人结直肠癌干细胞休眠与增殖阶段细胞形态学的研究

目的初步研究人结直肠癌干细胞休眠与增殖阶段细胞形态的变化。方法流式细胞仪从新鲜人结直肠癌组织中分选EpCAMhigh／CD44＋／CD133＋细胞亚群,并通过裸鼠（NOD／SCID）成瘤实验鉴定其干细胞特性：采用三维培养,WST．1绘制人结直肠癌干细胞的生长曲线;流式细胞仪测定P27及Ki一67的表达水平,区分人结直肠癌干细胞休眠和增殖时相;细胞免疫荧光显示休眠期与增殖期人结直肠癌干细胞形态的变化。结果EpCAMhigh／CD44＋／CDl33‘细胞亚群在人结直肠癌组织中占1．6％．经NOD／SCID成瘤实验证实为人结直肠癌干细胞。人结直肠癌干细胞生长曲线呈“S”型;前3d生长缓慢,细胞为静止阶段（休眠期）,P27表达水平逐渐增加,Ki．67表达偏低;从第4d开始,细胞进入增殖期,Ki-67表达逐渐增加,P27表达降低。细胞免疫荧光染色显示：休眠期人结直肠癌干细胞圆而大,伪足少;而增殖期细胞伪足增多,呈现增殖和侵袭的状态。结论肿瘤的复发、转移可能与肿瘤干细胞的生长状态发生改变有一定关系;人结直肠癌干细胞增殖期与休眠期相比。呈现出明显增殖和侵袭能力：这为治疗人结直肠癌及其他肿瘤的复发和转移提供了新的切人点。     

苯乙酸对结直肠癌HCT-8细胞增殖抑制及同源盒基因表达的影响

目的探讨苯乙酸(PA)对结直肠癌HCT-8细胞株细胞增殖及同源盒(HOX)基因表达的影响。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法,以1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L的PA作用于HCT-8细胞,分别于244、8、72 h对细胞增殖进行检测。根据引物的不同,将已知的22种HOX基因分为3组(P1、P2、P3),应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测应用PA前后3组HOX基因mRNA的表达水平。HOX基因(组)表达水平用基因(组)与β肌动蛋白(-βactin)灰度比值表示。结果1.0~5.0 mmol/L PA作用HCT-8细胞24~72 h,随着PA浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率明显增加,PA作用24 h为5.1%~24.3%,48 h为16.7%~72.3%,72 h为30.2%~93.4%。RT-PCR法检测,结直肠癌HCT-8细胞中P1组HOX基因表达(0.770 1±0.088 3)明显强于P2组(0.122 1±0.078 2)、P3组(0.180 6±0.081 1,P<0.01)。应用2.0 mmol/L PA作用72 h后,P1组HOX基因表达(0.578 1±0.083 6)显著减弱,P2、P3组HOX基因表达(0.394 1±0.081 9)(、0.560 1±0.073 6)显著增强,与用药前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论PA可有效抑制结直肠癌HCT-8细胞的增殖;PA对HOX基因具有明显的调控作用,HOX基因有望成为结直肠癌基因治疗靶点。     

氟尿嘧啶对人结直肠癌CA-Ⅱ细胞G1/S期进程和细胞周期调控的影响

目的探讨氟尿嘧啶(5-FU)对结直肠癌细胞G1/S期进程和周期调控的影响;并观察治疗结果是否有药物剂量依赖性。方法采用细胞周期同步化方法,观察结直肠癌化疗主要药物5-FU对人结直肠癌细胞CA-ⅡG1/S期进程的影响,并探讨不同的区域化疗药物浓度与肿瘤杀伤作用的量效关系;并通过RT-PCR方法检测癌细胞在该时期内P16/cyclinD1/CDK4/Rb调控途径转录水平的改变。结果5-FU能够明显延长CA-Ⅱ细胞G1/S期的进程,阻抑细胞周期进展,其阻抑程度对5-FU有剂量依赖性;5-FU同时还可引起癌细胞G1/S期P16基因的转录增强,cyclinD1基因的转录减弱。结论高浓度药物所产生的细胞周期G1/S期阻滞作用可能是5-FU杀伤结直肠癌细胞的机制之一。     

围手术期营养支持对结直肠癌患者细胞周期蛋白D1表达及复发转移的影响

目的 探讨围手术期营养支持对结直肠癌患者肿瘤细胞cyclin D1表达及复发转移的影响.方法 将120例结直肠癌患者按其是否行营养支持分为营养支持组（60例）和对照组（60例）.围手术期营养支持方案：葡萄糖、脂肪乳剂、氨基酸及微量元素等组成的营养液,行全胃肠外营养,术前7 d,术后3 d.采用原位杂交检测cyclin D1的表达;采用TUNEL法检测细胞凋亡;采用细胞核抗原免疫组织化学染色检测细胞增殖.结果营养支持治疗后,营养支持组和对照组患者肿瘤组织cyclin D1阳性表达率分别为（35.23±5.12）%和（37.53±5.31）%;增殖指数分别为（7.21±2.56）%和（8.75±3.84）%;凋亡指数分别为（53.45±7.74）%和（56.74±8.02）%;差异均无统计学意义（P＞0.05）.两组患者术后3年复发率分别为16.7%和15.0%,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 围手术期营养支持不会影响cyclin D1的表达,也不会促进肿瘤复发和转移.     

围手术期营养支持对结直肠癌患者细胞周期蛋白D1表达及复发转移的影响

Objective To evaluate the effects of perioperative total parenteral nutrition on cyclin D1, recurrence and metastasis of colorectal cancer cells. Methods A total of 120 patients with colorectal carcinoma were randomly divided into two groups, namely group A (total parenteral nutrition,TPN,60 cases) and group B (non total parenteral nutrition, NTPN, 60 cases). In group A, the patients were given with TPN (including glucose, intralipid, amino acid, and vitamins, etc.) for 10 days perioperation (7 days preoperatively and 3 days postoperatively). In group B, the patients did not receive any nutrition support perioperative nutrition support. The samples were obtained by colonoscopy preoperatively or during operation. Apoptosis was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling (TUNEL) technique,expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) by immunohistochemical staining, and the expression of cyclin D1 by in situ hybridization. The apoptotic index (AI), the proliferating index (PI), and the expression of cyclin D1 were calculated perioperatively and postoperatively. Results After perioperative nutrition support, the expression rates of cyclin D1, PI and AI in group A and group B were (35.23±5.12)% and (37.53±5.31)%, (7.21±2.56)% and (8.75±3.84)%, (53.45±7.74)% and (56.74±8.02)% respectively. There were no significant difference of PI, AI and the expression of cyclin D1 (all P＞0.05) between two groups. The 3-year recurrent rates in two groups were 16.7% and 15.0%(P＞0.05). Conclusion Perioperative TPN can not promote proliferation and apoptosis of carcinoma cells, and has no significant impact on the expression of cyclin D1, recurrence or metastasis of colorectal cancer.     

围手术期营养支持对结直肠癌患者细胞周期蛋白D1表达及复发转移的影响

Objective To evaluate the effects of perioperative total parenteral nutrition on cyclin D1, recurrence and metastasis of colorectal cancer cells. Methods A total of 120 patients with colorectal carcinoma were randomly divided into two groups, namely group A (total parenteral nutrition,TPN,60 cases) and group B (non total parenteral nutrition, NTPN, 60 cases). In group A, the patients were given with TPN (including glucose, intralipid, amino acid, and vitamins, etc.) for 10 days perioperation (7 days preoperatively and 3 days postoperatively). In group B, the patients did not receive any nutrition support perioperative nutrition support. The samples were obtained by colonoscopy preoperatively or during operation. Apoptosis was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling (TUNEL) technique,expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) by immunohistochemical staining, and the expression of cyclin D1 by in situ hybridization. The apoptotic index (AI), the proliferating index (PI), and the expression of cyclin D1 were calculated perioperatively and postoperatively. Results After perioperative nutrition support, the expression rates of cyclin D1, PI and AI in group A and group B were (35.23±5.12)% and (37.53±5.31)%, (7.21±2.56)% and (8.75±3.84)%, (53.45±7.74)% and (56.74±8.02)% respectively. There were no significant difference of PI, AI and the expression of cyclin D1 (all P＞0.05) between two groups. The 3-year recurrent rates in two groups were 16.7% and 15.0%(P＞0.05). Conclusion Perioperative TPN can not promote proliferation and apoptosis of carcinoma cells, and has no significant impact on the expression of cyclin D1, recurrence or metastasis of colorectal cancer.     

microRNA-133b抑制人结直肠癌细胞迁移和侵袭的研究

目的研究microRNA-133b在结直肠癌细胞中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用实时定量PCR检测microRNA-133b(miR-133b)在不同恶性程度的结直肠癌细胞及正常结肠细胞中的表达差异;构建miR-133b的真核表达载体并稳定转染SW-620细胞,筛选出稳定表达miR-133b及对照质粒的细胞株SW-620-133b和SW-620-HK,实时定量PCR检测转染后miR-133b表达的变化;划痕实验检测miR-133b对SW-620细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-133b对SW-620细胞侵袭能力的影响。结果正常结肠细胞系CCD-18Co中miR-133b的表达显著高于4种结直肠癌细胞(SW-480,HT-29,LoVo,SW-620)(P0.05),且其在结直肠癌细胞中的表达随着肿瘤细胞恶性程度的增加而降低。稳定转染后,SW-620-133b细胞miR-133b表达量较SW-620及SW-620-HK组显著增高(P0.05);miR-133b对SW-620细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.2±2.6)%及(66.3±8.7)%。结论miR-133b在结直肠癌细胞中呈低表达,miR-133b高表达能显著抑制SW-620细胞的迁移和侵袭能力。     

长链非编码RNA调节细胞周期素D1表达对结直肠癌细胞辐射敏感性的影响

目的筛选影响结直肠癌细胞辐射敏感性的长链非编码RNA（1ncRNA）并探讨其作用机制。方法选取RKO和Lovo结直肠癌细胞株梯度照光后行克隆形成实验。应用单击多靶数学模型计算存活分数SF2值并绘制剂量存活曲线：高通量IncRNA／mRNA芯片筛选在RKO与Lovo、以及2Gv照光前后RKO细胞中表达差异2倍以上的lncRNA基因和蛋白编码基因：采用GeneOntology联合Pathway综合分析阳性表达基因主要作用通路：实时PCR进一步检测验证RKO细胞株照光前后P53、P21、细胞周期素（cyclin）D1表达变化。结果克隆形成实验显示,Lovo细胞株SF2=0．47．RKO细胞株SF2=0．53,Lovo辐射敏感性显著高于RKO（P〈O．05）。高通量lncRNA／mRNA芯片筛选得到阳性表达长链非编码RNA基因268条,蛋白编码基因270条;GeneOntologv联合Pathway综合分析显示：细胞周期相关基因所占比重最大（38．6％）,并有多条lncRNA表达水平与cvclinD1编码基因CCNDl组间表达差异显著相关。RKO与Lovo两株细胞P53和P21相对表达量的差异均无统计学意义（P〉0．05）,RKO细胞cyclinD1相对表达量明显高于Lovo细胞（P〈0．05）;RKO细胞株经2Gy剂量照射前后,P53和P21相对表达量的差异无统计学意义（P〉0．05）,而cvclinD1表达明显下调（P〈0．05）。结论incRNA可能通过形成转录复合物与CCNDl基因结合,调节cvclinD1蛋白表达进而影响结直肠癌细胞辐射敏感性：且lncRNA对cvclinD1表达的调节不依赖于P53-P21-cyclinD1通路。     

MTSS1蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制因子1（MTSS1）基因的表达与结直肠癌生物学行为及预后之间的关系。方法应用免疫组织化学的方法分析MTSS1蛋白在60例结直肠癌患者组织,以及60例同一患者癌旁10cm正常黏膜组织标本中的表达情况,并应用SPSS13．0软件对实验数据进行统计学分析,MTSS1在癌旁正常黏膜和结直肠癌组织中的表达采用卡方检验四格表,MTSS1蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理参数的数据采用RxC表的x2检验,校正使用Fisher确切概率法,以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果MTSS1在癌旁10cm正常黏膜和结直肠癌组织中的表达率分别为：100％（60／60）和28．3％（17／60）,在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁10em正常黏膜,其差异有显著统计学意义x2=67．013,P〈O．01）;MTSS1的表达与性别、年龄、病灶位置、癌组织大体分型和远处转移等因素均无明显关系钟=0．134、0．019、0．002、0．334、1．433、P〉0．05）;MTSS1表达下调与结直肠癌浸润深度、分化程度、淋巴结转移以及Dukes分期等因素相关（x2=9．520、13．849、7．171、8．026、P〈0．05）。结论MTSS1蛋白异常表达可能在结直肠癌的发生发展及其浸润转移中起着重要作用。     

反义人类端粒酶 RNA逆转录病毒载体构建及其对结直肠癌细胞的抑制作用

目的 研究反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体对结直肠癌HT29细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用。探讨以端粒酶为酸点的结直肠癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒，感染结直肠癌HT29细胞，采用RT-PCR检测hTR表达。端粒酶重复扩增法（telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性，绘制生长曲线了解细胞生长状态，倒置显微镜观察和DNA片段电泳检测细胞凋亡。结果 反义hTR作用后的结直肠癌细胞hTR表达下降，端粒酶活性和细胞生长受到明显抑制，细胞出现凋亡。结论 反义hTR对结直肠癌HT29细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制人舰艇可能以hTR为靶点对结直肠癌进行基因治疗。     

HGF下调Skp2表达抑制人肝癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子(HGF)对人肝癌细胞增殖的作用及其机制。方法：人肝癌细胞株HepG2用于实验。通过BrdU细胞增殖酶联免疫实验观察HGF对细胞增殖的作用,采用Western印迹和RT-PCR法检测HGF对S期激酶结合蛋白2(Skp2)表达的影响。将Skp2真核细胞重组表达质粒转染HepG2细胞并获得稳定转染的过表达Skp2的HepG2细胞,观察HGF对该转染细胞增殖的影响。结果： HGF对HepG2细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性的抑制作用;HGF明显抑制HepG2细胞表达Skp2蛋白和mRNA。但HGF对过表达Skp2的HepG2细胞无增殖抑制作用。结论：HGF对HepG2细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与下调Skp2表达密切相关。     

大肠癌细胞增殖中HGF/SF作用的观察

目的研究肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)在诱导大肠癌细胞增殖中的作用。方法采用W estern B lot方法,检测HGF的受体c-met在受检大肠癌细胞株Caco-2,Colo3 2 0中的表达;观察Caco-2,Colo3 2 0中HGF/SF活化p 4 2/p 4 4MAPK和p 3 8MAPK的动态变化;应用[3H]-TdR,MTT方法观察p 4 2/p 4 4MAPK和p 3 8MAPK传导通路阻滞剂PD 9 8 0 5 9和SB 2 0 3 5 8 0对HGF/SF诱导的大肠癌细胞增殖的抑制作用。结果(1)c-met在Caco-2和Colo3 2 0中有表达。(2)HGF/SF激活p 4 2/p 4 4MAPK,p 3 8MAPK:2 0 ng/mL的HGF/SF处理细胞,p 4 2/p 4 4MAPK磷酸化在1 0m in达高峰(2.2 8±0.0 1);p 3 8MAPK变化与之相似(2.2 5±0.0 1)。(3)HGF/SF诱导大肠癌细胞的DNA合成增加依赖于p 4 2/p 4 4MAPK的激活,在2 4 h时点分别以2 0 ng/m lHGF/SF,不同浓度(1μmol/L,5μmol/L,1 0μmol/L)的PD 9 8 0 5 9和SB 2 0 3 5 8 0处理细胞,HGF/SF使胸腺啶吸收增加(P<0.0 1);PD 9 8 0 5 9以浓度依赖性抑制胸腺啶的吸收(P<0.0 1)。(4)HGF促进Caco-2细胞的增殖,而PD 9 8 0 5 9对这种增殖有抑制作用。结论HGF激活大肠癌细胞Caco-2和Colo3 2 0中p 4 2/p 4 4MAPK和p 3 8MAPK;p 4 2/p 4 4MAPK参与HGF/SF诱导的大肠癌细胞Caco-2有丝分裂;HGF促进大肠癌细胞Caco-2增殖;HGF/SF和p 4 2/p 4 4MAPK在大肠癌细胞中发挥作用可能有细胞选择性。     

非气腹手助腹腔镜结直肠癌手术

目的探讨非气腹手助腹腔镜结直肠癌手术的可行性。方法回顾分析25例手助腹腔镜结直肠癌根治手术患者的临床资料,手术均在非气腹腹腔镜下进行操作。结果全组均获成功,手术时间(171.5 15.6)min;手术清除淋巴结(14.1士1.4)个,切除标本长度结肠癌为(23.8士2.3)cm,直肠癌为(19.4士1.5)cm。术后切口感染3例,未发生吻合口瘘等严重并发症,无手术死亡。结论非气腹手助腹腔镜结直肠癌手术是安全、可行、有效的,可达到结直肠癌根治性手术切除的要求。     

线粒体融合素基因2对肝癌细胞的增殖及对化疗敏感性的影响

目的：探讨线粒体融合素基因2(mfn2)对肝癌细胞的增殖及对化疗敏感性的影响。 方法：实验分3组：重组质粒pEGFPmfn2转染HepG2细胞为实验组,空质粒pEGFP–N2转染HepG2细胞为阴性对照组,HepG2细胞为空白对照组。RT-PCR和Western Blot 分别检测转染后各组细胞mfn2 mRNA和蛋白水平的表达。采用细胞计数法和MTT法检测mfn2基因对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期的分布情况;MTT法检测转染mfn2基因对化疗敏感性的影响。 结果：转染48 h 后,转染mfn2组细胞生长开始受到明显抑制,明显低于空白对照组和转染空载体组,差异均有显著性(P< 0.05);转染pEGFPmfn2组G0/G1期所占比例为(83.2±1.5)%,明显高于转染空质粒pEGFP组与空白对照组G0/G1期所占比例,差异均有显著性 (P<0.05)。实验组HepG2细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性增强。 结论：mfn2对肝癌细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞有关;mfn2可增强化疗药物的敏感性。     

腹腔镜辅助下结直肠癌手术的疗效分析

目的探讨腹腔镜辅助下结直肠癌手术的可行性、安全性、并发症及近期临床疗效。方法回顾性分析4年间1 1 2例腹腔镜下结直肠癌手术患者的临床资料,包括右半结肠切除2 3例,左半结肠切除7例,乙状结肠癌切除1 5例,D ixon术4 9例,M iles术1 8例。结果1 0 5例手术成功,7例因出血、肥胖及与邻近器官粘连而中转开腹手术,其中左半结肠2例,直肠癌4例。平均手术时间(1 6 1.2±4 8.6)m in,平均出血量7 8.5mL。术后早期并发症8例,无围手术期死亡。结肠癌标本近、远切缘长度分别为(1 4.5±3.2)cm和(1 1.0±2.6)cm,直肠癌标本近、远切缘长度分别为(15.3±2.7)cm和(2.8±1.6)cm。清扫淋巴结平均(8.2±4.6)枚,4 9例淋巴结转移。随访8~4 4个月,随访率9 5.5%。随访未发现戳孔肿瘤种植,局部复发7例(6.5%),远处转移6例(5.6%),总病死率7.5%(8/1 0 7)。结论腹腔镜下结直肠癌手术不仅安全可行,具有微创优势,并可达到与开腹同样的肿瘤根治性效果。     

新辅助化疗对结直肠癌的作用

目的探讨短程5-FU/CF方案新辅助化疗对结直肠癌细胞凋亡、增殖和p53表达以及术后并发症和预后的影响。方法分别采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）和免疫组化SP法检测68例患者结直肠癌组织的细胞凋亡指数（AI）和ki-67增殖指数（PI）及凋亡相关基因p53的表达,并比较新辅助化疗组和对照组患者术后并发症的发生情况和预后情况。结果新辅助化疗组肿瘤细胞的AI均数为3.56%,明高于对照组的2.29%（P〈0.01）,PI均数为22.60%明显低于对照组的33.60%（P〈0.01）,p53阳性表达率为28.9%（11/38）明显低于对照组的56.7%（17/30）（P〈0.05）。两组中大肠癌细胞的AI与PI均呈负相关（r=-0.790,r=-0.663）（P〈0.01）。两组术后并发症的发生差异无显著性（P〈0.05）。两组的复发转移率和复发转移平均时间差异有显著性（P〈0.05）。结论短程5-FU/CF方案新辅助化疗可以显著诱导结直肠癌细胞凋亡,并抑制其增殖;降低结直肠癌组织p53的阳性表达率,而不增加术后并发症的发生,能延缓和减少结直肠癌术后的复发转移。     

选择性Cox-2抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的: 探讨选择性环氧合酶-2(Cox-2)抑制剂Celebrex对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖的影响。方法:采用MTT比色法检测Celebrex对细胞系生长的影响;TUNEL染色法观察细胞凋亡指数,并用流式细胞仪定量分析；透射电镜和荧光显微镜检测细胞凋亡。结果:Celebrex抑制GBC-SD细胞系的生长呈剂量依赖性;40,80,120,160μmol/L浓度的Celebrex对GBC-SD细胞的生长抑制率分别是18.77%,25.32%,46.58%和52.19%（P<0.01）。流式细胞仪定量分析在40,80,120,160μmol/L浓度下的细胞凋亡率分别为（8.51±1.44）%,（12.40±0.87）%,（26.37±1.72）%和（43.21±0.39）%，与对照组（4.87±0.55）%比较有显著的统计学差异；各组间两两比较差异亦有显著性(均P<0.01)。透射电镜和荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。结论:Celebrex 可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。     

L-NAME对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对人大肠癌细胞（LS-174T）侵袭、运动能力的影响及其可能的机制。方法 用不同浓度的L—NAME干预LS-174T细胞，用硝酸还原酶法测定L-NAME对细胞分泌NO的影响；用重组基底膜侵袭实验观察药物对癌细胞侵袭、运动能力的影响；用RT-PCR法检测MMP2和TIMP2的表达。结果（1）L-NAME降低了sL-174T细胞NO的分泌，呈浓度依赖性。（2）0．2mmol／L，0．4mmol／L，0．8mmol／L和1．0mmol／LL-NAME处理sL-174T细胞72h，对细胞侵袭重建基底膜的抑制率分别为10．29％，19．62％，34．08％和42．23％（P〈0．05或P〈0．01）；（3）对细胞趋化运动抑制率分别为20．76％，24．95％，39．43％和46．85％（P〈0．01），同时可降低细胞MMP2mRNA的表达，而提高TIMP2 mRNA的表达。（4）NO浓度与MMP2mRNA表达呈正相关（r=0．8124，P〈0．01），而与TIMP2mRNA呈负相关（r=-0．7106，P〈0．01）。结论L-NAME具有抑制sL-174T细胞侵袭和转移的作用；L—NAME的抗侵袭活性与肿瘤细胞MMP2mRNA和TIMP2mRNA的表达有关。     

SFPQ在肝细胞癌的表达及其对细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨脯氨酸、谷氨酰胺剪接因子(SFPQ)在肝细胞癌(HCC)中的表达及作用。方法:采用实时定量PCR及Western blot检测HCC患者的癌组织和对应癌旁组织SFPQ mRNA及蛋白表达。采用TCGA和GEO数据库分析正常肝组织及HCC组织中SFPQ的表达丰度差异;采用TCGA数据库分析SFPQ表达与HCC患者临床分期、病理分级以及患者生存期的关系以及与增殖基因PCNA、Ki-67和周期蛋白CCNE1、CDK2的相关性。观察敲低HCC细胞株HepG2及Hep3B中SFPQ的表达后增殖能力与细胞周期的变化。结果:组织标本分析结果显示,SFPQ mRNA及蛋白表达水平在HCC组织中明显高于癌旁组织(均P0.05)。数据库分析结果显示,HCC组织中SFPQ mRNA表达丰度明显高于正常肝组织,且患者临床分期及病理学分级越高,SFPQ mRNA水平越高,高表达SFPQ的患者的总生存率明显降低,SFPQ mRNA表达与PCNA、Ki-67、CCNE1、CDK2的表达均呈明显正相关(均P0.05)。敲低SFPQ表达后,HepG2及Hep3B细胞的增殖能力明显减弱,并出现明显G1期阻滞(均P0.05)。结论:SFPQ在HCC中表达升高,升高的SFPQ可通过调节HCC细胞周期,促进HCC细胞的增殖,加速肿瘤进展。