大鼠脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的改变及转移生长因子β1的表达

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障（BBB)通透性的改变以及转移生长因子β1(TCF—β1)在脑组织中的表达。方法 采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型，通过测定脑组织中伊文氏蓝(EB)含量及免疫组化法来观察TGF—β1的表达。结果 缺血2h再灌注3h，BBB通透性开始增加，24h达高峰，72h后明显减弱。同时，TGF—β1在缺血再灌注3h开始表达，24h达高峰，持续至72h，72h后逐渐减弱。结论 脑缺血后BBB的破坏与TGF—β1的表达密切相关，提示TGF—β1参与了BBB内皮细胞破坏的修复过程。     

大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑皮质Occludin、ZO-1表达水平及血脑屏障通透性的影响

目的 观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达及变化趋势,探讨大麻二酚(CBD)对BBB的干预作用。方法 采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将大鼠随机分为3组：假手术组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和CBD干预组(TBI+CBD组),每组24只;每个组又分为损伤后8 h、1、2、3、5和7 d共6个时间点,通过免疫组化和免疫荧光染色,Western blot检测与BBB通透性密切相关的Occludin和ZO-1在不同时间点的表达情况;通过荧光素钠实验检测BBB通透性。结果 免疫组化实验结果表明,与假手术组相比,TBI后随着时间推移Occludin和ZO-1蛋白阳性表达减少（P<0.05）,2d达到最低;CBD干预1d后Occludin和ZO-1蛋白表达水平均上调（P<0.05）;免疫荧光染色实验与Westernblot结果趋势近似,与假手术组相比,TBI后Occludin和ZO-1荧光表达强度及蛋白表达量减少（P<0.05）,CBD干预2d后Occl...     

大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障通透性变化的研究

目的研究大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障（BBB）通透性的变化。方法参照Feeney’s自由落体致伤法,制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文氏兰（Evans Blue,EB）示踪,测定伤后不同时点皮层和海马脑组织中EB含量;应用荧光显微镜观察皮层和海马是否存在EB的渗出。结果损伤灶皮层和同侧海马中EB含量在伤后1～6h与伤后1～7d明显增多,高峰期在3h和3d。荧光显微镜下发现血脑屏障中间期损伤灶同侧海马仍然存在EB的渗出。结论大鼠顶叶局部脑挫裂伤后,损伤灶皮层和同侧海马BBB开放呈双相性变化,BBB开放中间期仍然有很少量EB渗出。     

大鼠蛛网膜下腔出血后血脑屏障通透性变化

目的 探讨大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性变化.方法 雌性SD大鼠80只,分为生理盐水对照组(NS组)和SAH组.采用经额叶底面蛛网膜下腔插管至Willis环注血法建立SAH模型,在SAH后6、12、24、36、48、60、72 h等不同时间点,应用荧光分光光度计和荧光显微镜方法分别检测大脑皮质BBB对伊文思蓝(Evans Blue, EB)的通透性,同时利用透射电镜观察BBB超微结构变化.结果 与NS组比较,大脑皮质EB含量和漏出量的最大值均出现在SAH后36 h时(P＜0.05),于60 h时恢复至正常水平(P＞0.05).BBB超微结构改变在SAH后36 h时最明显.结论 BBB通透性改变发生在SAH急性期,是由多种因素共同所致,而且SAH后BBB具有自我修复特性.     

依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

[摘要] 目的 观察自由基清除剂依达拉奉对创伤性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨自由基清除剂保护血脑屏障的作用机制。方法 采用大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,通过测定渗出血管外的EB（伊蓝）含量来评价BBB通透性的变化,采用免疫组化的方法检测各组大鼠脑MMP-9的表达。结果 脑缺血再灌注后3h脑组织EB渗出量增加,1d时达到高峰,2d以后逐渐减小。MMP-9在缺血再灌注12h起显著显著增加,2d达高峰期,依达拉奉组脑组织EB渗出量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01)。结论 脑缺血后MMP-9表达增高,BBB通透性增加。自由基清除剂依达拉奉可以保护BBB,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关。     

阿尔茨海默病小鼠模型中TRPC3通过上调ZO-1和LRP-1蛋白表达清除β淀粉样蛋白沉积

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）小鼠模型中经典瞬时受体电位通道3 (TRPC3)和血脑屏障（BBB）在β淀粉样蛋白（Aβ）沉积清除中的关系。方法 将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、二酰基甘油类似物（OAG）组和吡啶化合物（Pyr3）组,每组15只。侧脑室注射Aβ1-42建立AD小鼠模型。OAG组和Pyr3组小鼠分别连续21 d腹腔注射TRPC3激动剂OAG和抑制剂Pyr3。应用Morris水迷宫实验检测小鼠行为学,伊文思蓝（EB）染色检测小鼠BBB通透性,Western blotting检测小鼠紧密连接蛋白（ZO-1）、Aβ转运受体低密度脂蛋白受体相关蛋白1 (LRP-1)表达水平,ELISA测定小鼠海马和血清Aβ1-42浓度。结果 与假手术组比较,模型组小鼠学习记忆能力下降（P <0.001）,EB含量增加（P <0.05）,ZO-1、LRP-1蛋白表达下降（均P <0.01）,脑组织和血清Aβ浓度均升高（P <0.01,P <0.05）;与模型组比较,OAG组小鼠的学习记忆能力明显改善（P <0.05）,EB含量下降（P <0.05）,Z...     

利拉鲁肽对匹罗卡品致痫大鼠海马各区神经元凋亡的影响

目的探讨利拉鲁肽对大鼠癫痫持续状态后海马各区神经元凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠(n=54)随机分为空白对照组(n=6)、匹罗卡品模型组(SE组,n=24)、利拉鲁肽干预组(Liraglutide组,n=24);并根据发作终止后的时间点(12 h,1 d,3 d,7 d)将SE组和Liraglutide组各分为4个亚组(n=6)。采用免疫组化技术检测海马CA3和DG区BCL2和BAX蛋白的表达。结果与SE组相比,Liraglutide组在SE后12 h、1 d、3 d时CA3区BCL2表达水平升高(P0.05),而在SE后7 d时BCL2水平与SE组无差异(P0.05);在DG区,Liraglutide组在SE后1 d BCL2表达升高(P0.05),在SE后3 d时表达无差异(P0.05)。Liraglutide组相较SE组,在SE后12 h,DG区BAX表达开始明显降低(P0.01);在SE后1 d,CA3区BAX表达降低(P0.01);且在SE后3 d,Liraglutide组DG区和CA3区BAX表达都高于空白对照组(P0.05)。结论利拉鲁肽通过抑制癫痫持续状态后海马CA3区和DG区神经元凋亡发挥神经保护作用。     

地塞米松对脑出血大鼠脑AQP4影响的研究

目的通过建立大鼠自体血脑出血(ICH)模型,观察地塞米松对水孔蛋白4(AQP4)表达的影响及血脑屏障(BBB)的通透性与AQP4表达的关系。方法建立自体血ICH模型后,大鼠随机分为脑出血模型对照组(ICH组)和脑出血加地塞米松干预组(DEX组),观察脑出血后12h、1d、3d、5d、7d各点大鼠BBB通透性及AQP4的表达。结果ICH组大鼠BBB通透性从12h开始明显增加,1d达高峰(20.350±1.294),灶周AQP4的蛋白及其mRNA光密度值均至第3天达到高峰(0.806±0.113,1.112±0.072),BBB通透性的变化与AQP4蛋白及其mRNA的变化成正相关(r=0.898和r=0.847,P<0.01)。脑出血12h后DEX组BBB通透性和AQP4的表达均较ICH组降低。结论地塞米松可以保护脑出血大鼠BBB,并降低AQP4的表达,并且BBB通透性与AQP4及其mRNA成正相关。     

体外循环对大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白表达的影响

目的探讨体外循环（CPB）对大鼠血脑屏障（BBB）功能及脑血管内皮紧密连接蛋白表达的影响。方法 24只成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组（S组）和体外循环组（C组）。S组进行相应的麻醉和手术操作但不进行CPB,C组进行CPB 60 min并继续观察2 h。每组随机取6只测脑组织伊文思蓝（EB）含量,另6只做脑组织含水量测定、紧密连接蛋白Oc-cludin和ZO-1的表达以及大鼠BBB超微结构的观察。结果与S组比较,C组大鼠海马区脑组织EB含量和含水量升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。与S组比较,C组大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达水平下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。S组BBB基膜均匀一致,完整性良好,内皮细胞间的紧密连接完整;C组基底膜变厚,微血管腔狭窄,内皮细胞间紧密连接不清楚。结论 CPB使大鼠BBB的结构发生变化、通透性增加,其机制可能与大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白改变有关。     

钙拮抗剂对大鼠脑缺血后血脑屏障通透性的影响

目的:探讨钙拮抗剂对大鼠脑缺血后血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:制备脑缺血再灌注(CIR)大鼠模型150只,在大鼠缺血2h后进行再灌注。将大鼠平均分为观察组(尼莫地平)与对照组(生理盐水),在6、12、24、48、72h时间点分别进行再灌注,观察每个时间点BBB通透性损伤情况及梗死灶体积百分比。结果:随着时间的延长,CIR后BBB通透性与梗死灶体积百分比出现逐步上升,且在12、48h达到双高峰。观察组的BBB通透性及脑梗死灶体积百分比的上升较对照组明显(P<0.05)。结论:CIR能够提升BBB的通透性,增加梗死灶体积百分比,而早期使用钙拮抗剂能够加重上述情况。     

化痰通络法对急性脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障通透性及海马内皮细胞超微结构的影响

目的 观察化痰通络法对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活物( rt-PA)溶栓后神经功能缺损评分、血脑屏障通透性及海马内皮细胞超微结构的影响,为化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后出血转化提供实验依据.方法 选择健康雄性SD大鼠120只分为6组,即假手术组、模型组、rt-PA组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组(每组又分为6h、24h、3d、7d四个时相),采用自身栓子法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠,rt-PA组及中药组分别给予尾静脉注入rt-PA及联合3种不同剂量化痰通络中药干预.根据不同观察时相对大鼠进行神经功能缺损评分(Bederson's评分),采用依文思蓝染色(EB染色)检测血脑屏障(BBB)通透性,并通过电镜对大脑海马缺血区内皮细胞超微结构进行观察.结果 1.Bederson's评分:与模型组相比,rt-PA组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组神经功能缺损评分明显降低(P＜0.01);与rt-PA组相比,以rt-PA联合化痰通络法中剂量组、高剂量组神经功能缺损评分降低最为明显(P＜0.05).2.EB染色:与模型组相比,rt-PA组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组EB含量均明显减低(P＜0.01);与rt-PA组[6h:(236.72±79.79) ng/g;24h:(229.72±22.18) ng/g;3d:(163.34±24.45)ng/g;7d:( 133.21±25.09) ng/g]相比,以化痰通络法联合rt-PA中剂量组[6h:(121.63±33.27) ng/g;24h:(153.78±60.67) ng/g;3d:(76.05±27.11 )ng/g;7d:(72.97±25.81) ng/g]、高剂量组[6h评分( 123.11±23.65) ng/g;24h评分(138.36±52.36) ng/g;3d评分(83.00±32.00) ng/g;7d评分(75.06±13.97) ng/g]EB含量降低最为明显(P＜0.01).3.电镜观察:与模型组相比,治疗组均起到保护内皮细胞的作用,其中以rt-PA联合化痰通络法高剂量组24h时相内对内皮细胞的保护作用最好,rt-PA联合化痰通络法中剂量组对3d和7d的内皮细胞形态保护为最佳.结论 rt-PA联合化痰通络法溶栓可以保护溶栓后血脑屏障完整性及海马缺血区微血管内皮细胞,针对溶栓后不同时相调整中药的用药浓度,可以起到更好的效果.     

发育期癫痫持续状态大鼠海马Semaphorins-3A与突触素P38的表达变化

目的 观察发育期大鼠癫痫持续状态后海马内Semaphorins-3A、突触素P38的表达变化.方法 生后7d(P7)、14d(P14)、21d(P21)、28d(P28)四个日龄组SD幼鼠共320只,每个日龄组大鼠按随机数字法分模型组(SE组)和生理盐水对照组(NS组).用戊四氮(PTZ)诱导SE,免疫组化法观察SE发作后1d、7d、14d、21d、28d五个时间点海马CA1区Semaphorins-3A及突触素P38的表达.结果 Semaphorins-3A阳性细胞在海马颗粒细胞层表达最明显,阳性表达量随大鼠生理日龄的增加呈减少趋势,尤以P7组表达最明显(如91 552.68 ±4664.69);不管大鼠日龄如何,SE发作后大鼠海马结构内Semaphorins-3A免疫反应产物的分布特征及表达与NS组无明显变化,但是Semaphorins-3A表达量在SE后7d减少最明显(如56938.84±5688.47).生理状态下P7组日龄大鼠P38表达在1～ 14 d(5413.18 ±48.77,6223.40±29.19,6902.94 ±78.51)内存在逐渐增加的趋势,并在21 d (7523.42±62.94)逐渐稳定.其他日龄组大鼠生理状态下P38表达相对平稳在同一水平上.P7、P14、P21和P28等各日龄组SE发作后1～28d的时间点上海马CA1区P38免疫反应产物的IOD值较NS组增加(P＜0.05),其中均以SE发作后14d(如8408.35±55.73)增加达最高峰.结论 Semaphorins-3A和突触素P38参与了发育期及癫痫持续状态下大鼠海马突触可塑性变化.     

低剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后TGF-β1、HIF-1α和Nogo-NgR通路的影响

目的 探讨低剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factors 1-α,HIF-1α)和Nogo-NgR通路相关基因及蛋白表达的影响。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、超短波(ultrashort wave, USW)组,每组10只。对照组仅暴露脊髓,模型组、USW组采用改良Allen法建立脊髓损伤模型,USW组在造模24h后每日给予低剂量超短波干预,持续4周。采用运动评分量表(Basso-Beattie-Bresnahan, BBB)和斜板评分评价大鼠的后肢运动功能情况,利用Real-time PCR及Western blot法检测脊髓组织中TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠BBB评分与斜板评分显著降低(P<0.05),TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,USW组大鼠BBB...     

大鼠脑出血后脑含水量的变化及水蛭素的干预作用

目的：探讨大鼠脑出血（ICH）后脑含水量与血脑屏障（BBB）通透性之间的变化及水蛭素对ICH后脑水肿的作用.方法：采用自体动脉血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,将75只大鼠分成：对照组、脑出血组、水蛭素组,各实验组分6 h、1 d、3d、5 d、7 d等5个时间点.采用干湿重法测定不同时间点的脑含水量;按BELAYEV法使用伊文思蓝测定BBB通透性.结果：脑水含量和BBB通透性在ICH后6 h开始升高,3 d达到高峰,5 d到7 d开始下降,二者之间存在明显的相关性（r=0.815,P＜0.01）.水蛭素能够降低各个时间点的脑水含量和BBB通透性.结论：BBB通透性增高与脑水肿的形成密切相关;水蛭素可抑制ICH后的脑水肿形成,抗凝血酶治疗可能成为ICH后脑水肿的一种可行治疗方法.     

急性寒冷暴露对大鼠血脑屏障通透性的影响研究

目的:探讨不同时间急性寒冷暴露对大鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:通过-15℃低温暴露1、2、3h建立大鼠急性寒冷暴露模型,用比色法测定脑组织中伊文思蓝(EB)含量,结合干-湿比重法检测脑组织中含水量变化,探讨急性寒冷暴露对大鼠BBB通透性的影响。结果:寒冷暴露3h后大鼠脑组织水分含量和伊文思蓝含量明显增高,BBB通透性明显增加。结论:脑组织在寒冷暴露下BBB通透性增高,可能是寒冷导致中枢神经系统功能障碍的机制。     

亚低温对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶TGF-β_1表达的影响

目的:观察亚低温对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶TGF-β1表达的影响,探讨亚低温对脑缺血再灌注后的保护机制。方法:通过线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血时间为2 h。动物随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注(cerebral ischemic reperfusion,CIR)后正常体温组(normathermia)、缺血再灌注后亚低温组(hypothermia)。对大鼠进行神经功能缺损评分和计算梗死体积;使用免疫组化法检测TGF-β1的表达。结果:①大鼠CIR亚低温组6 h、12 h、24 h、3 d后神经功能缺损评分、缺血灶区域TGF-β1免疫阳性神经元细胞分别较常温组相应时间点明显增加(P<0.01);②大鼠CIR后梗死体积亚低温组较常温组对应时间点明显减小(P<0.01)。结论:大鼠CIR后3 d内亚低温可减轻脑损伤,其机制可能与亚低温缺血灶区域TGF-β1表达增多有关。     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后TGF-β1表达的影响

目的 探讨丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后TGF-β1表达的影响. 方法 选择健康成年SD大鼠(96只)为研究对象,随机分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)、缺血再灌注组(40只)、药物干预组(40只),后两组根据不同再灌注时间点再分为6h、24h、48 h、72 h、7天共5个亚组,每个亚组8只.采用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织中转化生长因子β1蛋白含量. 结果 缺血再灌注组、药物干预组各时间点组TGF-β1阳性细胞表达数均明显高于正常对照组和假手术组(P ＜0.05);6 h时,药物干预组TGF-β1阳性细胞表达与缺血再灌注组差异无显著性(P＞0.05),其余各时间点比较,药物干预组TGF-β1阳性细胞表达均明显高于缺血再灌注组(P＜0.05).丹红注射液干预后TGF-β1的表达上升,其中7天组表达明显高于其余各时间点干预组(P＜0.05).结论 丹红注射液能显著提高大鼠脑缺血再灌注损伤后TGF-β1的表达.     

针刺对急性期脑出血大鼠脑组织IL-10、TGF-β蛋白表达的影响

目的探讨针刺百会穴透曲鬓穴对急性期脑出血大鼠脑组织IL-10、TGF-β蛋白表达的影响。方法将54只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺+模型组(简称针刺组),每组按1 d、3 d、7 d分为3个亚组,每组6只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型,采用百会穴透曲鬓穴针刺干预,在1 d、3 d、7 d 3个时间点采用Longa评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估;免疫组化法检测血肿组织IL-10、TGF-β的表达。结果神经行为学:模型组大鼠出现不同程度的神经功能缺损症状。各时间点针刺组大鼠与同时间点模型组大鼠相比神经功能缺损明显减轻(P 0. 05)。免疫组化结果:在各时间点假手术组大鼠脑组织可见少量IL-10、TGF-β蛋白表达;模型组在各时间点IL-10、TGF-β蛋白表达均高于假手术组(P 0. 05);针刺组在3 d、7 d IL-10、TGF-β蛋白表达与模型组比较明显下调(P 0. 05)。结论针刺百会穴透曲鬓穴可以抑制IL-10、TGF-β蛋白的表达,降低血肿组织中炎症因子IL-10、TGF-β的含量,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损。     

大鼠脑出血后HIF-1α表达与血脑屏障通透性相关分析

目的 探讨血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白的表达变化与血脑屏障(BBB)通透性之间的关系.方法 SD大鼠56只随机分假手术对照组(sham组)和脑出血组(ICH组).ICH组又分为6h组、24h组、3d组、7d组和14d组,每组8只.采用自体血脑内注射法建立脑出血动物模型,测定血肿周边脑组织中伊文思蓝(EB)外渗量,以EB外渗量反映BBB通透性的变化,以免疫组化方法检测脑出血后不同时间血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白表达情况,并应用干湿比重法测定脑组织含水量.结果 脑出血后3d内,BBB通透性和脑组织含水量均呈进行性增加,并于出血后第3d达到高峰,此后逐渐下降,对照组与出血组脑组织含水量及BBB通透性比较差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血组HIF-1 α蛋白阳性表达率60.42%(29/48),对照组HIF-1 α蛋白阳性表达牢为0％,二者相比差异有统计学意义(P<0.05);脑出血后,HIF-1 α蛋白表达于出血后3d达到高峰并维持到第7d,脑出血后不同时间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05).HIF-1α的表达变化与BBB通透性和脑组织含水量均呈正相关(P<0.05).结论 HIF-1 α在血肿周边脑组织中的表达与BBB通透性改变及脑水肿的形成和发展密切相关.     

手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白和β淀粉样蛋白表达的影响

目的 探讨手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白(App)、β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响.方法 49只SD大鼠随机分成对照组(A组,n=7)、假手术组(B组,n=21)、肝部分切除术组(C组,n=21),B、C组大鼠分别在术后24 h、3 d、7 d三个时间点取左侧海马(n=7),放射免疫法测Aβ,取右侧海马热启动荧光定量PCR测AppmRNA.结果 (1)肝部分切除术后24h大鼠海马中App770(Ct)/GAPDH(Ct)为(1.39±0.05),低于对照组和假手术组(P＜0.05),说明此时App770mRNA的表达增加.但是手术对于App695mRNA、App751mRNA以及App770mRNA在其他时间的表达没有影响.假手术组App695mRNA、App751mRNA、App770mRNA的表达与对照组差异无显著性(P＞0.05).(2)肝部分切除术组大鼠海马中Aβ的表达在术后24h、3d、7d分别为(58.3±2.6)pg/ml、(48.0±3.7)pg/ml、(27.2±3.6)pg/ml,明显高于对照组和假手术组,(P＜0.05).在相应的时间点中,假手术组与对照组没有差异(P＞0.05).结论 肝部分切除术后大鼠海马中App770mRNA的表达增加,Aβ表达水平上调.