异丙酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的作用

目的 探讨异丙酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的作用及其可能机制。方法PCI2细胞接种于96孔培养板中培养，随机分为4组：对照组、布比卡因组、异丙酚组和布比卡因＋异丙酚组，分别加入Hanks液、布比卡因（终浓度为0．03、0．06、0．09、0．12、0．15mmol／L）、异丙酚（终浓度为1、2,4、8mmol／L）以及同时加入布比卡因（终浓度为0．09mmol／L）和异丙酚（终浓度为1、2,4、8mmol／L）。培养24h时，采用二甲基噻唑二甲基四唑溴盐比色微量分析法测定各孔的细胞活力和上清液乳酸脱氢酶（LDH）的活性，应用流式细胞仪检测硫氧还蛋白-1（Trx-1）和硫氧还蛋白还原酶-1（TrxR-1）表达率。结果 与对照组比较，布比卡因组PC12细胞活力降低（P〈0．01），且呈浓度依赖性；异丙酚组PC12细胞活力差异无统计学意义（P〉0．05）。与布比卡因组的0．09mmol／L亚组比较，布比卡因＋异丙酚组的2—8mmol／L亚组PC12细胞活力增加（P〈0．05）。与对照组比较，布比卡因组和布比卡因＋异丙酚组LDH活性升高，Trx-1和TrxR-1表达率降低（P〈0．01）；与布比卡因组比较，异丙酚组和布比卡因＋异丙酚组LDH活性降低，Trx-1和TrxR-1表达率升高（P〈0．01）。结论 布比卡因对PC12细胞具有浓度依赖性的细胞毒性作用。异丙酚可通过保护内源性硫氧还蛋白系统减轻布比卡因诱导的PCI2细胞的毒性。     

异丙酚对大鼠肺一氧化氮合酶活性的影响

目的 了解异丙酚对大鼠肺一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨异丙酚对肺血管、支气管扩张作用的机理。方法40只SD大鼠,随机分为异丙酚组(n=20)、对照组(n=20),分别腹腔注射等容积异丙酚(1ml·kg-1,即100mg·kg-1)和生理盐水(10ml·kg-1)。异丙酚组待鼠翻正反射消失后,经尾缘静脉泵以异丙酚10mg·kg-1·h-1,20min后处死,对照组鼠腹腔注射20min后处死。检测支气管肺泡灌洗液NO水平、肺组织匀浆中NOS酶活性、NO水平及内皮型NOS(eNOS)、神经型NOS(nNOS)在肺内的表达与分布(免疫组化法)。结果 异丙酚组支气管灌洗液和肺组织匀浆中NO水平均明显高于对照组(P<0.01),肺组织匀浆中NOS酶活性也明显大于对照组(P<0.01)。异丙酚组肺血管内皮细胞nNOS和eNOS、支气管粘膜上皮细胞nNOS染色表达强阳性。结论 异丙酚可以刺激肺中NOS活性,升高肺内内源性NO水平,在异丙酚的扩张肺血管、支气管中发挥一定的作用。     

丙泊酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性、活性氧和过氧化氢酶的影响

目的探讨丙泊酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的保护作用及活性氧（ROS）和过氧化氢酶（CAT）在其中的作用。方法培养的PC12细胞分成四组：正常对照组（C组）；丙泊酚组（P组），在细胞培养基中加入2mmol／L，丙泊酚；布比卡因组（B组），在细胞培养基中加入0．09mmol／L布比卡因；丙泊酚加布比卡因组（PB组），在细胞培养基中同时加入2mmol／L，丙泊酚和0．09mmol／L布比卡因；每组6孔。培养6h和24h后，用倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT比色微量分析细胞活性，测定上清液乳酸脱氢酶（LDH）活性和细胞内CAT、ROS活性。结果与c组相比，B组PC12细胞活性和细胞内CAT活性显著降低（P＜0．01），LDH活性和细胞内ROS活性显著增加（P＜0．01）；P组PC12细胞活性及其它指标无显著变化；与B组相比，PB组PC12细胞活性和细胞内CAT活性显著增加（P〈0．05），LDH活性和细胞内ROS活性显著降低（P＜0．01）。结论布比卡因对PC12细胞具有毒性作用，可能与降低细胞内CAT活性、增加ROS活性有关；丙泊酚通过保护细胞内CAT活性和清除ROS而减轻布比卡因诱导的PC12细胞毒性。     

丙泊酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性、活性氧和过氧化氢酶的影响

目的探讨丙泊酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的保护作用及活性氧(ROS)和过氧化氢酶(CAT)在其中的作用。方法培养的PC12细胞分成四组:正常对照组(C组);丙泊酚组(P组),在细胞培养基中加入2mmol/L丙泊酚;布比卡因组(B组),在细胞培养基中加入0.09mmol/L布比卡因;丙泊酚加布比卡因组(PB组),在细胞培养基中同时加入2mmol/L丙泊酚和0.09mmol/L布比卡因;每组6孔。培养6h和24h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态、MTT比色微量分析细胞活性,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性和细胞内CAT、ROS活性。结果与C组相比,B组PC12细胞活性和细胞内CAT活性显著降低(P<0.01),LDH活性和细胞内ROS活性显著增加(P<0.01);P组PC12细胞活性及其它指标无显著变化;与B组相比,PB组PC12细胞活性和细胞内CAT活性显著增加(P<0.05),LDH活性和细胞内ROS活性显著降低(P<0.01)。结论布比卡因对PC12细胞具有毒性作用,可能与降低细胞内CAT活性、增加ROS活性有关;丙泊酚通过保护细胞内CAT活性和清除ROS而减轻布比卡因诱导的PC12细胞毒性。     

异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 评价异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 SD大鼠,雌雄各半,体重240～ 280 g,采用皮下注射去氧皮质酮的方法制备高血压模型,采用随机数字表法,将64只造模成功的大鼠随机分为4组(n＝16):高血压组(H组)、小剂量异丙酚组(P1组)、中剂量异丙酚组(P2组)和大剂量异丙酚组(P3组).P1组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚20、30、40 mg·kg-1·h-13 h,H组给予等容量生理盐水.分别于给药前、给药1h、3h时记录平均动脉压(MAP).给药3h时处死大鼠,摘眼球法采集血样,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(N0)浓度,取胸主动脉,采用RT-PCR和Western blot法测定eNOS mRNA、iNOS mRNA及其蛋白表达水平.结果 与H组比较,P1组、P2组和P3组给药3h时MAP降低,血清NO浓度升高,主动脉eNOS mRNA及其蛋白表达上调,主动脉iNOS mRNA及其蛋白表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05或0.01).结论 异丙酚降低高血压大鼠血压的机制与下调iNOS表达,上调血管内皮细胞eNOS表达,促进NO释放有关.     

脂质体包裹对布比卡因致大鼠脊髓神经毒性的影响

目的 评价脂质体包裹对布比卡因致大鼠脊髓神经毒性的影响.方法 取鞘内置管成功的SD大鼠108只,体重200 ～ 225 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=18):对照组(C组)、脂质体组(L组)、0.5％布比卡因组(B1组)、1％布比卡因组(B2组)、0.5％脂质体布比卡因组(LB1组)和1％脂质体布比卡因组(LB2组).从鞘内置管成功第4天开始,L组、B1组、B2组、LB1组和LB2组每天分别鞘内注射脂质体、0.5％布比卡因、1％布比卡因、0.5％脂质体布比卡因和1％脂质体布比卡因各20μl,连续7d.给药结束后观察大鼠后肢形态和行走状况.采用痛敏仪测定大鼠后爪机械痛阈.痛阈测定结束后每组随机处死8只大鼠,取腰膨大处脊髓组织,采用免疫组化法计数Fos蛋白阳性细胞.痛阈测定结束后每组随机处死8只大鼠,取注射节段脊髓组织,采用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率.痛阈测定结束后每组随机取2只大鼠,取L3,4节段脊髓组织,观察神经元超微结构.结果 与C组比较,L组机械痛阈、Fos蛋白阳性细胞计数和细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05),B1组和LB1组Fos蛋白阳性细胞计数升高(P＜0.01),机械痛阈和细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05),B2组机械痛阈、Fos蛋白阳性细胞计数和细胞凋亡率升高,LB2组Fos蛋白阳性细胞计数和细胞凋亡率升高(P＜0.01),机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)；与B1组比较,LB1组机械痛阈和细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05),Fos蛋白阳性细胞计数降低,B2组机械痛阈、Fos蛋白阳性细胞计数和细胞凋亡率升高(P＜0.01)；与B2组比较,LB2组机械痛阈、Fos蛋白阳性细胞计数和细胞凋亡率降低(P＜0.01)；与LB1组比较,LB2组机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05),Fos蛋白阳性细胞计数和细胞凋亡率升高(P＜0.01).结论 脂质体包裹可减轻鞘内注射1％布比卡因对大鼠脊髓的神经毒性.     

异丙酚对缺氧复氧后大鼠海马神经元诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察异丙酚对原代培养海马神经元缺氧复氧后诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达及存活率的影响。方法 原代培养SD大鼠海马神经元随机分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧 异丙酚4μg/ml组、缺氧 异丙酚12μg/ml组。MTT法测定体外缺氧4h复氧24h后海马神经元的存活率,免疫细胞化学法测定iNOS表达的程度。结果 与缺氧组比较,两异丙酚组缺氧复氧后海马神经元的存活率提高(P<0.05),iNOS表达的灰度值降低(P<0.05或0.01),iNOS阳性表达率降低,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论 异丙酚可降低大鼠海马神经元缺氧复氧后iNOS的表达,提高存活率。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对布比卡因所致神经细胞毒性的影响

目的 明确布比卡因是否导致SH-SY5Y细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)水平降低,以及NAD水平降低是否与布比卡因神经细胞毒性有关.方法 以1 mmol/L布比卡因培养液处理SH-SY5Y细胞30 min～7 h,检测细胞内NAD含量及细胞活性;以1～10 mmol/L布比卡因处理细胞30 min,检测细胞内NAD含量及细胞活性;于5 mmol/L布比卡因处理细胞30 min前后,以不同NAD培养液预处理、后处理SH-SY5Y细胞30 min,检测细胞内NAD水平的变化及细胞活性.结果 1 mmol/L布比卡因处理后3h,细胞内NAD水平开始下降,至处理7h,细胞内NAD水平降至处理前的(28±8)％;2、5、10 mmol/L布比卡因处理30 min后,细胞内NAD水平分别降至对照组的(22±3)％、(26±7)％及(16±14)％,明显低于对照组(P＜0.05).1 mmol/L布比卡因处理后各时点细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05);1～10 mmol/L布比卡因处理后,细胞存活率随着布比卡因浓度的增高而降低,2、5、10 mmol/L布比卡因组细胞存活率分别降至对照组的(49±9)％、(36±16)％及(26±-4)％(P＜0.05).以2.50、5.00、10.00 mmol/L NAD预处理的细胞,其细胞内NAD水平分别达到对照组的(86±12)％、(89±12)％及(105±59)％,明显高于单独以布比卡因处理的细胞(P＜0.05).以不同浓度NAD预处理或后处理干预后,细胞存活率明显高于单独以5 mmol/L布比卡因处理的细胞,且预处理效果好于后处理(P＜0.05).结论 布比卡因引起神经细胞毒性与NAD水平下降有关,外源性NAD能提升细胞内NAD水平,且能减轻布比卡因的细胞毒性.     

异丙酚对大鼠心肌细胞钙离子移动及钙通道电流的影响

目的 观察异丙酚对心肌细胞钙离子移动和Ｌ－型钙通道电流（Ｉｃａｌ）的影响。方法 急性分离的大鼠单个心室肌细胞，采用Ｆｌｕｏ－３ＡＭ钙荧光指示剂和膜片钳技术，观察５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１或２５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１异丙酚对高浓度ＫＣ１或咖啡因所诱发细胞内钙离子浓度的变化，以及对Ｌ－型钙通道电流的影响。结果 ５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１或２５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１异丙酚明显减弱ＫＣｌ所诱发细胞内钙离子的增加，浓度     

金属硫蛋白对离体心脏细胞凋亡和NO、NOS表达的影响

目的 探讨金属硫蛋白（Mr）与离体心脏细胞凋亡和一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的关系。方法 Wistar大鼠16只，分为2组：对照组（c），腹腔注射蒸馏水0．5ml24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液，4℃保存3h后建立Langendorff灌注模型，灌注KH液2h；实验组（E）腹腔注射3．6％ZnSO4（1．5ml／ks）24h后取离体心脏，处理方法同C组。测定心肌MT含量、心肌细胞凋亡率、NO、NOS的含量。结果 MT含量E组明显较C组增高（P〈0．05），心肌细胞凋亡率E组明显低于C组（P〈0．01），琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯E组与C组比较，光密度明显减弱（P〈0．01），E组与C组比较，NO、NOS的含量明显增多（P〈0．01）。MT含量与凋亡细胞率呈负相关（r=-0．96，P〈0．01），与心肌组织中NO含量呈正相关（r=0．97，P〈0．01）。结论 心肌MT可增加心肌中NO、NOS的表达，减少再灌后心肌细胞凋亡的发生。     

异丙酚对豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响

目的观察不同浓度异丙酚对氯化钾诱发的豚鼠耳蜗外毛细胞内钙离子移动的影响，探讨其对听觉外周感受器（耳蜗）作用的可能机制。方法用Fluo-3AM荧光指示剂染色急性分离的豚鼠耳蜗外毛细胞，在激光共聚焦显微镜下动态观察使用异丙酚前及异丙酚（50、250μmol／L）预处理后，氯化钾诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果异丙酚可使氯化钾诱发的外毛细胞内钙荧光染色强度的峰值下降，较对照组有明显差异，并与浓度呈正相关。结论异丙酚浓度依赖性地降低耳蜗外毛细胞内钙离子浓度，部分与抑止细胞外钙内流有关。     

鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓NOS活性和NO产量的影响

目的 观察鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓一氧化氮(NO)产量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法 32只Wistar大鼠制成慢性坐骨神经痛模型并随机分为4组，每组8只：对照组(C组)，鞘内应用0．9％生理盐水10μl；氯胺酮组(K组)，鞘内应用氯胺酮50μg；吗啡组(M组)，鞘内应用吗啡20μg；吗啡加氯胺酮组(KM组)，鞘内应用吗啡10μg加氯胺酮25μg。每日给药1次，连续7d。用药后30min用辐射热刺痛仪测定热痛阈值(即右后肢抬足潜伏期)，结果用最大镇痛效应百分率(MPE％)表示。用药7d后动物处死，取腰段脊髓，用分光光度法测定脊髓NO产量和NOS活性。结果 M组和KM组用药后MPE明显高于C组和K组(P＜0．01)，但随着用药次数的增加，M组的MPE逐渐下降，在用药后第5、6、7天与KM组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。K组和C组在各时点比较差异亦有统计学意义(P＜0．01)。KM组脊髓NO产量和NOS活性均明显低于其他三组(P＜0．01或P＜0．05)。结论 鞘内应用吗啡和氯胺酮可对抗神经痛大鼠对辐射热的痛觉过敏反应，对防治中枢神经敏感化的进一步形成和发展有一定作用，具有临床应用潜能。     

异丙酚和硫喷妥钠对心肌内游离Ca2+浓度的影响

目的　观察异丙酚和硫喷妥钠对心肌细胞内游离Ｃａ２＋ 浓度的影响,以探讨静脉麻醉药对心肌细胞内游离Ｃａ２＋ 的作用及其机制。方法　心肌细胞分离培养７～９ 天,以Ｆｕｒａ２／ＡＭ 荧光指示剂负载后,实验组Ａ 加入实验用药孵育１０ 分钟进行Ｃａ２＋ 测定;实验组Ｂ：加入实验用药１０ 分钟后,加ＫＣｌ４０ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ,１ 分钟后进行Ｃａ２＋ 测定。结果　临床剂量的异丙酚和硫喷妥钠对静息心肌细胞内Ｃａ２＋ 浓度无明显影响,超临床剂量的异丙酚和硫喷妥钠使静息细胞内Ｃａ２＋ 明显降低。４０ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ可使心肌细胞内Ｃａ２＋ 浓度明显升高,异丙酚和硫喷妥钠对高浓度ＫＣｌ所激发Ｃａ２＋ 内流均有明显的抑制,并呈剂量依赖性。结论　异丙酚和硫喷妥钠降低心肌细胞内钙离子浓度。他们在完整心肌的负性肌力作用可能与其部分抑制兴奋收缩耦联过程中钙离子内流和抑制静息状态下的钙溢流有关