当归多糖对骨髓巨噬细胞的影响及其与造血调控的关系

目的研究当归多糖(APS)对骨髓巨噬细胞(BMMФ)生物活性的影响及其与造血调控的关系，从而阐明当归的活血机制。方法采用骨髓造血祖细胞和巨噬细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测，免疫细胞化学，核酸探针原位杂交等技术。结果经APS诱导的BMMФ的培养上清液可提高髓系造血祖细胞的集落产率；经APS诱导后，BMMФ表达促红细胞生成素(EPO)、粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白水平有不同程度的提高；EPO mRNA和GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论APS可以直接和(或)间接地刺激造血诱导微环境中的BMM中，从基因水平和蛋白水平上促进造血调控因子的合成和分泌，进而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、晚期红系祖细胞(CFU-E)、粒单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化。     

当归多糖对人红系造血祖细胞增殖的影响及其机理研究

采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术，研究当归多糖（AP）对人红系造血祖细胞（BFU-E，CFU-E）增殖调控的影响及其机理，结果表明，AP能显著促进BFU-E，CFU-E的集落形成/经AP诱导制备的脾细胞，胸腺细胞和骨髓基质细胞培养上清液能提高BFU-E的集落产率；AP能协同IL-3和红细胞生长素（Epo)促进BFU-E生长，研究提示，AP有可能直接刺激BFU-E，CFU-ZE增殖。亦可能通过促进机体产生红系造敌国生长因子和/或协同这些因子的作用等途径。进而促进机体的红系血发生。     

人参总皂甙诱导IL-3基因表达的实验研究

目的:研究人参总皂甙(TSPG)对人早期造血生长因子IL-3基因表达的影响.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、核酸分子原位杂交方法.结果:未经诱导的人T淋巴瘤细胞株-Jurkat细胞RNA提取物的RT-PCR扩增产物中未见IL-3条带,而经TSG诱导后Jurkat细胞RNA提取物的RT PCR扩增产物中出现IL-3条带.核酸分子原位杂交显示经TSPG诱导的胎儿胸腺细胞、脾细胞IL-3mRNA表达的阳性率及阳性强度较对照组均有显著提高.结论:人参总皂甙能诱导人淋巴细胞表达IL 3mRNA,从而促进人早期血细胞发生.     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

脐血CD34+细胞的体外扩增研究

目的:探讨造血生长因子不同组合方式对脐血CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC)的扩增作用.方法:应用StemsepTM阴性分选系统分离纯化CD34+细胞,在体外液体培养体系中经不同组合细胞因子进行扩增1～3w.结果:FL+Tpo+SCF+IL-3+GM-CSF+G-CSF+Epo组合的扩增效果最佳,可分别扩增细胞总数、造血祖细胞集落总数(CFCs)、CD34+细胞达1627.57±52.93、56.78±8.13、41.09±4.11倍.FL和Tpo具有明显的协同扩增早期祖细胞的作用,CFCs和CD34+细胞在1～2w维持在较高水平,以后逐渐衰退.结论:合理的细胞因子组合在大量扩增造血细胞的同时也有助于早期造血祖细胞的自我更新,把握适宜的扩增时机,将有助于扩增细胞在质和量上满足移植和基因治疗等的要求.     

5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的探讨IL-3、IL-6、GM-CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响.方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、10 00 u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落.结果 IL-3、IL-6、GM-CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、25 0 u/ml.峰值浓度下,对CFU-E、BFU-Em、BFU-Eim、CFU-GM形成的作用强度不同,PIXY321 条件下所形成的集落数最多.结论这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著.     

中药经骨髓基质细胞干预调节造血的研究进展

本文通过查阅相关文献,简要回顾了骨髓基质细胞的生物学特性,总结了中药经骨髓基质细胞对造血功能的调节。骨髓基质细胞是造血诱导微环境中的重要组成部分,当归、黄芪等中药可调节其分泌多种造血调节因子如SCF、GM-CSF、IL-3等影响造血,并表达多种粘附分子如VCAM-1、ICAM-1等改变骨髓基质细胞与造血细胞的结合力,中药作用于骨髓基质细胞对造血的调控可能与调节因子和粘附分子有关。     

当归多糖促进慢性粒细胞白血病细胞性树突状细胞的诱导生成

目的 探讨当归多糖(APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞(DCs)的影响。方法 取慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞，分别予粒-巨噬集落刺激因子(GM—CSF)／白介素-4(IL-4)培养或GM-CSF／IL-4联合各浓度APS(50，100，200mg／L)培养，普通光镜和电镜观察细胞形态，台盼蓝拒染法检测细胞成活率，流式细胞仪检测DCs的免疫表型(CD80，CD86，CD83)，自体或异体混合淋巴细胞反应检测DCs刺激T淋巴细胞的增殖能力。结果GM-GSF/TL-4或GM-CSF，IL-4／APS诱导培养的慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞均表现出典型的树突状形态而且表达高水平的免疫表型。GM-CSF／IL-4／APS培养的DCs的细胞成活率和增殖能力显著提高，CD83，CD80，CD86表达显著升高，APS组慢性粒细胞白血病细胞诱导的树突状细胞(CML-DCs)刺激T淋巴细胞的增殖能力更强。结论 GM-CSF/IL-4/APS培养的DCs的CD83，CD80、CD86表达率明显高于GM-CSF／IL-4组。GM-CSF／IL-4／APS诱生的CML-DCs刺激T淋巴细胞增殖能力强于GM-CSF／IL-4组。APS能促进IL-4和GM-CSF对CML-DCs的诱生与成熟。     

当归多糖对造血祖细胞增殖调控机理的研究

探讨当归多糖（ＡＰ）对造血祖细胞增殖调控和“补血”的生物学机理。方法采用贫血小鼠模型，用造血祖细胞体外培养和造血生长因子检测等技术，测定ＡＰ对造血祖细胞克隆增殖等影响。结果ＡＰ对正常或贫血鼠的髓系造血祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ－ＭＫ）增殖分化有显著促进作用；经ＡＰ诱导制备的成纤维细胞、巨噬细胞、脾细胞和骨骼肌条件培养液能提高造血祖细胞集落产率。结论ＡＰ促进造血的机理可能与直接或间接刺激造血诱导微环境的巨噬细胞、成纤维细胞、淋巴细胞等分泌较高活性的造血生长因子有关。     

几种组织培养上清液对造血祖细胞体外增殖分化的比较

目的：寻求既经济又有效的造血生长因子样活性物质。方法：采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术,检测胎肌培养上清液、骨液基质细胞培养上清液、胸腺细胞培养上清液与脾细胞培养上清液对造血祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍix增殖分化的影响。结果胎肌培养上清液和对ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ－Ｍix的体外地产殖与分化有明显刺激作用。而胸腺与脾细胞条件培养上清液对ＢＦＵ－Ｅ的生长有显著促进作用。结论：胎肌培养上清液中可能含ＧＭ－ＣＳＦ样活性物质。而胸腺与脾细胞培养上清液具有较高ＩＬ－３样活性,可以利用组织与细胞培养上清液替代重组造血生长因子进行造血细胞的实验研究和临床诊断。     

当归注射液对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的保护作用

目的探讨当归注射液对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的保护作用。方法将30只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。于第7天断颈处死小鼠,取出尺骨和股骨,计数骨髓单个核细胞,并行尺骨组织学切片和超微结构观察。结果与正常组比较,模型组骨髓单个核细胞明显减少(P<0.01);而治疗组与模型组比较,骨髓单个核细胞明显增多(P<0.01)。骨髓超微结构观察显示模型组线粒体和内质网数量减少且明显受损,血窦减少、窦壁断裂。治疗组线粒体、内质网和血窦数量增加,形态基本正常。结论当归注射液能通过促进骨髓造血细胞增生,改善骨髓微环境而对受环磷酰胺损伤的小鼠进行保护。     

Exonuclease-1缺失延缓端粒酶缺失小鼠造血微环境的衰老

目的 研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响.方法 以端粒酶基因敲除小鼠( Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo -1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc -/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/- Exo-1-/-).以CD45.1野生型小鼠的骨髓细胞为供体,以2月龄G3Terc-/-或G3Terc-/- Exo-1-/-小鼠为受体,进行骨髓移植.在受体小鼠9月龄时,取骨髓、脾脏、胸腺、外周血等组织器官的细胞进行流式分析,研究G3 Terc-/-和G3Terc-/-Exo -1-/-受体小鼠中的野生型供体来源的造血干细胞的发育分化.结果 同G3Terc-/-小鼠相比,G3Terc-/- Exo-1-/-双基因敲除受体小鼠骨髓中野生型供体来源的B220+细胞比例升高,前体B细胞的比例也明显升高;脾脏B220+细胞的比例明显升高;胸腺发育正常;外周血中B220+细胞比例升高.结论 Exo-1缺失延缓了端粒酶基因敲除小鼠造血系统微环境的衰老,从而逆转了端粒功能障碍引起的骨髓造血干细胞发育分化异常.     

人参总皂甙诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究

目的：研究和论证人参促进血细胞发生及“补气生血”的现代生物学机理。方法：采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术，研究经人参总皂甙（TSPG）诱导的人脉静脉内皮细胞株（Ecv304)上清液（HEcCM)中造血生长因子的活性及GM－CSF、IL－3和IL－6在内皮细胞的表达。结果：TSPG体外诱导制备的HEcCM能显著促进CFU－GM和CFU－Mix的增殖；同时，TSPG能不同程度地促进内皮细胞表达GM－CSF、IL－3和IL－6蛋白。结论：本研究提示TSPG能上调造血策环境中的内皮细胞分泌造血生长因子来调节血细胞的生长，这或许是人参“补气生血”的现代生物学机理之一。     

氟康唑治疗血液病患者真菌感染的临床观察

目的 分析血液病患者真菌感染的临床特点及抗真菌药物氟康唑的临床疗效.方法 收集血液病合并真菌感染应用氟康唑治疗的32例患者的临床资料,观察氟康唑在浅部真菌感染、深部真菌感染中的治疗疗效, 并进行统计学分析.结果 氟康唑治疗浅部真菌感染有效率达100%(12/12),与深部真菌感染有效率55%(11/20)比较,差异有统计学意义(P<0.01);浅部真菌感染组真菌清除率为100%(6/6)、深部真菌感染组为42.9%(3/7),两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 在浅部真菌感染中,用氟康唑治疗经济有效;在深部真菌感染中,应根据病情及病原学特点选用药物. Abstract： Objective To analyze the clinical features of fungal infection in patients with hematopoietic diseases and observe the therapeutic effect of fluconazole. Methods The clinical datas of 32 cases of hematopoietic diseases with fungal infection treated by fluconazole were collected. The patients were divided into two groups:one was shallow fungal infection (group A),the other was deep fungal infection (group B),and the clinical effect of fluconazole in the two groups was observed. Results The effective rate of fluconazol in group A and group B was 100%, 55% respectively, and the difference between the two groups was statistically significant. Similarly, there was statistical difference between group A(100%) and group B(42.9%) in the eradication rate of fungi by fluconazole.Conclusions Fluconazole was effective and economical in treating shallow fungal infection. However, different antifungal agent should be choosen according to the condition and etiologic features of the disease in deep fungal infection.     

小鼠脾脏内粒-巨噬系祖细胞含量及其反应的某些特性

本实验报道脾脏的大小与脾脏内 CFU-GM 含量的关系;脾与股骨骨髓中造血干细胞数量的比较;不同剂量钴60照射以及饥饿对脾脏与骨髓中 CFU-GM 产率的影响。     

人参多糖动员的造血干/祖细胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究

目的:探讨经人参多糖动员的外周血造血干/祖细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法:建立小鼠造血衰竭模型,移植经人参多糖动员的外周血单个核细胞,检测受体小鼠生存时间,外周血WBC,脾湿重及脾集落数,进行染色体嵌合实验。结果:经人参多糖动员的雄性小鼠外周血MNC1×105个输注给致死剂量照射的雌性小鼠,可明显延长小鼠存活时间;提高受体小鼠外周血WBC数;亦能增加脾湿重,提高脾集落(CFU-S)数;经Y染色体检测(PCR法)受体小鼠外周血单个核细胞可检出581bpY染色体序列。结论:经人参多糖动员小鼠的外周血中存在数量较多的造血干/祖细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建小鼠造血功能。     

造血干细胞低温保存与临床应用

目的观察低温保存造血于细胞（hematopoietic stem cell,HSC）的效率及冻存HSC的临床应用情况。方法25例骨髓造血干细胞（bone marrow stem cell,BMSC）以10％二甲基亚砜加10％自体血浆为冷冻保护剂,采用程控降温液氮保存。21例外周血于细胞（peripheral blood stem cell,PBSC）采用CP1（cryopreservativesl）加4％人血白蛋白为冷冻保护剂,非程控降温后液氮保存或低温冰箱保存。检测复温后单个核细胞（MNC）回收率、粒-单细胞集落形成单位（CFU—GM）回收率、台盼蓝拒染率（TBR）,并行细菌学培养,移植后观察输注反应及植入情况。结果BMSC冻存时间为1～3个月,中位时间1个月。复温后MNC回收率为（97．74±0．85）％,TBR为（96．74±0．91）％,CFU—GM回收率为（72．04±1．87）％。PBSC冻存时间为1～20个月,中位时间2个月。复温后MNC回收率为（97．75±1．34）％,TBR为（96．28±2．16）％。复温后46份标本细菌学培养均为阴性。实施自体骨髓造血干细胞移植（ABMSCT）25例,中性粒细胞绝对值（ANC）〉0．5×10^9／L的时间为（10．79±0．93）d,血小板计数（PLT）〉20×10^9／L的时间为（12．88±0．95）d。实施自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）21例,ANC〉0．5×10^9／L的时间为（10±1．14）d,PLT〉20×10^9／L的时间为（12．04±2．13）d。两组间MNC回收率和TBR比较均无显著性差异,移植后APBSCT组ANC〉0．5×10^9／L的时间早于ABMSCT组,有显著性差异（P〈0．05）,但PLT〉20×10^9／L的时间两组无显著差异。出院前所有患者复查骨髓均示增生活跃或明显活跃。BMSC输注出现的不良反应明显多于PBSC输注。结论采用联合冷冻保护剂、非程控降温后液氮保存或低温冰箱保存来冻存HSC是切实可靠的,这种方法操作简便、价格低廉、安全有效;建议今后冻存BMSC前应去除红细胞。     

脐血细胞成份及造血干/祖细胞的定量研究

目的:探讨脐全血细胞组成特点,对脐血造血干／祖细胞进行定量测定。方法:采用自动血细胞分析仪检测血细胞成份,以流式细胞术为基础.应用双荧光标记单克隆抗体方法,测定造血于／祖细胞的含量。结果:脐血组成细胞的大多数检测指标高于成人外用血。CD34＋细胞占1.14±1.12％;CD34＋CD38-细胞占CD34＋细胞的16％。结论:脐血具有丰富的血细胞及造血于／祖细胞,有造血重建的临床应用潜能。     

双基因导入人脐血CD34^＋细胞共表达的调控

目的 观察携带双基因的逆转录病毒载体转导人脐血ＣＤ３４＾＋细胞后,猴病毒４０（ＳＶ４０）早启动子和内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）对载体上,下游双基因共表达的影响。方法 分别构建含ＳＶ４０早启动子和ＩＲＥＳ的双基因逆转录病毒载体ｐＬＥＳＮ和ｐＬＥＩＮ,两者均携带增强型绿色荧光蛋白和新霉素抗性ｎｅｏ基因。重组载体经包装以其病毒上清感染经磁性细胞分离仪富集的人脐血ＣＤ３４＾＋细胞,而后进行集落形成细胞测     

异基因外周血干细胞移植治疗高危白血病

目的　探讨异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)治疗高危白血病的疗效。方法　25例高危白血病患者,中位年龄34（5.5～52）岁,接受了HLA配型相合同胞供者外周血干细胞移植,其中急性白血病（AL）15例,（第一次完全缓解1例,为Ph染色体阳性,第二次及以上完全缓解期7例,复发7例,包括2例异基因骨髓移植(BMT)后复发;慢性粒细胞性白血病（CML）4例;（第2次慢性期、加速期、急变期、BMT后复发各1例）;骨髓增生异常综合征(MDS)6例,移植物抗宿主病（GVHD）预防方案采用经典环孢霉素（CsA）加氨甲蝶呤（MTX）。结果　所有患者均植活,中性粒细胞数恢复至≥0.5×109/L和血小板数≥20×109/L的中位时间分别为移植后14(10～18) d和11（7～45） d。发生II度及以上急性GVHD13例,包括1例III度GVHD,未发生IV度急性GVHD。23例可评估患者中16例(70%)诊断慢性GVHD。移植相关死亡率为16%,复发6例,4例经回输供者淋巴细胞获得再次缓解。19例患者无病存活,中位随访时间为304（94～1 963） d。2年总生存率、无病生存率及复发率分别为64%、58%及25%。结论　allo-PBSCT可治疗高危白血病患者,降低移植后复发率,延长无病生存。对有高危因素的血液系统恶性肿瘤患者,选择PBSCT替代骨髓移植更有优势。