正常上皮细胞特异性-1基因在胃癌细胞株中的表达及甲基化调控

目的:研究正常上皮细胞特异性-1(NES1)基因表达及其CpG岛甲基化状况与胃癌的关系。方法:分别培养胃癌细胞MKN-28(高分化)、SGC-7901、AGS(均中分化)、MKN-45(低分化)、HGC-27(未分化)和原代正常胃上皮细胞。提取细胞RNA,经RT-PCR检测NES1在各细胞株中的表达。以不同浓度DNA去甲基化抑制剂5-aza-dc处理胃癌细胞,RT-PCR检测其NES1mRNA表达。提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后MSP分析其CpG岛甲基化状态。结果:各肿瘤细胞株中NES1mRNA表达较胃正常上皮细胞有不同程度降低。甲基化检测显示NES1表达减少的胃癌细胞株均存在不同程度的NES1基因外显子3CpG岛甲基化。NES1表达降低的胃癌细胞株经5-aza-d处理后NES1表达上调。结论:NES1胃癌细胞株中低表达,表达下调与该基因外显子3周围CpG岛甲基化有关。5-aza-dc可使NES1表达降低的胃癌细胞株重新表达NES1mRNA。提示NES1基因CpG岛甲基化可能是NES1在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制。     

胰腺癌细胞中Runx3基因表达及甲基化的研究

目的观察胰腺癌细胞中Runx3基因表达的情况,探讨其出现表达异常的机制。方法 (1)RT-PCR检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3mRNA表达情况(2)Western blotting检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3蛋白表达情况;(3)甲基化特异性PCR(MSP)检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、As-PC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果 (1)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3基因mRNA表达,而正常胰腺组织可检测到Runx3基因mRNA表达;(2)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3蛋白表达;(3)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3基因启动子区CpG岛均发生甲基化,而正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛未检测到甲基化。结论胰腺癌细胞中存在Runx3基因失表达,其机制可能与Runx3基因启动子区CpG岛发生甲基化有关。     

抑癌基因RASSF1A及其甲基化的研究进展

RASSF1A基因位于染色体3p21.3区,是一种新型抑癌基因,多项研究表明它可参与细胞凋亡和多种恶性肿瘤的发生。在多种肿瘤中失活,该基因的失活与其启动子区CpG岛甲基化有关。通过逆转RASSF1A基因甲基化状态使其重新表达,为肿瘤的治疗提供了新思路。     

膀胱移行细胞癌A激酶锚定蛋白12基因转录表达与其启动子区甲基化状态的相关性

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与临床病理参数之间的关系.方法 用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测30份膀胱移行细胞癌组织及其癌旁组织中AKAP12基因mRNA的表达水平及其启动子区CpG岛甲基化状态.并用亚硫酸盐修饰后PCR产物进行克隆测序.结果 在30份膀胱移行细胞癌患者组织标本中,AKAP12在癌组织中表达下调比率为73.3%(22/30),在病理Ⅱ和Ⅲ级膀胱移行细胞癌中下调比率明显高于Ⅰ级(P=0.02).MSP检测结果显示,膀胱移行细胞癌甲基化比率为53.3%(16/30),且与膀胱移行细胞癌TNM分期(r=0.52,Pn=0.03)和病理分级(r=0.61,Pn=0.01)有明显的相关性.结论 AKAP12基因启动子区出现的异常甲基化可导致其在膀胱移行细胞癌中的表达沉默,且与膀胱移行细胞癌的发生有关.     

丙戊酸钠协同5-氮-2'-脱氧胞苷对U266细胞RASSF1A基因表达调控的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Azs-CdR)联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞中Ras相关区域家族1基因(RASSF1)的表达调控以及对细胞生物学活性的影响.方法 5-Aza-CdR、VPA单独或联合干预U266细胞,甲基化特异性PCR(MS-PCR)法和实时荧光定量-PCR(RQ-PCR)法检测药物干预前后RASSF1A基因甲基化状态和RASSF1A mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的改变.结果 未经药物处理的U266细胞检测到RASSF1A基因启动子区域的高甲基化,RASSF1A基因微弱表达,5-Aza-CdR可逆转RASSF1A基因CpG岛高甲基化.诱导U266细胞RASSF1A基因呈剂量依赖性表达(P<0.05),VPA不能诱导U266细胞RASSFlA基因表达,联合用药组U266细胞RASSF1A mRNA的表达明显增强(P相似文献   

乳腺癌组织及癌旁组织HER2基因CpG岛甲基化水平及其mRNA表达的研究

目的探讨乳腺癌组织及癌旁组织人类表皮生长因子受体2(HER2)基因CpG岛甲基化率和HER2mRNA表达的差异。方法收集经病理确诊的50份乳腺癌组织和对应的癌旁组织样本,采用焦磷酸测序法、实时聚合酶链反应(PCR)和免疫组化法分别检测HER2启动子CpG岛甲基化率、HER2 mRNA表达和HER2蛋白表达。结果 HER2阳性乳腺癌组织HER2 mRNA相对表达量高于HER2阴性癌组织(P0.05),但HER2启动子CpG岛甲基化率差异无统计学意义(P0.05)。HER2阴性乳腺癌组织HER2基因启动子CpG岛甲基化率显著高于对应的癌旁组织(P0.05),而HER2 mRNA表达则低于对应的癌旁组织(P0.05)。HER2阳性的乳腺癌组织与其对应的癌旁组织之间以及HER2阳性与阴性癌旁组织之间,HER2基因启动子CpG岛甲基化率和HER2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论在HER2阴性的乳腺癌癌旁组织中,HER2基因启动子CpG岛的低甲基化可能是HER2 mRNA高表达的机制之一。     

食管鳞癌细胞中五聚素3基因的表达及甲基化

目的研究食管鳞状细胞癌(ESCC)中五聚素3(PTX3)基因的表达以及基因启动子区甲基化状态对其表达的影响。方法采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(MSP)、亚硫酸氢盐测序等方法对ESCC细胞进行检测PTX3基因mRNA的表达、基因启动子区甲基化状态。应用甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-DC)去甲基化处理对该基因表达的影响。结论 RT-PCR结果显示PTX3 mRNA在细胞株TE-11、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE510均不表达,在KYSE410,Het-1A细胞株中有PTX3 mRNA表达。MSP结果显示TE-11、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE510存在PTX3基因甲基化,而KYSE410,Het-1A细胞株中不存在PTX3基因甲基化。甲基化测序结果进一步证实了MSP结果结果,28个CpG位点中,TE-11、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE510甲基化程度分别为64.3%,81.0%,94.5%,78.5%及81.0%,而KYSE410,Het-1A不存在甲基化。ESCC细胞株PTX3基因启动子处于异常的高甲基化状态,经5-Aza-DC处理后,高甲基化的PTX3基因启动子去甲基化,处理前PTX3基因启动子高甲基化的细胞株其mRNA均不表达,去甲基化处理后能重新激活该基因表达。结论 PTX3基因启动子高甲基化是PTX3表达失活的主要原因之一,PTX3基因启动子甲基化检测可作为ESCC的潜在肿瘤标志物之一。     

膀胱癌组织中上皮细胞钙依粘连蛋白基因启动子区CpG岛甲基化状态的分析

目的探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E-cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状态及其与mRNA表达的关系.方法收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态;采用逆转录PCR检测E-cadherin基因的mRNA表达.结果 E-cadherin基因在膀胱癌组织中的甲基化阳性率(43.3%)显著高于在癌周正常组织中的甲基化阳性率(6.7%,P＜0.01);在复发性膀胱癌中的甲基化阳性率(64.7%)显著高于在原发性膀胱癌中的甲基化阳性率(15.4%,P＜0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性.13例异常甲基化的膀胱癌组织中有10例未检测到CDH1 mRNA的表达,而13例未甲基化膀胱癌组织中有2例未检测到,二者差异有显著性(P＜0.01).结论 E-cadherin在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床分期和病理分级无显著相关性,提示其可能参与了膀胱癌的发生;E-cadhenn基因CpG岛的过甲基化可能成为判断膀胱癌复发的指标之一;E-cadhenn基因CpG岛的过甲基化可能是造成E-cadherin mRNA不表达的原因之一.     

急性髓系白血病E-cadherin基因表达和CpG岛甲基化状态的研究

目的 探讨急性髓系白血病（AML）患者中上皮钙黏附素（E-cadherin）基因表达及其甲基化状态。方法 分别用RT-PCR和流式细胞术方法检测55例AML患者骨髓细胞和7份正常对照骨髓细胞中E—cadherin基凶和蛋白的表达，并用甲基化特异性PCR方法分析E—cadherin基因5’端CpG岛的甲基化状况。结果 55例AML患者骨髓细胞中E-cadherinmRNA和蛋白表达阳性率分别为23．6％和18．2％，较正常对照组明显下调（P值均〈0．01）；E—cadherin基因5’端甲基化的阳性率为69．1％。E-cadherin mRNA和蛋白表达阴性的31例患者中，29例（93．5％）E—cadherin甲基化阳性，其蛋白水平和mRNA表达水平与启动子甲基化呈明显负相关（P〈0．01）。7份正常对照骨髓细胞E—cadherin mRNA和蛋白表达均为阳性，E—eadherin基因的CpG岛无明显甲基化。结论 AML的粒系分化成熟障碍可能与E—cadherin基因表达下调有关。5’端CpG岛的甲基化可能影响E-cadherin基因表达。     

RASSF2A基因启动子甲基化与肿瘤关系的研究进展

肿瘤抑制基因（TSG）的失活是癌症发病机制的关键因素。TSG失活可能是不可逆的,比如基因缺失或突变;TSG失活也可能通过表观遗传的机制,是可逆的,这为寻找更适合的治疗方法或治疗药物提供了理论基础。CpG 双核苷酸很少出现在人类基因中,但在某些基因的启动子区发现 CpG 保持或高于正常概率,即CpG岛,其甲基化在基因表达的调控上起关键作用。RAS相关区域家族2A（RASSF2A）位于染色体3p21．3,这个区域被证实在一些肿瘤中频繁缺失;其中RASSF2A的表观遗传失活是重要的分子改变。最近的一些研究已陆续阐明了RASSF2A启动子甲基化在肿瘤诊断和预后中的潜在意义,本文对其研究进展综述如下。     

膀胱癌和肾癌中RASSF1A和BLU的甲基化状态

目的探讨RASSF1A和BLU在膀胱癌和肾癌中启动子甲基化状态及其意义。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别在45例膀胱癌组织和相应癌周正常组织、12例肾癌组织及其相应癌周正常组织和3例非肿瘤患者正常膀胱组织中检测RASSF1A和BLU启动子区域的甲基化状态。结果膀胱癌组织中,RASSF1A和BLU甲基化率分别为55.6%和31.5%;肾癌组织中,两基因甲基化率为66.7%和33.3%。RASSF1A和BLU启动子甲基化状态与膀胱癌临床病理参数无明显相关性（P〉0.05）。在膀胱癌或肾癌中,RASSF1A和BLU启动子甲基化状态之间均无明显相关性（P〉0.05）。结论膀胱癌和肾癌中,RASSF1A和BLU频繁发生高甲基化,高甲基化可能参与膀胱癌和肾癌两类肿瘤的发生。     

骨肉瘤组织与血浆中RASSF1A甲基化的检测及其临床诊断意义

【目的】寻求有助于骨肉瘤临床诊断的分子生物学标志物。【方法】甲基化特异性 PCR 法检测30例骨肉瘤患者肿瘤组织和血浆及15例健康志愿者骨组织和血浆中 RASSF1A 启动子甲基化情况。统计分析RASSF1A 甲基化与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤分化、肿瘤转移等临床病理特征的相关性。【结果】正常骨组织及血浆中均未检测到 RASSF1A 基因启动子区的甲基化。骨肉瘤组织中 RASSF1A 甲基化阳性率为40％（12／30）,血浆甲基化阳性率为26．7％（8／30）。12例肿瘤组织甲基化阳性患者其血浆甲基化阳性共8例,癌组织和血浆 RASSF1A 甲基化一致率为66．7％（8／12）,18例癌组织甲基化阴性其血浆甲基化也为阴性,Kappa 一致性检验显示骨肉瘤组织和血浆中 RASSF1A 甲基化水平具有一致性（κ＝0．133,P ＜0．05）。骨肉瘤组织及血浆中 RASSF1A 甲基化阳性率显著高于正常骨组织及血浆的甲基化阳性率（ P ＜0．05）,且骨肉瘤组织和血浆中 RASSF1A 甲基化水平与患者的性别、年龄、肿瘤位置无关（ P ＞0．05）,而与肿瘤的分化及有无远处转移有关（ P ＜0．05）。【结论】骨肉瘤患者血浆中 RASSF1A 启动子甲基化与骨肉瘤组织中变化具有一致性,可作为骨肉瘤患者临床诊断的一个辅助指标。     

宫颈脱落细胞RASSF1A基因甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究宫颈脱落细胞RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测宫颈癌患者和健康女性宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化,分析与病理因素间的关系。结果宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率为64.0%,高于健康女性的1.3%(P<0.05)。宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率在宫颈癌不同组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、Figo分期患者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌病理因素密切相关,可作为宫颈癌病情判断和预后评估的标志物。     

白血病患者RASSF1A基因甲基化状态及其临床意义

目的研究白血病患者骨髓中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测86例白血病患者和60例非白血病患者对照组骨髓中RASSF1A基因启动子的甲基化状况,分析不同白血病类型之间的差异。结果 86例白血病患者中,有12例(13.95%)RASSF1A基因启动子甲基化,而60例非白血病患者骨髓均未检测到甲基化,二者比较差异均有统计学意义(P<0.05)。淋巴系白血病患者RASSF1A基因甲基化比例(23.1%)明显高于髓系白血病患者(6.4%)(P<0.05)。结论白血病患者骨髓中存在RASSF1A基因甲基化,淋巴系白血病甲基化比例明显高于髓系白血病。RASSF1A基因甲基化检测可能成为白血病分型的生物标志物之一。     

GGTase-1在人脑胶质瘤中的表达及其意义的研究

目的：研究GGTase-1在人脑胶质瘤中的表达,并分析其表达与胶质瘤病理级别的关系,探讨GG-Tase-1对人脑胶质瘤发生、发展所起的作用,从而为胶质瘤的治疗提供一定的理论依据。方法：分别应用半定量RT-PCR法和WesternBlot法检测15例人脑胶质瘤标本和4例正常脑组织中的GGTase-1β亚单位（GGTβ）mR-NA水平和蛋白水平;应用免疫组织化学法检测29例人脑胶质瘤组织标本和6例正常脑组织中GGTβ蛋白表达与定位情况。结果：GGTβmRNA和蛋白在各级人脑胶质瘤和正常脑组织均可表达,但在人脑胶质瘤中的表达明显高于正常脑组织（P〈0.05）;并且GGTβmRNA和蛋白在人脑胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组中的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ级组（P〈0.05）。结论：①GGTase-1在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达,但在人脑胶质瘤中呈明显高表达,可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关。②GGTase-1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。     

NOB1影响胶质瘤细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1基因的表达,探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响.方法 构建NOB1基因的短发卡（shRNA）慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和U87-MG细胞,采用实时定量聚合酶链反应检测NOB1在恶性胶质瘤细胞系中的表达.采用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况;同时利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察NOB1基因对U251和U87-MG细胞增殖、凋亡的影响.结果 NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达.NOB1-shRNA慢病毒能有效感染胶质瘤细胞,实验结果显示感染后U251和U87-MG细胞的增殖能力明显下降;U251克隆形成能力明显受到抑制;细胞周期在G0/G1停滞,而且细胞出现显著性凋亡;上述差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达;降低NOB1基因的表达,可以显著降低胶质瘤细胞的增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡;NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用.