乌索酸诱导K562/DNR细胞凋亡的实验研究

目的通过体外细胞实验,证实乌索酸对柔红霉素(DNR)诱导的K562耐药细胞株(K562/DNR)有细胞毒和诱导凋亡作用,并摸索出作用的最佳浓度和时间,为乌索酸治疗血液系统恶性肿瘤奠定理论基础。方法利用WST-8分析,研究不同浓度和作用时间的乌索酸对K562/DNR细胞的体外细胞毒作用情况;利用流式细胞仪技术,研究不同浓度和作用时间的乌索酸诱导K562/DNR细胞凋亡的情况。结果乌索酸对K562/DNR细胞增殖具有明显抑制作用,诱导凋亡作用亦显著,并呈现一定的时间、浓度依赖性。结论乌索酸对于K562/DNR细胞具有确切的抗肿瘤活性。     

东亚钳蝎毒诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 研究东亚钳蝎毒（BMK）在体外诱导白血病细胞株K562凋亡的作用。方法 流式细胞仪检测细胞凋亡率，应用RT．PCR检测野生型p53基因的表达。结果 经BMK作用于细胞后，细胞的总凋亡率均有升高；RT—PCR检测提示经BMK作用后的K562细胞p53基因的表达上调。结论 BMK能诱导K562细胞凋亡，可能促进P53基因表达上调是其机制之一。     

环孢菌素A诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：本实验旨在观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响。方法：采用瑞氏染色、DNA电泳、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响。结果：20μmol/L环孢菌素A作用24小时可诱导K562细胞凋亡，瑞氏染色呈瑞典型的凋亡形态学改变，DNA电泳呈“阶梯状”条带，流式细胞仪显示凋亡峰，细胞周期分析环孢菌素A可使K562细胞生长阻滞于G0－G1期，环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组（P＜0．01）。结论：环孢菌素A可诱导K562细胞株凋亡。     

桂皮酸诱导K562细胞凋亡及其机制的初步研究

目的探讨桂皮酸对K562细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法应用MTT测出 IC50,应用免疫荧光显微镜,DNA Ladder,流式细胞仪,检测凋亡的发生,应用RT-PCR琼脂糖凝胶电泳检测bcl-2基因表达的差异。结果经MTT检测发现IC50为1 mmol／L,24 h后药物基本达到了较佳的效果,且免疫荧光显微镜、DNA Ladder、流式细胞仪检测均有凋亡的发生,RT-PCR结果显示,经桂皮酸处理24h后,bcl-2基因表达明显降低。结论1 mmol／L的桂皮酸作用24 h后可以引起K562 细胞发生凋亡,并且bcl-2基因表达下调是引起凋亡的原因之一。     

干扰素-γ通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究探讨干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。方法：通过流式细胞技术（FCM）检测干扰素-γ作用后的细胞凋亡情况及Fas、FasL表达情况。结果：MCF-7乳腺癌细胞经干扰素-γ作用后凋亡细胞百分率增加,FasL表达与对照组相比也增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,Fas表达无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：干扰素-γ可通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。     

葛根提取物诱导K562细胞凋亡

目的 探讨葛根提取物(PL)对慢性粒细胞自血病(CML)细胞株K562的凋亡诱导作用及其可能的分子机制.方法 以不同浓度(0、2.5、5、10和20 mg/ml)PL处理K562细胞,24 h后光镜下观察形态学改变,MTT法测定细胞增殖抑制,Hoechest 33258荧光染色及FITC-Annexin V/PI双染法检测凋亡率变化,半定量RT-PCR及Western blot方法检测Bcr/abl、Bcl-2、p53、Fas/FasL蛋白表达.结果 PL对K562细胞有明显的增殖抑制作用,并观察到典型的细胞凋亡形态变化,细胞凋亡率与浓度呈正相关;不同浓度PL干预后Bcr/abl基因在mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性下调,而 Bcl-2基因则无明显变化;p53表达呈浓度依赖性上调;Fas/FasL表达无明显变化.结论 不同浓度PL能有效诱导K562细胞凋亡;其机制可能通过在mRNA和蛋白水平下调Bcr/abl基因,上调p53基因表达而实现.     

一叶秋碱诱导K562细胞凋亡

目的研究一叶秋碱（ＳＥＣ）能否诱导Ｋ５６２细胞凋亡。方法细胞增殖抑制采用ＭＴＴ法;形态学研究采用电子和荧光显微镜;流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ断裂。结果ＳＥＣ１０～１６０ｍｇ·Ｌ－１呈剂量依赖性抑制Ｋ５６２细胞增殖（ｒ＝０９６１３,Ｐ＜００５）;ＳＥＣ作用４８ｈ后,电镜下可见细胞膜完整,核染色质边聚和凋亡小体;荧光显微镜下核染色质凝聚成点状结构;流式细胞仪出现凋亡峰;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳可见“梯状”图谱。结论ＳＥＣ可诱导Ｋ５６２细胞调亡。     

天南星醇提取液诱导人K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨天南星醇提取物对人K562细胞的细胞凋亡作用.方法:采用四唑盐比色法(MTT)测定天南星醇提取物对人K562细胞的抑制作用,采用流式细胞术检测天南星醇提取液对人K562细胞凋亡的影响.结果:天南星醇提取液可明显抑制人K562细胞株的增殖,实验组与对照组间差异有统计学意义(P<0.01).IC<,50>达到65.07 μg·mL<'-1>.流式细胞学检查发现天南星提取物处理后的人K562细胞出现凋亡现象,且有一定的量效和时效关系.结论:天南星醇提取液能抑制体外培养人K562细胞的增殖,可能是通过诱导K562细胞的凋亡来实现的.     

辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制。方法:取浓度为0(阴性对照组)、10、20、30μmol·L-1的辛伐他汀作用K562细胞72h后,双染色法检测细胞凋亡率;DNALadder实验检测细胞凋亡条带;用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白;逆转录-聚合酶链反应法检测GRP78、caspase-9、caspase-3、GADD153mRNA表达;Western blot法检测GRP78、caspase-12、caspase-9、caspase-3、GADD153、细胞色素C蛋白水平。结果:与阴性对照组比较,10、20、30μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞72h后出现典型的凋亡条带,凋亡率分别为12.41%、19.08%、23.41%(P<0.01),GRP78、caspase-9、caspase-3和GADD153 mRNA表达上调(P<0.05),caspase-12、caspase-9、caspase-3蛋白水平下降,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放,GRP78、GADD153蛋白表达上调。结论:辛伐他汀可通过内质网和线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

榄香烯诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究榄香烯抗肿瘤的作用机制。方法用流式细胞仪和琼脂糖电泳检测DNA断裂,透射电镜观察超微结构变化。结果260μmol·L-1榄香烯孵育K562细胞6、12、24、48h后流式细胞仪检测到逐渐增强的凋亡峰,电泳发现明显的阶梯状条带,电镜观察到染色体聚集、凋亡小体。结论榄香烯能诱导K562细胞凋亡。     

毛细管气相色谱法测定莪术油中吉玛酮和β-榄香烯的含量

目的建立以毛细管气相色谱法测定莪术油中吉玛酮和β榄香烯含量的方法。方法内标法,以水杨酸甲酯为内标物。采用OV 1701为固定液,柱长25 m、内径0.2 mm、液膜厚度0.25μm的毛细管色谱柱;程序升温:起始温度100℃,5℃.min-1,结束温度200℃;载气为氮气,流速1.5 mL.min-1。氢火焰离子化检测器。结果吉玛酮进样量在0.077~0.384μg内与峰面积比值(吉玛酮/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系,r=0.999 8(n=5),平均回收率99.1%(RSD 0.85%,n=6);β榄香烯进样量在0.715~14.300 ng内与峰面积比值(β榄香烯/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=5),平均回收率100.4%(RSD 0.58%,n=6)。结论毛细管气相色谱法可作为莪术油中吉玛酮和β榄香烯的含量测定方法。     

三氧化二砷通过JNK信号通路诱导K562细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡中的作用及机制。方法:体外培养K562细胞,用As2O3及特异性JNK抑制剂SP600125对K562细胞进行处理;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;AnnexinV/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测p-JNK蛋白表达的变化;流式细胞术检测突变型P53表达。结果:ELISA显示4μmol/LAs2O3作用48h后p-JNK蛋白表达增强,经SP600125预处理后,As2O3诱导的K562细胞p-JNK蛋白表达明显减弱(P<0.01),As2O3诱导的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均下降,与As2O3单作用组相比突变型P53表达增加(P<0.05)。结论:JNK信号转导通路在As2O3诱导K562细胞凋亡过程中发挥重要作用,是As2O3诱导K562细胞凋亡的主要途径之一。     

青黛复方对K-562细胞Bcr/Abl融合基因及p210蛋白表达的影响

目的 探讨青黛复方对K-562细胞调亡、Bcr/Abl融合基因及p210蛋白的影响.方法 以不同浓度青黛复方(0、2.5、5、7.5、10和20 mg/ml)处理K-562细胞24 h后,采用半定量RT-PCR技术检测各组Bcr/Abl融合基因的表达,Western blot技术检测p210 Bcr/Abl蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 随药物作用浓度升高,K-562细胞凋亡率呈浓度依赖性增加;Bcr/Abl在mRNA和蛋白水平均呈浓度依赖性下调,尤以10 mg/ml和20 mg/ml处理组更为显著.结论 青黛复方能部分抑制K-562细胞Bcr/Abl的表达并呈浓度依赖关系,其对慢性髓细胞性白血病(CML)的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的.     

Autophagic and apoptotic mechanisms of curcumin-induced death in K562 cells

Curcumin (1), a natural polyphenolic compound, has shown strong antioxidant and anticancer activities. Several molecular mechanisms have been attributed to its inhibitory effects on a wide range of tumor cells. In this study, the response of the chronic myeloid leukemia cell line K562 cells to 1 is investigated. Curcumin inhibited the viability of K562 cells in a dose- and time-dependent manner. Furthermore, curcumin-induced cell death was associated with the formation of the apoptosome complex, the collapse of the mitochondrial membrane potential, and caspase-3 activation. Curcumin treatment also induced Bid cleavage and downregulated the expression of Bcl-2 protein. Surprisingly, even with these molecular features of apoptosis, we showed that 1 stimulated autophagy, which was evidenced by microtubule-associated protein light chain 3 (LC3) immunoreactivty. Curcumin also increased the protein levels of beclin 1 and membrane form LC3 (LC3-II). Autophagy inhibitor bafilomycin A1 and the pan-caspase inhibitor Z-VAD-fmk suppressed curcumin-induced K562 cell death. Overall, these results suggest that curcumin induces autophagic and apoptotic death of K562 cells. These findings suggest that both apoptotic and autophagic mechanisms contribute to the curcumin-induced K562 cell death.     

色胺酮对人白血病细胞株K562细胞增殖抑制、凋亡诱导的影响

目的探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法K562细胞进行常规培养后,利用MTT方法进行Try(1.56～50)mg.L-1的细胞增殖影响;Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡情况等指标;综合评价Try对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果Try在3.12～50mg.L-1浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪结果显示,不同浓度Try作用48h后,K562细胞可发生明显的凋亡;同时Try也可影响K562的细胞周期,将细胞阻滞于G0/G1期,随Try剂量增大G0/G1期细胞比例也逐渐增高,并出现明显的亚二倍体凋亡峰;同时,S期细胞比例随剂量增大而逐渐降低。结论色胺酮能明显抑制K562细胞增殖并具有诱导K562细胞发生凋亡的作用。     

5-氟尿嘧啶诱导Jurkat细胞凋亡及Fas、FasL的表达

目的探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导Jurkat细胞株的凋亡和Fas、FasL的表达。方法不同浓度的5-FU分别处理Jurkat细胞12h和24h后,流式细胞仪检测细胞表达CD95、CD95L的百分率。结果与对照组相比,5-FU在10、20、40μg.mL-1浓度下明显促进Jurkat细胞表达Fas、FasL;且5-FU在24h比处理12h有更强的诱导效果。结论 5-FU可显著提高Jurkat细胞凋亡率,并增强Fas、FasL的表达率。     

低剂量毒死蜱重复染毒诱发雄性大鼠生殖毒性及其机制

目的探讨毒死蜱(CPF)低剂量重复染毒对雄性大鼠生殖功能的影响及其可能作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠ig给予CPF 1,5和10 mg.kg-1,每日1次。连续染毒12周后取大鼠附睾和睾丸称重计算脏器系数,进行组织病理学、精子数量以及活力及畸形率等检查,测定睾丸碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化及Western印迹法检测胱天蛋白酶和Fas,FasL蛋白的表达。结果与正常对照组相比,CPF染毒大鼠睾丸脏器系数显著升高,精子数及精子活力降低,精子畸形率显著升高(P<0.05),睾丸AKP和γ-GT活性抑制明显。组织病理检查显示,睾丸曲细精管疏松和生精细胞减少。CPF染毒组生精细胞凋亡增加(P<0.05)。Fas/FasL蛋白表达量升高。结论 CPF低剂量重复染毒能够诱导雄性大鼠生殖毒性,其作用机制可能与激活Fas/FasL受体途径而引起睾丸生精细胞凋亡有关。     

As_2O_3诱导人肝癌细胞凋亡及对Fas表达和钙含量的影响

化疗在原发性肝癌的综合治疗中占重要地位.为寻找肝癌治疗新的有效药物,我们观察了As2O3对人肝癌细胞株BEL7402的生物学效应,以期为As2O3临床治疗肝癌提供实验依据.     

金雀异黄素对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡作用

目的探讨金雀异黄素对人红白血病细胞系K562细胞的生长抑制、诱导凋亡作用。方法不同浓度的金雀异黄素处理K562细胞后,用MTT比色法检测细胞生长增殖作用,Wright-Gimesa法观察细胞的形态学变化,FCM检测K562细胞凋亡峰。结果金雀异黄素对K562细胞具有与时间、浓度呈正相关的生长抑制作用。形态学显示金雀异黄素高浓度组细胞发生核固缩、核碎裂,并有凋亡小体出现。细胞周期显示对照组K562G2／M期细胞8．9％,金雀异黄素75gmol·L^-1时升高到60．6％（P〈0．05）;金雀异黄素75gmol·L^-1时K562细胞亚G1期细胞为27．3％,对照组为0．4％（P〈0．05）。结论金雀异黄素对K562细胞具有很强的生长抑制作用,K562细胞可发生明显G2／M期阻滞,金雀异黄素诱导了K562细胞发生凋亡。     

As2O3诱导K562细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )诱导K562 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化 ,阐明As2 O3 诱导K562 细胞凋亡的可能机制 ,为As2 O3 在临床上的应用提供理论依据。方法 :应用细胞电泳仪检测As2 O3 诱导K562 细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测 ,形态学观察 ,亚G1期细胞含量和DNA凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果 :1.0～ 2 0 μmol·L-1As2 O3 作用于K562 细胞 ,在细胞形态、DNA凝胶电泳、FCM显示出典型的细胞凋亡特征之前 ,试验组细胞表面电荷已在 1.6h左右开始下降 ,6h内降低最明显 ,6h后虽有下降 ,但幅度明显减弱。与对照组比较 ,低于 1.0 μmol·L-1的As2 O3 对细胞表面电荷影响不大。结论 :细胞表面电荷的下降是K562 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围 ,超过此范围 ,细胞表面电荷下降趋向无限大。