Lat-B对家兔房水葡萄膜巩膜引流通路的影响

目的:研究Lat-B对家兔眼内压、葡萄膜巩膜通路的影响。方法:兔眼局部应用Lat-B,BSS和DMSO,于用药前1h及用药后1,2,3,4,5,6,24h测量眼压后部分免疫荧光组通过前房内注入微量示踪剂异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白(fluorescein isothiocyanate bovine serum albumin,FITC-BSA),于点眼后2,4,6,8,10h各处死家兔2只,摘除双侧眼球作冰冻切片,于荧光显微镜下观察并确定睫状体、脉络膜上腔、前、后巩膜和脉络膜的荧光强度等级。结果:Lat-B滴眼后处理眼眼压不同时间点与滴眼前比较眼压呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05),1h即可引起眼压降低,24h仍有效,BSS组与DMSO组未引起眼压下降;葡萄膜巩膜途径通路3组之间在睫状体、脉络膜上腔、前、后巩膜和脉络膜的荧光强度,各部位均为Lat-B组最强,Lat-B与BSS组和DMSO组相比差异均有显著性(P<0.05),BSS组和DMSO组相比差异无显著性。结论:Lat-B能够有效降低眼压,1h即可起效,且24h仍有效。Lat-B可以增加葡萄膜巩膜途径通路的房水流出率,具有治疗青光眼的应用前景,尤其是正常眼压性青光眼、开角性青光眼。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在大鼠慢性高眼压模型筛板区巩膜组织中的表达

目的 探讨大鼠慢性高眼压模型筛板区巩膜组织中基质金属蛋白酶(MMP)及其抑制剂(TIMP)的表达与青光眼发病机制的关系.方法 实验研究.将43只Wistar大鼠的左眼成功地建立为慢性高眼压模型,对侧右眼为对照组.采用计算机随机数字表法将实验大鼠分为3组,分别应用免疫组织化学法(13只鼠)、免疫印迹法(15只鼠)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法(15只鼠)检测大鼠筛板区巩膜组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达情况.应用SAS统计学软件,对免疫印迹法和RT-PCR法榆测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达的4个定量指标,分别采用具有一个重复测量的两因素设计定量资料的方差分析,以P＜0.01作为差异有统计学意义.结果 (1)免疫组织化学检测结果:实验眼筛板区巩膜组织中细胞核和细胞浆巾MMP-2、MMP-9表达明显,对照眼均未见MMP-2、MMP-9表达;实验眼和对照眼筛板区巩膜组织中细胞核和细胞浆中均未见TIMP-1、TIMP-2表达.(2)免疫印迹法检测结果:平均灰度值:实验眼的MMP-2为193.88±8.84,MMP-9为202.65±8.37,TIMP-1为283.63±5.65,TIMP-2为284.75±5.50;对照眼的MMP-2为117.38±10.76,MMP-9为134.13±5.06,TIMP-1为186.88±7.14,TIMP-2为183.0±5.58.(3)RT-PCR法检测结果:平均灰度值:实验眼的MMP-2为200.50±3.25,MMP-9为200.13±2.95,TIMP-1为201.88±3.14,TIMP-2为195.50±3.55;对照眼的MMP-2为181.88±9.36,MMP-9为181.75±5.85,TIMP-1为179.25±9.21,TIMP-2为179.75±7.12.实验眼与对照眼的表达差异有统计学意义(MMP-2:F=405.55,MMP-9:F=436.11,TIMP-1:F=1167.77,TIMP-2:F=4629.64;均P＜0.01).结论大鼠慢性高眼压模型筛板区巩膜组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达明显增加.(中华眼科杂志,2009,45:260-265)     

PDGF对人RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响

背景研究表明血小板源性生长因子（PDGF）能调节多种细胞中基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMP／TIMP）的表达和平衡,但视网膜色素上皮（RPE）细胞中MMP／TIMP的表达与PDGF作用剂量和作用时间的关系尚不明确。目的观察PDGF对RPE细胞中MIP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法体外培养人RPE细胞系ARPE-19,将达到70％～80％融合的细胞分为5个组。分别将0、0．1、1、10、50mg／LPDGF加入RPE细胞培养基作用36h,分别采用逆转录PCR（RT—RCR）法和Western blot法检测各组RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及其蛋白的表达。PDGF组采用10mg／LPDGF组PDGF分别刺激RPE细胞24、36和48h,对照组用不含PDGF的培养液培养,采用逆转录PCR（RT—RCR法和Western blot法分别检测RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及蛋白的表达。结果随着PDGF质量浓度的增加和刺激时间的延长,RPE细胞生长速度加快,细胞增生明显。PDGF刺激RPE细胞36h,随着PDGF质量浓度的增加,MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA在RPE细胞中表达相对值逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F=79．304,P=0．000;MMP-9 mRNA：F=8．465,P=0．003）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值随着PDGF质量浓度的增加而逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2：F=26．550,P=0．000;MMP-9：F=80．993,P=0．000）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。各质量浓度PDGF组RPE细胞中TIMP-1 mRNA和蛋白表达相对值差异均无统计学意义（F=0．143,P=0．962;F=1．955,P=0．178）。随着10mg／L PDGF刺激RPE细胞时间的延长,RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达逐渐增加,差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F时间=83．250,P=0．002;MMP-9 mRNA：F时间=6．785,P=0．019）;各时间点RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显增加,差异均有统计学意义（MMP-2：F时间=11．185,P=0．041;MMP-9：F时间=968．413,P=0．000）。PDGF作用不同时间点对照组与PDGF组间MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白在RPE细胞中的表达差异均有统计学意义（分组：均P=0．000,时间点：P〈0．05）,而各时间点2个组间RPE细胞中TIMP-1表达相对值的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF上调PRE细胞中MMP-2和MMP-9的表达,其作用呈剂量和时间依赖性,但对PRE细胞中TIMP-1的表达无明显影响。PDGF导致RPE细胞中MMP／TIMP的平衡失调,从而导致细胞外基质的破坏,促进RPE细胞的迁移。     

白细胞介素-1α对猪小梁细胞基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶抑制剂表达的影响

背景房水外流通路的阻塞或小梁网细胞外基质（ECM）的异常堆积导致房水流畅系数降低是引起眼压升高的原因之一,基质金属蛋白酶（MMPs）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的平衡对ECM的代谢至关重要,白细胞介素-1α（IL-1α）可以通过调节MMPs的表达而调节房水的外流。目的研究猪重组IL-1α对体外培养的猪眼小梁细胞MMP-2、MMP-3及TIMP-1表达的影响。方法从猪眼取出带有小梁组织的巩膜,用组织块培养法培养小梁细胞并进行传代,第3代的猪小梁细胞应用纤维连接蛋白（FN）和层黏连蛋白（LM）进行鉴定。第3代小梁细胞血清饥饿培养24h后分为2组,对照组加入无血清培养基,IL组加入10m／L IL-1α,分别培养30min。采用细胞免疫化学法分析IL组MMP-2、MMP-3及TIMP-1蛋白在培养小梁细胞中的表达;采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测小梁细胞中MMP-2mRNA、MMP-3mRNA及TIMP-1 mRNA的表达,并与对照组的检测结果进行比较。结果传3代的细胞对FN和LM呈现阳性反应。与对照组比较,IL组小梁细胞中MMP-3和TIMP-1蛋白的表达量（A值）明显升高,差异均有统计学意义（t=-7．694、t=-5．199,P〈0．05）,但2组间小梁细胞中MMP-2表达的差异无统计学意义（t=-2．365,P〉0．05）。IL组小梁细胞中MMP-3mRNA和TIMP-1mRNA的表达量（A值）明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=-3．025、t=-1．921,P〈0．05）,而2组间小梁细胞中MMP-2mRNA的表达差异无统计学意义（t=-1．173,P〉0．05）。结论外源性IL-1α能增加猪眼小梁细胞中MMP-3、TIMP-1的表达,引起MMP-3／TIMP-1平衡改变,促进小梁网ECM的分解,增加房水外流,而对MMP-2的表达无影响。     

豚鼠形觉剥夺早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2及其抑制剂动态表达

目的探讨豚鼠形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia, FDM ）早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）及基质金属蛋白酶抑制剂2（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2,TIMP-2）mRNA的表达。方法4周龄三色豚鼠50只,随机分成实验组和正常对照组各25只,实验组又随机分为5组,单眼形觉剥夺（monocular deprivation, MD）右眼1、4、7、14、21d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照组。各组豚鼠进行检影验光和A超测量眼轴长度。提取后极部巩膜总RNA,二步法逆转录聚合酶链反应检测各组后极部巩膜MMP-2及TIMP-2mRNA的表达水平。结果除1d外,各组MD后极部巩膜MMP-2mRNA的表达与正常对照组、自身对照组差异均有统计学意义（P〈0,05）,MD组间差异也有统计学意义（P〈0．01）;而TIMP-2mRNA的表达则逐渐下降。各自身对照组MMP-2、TIMP-2mRNA的表达与MD组变化趋势大致相同。结论MMP-2／TIMP-2之间动态平衡失调可能是启动豚鼠FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的重要因素。（中国跟耳鼻喉科杂志,2010,10：75—78）     

基质金属蛋白酶-1及其抑制剂和转化生长因子-β1在糖尿病结膜松弛症结膜组织中的表达

目的测定基质金属蛋白酶-1（MMP-1）及其抑制剂（TIMP-1）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在糖尿病结膜松弛症患者结膜中的表达,探讨其在糖尿病结膜松弛症发生过程中的作用机制。方法按照张兴儒眼结膜松弛症临床分级标准和1999年WTO糖尿病诊断标准,经手术共收集待检结膜标本36份,其中包括糖尿病结膜松弛症6例9眼（糖尿病结膜松弛症组）、单纯结膜松弛症5例9眼（单纯结膜松弛症组）、糖尿病不伴结膜松弛症9例9眼（糖尿病组）和行白内障囊外摘出术（ECCE）手术的正常对照9例9眼（正常结膜组）。采用免疫组织化学SP法检测并比较各组结膜组织中MMP-1、TIMP-1和TGF-β1的表达。结果 MMP-1在糖尿病结膜松弛症和单纯结膜松弛症组患者结膜中阳性表达的平均吸光度（A）值分别为0.2732±0.0285和0.2599±0.0229,明显高于糖尿病组和正常结膜组的0.1872±0.0138和0.1485±0.0079,差异均有统计学意义（P〈0.05）;TIMP-1的表达在各组间差异无统计学意义（F=2.470,P=0.079）。TGF-β1在糖尿病结膜松弛症组患者结膜中的阳性表达高于单纯结膜松弛症组、糖尿病组和正常结膜组（0.2065±0.0331vs0.1866±0.0129;0.2065±0.0331vs0.1773±0.0153;0.2065±0.0331vs0.1632±0.0155）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 MMP-1和TIMP-1表达失衡在糖尿病结膜松弛症的发生发展过程中起重要作用,此过程不受TGF-β1的调控。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在结膜松弛症成纤维细胞中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶1、3（MMP．1、MMP．3）及其组织抑制因子1、3（TIMP-1、TIMP．3）在结膜松弛症（CCh）成纤维细胞培养上清液中的表达,揭示四者表达水平变化与CCh的内在联系。方法体外原代培养CCh成纤维细胞,取第3—6代细胞,以2．5×10^5个／mL浓度接种于24孔板中培养,24h后提取细胞上清液,采用ELISA检测MMP-1、MMP-3、TIMP-1、TIMP-3的表达水平。不同组间比较采用单因素方差分析。结果MMP-1的表达：CCh组成纤维细胞的蛋白浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。MMP-3的表达：CCh组成纤维细胞的蛋白浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。TIMP．1的表达：CCh组成纤维细胞的蛋白浓度与正常对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。TIMP-3的表达：CCh组成纤维细胞的蛋白浓度明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成纤维细胞MMP．1／TIMP-1及MMP-3／TIMP-3的表达失衡可能参与了CCh的发生、发展。     

胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞增生的影响及其机制

背景胰高血糖素与近视的发生密切相关，在一定浓度范围内可抑制近视的发展，但其确切的作用机制尚不明确。目的研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞（GSFCs）生长的影响及作用机制。方法获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织，采用组织块培养法进行GSFCs的培养和传代，采用免疫组织化学法检测培养的细胞中波形蛋白抗体、细胞角蛋白抗体及S-100抗体的表达。用完全随机法将培养的细胞分组，分别在不同组的培养孔中加入5、10、50、100、200μg／L胰高血糖素培养GSFCs24h，不加胰高血糖素培养的为对照组。利用MTT比色法观察各质量浓度胰高血糖素作用后及50btg／L胰高血糖素作用1、2、3、5、7dGSFCs的生长情况，酶联免疫检测仪测量波长490nm处各孔细胞的吸光度（A490）值，并用ELISA法检测培养72h不同质量浓度胰高血糖素对GSFCs中基质金属蛋白酶2／组织金属蛋白酶抑制剂2（MMP-2／TIMP-2）表达水平的影响，以酶标仪测定450nm波长处各孔细胞的A450值。结果GSFCs传代培养后密度较低时呈枝状排列，密度较高时呈束状或漩涡状排列，波形蛋白抗体反应阳性。随着胰高血糖素质量浓度的增加，细胞的A490值逐渐升高，差异有统计学意义（F=32．340，P=0．013），胰高血糖素质量浓度〉10μg／L时，细胞的A490值较对照组明显升高，差异均有统计学意义（t=5．575、6．627、16．074、12．003，P〈0．05）。培养孔中加入50μg／L胰高血糖素后随着培养时间的延长，细胞的A450值升高，差异有统计学意义（F时间=10．610，P=0．024），且与对照组比较细胞的A490值升高，差异有统计学意义（F。=9．068，P=0．039）。胰高血糖素质量浓度在5～200μg／L时，随胰高血糖素质量浓度的增加，MMP-2含量逐渐减少，差异有统计学意义（F=153．639，P=0．036），但TIMP-2含量的变化差异无统计学意义（F=24．770，P=3．250）。结论胰高血糖素可促进体外培养的GSFCs的增生，其作用呈剂量和时间依赖性，其作用机制可能是下调MMP-2在GSFCs中的表达，MMP-2／TIMP-2失衡所致。     

不同切削厚度的兔眼准分子激光原位角膜磨镶术后基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的表达

目的 研究不同切削厚度的准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）后兔眼基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）及基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs）的表达,以探讨LASIK手术的不同切削深度对角膜的胶原结构的影响。方法 选取成年新西兰白兔28只（56眼）。随机分成A（正常对照组）、B、C、D四个组,每组14眼。B、C、D组行LASIK手术,使残留的基质床厚度分别为整体角膜厚度的70%、50%、30%。术后第6个月,用ELISA法检测各组角膜明胶酶（MMP-2和MMP-9）的含量,用RT-PCR法检测TIMP-2的mRNA的表达量。结果 术后第6个月,各组均有MMP-2和MMP-9的表达,MMP-2表达量差异无统计学意义（F=0.456,P〉0.05）,MMP-9表达量的差异亦无统计学意义（F=1.676,P〉0.05）。各组均有TIMP-2 mRNA的表达,差异无统计学意义（F=0.003,P〉0.05）。结论 兔眼正常角膜有MMP-2、MMP-9及TIMP-2的表达。LASIK术后第6个月,各组角膜细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-2的表达量与正常角膜无差异,这说明LASIK术后第6个月时角膜胶原结构已基本稳定。如有继发性圆锥角膜的发生,并非是由于手术本身引起的主要胶原降解增多所导致,可能与遗传易感性及生物力学相关,其具体作用机制有待进一步研究。     

哌仑西平对鸡形觉剥夺性近视的疗效及作用机制

目的初步探讨选择性M1受体拮抗剂哌仑西平抑制近视的作用机制.方法 1日龄鸡40只,随机分为4组,Ⅰ组为正常组;Ⅱ组为单纯遮盖组;Ⅲ组为药物对照组;Ⅳ组为哌仑西平组.Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组右眼用半透明眼罩遮盖,Ⅲ、Ⅳ组鸡的剥夺眼分别每日结膜下注射0.1 mol/L的磷酸缓冲液和10%哌仑西平溶液;2周后检测4组动物右眼屈光度数、眼轴长度和赤道部直径.提取鸡眼巩膜纤维层的RNA和蛋白质,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶2抑制剂（TIMP-2） mRNA和蛋白质表达水平的改变.结果哌仑西平组的各项指标较单纯遮盖组、药物对照组显著减低 （P〈0.01）,较正常组形成相对近视,眼轴长度、赤道部直径明显增大;药物对照组与单纯遮盖组相比各项指标无统计学意义（P〉0.05）,与遮盖组相比,哌仑西平组鸡眼巩膜纤维层MMP-2 mRNA和蛋白质表达水平显著下降 （P〈0.01）,而TIMP-2的表达水平显著升高 （P〈0.01）.结论选择性M1受体拮抗剂哌仑西平能部分抑制近视的发生发展,可能是通过调节巩膜纤维层MMP-2和TIMP-2的表达而发挥疗效的.     

国产猪源纤维蛋白黏合剂玻璃体腔注射后对兔眼视网膜组织的生物安全性研究

背景 猪源纤维蛋白黏合剂已广泛应用于临床手术中,能够起到止血和闭合伤口的作用.目前眼科学者认为猪源纤维蛋白黏合剂在玻璃体切割术中可替代长效气体或硅油作为填充物,但国产猪源纤维蛋白黏合剂是否对视网膜有毒性作用仍在研究中. 目的 研究国产猪源纤维蛋白黏合剂在眼内应用后对视网膜组织的生物安全性. 方法 15只青紫兰兔任选一眼作为实验眼,对侧眼作为对照眼.兔眼行玻璃体切割术,实验眼术毕于玻璃体腔内注射猪源纤维蛋白胶0.5 ml,对照眼注射等量平衡盐溶液.术后1、3、7、15、30 d用裂隙灯及直接/间接检眼镜检查眼前后节的炎症反应,术后1、3、7d用Schi(o)tz眼压计测量眼压,分别于术前和术后30 d进行视网膜电图(ERG)检查,评估视网膜的功能变化,术后30 d行眼科B型超声检查.玻璃体腔内注射后第30天摘除眼球并制备视网膜切片,光学显微镜下检查视网膜的组织形态学变化,透射电子显微镜下观察视网膜的超微结构变化. 结果 实验组15只兔眼中出现并发症者7只眼,其中晶状体损伤后发生白内障者3只眼,术后增生性玻璃体病变和视网膜脱离者5只眼,眼内炎者1只眼.对照组15只兔眼晶状体损伤后发生白内障者2只眼,术中发生视网膜损伤者2只眼.眼内注射后30d实验组未出现并发症的8只眼及对照组的11只眼均未见明显的眼内炎症反应,术后眼压均正常,2个组间及手术前后各时间点间的眼压变化差异均无统计学意义(F分组=0.008,P=0.929;F时间=3.600,P=0.075).实验组及对照组间兔眼注药前后ERG a波、b波振幅的总体差异均无统计学意义(a波:F分组=0.728,P=0.405;b波:F分组=0.222,P=0.644);各组兔眼手术前后ERG a波、b波振幅的总体差异均无统计学意义(a波:F时间=0.516,P=0.482;b波:F时间=0.057,P=0.814).眼内注射后30 d,实验眼和对照眼视网膜组织层次清晰,无水肿及阳性细胞浸润,各层视网膜的细胞及视网膜光感受器、视网膜色素上皮的色素细胞形态均正常,亚细胞器结构清晰,细胞膜和核膜完整,线粒体嵴排列整齐. 结论 国产猪源纤维蛋白黏合剂玻璃体腔注射后对兔眼视网膜无毒性作用.     

马来酸噻吗洛尔滴眼液预防高度近视眼LASIK术后屈光回退的随机对照研究

背景 屈光回退是高度近视眼准分子激光角膜原位磨镶术（LASIK）术后较常见的并发症,影响手术的长期稳定性.目前尚无预防LASIK术后屈光回退的方法. 目的 观察马来酸噻吗洛尔滴眼液对高度近视眼LASIK术后屈光回退的预防效应.方法 采用前瞻性干预性临床随机对照研究.选取2012年2-9月在遵义医学院附属医院行LASIK的高度近视患者60例60眼,屈光度为（-7.16±0.95）D.将患者按随机数字表法分成试验组和对照组,2个组患者术后均给予常规抗炎用药,试验组患者在术后第1天开始滴加质量分数0.5％马来酸噻吗洛尔滴眼液,每日2次,1个月后改为每天晨起点眼1次.测量2个组患者术前,术后1周及1、3、6个月的裸眼视力、最佳矫正视力（BCVA）、等效球镜度（SE）、角膜前表面曲率和眼压,并测量术前及术后1、3、6个月术眼的中央角膜厚度（CCT）,术前测算残余角膜基质厚度.采用重复测量方差分析、独立样本t检验和Bonferroni检验对2个组在不同时间点间的数据进行分析. 结果 试验组及对照组间患者术前的年龄、裸眼视力、BCVA、SE、眼压、角膜前表面曲率、CCT及残余角膜基质厚度的差异均无统计学意义（P＞0.05）.2个组间手术后不同时间点的裸眼视力差异有统计学意义（F分组=3.91,P＜0.05;F时间=3.80,P＜0.05）,其中术后6个月试验组裸眼视力优于对照组（t=2.97,P＜0.05）,试验组术后6个月裸眼视力优于术后7d,差异有统计学意义（P＜0.05）.2个组术眼在术后不同时间点BCVA的差异无统计学意义（F分组=2.44,P＞0.05;F时间 =2.31,P＞0.05）.2个组间术眼术后SE的有统计学意义（F分组=11.52,P＜0.05）,术后不同时间点术眼SE的整体比较差异有统计学意义（F时间=22.06,P＜0.05）,术后6个月试验组术眼SE高于对照组（t=2.47,P＜0.05）,术后7d及术后1个月、3个月试验组术眼的校正眼压明显低于对照组（F分组=14.83,P＜0.05）,术后2个组间CCT的增幅差异无统计学意义（F分组=0.04,P＞0.05）.术后试验组角膜前表面曲率变化平稳,但对照组随着时间的延长角膜前表面曲率逐步增加（F时间=18.73,P＜0.05）.结论 高度近视眼LASIK术后早期局部使用0.5％马来酸噻吗洛尔滴眼液能减少屈光回退,提示0.5％马来酸噻吗洛尔滴眼液通过降低眼压而阻止角膜膨隆,其可能是预防术后屈光回退的主要机制.     

促红细胞生成素对光损伤后视网膜色素上皮层基质金属蛋白酶表达的影响

背景 近年来,随着眼科光学诊疗器械和显微手术应用的增多,各种器械的光源所导致的视网膜损伤等问题倍受关注,研究视网膜光损伤可为临床治疗相关疾病提供参考. 目的 研究小鼠光损伤后视网膜色素上皮(RPE)层基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9表达的变化,探讨促红细胞生成素(EPO)对小鼠视网膜光损伤的治疗作用及其相关机制.方法 将52只SPF级BALB/c小鼠采用抽签法随机分为正常对照组4只、单纯光照组24只和EPO预处理组24只,后两组小鼠在自制光照箱内用6000 lx弥散白光照射4h以建立光损伤动物模型.单纯光照组接受6000 lx白光照射4h,EPO预处理组小鼠腹腔注射rhEPO 5000 U/kg(商品单位)后,接受6000 lx白光照射4h.光照后6、12、36、72、96 h和7d采用免疫组织化学法检测各组小鼠RPE中MMP-2和MMP-9的表达.结果 单纯光照组小鼠视网膜组织病理学改变出现早且明显,光照后RPE细胞出现不同程度的水肿和结构紊乱,且随着光照后时间的延长,形态异常的细胞数增加,但EPO预处理组在光照后7d未发现类似改变.免疫组织化学法检测显示,正常BALB/c小鼠RPE层MMP-2低表达,单纯光照36 h后,RPE层可观察到大量MMP-2阳性表达细胞,但同一时间点EPO预处理组阳性表达量(A值)明显下降.3个组和不同时间点MMP-2的表达量差异均有统计学意义(F分组=3.68,P=0.04;F时间=9.13,P=0.00).MMP-9免疫组织化学法检测显示,正常RPE层中未见MMP-9的阳性表达,单纯光照6h后,MMP-9开始表达,12h时达高峰并维持高表达状态,96 h后表达量开始下降;EPO预处理组MMP-9表达趋势同单纯光照组,但各时间点MMP-9的表达量均较单纯光照组减少.3个组和不同时间点MMP-9的表达差异均有统计学意义(F分组=3.61,P=0.04;F时间=16.91,P=0.00). 结论 MMP-2、MMP-9在视网膜光损伤过程中发挥着重要作用,推测EPO可能通过抑制MMP-2、MMP-9的表达发挥对视网膜的保护作用.     

激光周边虹膜成形术中光凝兔青光眼模型不同部位虹膜的效果比较

背景 激光周边虹膜成形术(LPI)能使虹膜收缩变平,房角增宽,在临床上用于青光眼的治疗.但目前临床上对LPI的最佳作用部位尚无定论. 目的 探讨选择不同部位虹膜行LPI对青光眼疗效的影响.方法 取健康成年雄性灰兔40只,用含质量分数0.3％卡波姆和质量分数0.025％地塞米松的复方卡波姆溶液0.1 ml行兔右眼前房注射建立青光眼动物模型,然后将模型眼按随机数字表法随机分为模型对照组、角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组和距角巩膜缘2个光斑对应部位组,每组各10只.按照分组描述部位应用532 nm激光对角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组和距角巩膜缘2个光斑对应部位组实验眼行LPI,光斑直径为500 μm,能量为300 mW,曝光时间为0.3s,激光击射24个点,模型对照组未行LPI.用Schi(o)tz眼压计记录术前及术后2、4、7、14、30 d各组兔的眼压并计算房水流畅系数(C值),用超声生物显微镜(UBM)测定上述时间点兔眼前房深度(ACD)、房角开放度数(AA)和距巩膜突500 μm半径内的房角开放距离(AOD500).于术后30 d摘取兔眼球,采用苏木精-伊红染色法观察各组兔眼房角的形态学改变.结果UBM检查显示,与模型对照组比较,LPI各组兔眼房角均明显增宽,以距角巩膜缘1个光斑对应部位组最为明显,距角巩膜缘2个光斑对应部位组效果最不明显.与模型对照组比较,角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组、距角巩膜缘2个光斑对应部位组兔眼眼压均明显下降,C值均明显增加,AA和AOD500均明显增加,总体比较差异均有统计学意义(眼压:F分组=16.848,P＜0.01;C值:F分组=9.629,P＜0.01;AA:F分组=62.336,P＜0.01;AOD500:F分组=77.779,P＜0.01).与各自LPI组内术前值比较,兔眼术后2、4、7、14、30 d眼压均明显下降,C值、AA和AOD500值均明显增加,总体比较差异均有统计学意义(眼压:F时间=3.041,P=0.011;C值:F时间 =4.311,P＜0.01;AA:F时间=14.627,P＜0.01;AOD500:F时间=20.378,P＜0.01).与模型对照组比较,角巩膜缘对应部位组、距角巩膜缘1个光斑对应部位组兔眼各时间点ACD值均明显增加,而距角巩膜缘2个光斑对应部位组与其相似,总体比较差异有统计学意义(F分组=18.017,P＜0.01),各组兔眼LPI前后不同时间点ACD的总体比较差异无统计学意义(F帅=0.022,P=1.000).苏木精-伊红染色可见各LPI组术后30 d兔眼房角处小梁网和房角粘连均被拉开,房角不同程度增宽.结论 LPI可使青光眼模型兔眼房角增宽,眼压下降.在距离角巩膜缘1个光斑处虹膜上行LPI效果最佳.     

形觉剥夺下雏鸡后极部巩膜中MMP-2 TIMP-2及RARβ表达变化

目的 分析雏鸡形觉剥夺性近视眼及形觉剥夺性近视恢复眼后极部巩膜中基质金属蛋白酶2(matrix metallopmteinaae 2,MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂2(tissue inhibitor of matrix metallopro-teinase 2,TIMP-2)及视黄酸受体-β(retinoic acid receptor-β,RARβ)的水平及其相关性.方法 选用新孵出家鸡75只,半透明眼罩遮盖的方法对左眼进行形觉剥夺,分为形觉剥夺组,遮盖14d;形觉剥夺恢复组,遮盖11d后,去遮盖3d.右眼为对照眼.取直径8mm的后极部眼组织块,分离出巩膜纤维层和软骨层.RT-PCR检测MMP-2、TIMP-2及RARβ mRNA的相对含量,并将MMP-2、TIMP-2 mRNA水平分别与RARβ的mRNA水平作线性相关分析.结果 形觉剥夺14d后,纤维层中MMP-2的表达增强(P<0.01),TIMP-2的表达减弱(P<0.01);去剥夺3d后,MMP-2的表达减弱(P<0.01),而TIMP-2的表达恢复到接近对照眼的水平(P>0.05).软骨层表达没有明显变化.形觉剥夺14d后,RARβ的表达均增强,但纤维层中的表达更为强烈(P<0.01).去剥夺3d后,RARβ的表达均明显下降(P<0.01).MMP-2与RARβmRNA水平呈正相关(P<0.05,r=0.944);TIMP-2与RARβmRNA水平呈负相关(P<0.05,r=-0.863).结论 雏鸡形觉剥夺性近视眼及形觉剥夺性近视恢复眼后极部巩膜纤维层中MMP-2、TIMP-2及RARβ的水平均发生明显变化,并有相关性.RARβ参与了巩膜纤维层细胞外基质的降解过程.     

NEP1-40对视网膜缺血-再灌注损伤过程中视网膜细胞的保护作用

背景 视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）可导致细胞凋亡,凋亡是一个复杂的过程,与许多基因有关,探讨药物对RIRI后视细胞凋亡的保护作用具有重要意义. 目的 探讨Nogo-A在大鼠RIRI模型中的表达及其与细胞凋亡的关系,研究Nogo受体竞争性拮抗剂NEP1-40对视网膜细胞的保护作用. 方法 将78只SD大鼠按随机数字表法随机分为正常组、RIRI组和NEP1-40组,RIRI组及NEP1-40组大鼠分别用前房升高眼压的方法升高眼压至大鼠视网膜苍白,持续60 min,然后恢复眼压至视网膜色泽恢复,制作RIRI大鼠模型.术后6h、12 h及1、2、3、7d用过量的水合氯醛处死大鼠,制备视网膜标本.透射电子显微镜下观察各时间点各组大鼠视网膜的超微结构,采用TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡情况,并计算细胞凋亡指数（AI）.采用免疫组织化学法检测视网膜组织中Nogo-A蛋白的表达,并采用逆转录PCR（RT-PCR）法半定量检测Nogo-A mRNA在视网膜中的表达. 结果 正常组大鼠视网膜各层结构正常;RIRI组大鼠视网膜再灌注12h后可见少量视网膜细胞器的线粒体嵴异常及空泡化,再灌注后1 ～2d可见凋亡小体;NEP1-40组视网膜的视细胞外节膜盘略疏松,部分线粒体嵴短小,空泡化,未见凋亡小体,视网膜细胞超微结构损害明显轻于RIRI组.TUNEL检测显示细胞凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,再灌注后1d凋亡细胞数目达高峰,2d后开始下降,但再灌注后3d仍可见TUNEL阳性细胞.NEP1-40组各时间点间凋亡细胞数目较RIRI组明显减少.正常组、RIRI组和NEP1-40组大鼠在不同时间点细胞AI的差异均有统计学意义（F分组=100.850,P=0.000;F时间=34.309,P=0.000）,其中RIRI组和NEP1-40组大鼠视网膜细胞AI明显高于正常组,而NEP1-40组AI明显低于RIRI组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.Nogo-A蛋白及其mRNA主要表达于RIRI后的视网膜,再灌注后6h大鼠视网膜中Nogo-A蛋白及其mRNA均开始增加,至再灌注id时表达达高峰,然后逐渐减弱,但再灌注后7d仍有表达.3个组大鼠不同时间点视网膜中Nogo-A蛋白的表达差异有统计学意义（F分组=164.139,P=0.000; F时间=21.772,P=0.000）,Nogo-A mRNA的表达差异有统计学意义（F分组=93.889,P=0.000;F时间=6.349,P=0.000）,NEP 1-40组和RIRI组大鼠视网膜中Nogo-A蛋白及其mRNA的表达均明显高于正常组,而NEP1-40组大鼠视网膜中Nogo-A蛋白及其mRNA在各时间点的表达均低于RIRI组,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 Nogo-A可促进RIRI后视网膜细胞的凋亡,NEP1-40能抑制Nogo-A的表达,从而减少视网膜细胞的凋亡,对RIRI后的视网膜细胞有保护作用.     

LASIK术后局部应用溴芬酸钠与糖皮质激素药物的疗效比较

背景 随着准分子激光角膜原位磨镶术（LASIK）的普及,术后糖皮质激素滴眼液点眼引起的并发症有增高趋势.质量分数0.1％溴芬酸钠水合物滴眼液是非甾体类抗炎药,可用于LASIK术后的抗炎治疗,但其与糖皮质激素疗效、安全性和耐受性的比较研究较少. 目的 比较0.1％溴芬酸钠水合物滴眼液和糖皮质激素滴眼液作为近视眼LASIK术后抗炎药物的安全性、有效性及耐受性. 方法 采用前瞻性随机对照研究方法.纳入2011年1月至2012年5月在北京协和医院眼科行LASIK的近视患者119例238眼,先以等效球镜（SE）-6.0 D为界分为中低度SE组与高度SE组,各组再采用分层随机法根据用药方案亚分为试验组和对照组.其中试验组LASIK术后使用0.1％溴芬酸钠滴眼液点眼,每日4次,共10 d;对照组使用质量分数0.1％地塞米松滴眼液以相同方式点眼.此外两组患者术前准备、手术方法及术后其他用药均相同.在术前及术后1d、10d、1个月、3个月和6个月进行常规检查,包括裸眼视力（UCVA）、最佳矫正视力（BCVA）、眼压、角膜地形图、视觉症状与体征评分,并对这些指标进行组间比较. 结果 所有试验组和对照组手术前后视力、角膜地形图K1、K2、SAI、SRI及CY值的差异均无统计学意义（P＞0.05）;中低度SE组及高度SE组LASIK术后眼压值均显著低于术前,而2个组中试验组的眼压均低于对照组,其中中低度SE组试验组和对照组术后10d的眼压分别为（13.31±2.44）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（16.62±4.74）mmHg,术后1个月分别为（12.93±2.25） mmHg和（12.82±1.72） mmHg,术后3个月分别为（13.83±3.08）mmHg和（13.33±2.10） mmHg,术后6个月分别为（11.67 ±2.48）mmHg和（13.64±1.37） mmHg,组间和各时间点间的差异均有统计学意义（F分组=4.067,P=0.045;F时间=10.689,P=0.000;F相互作用=2.897,P=0.023）;高度SE组试验组和对照组术后10d眼压值分别为（12.36±1.30） mmHg和（17.32±4.74） mmHg,术后1个月分别为（12.10±2.12） mmHg和（14.81±2.26）mmHg,组间和各时间点间的差异均有统计学意义（F分组=2.188,P=0.121;F时间=14.025,P=0.000;F交互作用=15.805,P=0.000）.除中低度SE试验组有1例患者术后10d角膜上皮愈合不佳外,其余所有患者角膜上皮均愈合良好,未出现角膜上皮下雾状混浊（haze）和弥漫性板层角膜炎（DLK）.试验组均无患者停用溴芬酸钠,而对照组有6例8眼因眼压升高而使用降眼压药物;中低度SE组术后屈光状态稳定.结论 0.1％溴芬酸钠滴眼液用于近视眼LASIK术后安全、有效,患者具有良好的耐受性,在术后视力、眼压、抗炎、抑制屈光回退等方面可获得满意的效果;但高度近视患者还需要大样本长期临床观察.