total saponin from root of Actinidia Valvata Dunn prevents the metastasis of human hepatocellular carcinoma cells

Objective:To extract the active component from the root of Actinidia valvata Dunn and to investigate the effects on hepatocellular carcinoma(HCC) cells in vitro.Methods:Total saponin was extracted from the root of A.valvata(TSAVD).HCC cells,such as BEL-7402,HepG2,PLC,SMMC-7721,MHCC-97-H, and MHCC-97-L,were treated with TSAVD in 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenytetrazolium bromide(MTT) assay.BEL-7402 and MHCC-97-H cells were also treated respectively with TSAVD at different concentrations for 24 h in wound healing and adhesion assays,and the effects of TSAVD on BEL-7402 and MHCC-97-H cells mobility and adhesion abilities were observed.Meanwhile,the effects of TSAVD on invasion and migration of BEL-7402 and MHCC-97-H cells were also investigated by transwell chamber in invasion and migration assays. Results:TSAVD at 1.5 mg/mL inhibited BEL-7402 cell proliferation with inhibition ratios(IRs) of 61.08%,74.12%, 84.55%at 24,48,and 72 h,respectively.Meanwhile,TSAVD inhibited MHCC-97-H proliferation in a concentrationdependent manner from 1.5 to 0.5 mg/mL,with the IR of 36%at 1.5 mg/mL at 24 h.For SMMC-7721,PLC, and HepG2,the IR was lower than 30%at 1.5 mg/mL at 24 h.In the wound healing assay,mobility abilities of BEL-7402 and MHCC-97-H cells in TSAVD treated groups were significantly weaker than those of the control group.After pretreatment for 24 h with TSAVD,adhesion abilities were reduced in both MHCC-97-H and BEL-7402 cells,with IRs of 48.50%±4.86%and 49.85%±5.25%at 200 |xg/mL.The IRs of MHCC-97-H and BEL-7402 cells in the migration assay were 49.13%±2.91%and 79.37%±0.09%at 200μg/mL In the invasion assay,IRs were 69.78%±4.88%and 82.48%±0.25%at 200μg/mL Conclusions:Of all HCC cells,the highest inhibition by TSAVD was seen for BEL-7402 proliferation.TSAVD could restrain adhesion,invasion,mobility,and migration abilities of BEL-7402 and MHCC-97-H cells in vitro.     

全反式维甲酸对肝癌细胞连接蛋白基因表达及细胞间隙连接通讯功能的影响

目的 观察肝癌细胞株SMMC-7721和BEL-7404经全反式维甲酸(ATRA)诱导前后CX26、CX32、CX43基因在转录水平的改变以及对细胞间隙连接功能的影响。方法 分别用常规培养基和含ATRA浓度为10～mol／L的培养基培养SMMC-7721和BEL-7404两种肝癌细胞株细胞,于药物诱导细胞24、48、72h时,收集各组细胞并提取总mRNA,RT-PCR法检测CX26、CX32、CX43基因表达的情况。通过染料传输实验,观察细胞间隙连接通讯功能的变化。结果 SMMC-7721细胞和BEL-7404细胞在ATRA处理前没有CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达,但均有CX43 mRNA的表达。经ATRA处理后出现CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达。经ATRA处理后SMMC-7721细胞间隙连接通讯功能增强,而且随ATRA作用时间延长,细胞间隙连接通讯功能增强越明显。BEL-7404细胞经ATRA处理24、48、72h后细胞间隙连接通讯功能没有明显的改变。结论 全反式维甲酸能够在转录水平上调CX26、CX32基因在肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404中的表达。肝癌细胞SMMC-7721在CX26、CX32基因转录水平上调的同时伴有细胞间隙连接通讯功能的增强。肝癌细胞BEL-7404在CX26、CX32基因转录水平上调的同时不伴有细胞间隙连接通讯功能的增强。这说明两种细胞的间隙连接通讯功能调节机制不同。     

一组抗人肝癌单抗相应抗原的表达及位点分析

为分析肿瘤细胞的异质性，解决导向诊治中的问题。方法：我们用流工细胞仪定量地测定了四株抗人肝癌单抗在五种不同人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，ＢＥＬ－７４０２，ＱＧＹ－７７０１人肝癌细胞系ＨＨＣＣ，ＨＨＣＣ－９２０４和正常人肝细胞ＱＺＧ中的相应抗原表达及抗原位点分析。结果：Ｈ１８，Ｈ２７和Ｅ５相应抗原在五种人肝癌细胞株中均有表达，Ｆ１１在ＳＭＭＣ－７７２１，ＱＧＹ－７７０１两种肝癌细胞株有表达，但表达     

不同XAGE-1异构体在肝细胞癌中的表达

目的 探讨肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721以及肝癌患者肿瘤组织标本中的4种XAGE-1异构体的表达情况,同时研究其与肝癌患者临床病理之间的关系.方法 使用RT-PCR方法检测肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721以及80例肝癌患者肿瘤组织标本中的4种XAGE-1异构体的表达情况,同时收集患者临床资料,对XAGE-1b的表达与肝癌患者临床病理特征之间的关系进行研究.结果 XAGE-1b和XAGE-1d mRNA在肝癌细胞株和部分患者肿瘤组织标本中阳性表达[分别是35/80(43.75%)、6/80(7.50%)];而XAGE-1a和xAGE-1c mRNA在肝癌细胞株和肝癌患者标本中均为阴性表达;在对照组组织标本(4例肝血管瘤,8例肝破裂)中4种xAGE-1异构体均为阴性表达.XAGE-1bmRNA在肝癌组织中具有较高的表达率,并且其表达与肝癌TNM分期相关.结论 XAGE-1b在肝癌细胞中呈阳性表达,同时在肝癌组织中呈高度阳性表达,预示XAGE-1b的表达与肝癌预后相关,可作为其免疫治疗的潜在靶点之一.