大豆异黄酮对氧化损伤血管内皮细凋亡作用

目的 探讨大豆异黄酮(SI)对氧化损伤血管内皮细胞凋亡作用.方法 体外培养血管内皮细胞,采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)进行氧化损伤,将细胞分为6组,即空白对照组、氧化损伤对照组(ox-LDL)、氧化损伤加入维生素E对照组(VE ox-LDL)、氧化损伤加入SI低、中、高剂量组(SI-L ox-LDL、SI-M ox-LDL、SI-H ox-LDL).将ox-LDL作用于预先加入VE或不同剂量SI孵育24 h的内皮细胞,继续培养24 h.测定细胞四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)吸光度(A)值、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、细胞凋亡指数(AD及形态学观察.结果 空白对照组、VE ox-LDL及(SI-L、M、H) ox-LDL组细胞MTT(A)明显高于ox-LDL组(P<0.01);空白对照组、VE ox-LDL及(SI-L、M、H) ox-LDL组细胞LDH释放百分比及AI均明显低于ox-LDL组(P<0.01).结论 SI对体外氧化损伤血管内皮细胞凋亡具有明显的抑制作用.     

沙格列汀对H_2O_2诱导损伤的血管内皮细胞分泌白细胞介素-6及单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察选择性二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂沙格列汀对过氧化氢(H_2O_2)诱导损伤的血管内皮细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法以培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入100μmol/L过氧化氢(H_2O_2)制备细胞损伤模型,以不同浓度沙格列汀进行干预,并在不同培养时间进行观察,采用联免疫法吸附试验检测细胞上清液中IL-6及MCP-1含量。结果 H_2O_2作用HUVEC后,细胞上清液IL-6、MCP-1含量明显升高(P0.05);加入沙格列汀后IL-6、MCP-1含量明显降低,且这种作用在一定剂量范围内随药物剂量增加而增强,在一定时间范围内随时间增加而增强(P0.05)。结论沙格列汀可通过抑制血管内皮细胞IL-6、MCP-1的分泌发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

反油酸对血管内皮细胞功能及形态的影响

目的通过建立血管内皮细胞(EC)与血管平滑肌细胞(SMC)的联合培养模型,探讨反油酸对内皮细胞的损伤作用。方法将与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞用浓度为50μmol/L的油酸和反油酸分别作用48h。试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活力、一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定细胞粘附因子(VCAM-1、ICAM-1和E-slectin)基因表达量;激光共聚焦显微镜观察处理后的内皮细胞形态。结果反油酸促进LDH渗出,且紧密接触模型中内皮细胞LDH渗出率较旁分泌模型显著增加;反油酸抑制内皮细胞NO分泌,两种模型间无显著性差异;紧密接触模型中内皮细胞与旁分泌模型中的内皮细胞相比,VCAM-1、ICAM-1、E-slectin基因表达量均显著上升,且反油酸促粘附因子表达作用强于油酸;与平滑肌细胞紧密接触的内皮细胞出现形态不规则,反油酸使内皮细胞变形。结论与平滑肌联合培养可增加反油酸对内皮细胞的损伤。     

营养

03 0 95 0　维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用 孙东辉…∥中国医科大学学报 2 0 0 1 ,3 0 ( 4 ) 2 45～ 2 47研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞(EC)诱发的血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡是否具有抑制作用。以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应 ,将制备的内皮细胞条件培养液(EC CM)作为实验因素作用于培养的VSMC。采用透射电子显微镜 ,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果 ,电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示 ,VSMC的…     

人脐静脉血管内皮细胞的体外培养及rhNDPK-A对其增殖的作用

目的：建立一种体外培养人脐静脉血管内皮细胞的方法，初步探讨rhNDPK-A蛋白对内皮细胞生长的影响。方法：采用胶原酶对新生儿脐带静脉血管进行消化，从中分离出血管内皮细胞，体外传代培养，通过MTS／PMS法测定不同浓度的rhNDPK-A蛋白对HUVEC体外增殖的影响。结果：成功获得体外培养的人脐静脉血管内皮细胞，从0．0610μg／m1到250μg／ml的rhNDPK-A蛋白对人脐静脉血管内皮细胞的增殖既没有抑制也没有促进作用。结论：建立了分离培养人脐静脉向管内皮细胞的方法，rhNDPK-A蛋白不是通讨抑制内皮血管细胞的增殖而抑制血管新生的。     

黄芪甲苷对高糖受损人脐静脉内皮细胞分泌SDF-1α和CXCR4的影响

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对高糖受损人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、CXC趋化生长因子受体4(CXCR4)的影响,为进一步研究AS-IV通过内皮细胞调节SDF-1α/CXCR4轴改善血管新生奠定基础。方法:从足月健康新生儿脐静脉中分离、培养出HUVECs,采用血管性假性...     

氟对体外培养血管内皮细胞影响及硒干预作用研究

目的研究不同浓度氟对体外培养血管内皮细胞的影响及硒的干预作用。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)置于37℃,5%CO2,饱和湿度条件下培养。在培养液中加入氟化钠,氟浓度分别为0、100、400、700、1000、2000μmol/L,同时加入硒,浓度为100 nmol/L。连续培养48 h后,收集细胞培养液与细胞。应用瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,吖啶橙荧光染色测定细胞凋亡,四唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞活性;检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量;检测细胞培养液诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性、细胞iNOSmRNA、eNOSmRNA表达;检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)含量。结果在氟浓度100~700μmol/L加硒100 nmol/L,可明显减轻氟对细胞生长的抑制,恢复细胞形态的改变;使SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05)、MDA含量下降(P<0.05);降低iNOS活性和iNOSmRNA表达(P<0.05),升高eNOS的活性和eNOSmRNA表达(P<0.05);减少CAM-1和VCAM-1含量(P<0.05,P<0.01)。结论氟可致血管内皮细胞形态改变、功能异常。适宜剂量硒补充可通过提高抗氧化功能,调整NO代谢,抑制粘附分子异常表达等途径拮抗高氟所致的血管内皮损伤。     

高糖暴露对小鼠脑微血管内皮细胞通透性的影响

【目的】探讨高糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响。【方法】选取小鼠脑微血管内皮细胞系(bEnd.3)作为研究模型,检测跨内皮细胞电阻值(TEER)、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活性,对细胞模型的血脑屏障特征进行鉴定;再通过细胞形态学、细胞活力、细胞内乳酸脱氢酶活性及ZO-1、Occludin基因相对表达量的变化评价高糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响。【结果】细胞的TEER值、ALP及γ-GT的活性随细胞培养时间的增加而逐渐升高;细胞形态学结果显示,高糖作用下细胞数目明显减少,贴壁不稳;细胞活力实验显示,经葡萄糖暴露处理后,受试细胞活力呈剂量和时间依赖性降低;随着葡萄糖暴露浓度的增高,细胞内乳酸脱氢酶活性逐渐增高,各剂量组差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,对紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA表达水平进行检测发现,高糖暴露可抑制ZO-1、Occludin基因的表达,且表达水平呈剂量依赖性降低。【结论】体外培养的bEnd.3细胞模型具有血脑屏障的特征,高糖暴露能够抑制紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达,该结果可能与脑微血管内皮细胞通透性的改变有关。     

肺血管内皮细胞凋亡与肺气肿

肺气肿是COPD的主要病理表现,COPD是以不完全可逆的气流受限、进行性发展为特征的一类疾病。COPD的发病率和死亡率逐年增高,然而其确切发病机制却不十分清楚。病理学研究表明肺气肿患者存在着肺内细胞增殖和死亡的平衡失调,细胞死亡通常包括细胞坏死和细胞凋亡两种形式。细胞凋亡又称为程序性细胞死亡,是指细胞在一定条件下启动细胞内部机制发生自然死亡的过程。近年来,许多研究表明细胞凋亡参与肺气肿的发病过程,肺血管内皮细胞凋亡在肺气肿的发病中可能具有启动作用。本文就肺气肿肺血管内皮细胞凋亡与血管内皮细胞生长因子及受体、氧化剂/抗氧化剂、蛋白酶/抗蛋白酶、炎症细胞之间的关系和机制作一综述。1肺血管内皮细胞凋亡与血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体KDRVEGF是一具有多种功能的细胞因子,为血小板衍生生长因子超家族的重要成员,与不同的受体结合增加血管通透性,刺激脉管形成或生长[1]。VEGF受体目前发现有4种:VEGFR-1(Flt)、VEGFR-2(Flk/KDR)、VEGFR-3及Neuropilin(NRP-1)。其中VEGFR2能使毛细血管通透性增高,促进内皮细胞增生及迁移;而VEGFR1可促进内皮细胞分化成血管...     

大鼠内皮祖细胞的培养及鉴定

目的 探索大鼠内皮祖细胞的分离培养,为缺血性疾病细胞移植治疗提供实验方法.方法 采集大鼠骨髓,梯度密度离心法分离单核细胞,内皮细胞培养液M199培养基培养(含20%FCS+15 ng/ml VEGF),种植于提前包埋了纤维连接蛋白的六孔板培养,应用免疫荧光和流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133.并通过检测其对FITC标记的UED-1的吸附和内吞DiI-acLDL来进行细胞功能学的鉴定.结果 经过梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、Flk-1,部分表达CD133.大鼠骨髓单个核细胞经体外诱导分化,培养第5～14天的贴壁细胞不同程度的表达CD34、CD133、Flk-1和CD31.培养第9天流式细胞仪检测其阳性率分别为(40.12±6.28)%、(15.62±4.31)%、(44.05±8.20)%和(76.1±7.20)%,细胞能特异性吸附FITC标记的荆豆凝集素并内吞DiI-acLDL,并且在Matrigel上可以形成毛细血管样.结论 大鼠骨髓可以分离培养内皮祖细胞并能体外扩增,为内皮祖细胞的移植研究奠定了基础.     

茶色素对Hcy致血管内皮损伤拮抗作用

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)致血管内皮细胞的损伤作用及茶色素的拮抗作用.方法 体外培养动脉内皮细胞,随机分为6组;培养48 h后,应用四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长情况,取培养液测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素-1(ET-1)和超氧化歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)含量.结果 Hcy组细胞生长抑制率为30.70%,中、高剂量茶色素干预组细胞抑制率分别下降为13.62%和11.08%;NO含量对照组为91.33 μmol/L,Hcy组为45.67 μmol/L;ET-1含量对照组为1.39 ng/mL,Hcy组为7.18 ng/mL,给予茶色素干预后,NO含量升高,ET-1含量降低(P<0.05);MDA含量对照组为4.27 nmol/mL,Hcy组为8.51 nmol/mL;SOD活性对照组为18.72 U/mL,Hcy组为8.73 U/mL,给予茶色素干预后,MDA含量降低,SOD活性和GSH-Px活性升高(P<0.05).结论 茶色素有拮抗高同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的作用,其机制可能与抗氧化和恢复细胞因子表达有关.     

抗氧化维生素对氧化低密度脂蛋白作用的主动脉内皮细胞脂质过氧化损伤的影响

为深入探讨抗氧化维生素（维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素）对氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）损伤内皮细胞的防治作用及可能机理,我们以体外培养的小牛主动脉内皮细胞为模型、在培养的主动脉内皮细胞中加入不同剂量的抗氧化维生素,共同培养１２ｈ,再与终浓度为０．１ｇ／Ｌ的ｏｘＬＤＬ继续培养２４ｈ,取贴壁细胞及培养液,通过硫代巴比妥酸荧光比色法（ＴＢＡ）和单核细胞（ＨＬ６０）粘附计数法观察不同浓度的抗氧化维生素对ｏｘＬＤＬ损伤的内皮细胞脂质过氧化及单核细胞粘附性的影响。结果表明,抗氧化维生素各组细胞培养液中丙二醛（ＭＤＡ）含量以及内皮细胞粘附的ＨＬ６０细胞数均明显低于ｏｘＬＤＬ组,提示维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素三种抗氧化维生素均可减轻ｏｘＬＤＬ对内皮细胞的脂质过氧化损伤,阻止单核细胞的粘附。这些可能是抗氧化维生素防治动脉粥样硬化的重要机理之一。     

不明原因自然流产绒毛组织TNFR1的表达

目的 探讨肿瘤坏死因子受体1在绒毛组织中的表达及其与不明原因早期自然流产的关系.方法 采用共聚焦激光显微镜和免疫组化技术,对31例妊娠6～10周不明原因早期自然流产患者(流产组)和30例同期妊娠的健康妇女(对照组)绒毛组织中肿瘤坏死因子受体1的表达进行半定量和定位检测.结果 共聚焦显微镜观察结果为:流产组绒毛间质、血管内皮、细胞滋养层、合体滋养层细胞肿瘤坏死因子受体1表达荧光强度分别为35.99±6.35、44.11±11.89、51.40±15.26和50.76±15.74,对照组分别为32.64±5.01、42.82±8.13、49.67±10.19和48.70±10.40.流产组绒毛间质肿瘤坏死因子受体1表达荧光强度高于对照组,有显著性差异(t=2.208,P<0.05),血管内皮、细胞滋养层、合体滋养层细胞的两组差异均无显著性(t分别为0.474、0.585、0.503,均P>0.05).免疫组化结果为:流产组绒毛间质、血管内皮、细胞滋养层及合体滋养层细胞肿瘤坏死因子受体1表达率分别为100.00%(31/31)、80.65%(25/31)、100.00%(31/31)和90.32%(28/31),对照组分别为75.00%(18/24)、58.33%(14/24)、100.00%(24/24)和95.83%(23/24),流产组绒毛间质肿瘤坏死因子受体1阳性表达率明显高于对照组,经Fisher's精确概率法检验,差异具有显著性(P=0.001).免疫组化还显示:流产组中,与合体滋养层接触的细胞滋养层和血管内皮细胞肿瘤坏死因子受体1阳性表达增强.结论 绒毛间质细胞肿瘤坏死因子受体1表达水平的升高,可能通过调节肿瘤坏死因子-α的效应,导致胎儿界面局部绒毛组织间质细胞的功能改变或损害;部分细胞滋养层及血管内皮细胞肿瘤坏死因子受体1表达水平的升高加速了细胞滋养层细胞的程序性死亡,使细胞滋养层生长受限制,可能与不明原因早期自然流产的发生有关.     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉内皮细胞生长和功能的影响

Objective To study the possible mechanism of the effects ofhomocysteine on the formation of atherosclerosis (AS). Methods Aortic endothelial cells of SD rat were cultured and treated with a concentrated homocysteine for 24h,the cultured cells and the contents in the medium were studied by MTT colorimetric assay,flow cytometric method (FCM),PGI２,thromboxane A2,(TXA２),nitric oxide (NO),endothelin(ET) in the contents were examined. Results (1)homocysteine had an inhibitory effect on the proliferation of rat aortic endothelial cells;(2)homocysteine prevented rat aortic endothelial cell form G1-phase into S-phase in DNA synthesis;(3)vascular relaxing factor NO,PGI2 content in culture media in homocysteine group was significantly lower than that of control group;(4)vasoconstrictors-TXA2,ET were markedly higher than that of control group;(5)ox-LDL which had a bad effect on endothelial was higher than that of control group. Conclusions In the experimental model study,homocysteine was proved having a definite harmful effect on the aortic endothelial cells and this initial damage might play a very important role in the process of AS formation.     

Zinc deficiency alters barrier function of cultured porcine endothelial cells.

Zinc is necessary for normal membrane function and stability. We postulated that Zn deficiency may disrupt the integrity of the vascular endothelium by decreasing its barrier function. To test this hypothesis, endothelial cells were cultured on polycarbonate filters and exposed to media enriched with either 1% fetal bovine serum (FBS) (low FBS; total Zn, 1.07 mumols/L medium) or 5% FBS (control; total Zn, 2.29 mumols/L) or low FBS plus two supplemental levels of Zn, 3.36 and 5.66 mumols total zinc/L. Endothelial cell barrier function, expressed as albumin transfer across cultured endothelial monolayers, was significantly lower in cultures exposed to low FBS compared with control medium. Supplementation with 5.66 mumols total Zn/L completely restored endothelial barrier function. A divalent cation chelator, 1,10-orthophenanthroline, was used to induce Zn deficiency in vitro. Compared with control cultures, the presence of 1,10-orthophenanthroline in the culture medium resulted in markedly lower endothelial barrier function that was increased by the addition of Zn but not calcium or magnesium. Activity of the membrane-bound zinc-dependent angiotensin-converting enzyme (ACE) was depressed by low zinc medium, whereas membrane-bound Ca(2+)-ATPase and total ATPase were not depressed. Furthermore, cells cultivated in low zinc medium did not have greater cytosolic release of adenine, indicating no increase in cell injury or death. These data suggest that Zn is vital to endothelial cell integrity and that Zn may play an important role in vascular endothelial barrier function.     

RNA沉默Slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响

目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-Slug作用于Slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(P<0.05),抑制MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P<0.05)。结论:Slug-shRNA-1作用于Slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。     

抗氧化维生素对氧化密度脂蛋白作用的主动脉内皮细胞脂质过氧化损伤？…

为深入探讨抗氧化维生素（维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素）对氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）损伤内皮细胞的防治作用及可能机理,我们以体外培养的小年主支脉内皮细胞为模型,在培养的主动脉内皮细胞中加入不同剂量的抗氧化维生素,共同培养１２ｈ,再与终浓度为０．１ｇ／Ｌ的ｏｘＬＤＬ继续培养２４ｈ,取贴壁细胞及培养液,通过硫代巴比妥酸荧光比色法（ＴＢＡ）和单核细胞（ＨＬ６０）粘附计数法观察不同浓度的抗氧化维生素     

同型半胱氨酸致血管内皮细胞DNA损伤的作用

[目的]探讨同型半胱氨酸（HCY）对血管内皮细胞的DNA损伤作用。[方法]体外培养鼠主动脉内皮细胞,随机分为正常对照组和HCY9种浓度组,MTT法检测细胞毒作用,彗星试验检测DNA损伤情况,取培养液测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力。[结果]（1）对照组细胞呈单层鹅卵石样,紧密排列。1、2．5、5mmol／L HCY组细胞无明显变化,而自10mmol／L起,HCY组细胞排列杂乱,聚集成团。MTT法显示细胞生长明显受抑制,抑制率达20％;（2）彗星试验显示自5mmol／L HCY起尾长、尾矩和Olive尾矩明显增加;（3）自10mmol／L起HCY培养液中MDA含量高于对照组,SOD活力低于对照组。[结论]HCY具有明显的细胞毒作用,其机制可能与HCY直接造成DNA损伤和促进氧化应激有关