细菌16SrDNA聚合酶链反应用于败血症诊断的临床研究

目的 :建立用细菌 16SrDNA高度保守区引物聚合酶链反应 (PCR)扩增检测败血症病原菌的方法 ,并与血培养比较在败血症诊断中的价值。方法 :选用病原菌所共有的 16SrDNA基因保守区的一对寡核苷酸序列 91E和 13B为引物 ,对 10 1例疑为败血症的患者和 2 5例同期我院门诊健康查体者的血标本进行PCR检测分析。结果 :10 1例疑败血症的血标本中 ,PCR阳性结果 5 0例 ,阳性率为 4 9 5 % ,血培养阳性结果 2 2例 ,阳性率为 2 1 8% ,经 χ2 检验 ,PCR阳性率显著高于后者 (P <0 0 5 )。 2 5例阴性对照组DNA的PCR分析均为阴性 ,特异性为 10 0 % ;对血培养阳性的 2 2例进行PCR分析 ,结果阳性 2 1例 ,以血培养作为确诊标准 ,PCR的敏感性为 95 5 % ,且检测不受抗生素治疗的影响。结论 :在严格控制污染的条件下 ,细菌 16SrDNA高度保守区PCR具有高度的敏感性和特异性 ,该技术能为败血症提供可靠的病原菌诊断依据     

半巢式聚合酶链反应在浆膜腔细菌感染诊断中的初步应用

目的观察革兰分型半巢式聚合酶链反应(PCR)在浆膜腔细菌感染诊断中的应用价值。方法对30例浆膜腔积液标本,以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物和一条革兰阴性菌特异性引物,以半巢式PCR方法进行检测,并同时作细菌培养。结果以通用引物对30例标本作第1次PCR,11例扩增出371bp长度的DNA片段,阳性率为36.7%;对阳性PCR产物再以革兰阴性菌特异性引物作第2次PCR,9例扩增出353bp的DNA片段即为革兰阴性菌。对此30例标本作细菌培养,阳性率为16.7%,低于PCR扩增法。5例标本细菌分离结果与半巢式PCR革兰分型结果相同。结论革兰分型半巢式PCR方法能够灵敏地检测细菌并作出革兰阴性、阳性分型,对于浆膜腔感染的早期诊断具有较好的应用价值。     

细菌革兰双重16S rRNA基因荧光定量PCR快速诊断妇产科菌血症

目的:用已知细菌革兰阴性、阳性菌双重16S r RNA基因荧光定量PCR方法(q-PCR)应用于妇产科患者菌血症的诊断,探讨该方法检测妇产专科患者菌血症的临床应用价值。方法:2013年1月~2014年12月对100例疑为全身感染处于菌血症状态的住院分娩孕产妇进行常规血液培养,同时用细菌革兰阴性、阳性菌双重16S r RNA基因q-PCR方法检测,分析2种方法诊断菌血症的阳性率、敏感性和特异性。结果 :通过q-PCR方法检测菌血症阳性率44%,血液培养阳性率16%,两者差异有统计学意义(P<0.01);菌血症临床诊断阳性率为37%,与q-PCR法阳性率存在显著性差异(P<0.01)。以血液培养阳性和(或)临床诊断菌血症的标准作为对照,q-PCR方法诊断敏感性为89.2%,特异性82.5%。结论:细菌革兰阴性、阳性菌双重16S r RNA基因q-PCR方法检测妇产科菌血症的阳性率高于血液培养,可快速为孕产妇患者感染提供早期、敏感的病原学诊断依据。     

用三对引物检测血液中细菌DNA的方法学

目的建立稳定、敏感的检测血液中肠源性细菌 DNA的方法。方法取 23例腹部手术后体温 >38.5℃患者的肘静脉血进行血培养,并以酚抽提法提取全血 DNA进行 PCR,靶基因分别为大肠杆菌特异性的β-半糖苷酶基因、脆弱类杆菌特异性的谷氨酰胺合成酶基因,以及大多数细菌所共有的 16SrRNA基因。以标准菌株提取的 DNA为阳性对照,空白对照为阴性对照, 20例健康志愿者全血 DNA为正常对照。对 20例标本重复检测 2次以确定其复现性。结果 PCR复现率为 95％。血培养阳性率为 13.0％（ 3/23）, PCR检测阳性率为 43.5％（ 10/23）,较血培养阳性率高（ P=0.016）。结论按照规范进行的 PCR检测血液中肠源性细菌方法稳定,比血培养敏感。     

肝、肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的 探讨巢式PCR（Nest PCR)检测器官移植术后受体人巨细胞病毒（HCMV）DNA，并与传统ELISA法作方法学对照。方法 巢式PCR针对HCMV AD169株IEA基因设计内外两对引物，对59例肝、肾移植术后受体（肝移植27例、肾移植32例）血、尿标本进行HCMV DNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。结果 血液Nest PCR阳性率肝移植62.9%，肾移植46.8%；ELISA法阳性率：IgG35.5%,IgM27.1%,IgG IgM18.6%，IgM阳性标本（16例）DNA检测皆为阳性，6例IgG、IgM皆阴性标本DNA检测仍为阳性。结论 巢式PCR是一种敏感特异、简便快速诊断HCVM感染的方法，灵敏度及特异性高于传统ELISA，能弥补ELISA的假阴性，更适用于临床检测器官移植术后HCMV感染。     

湖北十堰地区幽门螺杆菌与原发性肝癌相关性研究

目的 探讨十堰地区原发性肝癌与幽门螺杆菌感染之间的关系. 方法 80例原发性肝癌组织标本和10例正常肝组织标本,分别采用螺杆菌培养、PCR扩增细菌16SrDNA通用序列以及幽门螺杆菌特异基因(26 kD基因)和相关功能基因(cagA、vacA、rps4、glmM)、免疫组化法检测各组织标本中有无幽门螺杆菌感染. 结果 ①未能从组织标本中培养出螺杆菌.②80例癌组织标本中有50例检出16SrDNA基因,阳性率为62.5%;正常肝组织未检出;50例16SrDNA基因阳性标本中有8例cagA基因阳性(16%),37例26 kD基因阳性(74%),9例glmM基因阳性(18%),未能扩增出vacA基因以及rps4基因.③80例肝癌组织标本中26例检出幽门螺杆菌,阳性率为32.5%,正常肝组织中未检出. 结论十堰地区原发性肝癌组织内存在幽门螺杆菌基因物质,且感染率较高,幽门螺杆菌的感染与原发性肝癌的发生存在相关性.     

16SrRNA基因聚合酶链反应快速检测烧伤脓毒症细菌病原体的研究

目的为早期诊断烧伤脓毒症，探索一种能迅速检测细菌感染的方法。方法按标准收集可疑脓毒症患者39人外周静脉血标本共41份。将每份标本一分为二分别行血培养和用细菌通用引物行16SrRNA基因聚合酶链反应检测，用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，比较两种方法在检测细菌病原体时的快速性和敏感性，分析血培养及药敏结果。结果16SrRNA基因PCR方法的阳性率（41．16％）是血培养阳性率（21．95％）的近两倍。P〈0．05。16SrRANA基因PCR方法出结果需4、5h，血培养需12～24h（多数需2、3d）。9例血培养阳性患者中，8例为单一铜绿假单孢菌感染，1例为单一溶血链球菌感染。结论16SrRNA基因PCR检测细菌感染的方法具有特异性、快速性、敏感性的优点。在该中心，使用抗生素治疗后，引起脓毒症的细菌主要为铜绿假单孢菌。该菌对目前常用广谱抗生素耐药。     

细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究

目的:比较不同方法检测生殖器疱疹病毒感染的效率。方法:采用病毒培养和PCR法检测疑为生殖器疱疹病毒感染者标本60例,并用PCR作病毒分型。结果:根据病史及临床表现确诊的生殖器疱疹患者标本60例中,病毒培养法阳性36例,阳性率60%(36/60);PCR检测单纯疱疹病毒(HSV)阳性45例,阳性率75%(45/60),和病毒培养相比,差异非常显著(χ2=26.76,P<0.01);PCR分型结果显示阳性标本均为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)。水疱和脓疱标本的病毒培养和PCR检测阳性率均较高(80.0%~93.3%),糜烂、结痂、斑丘疹标本检测中PCR阳性率(20.0%~66.7%)高于病毒培养(0~33.3%)。结论:对疑为生殖器疱疹患者作病原学诊断,采集水疱、脓疱标本进行病毒分离或PCR检测较佳。     

SARS病毒基因和特异性抗体检测效果评估

目的 :评估严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒基因检测和特异性抗体检测效果。方法 :采用巢式反转录PCR检测健康人、普通发热患者、不同时期 SARS患者痰标本中的 SARS病毒核酸即 RNA;采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)法检测上述几组血清标本中的特异性抗体 Ig G和 Ig M。结果 :SARS患者住院 6 d～ 5 7d期间 ,采用巢式 RT-PCR检测痰 SARS病毒基因 ,5 6例患者中 34例阳性 ,阳性率 6 0 .7% ;而采用间接 EL ISA检测血清抗 SARS病毒抗体 ,5 6例患者中 32例阳性 ,阳性率为 5 7.1%。两种方法均阳性的有 15例 ,均阴性的有 6例。2种病原学诊断方法检测2 0例正常人和 15例发热非 SARS患者 ,结果均为阴性。住院 6 d～ 13d组 (92 .3% )巢式 RT- PCR基因阳性率明显高于 EL ISA特异性抗体阳性率 (7.7% ) ;住院 >35 d组巢式 RT- PCR基因阳性率 (36 .8% )则明显低于 EL ISA特异性抗体阳性率 (94 .7% ) (P<0 .0 1)。结论 :痰中 SARS病毒基因检测可用于 SARS的早期诊断 ,这对于提前确诊和治疗SARS患者 ,以及尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查 ,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

使用PCR扩增和微阵列杂交分析16SrRNA基因可快速诊断细菌性脓毒症

本研究采用血培养和PCR微阵列分析法对172例疑似脓毒症患儿的血样进行检测。基于细菌16S rRN A基因的序列确定引物与寡核苷酸探针,再用机械手精确地将其分别点到玻片式基因微阵列上。对172例疑似脓毒症的患儿进行血培养和使用PCR法检测其血中的细菌16S rRN A。172例中有17例PCR检测结果阳性。PCR检测结果阳性率(9.88%)显著高于血培养结果(4.65%)。同血培养结果相对比,PCR法的敏感性为100%,特异性为97.85%,而准确诊断的指数为0.979。将17例PCR结果阳性的血样进行分子杂交检查的结果显示:其中5例为大肠杆菌阳性,4例为表皮葡萄球菌,…     

锁定钢板与AO钢板在肱骨近端骨折治疗中的疗效比较

目的 探讨解剖锁定钢板在肱骨近端骨折中的应用.方法 随机选取本院2009年6月至2013年1月收治入院的28例肱骨近端骨折患者实施锁定加压钢板术固定治疗和对照组22例采用传统AO钢板治疗.结果 对照组总优良率为72.7%,研究组为92.8%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论解剖锁定钢板治疗肱骨近端骨折疗效显著,值得推广应用.     

一期梅毒半巢式聚合酶链反应检测的效果

目的 探讨半巢式聚合酶链反应（PcR）在一期梅毒早期诊断中的意义。方法应用半巢式PCR检测一期梅毒溃疡组织液和血清中TP-DNA,与IPPA结果进行比较。结果60例临床诊断为一期梅毒患者,溃疡组织液、血清半巢式PCR和TPPA检测的阳性分别为56例（93．33％）、13例（21．67％）和53例（88．33％）。组织液半巢式PCR检测结果与血清半巢式PCR检测结果比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,与rI胛A结果比较,差异无统计学意义（D0．05）。结论半巢式PCR检测一期梅毒溃疡组织液中TP-DNA较检测血清中的TP-DNA敏感性高、特异强,可做为TPPA诊断早期梅毒的有效补充。     

儿童鼠伤寒沙门菌败血症24例临床分析

目的:探讨儿童鼠伤寒沙门菌败血症的临床特点及疗效。方法:对确诊为鼠伤寒沙门菌败血症的24例儿童患者进行回顾性分析,研究其临床表现及疗效。结果:婴幼儿多见,平均年龄9个月,主要表现为发热、消化道症状,外周血白细胞16例(66.7%)正常、2例(8.33%)减少,6例增高(25%),临床分离株对头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、左氧氟沙星、亚胺培南敏感率分别为83.3%、87.5%、91.7%、66.7%、100%,24例初治均采用头孢曲松钠,22例血培养正常,2例仍为阳性,根据药物敏感试验选用抗生素治疗后均治愈。结论:头孢三代耐药率相对较低,是治疗婴幼儿鼠伤寒沙门菌败血症的首选药物。     

C反应蛋白对新生儿败血症早期诊断的临床意义

目的: 观察C反应蛋白(CRP)在新生儿败血症的早期变化,探讨CRP在新生儿败血症早期诊断的价值.方法: 回顾性分析26例新生儿败血症(败血症组)患儿以及 19例同期住院非感染患儿(对照组),应用免疫比浊法测定CRP水平,并同时测定白细胞计数并观察其诊断新生儿败血症阳性率.结果: 败血症组CRP≥8 mg/L阳性率为88.46%,高于对照组的5.26%(P<0.01),且CRP水平高于对照组(P<0.01).败血症CRP检测阳性率88.46%高于白细胞的42.31%(P<0.01).结论: CRP可为败血症的早期诊断提供参考依据.     

降钙素原在预测感染患者发生败血症中的应用研究

目的：探讨降钙素原在败血症诊断中临床应用价值。方法收集我院败血症患者60例,局部细菌感染患者60例,于入院第1天采集患者血清,测定白细胞（WBC）,中性粒细胞比例（Neu%）,C-反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）水平。结果败血症患者主要以革兰阴性杆菌感染为主（47/60）;局部细菌感染者以革兰阳球细菌为主（43/60）。败血症患者组的Neu%、CRP和PCT水平明显高于局部细菌感染组,差异有统计学意义（P均〈0.01）。PCT的ROC曲线下面积（AUC）明显高于其他指标,PCT用于诊断感染患者中败血症的发生的敏感性为83.3%,特异性为86.7%。结论 PCT诊断感染患者中败血症的灵敏度、特异性均较高,有很高的临床应用价值。     

中山地区新生儿血培养病原菌分布及耐药性分析

目的了解中山地区新生儿血培养病原菌分布及其常见病原菌对抗生素的耐药情况,为指导临床诊断及合理应用抗生素提供客观依据。方法对2007年—2009年在我院新生儿科住院的患儿进行血培养,应用BacT/ALERT 3D全自动血培养仪进行检测,阳性菌株用VITEK-32全自动微生物分析仪进行菌株鉴定及药敏试验。结果3589例新生儿血培养标本共检出病原菌228株,总阳性率为6.35%,其中革兰阳性菌194株,占总分离率的85.09%,革兰阳性菌中以凝固酶阴性葡萄球菌为主;革兰阴性菌28株,占12.28%,革兰阴性菌以大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌居多。药敏结果显示革兰阳性菌对青霉素G耐药率最高,其次为氨苄西林/舒巴坦、苯唑西林,耐药率均在80%以上。未检出对万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因耐药的菌株。革兰阴性菌中大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌ESBLs的检出率均为50%,这些菌株对头孢哌酮/舒巴坦、丁胺卡那霉素、左旋氧氟沙星、亚胺培南表现了较低的耐药率。结论本地区新生儿血培养病原菌以革兰阳性菌为主,凝固酶阴性葡萄球菌是主要病原菌,且表现为多重耐药性。对新生儿凝固酶阴性葡萄球菌引起的败血症应加以重视。     

用PCR扩增16Sr RNA基因鉴定幽门螺杆菌的细胞壁缺陷型

目的：探讨幽门螺杆菌及其稳定L型的检测与鉴定方法。方法：用抗生素诱导、滤菌器过滤、非高渗透压培养基培养获得幽门螺杆菌稳定L型纯培养物,对幽门螺杆菌及其稳定L型进行16SrRNA基因的PCR扩增及序列测定。结果：幽门螺杆菌及其稳定L型的16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖电泳,在紫外检测仪下可见550 bp的DNA条带,测序结果经NCB I B last分析比对,基因同源性可达100%。结论：16SrRNA基因PCR检测可用于幽门螺杆菌L型及其他形态变异的菌种鉴定。     

PCR定量检测肺炎支原体在肺炎支原体肺炎中的应用分析

目的:探讨PCR定量检测在肺炎支原体肺炎诊断中的可行性及优越性。方法:选取186例接受治疗的肺炎患者,分别用MP快速培养法和实时PCR进行检测。记录并比较两组检测方法下的灵敏度及特异性等相关数据。结果:快速培养法与实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05);实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异性为85.5%(65/76),明显高于快速培养法的77.6%(59/76),假阳性率为14.5%(11/76),明显低于快速培养法的22.4%(17/76),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:快速培养法与实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的敏感度差别不大,而实时PCR法的特异性优于快速培养法。临床上应用这两种不同原理的检测方法组合检测,取长补短,在提高肺炎支原体感染检出率的同时,还可以互相佐证,减少实验误差,提高检测的准确性。     

泰安市2013年手足口病病原体检测结果分析

目的对2013年泰安市手足口病病例进行病原体检测和分析。方法对临床诊断为手足口病病例的粪便标本505份,用实时荧光定量PCR筛选出肠道病毒通用引物阳性的标本,再分别使用Cox A 16和EV71型的特异引物进行分类检测。结果标本总肠道病毒阳性率为95.05%（408/505）,Cox A 16阳性率为31.09%（157/505）,EV71阳性率为27.92%（141/505）,其他肠道病毒阳性率为36.24%（183/505）,Cox A 16的阳性率高于EV71。发病年龄多为1-6岁,男性多于女性。结论 2013年度泰安市的手足口病疫情以EV71和Cox A 16并发为主,采用分子生物学方法检测手足口病的病原体,对手足口病的监测及防控具有重要作用。